SDC2和TFPI2基因甲基化联合检测在结直肠癌早期筛查中的应用价值

目的 探讨粪便样本中硫酸类肝素蛋白多糖基因(SDC2)甲基化和组织因子途径抑制物2基因(TFPI2)甲基化联合检测在结直肠癌早期筛查中的应用价值。方法 选取106例结直肠癌患者(结直肠癌组)、75例进展期腺瘤患者(进展期腺瘤组)、35例非进展期腺瘤患者(非进展期腺瘤组)为研究对象,并以同期153例其他消化系统干扰性疾病患者、182例结肠镜检查结果为阴性者作为对照组,采用甲基化荧光定量PCR(qMSP)法对所有受试者的粪便标本进行SDC2和TFPI2基因甲基化检测。以结肠镜检查及病理检查结果为金标准,评估SDC2和TFPI2基因甲基化联合检测对结直肠癌和腺瘤检测的灵敏度和特异度。结果 106例结直肠癌患者中,甲基化联合检测灵敏度为93.4%;75例进展期腺瘤患者中,甲基化联合检测灵敏度为62.7%;35例非进展期腺瘤患者中,甲基化联合检测灵敏度为34.3%;SDC2和TFPI2基因甲基化联合检测对结直肠癌和腺瘤筛查的特异度为94.6%。结论 SDC2和TFPI2基因甲基化联合检测对结直肠癌及其早期病变具有较高的灵敏度,同时保持较高的特异度。

LDCT、肿瘤相关自身抗体、TFPI-2基因甲基化联合检测对肺癌的早期诊断价值

目的研究低剂量CT(LDCT)、肿瘤相关自身抗体、组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)基因甲基化联合检测对肺癌的早期诊断价值。方法选取109例疑似早期肺癌患者作为研究对象,所有患者均接受LDCT检查,以术后病理学检查作为金标准,分析LDCT检出率以及阳性患者和阴性患者肿瘤相关自身抗体、TFPI-2基因甲基化阳性率,分析LDCT联合肿瘤相关自身抗体[P5、RNA解螺旋酶自身抗体4-5(GBU4-5)、黑色素瘤抗原A1(MAGE A1)、肿瘤相关基因(CAGE)、性别决定基因家族2(SOX2)、蛋白基因产物9.5(PGP9.5)、G抗原7(GAGE7)]和TFPI-2基因甲基化对于早期肺癌的诊断价值。结果109例疑似肺患者经过病理学检查确诊101例,LDCT诊断肺癌阳性85例,检出率为84.15%;与阴性组患者相比,阴性组患者肿瘤相关自身抗体SOX2、PGP9.5和GAGE7水平显著更高(P<0.05);与阴性组患者TFPI-2基因甲基化阳性率[12.50%(1/8)]相比,阳性组患者[48.51%(49/101)]显著更高(P<0.05);经过ROC曲线分析结果发现,LDCT+P53+MAGEA1+GAGE+SOX2+PGP9.5+GAGE7+GBU4-5联合TFPI-2基因甲基化对于早期肺癌的诊断灵敏度和特异度均高于任意单一指标(P<0.05)。结论综上所述,LDCT、7种肿瘤相关自身抗原联合TFPI-2基因甲基化检测,可提高对于早期肺癌的诊断价值。

补阳还五汤对凝血酶诱导血管内皮细胞释放NO,vWF,TFPI及表达组织因子的影响

目的 :观察补阳还五汤对凝血酶诱导血管内皮细胞释放NO ,vWF ,TFPI和表达TF的影响。方法 :对传代培养的新生牛主动脉内皮细胞 (4～ 8代 )分别给予不同处理 ,取上清液测NO ,vWF ,TFPI;取细胞冻融液测定TF活性。结果 :①凝血酶促进血管内皮细胞表达TF ,较对照组明显增高 (12 .86± 2 .4 3vs 4 .6 9± 0 .83,P<0 .0 1) ,呈剂量依赖性 (r =0 .985 ,P <0 .0 1,0～ 2 0U·ml- 1 ) ,并促进vWF的释放 (18.4 3± 3.2 0vs6 .4 2± 2 .84 ,P <0 .0 1) ,补阳还五汤则抑制TF表达和vWF的释放 (P <0 .0 1) ;②补阳还五汤促进血管内皮细胞释放NO ,较对照组明显升高 (5 .93± 0 .94vs 1.6 3± 0 .2 7,P <0 .0 1) ;③凝血酶能抑制血管内皮释放TFPI (0 .6 2± 0 .38vs 2 .6 4± 0 .93,P <0 .0 1) ,补阳还五汤对凝血酶的这种抑制作用没有明显的影响。结论 :补阳还五汤能抑制凝血酶诱导血管内皮细胞表达TF和释放vWF ,促进血管内皮细胞表达NO。

