氢氯噻嗪联合肺表面活性物质对早产儿支气管肺发育不良的治疗效果及对血清白细胞介素-6 肌酸激酶 肌酸激酶同工酶和乳酸脱氢酶的影响

目的探讨氢氯噻嗪联合肺表面活性物质(PS)对早产儿支气管肺发育不良(BPD)的治疗效果及对血清白细胞介素-6(IL-6)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平的影响。方法回顾性分析2020年12月至2023年12月浙江省舟山市妇女儿童医院新生儿重症监护室(NICU)收治的78例早产儿资料,根据治疗方案分为2组,PS组(选择PS治疗的患儿)和PS+氢氯噻嗪组(选择氢氯噻嗪联合PS治疗的患儿),经倾向性评分匹配后获得39对病例,评定2组治疗72 h后的临床疗效,对比2组呼吸暂停时间、吸氧时间、机械通气时间、住院时间,比较2组治疗前后的血气指标[动脉血酸碱度(pH值)、动脉二氧化碳分压(PCO_(2))、动脉血氧分压(PO_(2))]和血清IL-6、CK、CK-MB及LDH水平变化。结果相较于PS组,PS+氢氯噻嗪组的临床总有效率较高(95%和77%,P<0.05);相较于PS组,PS+氢氯噻嗪组的呼吸暂停时间、吸氧时间、机械通气时间、住院时间均缩短(P<0.05);治疗后,PS+氢氯噻嗪组早产儿的pH值、PaO_(2)均高于治疗前和PS组(P<0.05),PCO_(2)均低于治疗前和PS组(P<0.05);治疗后,2组的血清IL-6、CK、CK-MB及LDH水平均较治疗前下降(P<0.05),其中PS+氢氯噻嗪组下降幅度较PS组更显著(P<0.05);2组均未见明显不良反应。结论氢氯噻嗪联合肺表面活性物质治疗早产儿BPD的疗效确切,能改善患儿临床指标和血气指标,降低血清IL-6、CK、CK-MB及LDH水平,减轻肺部炎症,对神经系统发育起到保护作用,临床安全性良好。

不同诱导物对白地霉中高级醇脱氢酶的影响

化学或物理因子作为诱导物,能够直接或间接影响菌体基因转录表达。为探索高级醇底物对白地霉的诱导效果,以分离自土壤的白地霉S12为对象,采用五种高级醇(正丙醇、正丁醇、异丁醇、正己醇和异戊醇)作为诱导物,研究不同高级醇的诱导剂量、诱导时间对菌体S12降解不同高级醇活性及脱氢酶活力的影响。结果表明,当正己醇和异丁醇分别作为诱导剂时,胞内酶活力较高。正丙醇、正丁醇、异丁醇和正己醇作为诱导剂时,最适诱导时间均为6 h;而以异戊醇为诱导剂时,最佳诱导时间为12 h。以正丙醇和正己醇为诱导剂时,最适的诱导浓度为1.5 g/L;以正丁醇、异丁醇和异戊醇为诱导剂时,最适诱导浓度分别为1.0、0.5和2.5 g/L。NativePAGE电泳结果表明,以五种高级醇为诱导剂均能使菌体合成分子量为223 kDa左右的脱氢酶。其中,以正己醇为诱导剂时所得菌体同时降解多种高级醇的能力最强,其降解产物均为其相应的酸类和酯类物质。

茶皂素中乙醇脱氢酶活性组分表面活性的研究

采用磁性固定酶技术从粗茶皂素中靶向分离出了乙醇脱氢酶的相关活性组分(ADH-related active ingredients,AAI)。为了揭示AAI的表面活性,通过表面张力法测定其临界胶束浓度;使用量角法测量其接触角;采用单因素实验探究浓度、水质硬度、pH等因素对泡沫性能的影响;同时采用分光光度法研究AAI的增溶能力,并与不同表面活性剂比较乳化和去污能力。结果表明:AAI具有降低液体的表面张力的作用,且该作用随AAI浓度增加而增强,AAI的临界胶束浓度在0.3%左右。AAI的润湿性能良好,在浓度0.1%~1.0%的范围内,接触角始终小于90°,且随浓度增加而减小。AAI的浓度越高,其起泡性越强,同时泡沫稳定性较好,具有抵抗硬水和酸碱的能力,在50℃时AAI的起泡性能最好。AAI有一定的增溶能力,对典型难溶有机物苯的增溶能力为7 mL·g^(-1)。AAI的乳化能力良好,单独使用时去污能力不强,与十二烷基苯磺酸钠(SDBS)组合使用效果可明显提升。

