构建人三叶因子3腺病毒载体对胆管上皮细胞迁移的调控作用

目的构建含有人三叶因子3(trefoil factor family 3,TFF3)基因的腺病毒载体,并观察其对胆管上皮细胞迁移的调控作用。方法利用PCR技术对目的基因TFF3全长进行扩增,测序后亚克隆至腺病毒穿梭质粒构建载体pAdTrack-CMV-TFF3,转化至含腺病毒骨架质粒pAd-Easy的大肠杆菌株BJ5183感受态细胞中进行同源重组,筛选重组子并经内切酶PacⅠ线性化,转染293细胞进行病毒包装及扩增,并进行滴度测定。构建的TFF3腺病毒载体感染人胆管上皮细胞后用RT-PCR及Western blot检测目的基因表达水平,并进行划痕实验观察细胞迁移能力的变化。结果成功扩增了大小约为458 bp的人TFF3基因,测序报告显示目的基因序列与NCBI报道一致;成功构建了TFF3的同源重组腺病毒穿梭载体,经293细胞包装及扩增的病毒滴度为1.3×109CPU/mL。RT-PCR及Western blot结果显示转染人胆管上皮细胞后其TFF3表达明显增强,细胞迁移能力也明显高于对照组。结论成功构建含TFF3基因的腺病毒载体,为进一步研究TFF3在胆管上皮损伤修复中的作用奠定了基础。