人TFPI基因转染对兔移植静脉血栓形成和近期通畅率的影响

目的:为减少冠状动脉旁路移植术后血栓形成,探讨人组织因子途径抑制因子(TFPI)基因转染对兔移植静脉血栓生成的影响。方法:构建真核表达质粒pCMV-(Kozak)TFPI。采用阳离子脂质体和腔内加压灌注法,转染移植静脉内皮细胞。RT-PCR、Western blotting和免疫组化法检测外源基因在兔移植静脉中的表达。病理标本、扫描电镜观察移植静脉血栓形成情况,血管多普勒观测其通畅率。结果:移植静脉中有人TFPI基因和蛋白表达。静脉移植术后3d,基因转染组、空载体和空白对照组分别有1条、8条和7条移植静脉发生血栓,术后30d,以上各组分别有0条、5条和5条移植静脉完全闭塞,前者静脉血栓发生率和闭塞率均低于后两者(P<0.05)。扫描电镜显示两对照组内皮表面有红细胞和血小板黏附、聚集,而转染组基本正常。结论:人TFPI基因干预,减少了兔移植静脉血栓形成,提高了近期通畅率。

PTX对内毒素休克大鼠血浆TNF、TF及TFPI的影响

ＰＴＸ对内毒素休克大鼠血浆ＴＮＦ、ＴＦ及ＴＦＰＩ的影响许建平肖苏红贺蓉邓常青李俊成贺石林（湖南医科大学生理学教研室，长沙４１００７８）己酮可可碱（ｐｅｎｔｏｘｉｆｙｌｉｎｅ，ＰＴＸ）可通过改善血液流变性、扩张血管、抑制白细胞内皮细胞反应，降低休克动...

携带TFPI-2基因的真核表达载体对SHI-1细胞生长的抑制作用

目的:构建人组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)核表达载体,探讨TFPI-2基因对急性单核细胞白血病细胞株(SHI-1)生长的影响。方法:通过基因化学合成的方式得到TFPI-2的cDNA,将TFPI-2基因和线性载体片段进行连接,并插入载体PEGFP-N1多克隆位点处,再将真核表达载体PEGFP-N1-TFPI-2转染SHI-1细胞,在荧光显微镜下观察TFPI-2转染SHI-1细胞的情况;应用MTT法检测TFPI-2基因不同时间段对SHI-1细胞相对生长率的影响;RT-PCR检测TFPI-2转染前后每组细胞中TFPI-2 mRNA表达水平;采用Western blot法检测TFPI-2蛋白表达。将成功转染PEGFP-N1-TFPI-2载体的细胞命名为SHI-1-TFPI-2(实验组),转染空载体pEGFP-N1的细胞和未转染细胞设为对照组,分别命名为SHI-1-V和SHI-1-P。结果:成功构建了人TFPI-2基因真核表达载体PEGFP-N1-TFPI-2;将载体PEGFP-N1-TFPI-2转染SHI-1细胞,24 h后在荧光显微镜下可见荧光细胞,表明载体PEGFP-N1-TFPI-2成功转入SHI-1细胞;48和72 h后荧光细胞数目增多。RT-PCR结果显示:TFPI-2基因与内参β-actin条带灰度比值实验组高于对照组,灰度比值分别为:SHI-1-V组:0.51±0.04、SHI-1-P组:0.52±0.03、SHI-1-TFPI-2组:0.87±0.08;SHI-1-TFPI-2组与SHI-1-V和SHI-1-P组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PEGFP-N1-TFPI-2中TFPI-2基因的表达能抑制SHI-1细胞生长,此为未来白血病的基因治疗提供了研究方向。

组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)在动脉粥样硬化斑块稳定性中的作用

组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)是一种含Kunitz型结构域的丝氨酸蛋白酶抑制剂,其生理功能和病理作用尚不清楚。由于TFPI-2在抑制恶性肿瘤侵袭转移中的重要作用及肿瘤侵袭转移与动脉粥样硬化斑块不稳定破裂的原因相似,研究者的目光开始转向TFPI-2对斑块稳定性的作用。本文就TFPI-2在动脉粥样硬化斑块稳定性中的作用作一综述。

氟伐他汀对脂多糖和血管紧张素Ⅱ致大鼠主动脉内皮细胞TF和TFPI表达的影响

目的研究氟伐他汀(fluvastatin)对脂多糖(LPS)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的离体大鼠主动脉内皮细胞(RAEC)表达组织因子(TF)和组织因子途径抑制物(TFPI)的影响。方法体外培养RAEC,分别给予LPS和AngⅡⅡ刺激,采用ELISA法检测氟伐他汀对RAEC TF和TFPI表达的影响。结果氟伐他汀0.01、0.1、1和10μmol/L组能剂量依赖性抑制LPS和AngⅡ引起的TF表达增强;氟伐他汀0.01、0.1、1和10μmol/L组TFPI表达增强,呈剂量依赖性。结论氟伐他汀能抑制引起血栓形成的TF表达,增加TFPI表达。