厚壳贻贝乙醇脱氢酶激活肽的纯化、鉴定及其与ADH的相互作用

【目的】开发厚壳贻贝(Mytilus coruscus)乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase,ADH)激活肽,并探究其与ADH作用的分子机制。【方法】以体外ADH激活率为指标,通过凝胶柱层析色谱、反向液相色谱法(RP-LC)分离纯化分子质量小于1 ku的厚壳贻贝活性肽(Mytilus coruscus peptides,MCP),利用液相色谱串联质谱技术(LC-MS/MS)对高ADH激活性的肽组分进行鉴定,并通过分子对接技术探究其与ADH间的相互作用。【结果】MCP经色谱分离得到活性组分Y-I-I,鉴定并筛选出其中3条与ADH对接结合能较低的活性肽序列PPLYE、PPLYQ和APPLYQ,其中活性肽PPLYE体外ADH激活作用最佳,在PPLYE质量浓度为2.0 mg/mL时,ADH激活率达到77.35%,且呈剂量依赖性。分子对接结果显示,PPLYE可结合至ADH活性中心附近的疏水空腔内,通过疏水作用和氢键与受体蛋白ADH形成稳定复合物,其结合能最低,为-35.58 kJ/mol。【结论】PPLYE作为最佳的ADH激活肽,可通过疏水作用和氢键与ADH相互作用形成稳定的复合物来提高ADH活性,本研究为厚壳贻贝资源的开发利用及ADH激活肽的开发提供依据。

高山被孢霉NADP^(+)依赖型异柠檬酸脱氢酶的异源表达与活性分析

产油真菌胞质中NADP^(+)依赖型异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,IDH)能够为脂肪酸合成提供还原力,前期研究表明高山被孢霉的异柠檬酸脱氢酶4(Mortierella alpina isocitrate dehydrogenase4,MaIDH4)对脂质积累有积极的影响。为了深入研究MaIDH4的性质,该文将其在大肠杆菌和毕赤酵母系统中分别进行异源表达并纯化,均成功获得纯酶,并考察了不同表达系统对酶活性和产量的影响。首先克隆MaIDH4至表达载体pET28a(+)和pPink-HC-3CZHEK构建重组质粒,然后分别转化至Escherichia coli BL21(DE3)和PichiaPink TM Strain 2进行诱导表达,最后采用镍柱纯化获得携带10×His标签的MaIDH4重组酶,检测纯酶的比活力分别是34.10 U/mg和43.00 U/mg,酶产量分别为10.28 U/L和159.12 U/L。通过纯酶比活力和酶产量分析表明相比于大肠杆菌表达系统,毕赤酵母宿主更适合MaIDH4的异源表达。

镧对红壤转化酶、过氧化氢酶和脱氢酶活性的影响

通过室内培养和盆栽试验研究了稀土元素镧对红壤转化酶、过氧化氢酶和脱氢酶活性的影响.镧对土壤转化酶活性有不同程度的刺激作用;对土壤过氧化氢活性有轻微的抑制作用;对土壤脱氢酶活性有强烈的抑制作用,当镧浓度为30mg/kg时,抑制作用达到显著水平.随着浓度的升高,镧对土壤脱氢酶和过氧化氢酶活性的抑制作用不断增强.随着培养时间的延长,镧对土壤脱氢酶的抑制作用有降低的趋势.土壤脱氢酶活性是评价稀土元素污染土壤环境的敏感指标.

活性污泥的基质代谢脱氢酶活性测定

阐述了活性污泥在曝气反应中的基质代谢脱氢酶活性 (Ds)和内源呼吸脱氢酶活性(De)的变化规律及其关系 ,提出了通过分别测定总脱氢酶活性 (Dt)和De 来间接测定Ds 的方法。测定结果表明 ,这 3种脱氢酶活性均随曝气反应的进行而不断变化 ,性能较好的活性污泥的Dt 与Ds 相近 ,而且通过适当投加基质可以明显提高Dt。

测定脱氢酶活性的萃取剂选择

选择最佳萃取剂是提高脱氢酶活性测定结果准确性的重要步骤之一,因此在测定内源呼吸TTC-脱氢酶活性时,选择了丙酮、乙醇、正丁醇、磷酸三丁酯、乙酸乙酯、甲苯和三氯甲烷七种萃取剂,就标准曲线、最佳萃取时间以及萃取污泥中三苯基甲酯(TF)的能力等三个方面进行了比较。综合考虑各种性能后确定丙酮为最佳萃取剂。

脱氢酶活性检测方法及其在环境监测中的应用

介绍了脱氢酶活性检测的方法及其在活性污泥活性检测、细菌菌落总数检测、水质毒性检测、土壤污染等检测与研究领域的应用。

腐殖酸存在下镉和铅对土壤脱氢酶活性的影响

采用室内培养试验研究Cd和Pb污染红壤添加不同组分腐殖酸后,其脱氢酶活性的变化,结果表明,红壤遭受镉和铅污染后,脱氢酶活性显著降低,然而腐殖酸特别是胡敏酸的存在能够使脱氢酶活性得到显著回升,说明腐殖酸与重金属的相互作用对重金属污染土壤微生物活性的改善和修复功能,对土壤有一定的去污降毒作用．不同腐殖酸组分的效应大小为:灰色胡敏酸(GHA)>棕色胡敏酸(BHA)>富里酸 (FA),表明分子量愈大、芳构化程度愈高的腐殖酸组分,其对重金属的钝化愈强,从而解除土壤重金属对生物毒害的能力愈强．

苹果细胞质型苹果酸脱氢酶基因克隆、表达及酶活性分析

根据亚细胞定位,苹果酸脱氢酶可分为5种类型,其中依赖于NAD的细胞质型苹果酸脱氢酶(cyMDH)在植物上的研究较少。从苹果果实中分离了cyMDH的全长cDNA序列,命名为Mal-cyMDH(GenBank登录号为DQ221207),该序列含有一个996bp的开放阅读框(ORF)。序列同源性分析表明Mal-cyMDH与其他物种cyMDH有较高的同源性,进化树分析表明几乎所有的cyMDH可以聚类在一个分支上,并且cyMDH可能是MDH的最原始种。原核表达得到一个37kD左右的融合蛋白,酶活测定表明该酶主要催化合成苹果酸。苹果果实中cyMDH酶活分析表明在高酸和低酸基因型中该酶的还原活性存在明显差异。

不同龋敏感人群变形链球菌分离株乳酸脱氢酶活性的初步研究

目的 初步探讨不同龋敏感人群变形链球菌乳酸脱氢酶(LDH)活性与龋病发生的关系,筛选不同LDH活力菌株。方法 从高龋和无龋个体分离变形链球菌各5 0株,应用经典考马斯亮蓝蛋白定量方法对菌细胞裂解液蛋白进行定量,通过还原性辅酶Ⅰ氧化法测定LDH活性,比较两组菌株LDH活性差异以及不同LDH活性的菌株在两组人群的分布。结果 两组菌株LDH的酶活性均值总体无差异(P >0 0 5 ) ;不同LDH活性的菌株在两组人群的分布不同(P <0 0 5 )。

TTC-脱氢酶测定法表征低温真空环境对细菌呼吸活性的影响

在探索TTC-脱氢酶法测定大肠杆菌脱氢酶活性的最佳条件基础上，对真空、-20℃低温对大肠杆菌脱氢酶的影响进行研究。TTC法显色最佳条件为：TTC的浓度0．4％，pH值7～8，反应时间30min，测定波长485nm。真空处理5min大肠杆菌脱氢酶活性显著降低，而-20℃低温处理1h时脱氢酶活性才明显下降。因此，-20℃低温、真空处理都会导致细菌呼吸活性的下降，细菌刚放入真空的瞬间对其呼吸活性影响较大，而-20℃低温处理1h后才引起细菌呼吸活性显著下降。

暗诱导油菜子叶衰老过程G-6-P脱氢酶和乙醇脱氢酶活性的变化

以离体油菜子叶为材料,研究了暗诱导子叶衰老过程中G-6-P脱氢酶(G6PDH)和乙醇脱氢酶(ADH)活性的变化。结果表明在暗诱导衰老过程中,2种酶的活性均呈急速下降的趋势。暗诱导1d G6PDH活性下降了40％以上,第4d活性下降了80％以上。G6PDH活性的下降可能是导致植物细胞衰老过程中活性氧水平上升的因素之一,磷酸戊糖途径(PPP)活性的调节可能在诱导植物细胞的衰老中有重要作用。ADH在正常油菜子叶中维持有一定的活性,但在暗诱导离体子叶衰老过程中,ADH活性迅速下降,暗诱导1d活性下降了40％以上,第3d活性下降了60％以上。推测ADH活性变化可能对于衰老的诱导和加剧有重要意义。

恶性疟原虫乳酸脱氢酶的表达及免疫活性鉴定

目的 在大肠杆菌中表达恶性疟原虫乳酸脱氢酶 (LDHp)与谷胱甘肽S 转移酶 (GST)融合蛋白 ,测定重组蛋白的免疫活性。方法 采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫 (海南株 )乳酸脱氢酶基因 ,经双酶切后克隆入 pGEX 4T 1表达载体中 ,重组蛋白纯化后免疫小鼠制备特异性血清 ,并用琼脂双向扩散法检测效价 ,ELISA、Western bloting检测重组抗原的免疫活性。结果 得到了重组表达的蛋白抗原 ,表达产物能与兔抗恶性疟原虫血清发生反应 ,并能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答 ,免疫琼脂扩散法抗体滴度为 1∶16。结论 LDHp在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性。

厌氧污泥体系脱氢酶活性表征细菌数的研究

以硫化钠作还原剂,甲苯为提取溶剂,用氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定污泥脱氢酶活性,探讨了脱氢酶活性与细菌数对数(lgABN)的相关性,并建立了脱氢酶活性表征细菌数的数学模型。结果表明:在lgABN为7.5～12范围内,脱氢酶表征的污泥活性与细菌数对数(lgABN)呈明显线性相关,从理论上分析了其惟一线性相关性;在细菌数的对数达到7.5～12的对数期、稳定期与衰亡期,脱氢酶活性换算成对应细菌数所绘制的曲线与细菌生长曲线有明显拟合;在有重金属离子存在的污泥体系中,脱氢酶活性可用来作为评价重金属离子的毒性指标;从而脱氢酶活性可取代细菌计数表征污泥活性。

不育症精子乳酸脱氢酶同功酶LDHx活性测定及其定位研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳、酶联染色、光密度扫描、分光光度法以及电镜酶细胞化学等方法 ,对 12例生育男性(生育组 )和 14例不育男性 (不育组 )精子 L DHx进行了研究。结果显示 L DHx电泳区带位于 L DH3和 L DH4之间 ,生育组精子 L DHx绝对活性和相对活性均高于不育组 (P<0 .0 5 )。相关分析表明精子密度与 L DHx绝对活性和相对活性均具有相关性 ,在生育组呈正相关 (r=0 .8和 0 .75 ,P<0 .0 5 ) ,在不育组呈负相关 (r=- 0 .76和 - 0 .78,P<0 .0 5 )。 L DHx酶细胞化学定位分析显示 L DHx酶反应颗粒主要分布于精子型线粒体 (STM)和胞质内 ,少量分布于顶体及质膜表面。生育组精子各部位酶反应颗粒多于不育组 ,且不育组精子多有畸形并伴有超微结构改变。上述研究分析提示 ,精子 L DHx活性测定与定位分析可作为检查不育症精子质量的可靠指标 。

TTC-脱氢酶还原法测定铜绿微囊藻活性

利用氯化三苯基四氮唑（TTC）-脱氢酶还原法定量地测定了铜绿微囊藻细胞的活性,并对影响活性测定的因素进行了分析与研究.结果显示,TTC浓度大于0.6%时会抑制酶活性,最适TTC浓度为0.2%;脱氢酶还原反应在Tris-HCl缓冲液中能正常进行,而在磷酸盐缓冲液中受到抑制,最适pH值为7.5-8.0;培养时间和培养温度对TTC脱氢酶还原反应的影响较大,最适培养时间为8-16h,最适培养温度为30-35℃;反应不需加入非离子去垢剂,吐温20和曲拉通X-100对脱氢酶反应会产生较强抑制作用.TTC还原所生成的三苯基甲臢（TPF）可采用50%乙醇提取.研究显示TTC-脱氢酶还原法可以很好地进行藻细胞活性定量化测定.

几种储粮霉菌脱氢酶活性测定方法的建立

基于氯化三苯基四氮唑(TTC)脱氢酶还原反应原理,建立适用于粮食中几种代表性霉菌如黄曲霉、灰绿曲霉、白曲霉和青霉脱氢酶活性的测定方法。结果表明:霉菌细胞脱氢酶在Tris-HCl缓冲液中反应较稳定,反应体系中TTC最适质量浓度为0.2g/100mL,80%丙酮提取三苯基甲臢(TF)的效果较佳。4种霉菌最适反应温度均为30℃,黄曲霉和白曲霉最适pH值均为11.0,灰绿曲霉和青霉最适pH值分别为10和10.5。黄曲霉和青霉反应1.5h后基本达到反应终点,而灰绿曲霉和白曲霉需2.5h。该方法测定结果显示,小麦霉变过程中霉菌脱氢酶活性升高与霉菌数量增长具有较高的相关性。

逆境下转BADH基因小麦甜菜碱醛脱氢酶活性表达与甜菜碱积累

对盐、旱逆境下转BADH基因小麦品系99T6的生长发育、甜菜碱醛脱氢酶活性及甜菜碱积累等进行了研究分析,结果表明,转BADH基因株系在盐逆境下具有明显的生长优势,耐盐能力达到100mmol/L;电导率和质膜相对透性表明转基因株系抗膜损伤能力增强;甜菜碱醛脱氢酶活性的增强和甜菜碱积累的增加,说明转基因株系的盐旱逆境抗性是通过甜菜碱积累这一长期、持久的方式解除渗透胁迫,而不是通过脯氨酸积累这种临时的应急反应;以甜菜碱作为靶标性状采用基因工程方法提高植物盐旱耐性是可行的。