重组TFPI-2影响人卵巢癌细胞体外迁徙浸润能力的研究

目的 :从功能角度研究重组组织因子途径抑制物 2 (TFPI 2 )对人卵巢癌细胞体外迁徙、浸润能力的影响。方法 :①迁徙实验 ,加不同浓度TFPI 2培养的A2 780细胞和不加TFPI 2的A2 780细胞 ,通过Boyden小室体外浸润转移模型 ,以迁徙到聚碳脂微孔滤膜 (PVPF)背面的每高倍镜视野中的平均细胞数作为评价人卵巢癌细胞迁徙能力强弱的指标。②浸润实验在PVPF膜铺上基底膜基质胶 (Matrigematrix)后 ,行迁徙实验。结果 :①迁徙实验中 ,将A2 780 TFPI 2不同浓度组与A2 780对照组细胞穿过PVPF膜的细胞数进行比较 ,经t检验 ,没有统计学意义 (P >0 .0 5)。②浸润实验中 ,将A2 780 TFPI 2不同浓度组与A2 780对照组的细胞穿过人工膜的细胞数进行比较 ,及TFPI 2不同浓度组间的细胞数进行比较 ,经t检验 ,均有非常显著差异 (P <0 .0 1)。结论 :重组TF PI 2对人卵巢癌细胞体外自身运动能力无影响 ,但可显著抑制人卵巢癌细胞的体外浸润能力 ,为卵巢癌的蛋白酶抑制剂治疗提供一可能的靶向依据。

恶性肿瘤患者血浆TFPI和uPA系统变化的临床研究(英文)

目的 研究组织因子途径抑制物(TFPI)，尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及其特异性受体(uPAR)和纤溶酶原激活物抑制物(PAI)在恶性肿瘤中的表达水平和临床意义。方法TFPI，uPA和uPAR采用酶联免疫法(ELISA)法，PAI采用发色底物法对44例恶性实体瘤(A1组)和30例急性白血病(AL，A2组)进行检测。结果(1)A1组较正常对照组(B组)TFPI，uPA，uPAR升高。(2)A2组较B组TFPI，uPAR升高，PAl降低。(3)组间比较：合并感染组TFPI升高，出血组PAI降低，转移或复发组TFPI，uPA，uPAR和PAI均升高，1周内死亡组TFPI降低，uPA和PAR升高。结论 恶性实体瘤和急性白血病存在不尽相同的抗凝，纤溶激活状态，其指标对病情和预后判断有指导意义。

白血病患者血浆TFPI活性变化的临床意义

组织因子途径抑制物(Tissur factor pathway in-hibitor TFPI)为血浆中一种新近发现的抗凝蛋白,其作用是通过抑制因子X和Ⅶ a/TF发挥抗凝作用。近年国外研究发现恶性肿瘤。

TFPI-2在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨TFPI-2在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)SP法测定TFPI-2在食管鳞癌组织、癌旁组织、正常食管组织中的表达。结果:TFPI-2表达阳性指数在食管鳞癌组织、癌旁组织、正常食管组织中分别为(16.25±9.57)%、(22.41±7.24)%、(27.76±5.30)%。食管鳞癌中淋巴结转移、大小、浸润深度、TNM分期及肿瘤的分化程度与TFPI-2的表达阳性指数则呈负相关(rs分别=-0.315、-0.444、-0.647、-0.772、-0.292)。结论:TFPI-2与食管鳞癌的生长、转移、侵袭有关,是判断食管癌预后的有效指标。

尿毒症患者血浆TFPI与AT-Ⅲ的检测及临床意义

目的：对尿毒症患者的血浆中抗凝物质－组织因子途径抑制物（ＴＦＰＩ）与抗凝血酶Ⅲ（ＡＴ－Ⅲ）进行测定以研究其病理改变与凝血机理的关系，以及透析治疗对它的影响。方法：ＴＦＰＩ抗原（ＴＦＰＩ：Ａｇ）测定采用酶联免疫（ＥＬＩＳＡ）方法，ＡＴ－Ⅲ活性（ＡＴ－Ⅲ：Ａ）测定采用发色底物法。结果：尿毒症组（２０例）ＴＦＰＩ：Ａｇ为１７７３５±４６５８ｎｇ／ｍｌ，较正常组（３０例）为高（Ｐ＜００１）；ＡＴ－Ⅲ：Ａ为７３１１０±１７０１，较正常组为低（Ｐ＜００１）。尿毒症组（１０例）透析前后比较：ＴＦＰＩ：Ａｇ从１８２９１±３１２０降至１３１５５±３６５１（Ｐ＜００１）；ＡＴ－Ⅲ：Ａ从８４２６±１６１９升至１１０００±２６５１（Ｐ＜００１）。结论：尿毒症患者ＴＦＰＩ：Ａｇ增高，ＡＴ－Ⅲ：Ａ降低，表明其组织病理损伤明显而致ＴＦ过度表达，从而呈现一定程度的高凝状态。透析治疗可使此病理过程得到一定程度的矫正。

TFPI-1抑制作用的模型化研究

TFPI-1在凝血动力系统中起着重要的调节作用,主要对FV∏α-TF的抑制过程作用显著.根据生物学实验建立一个关于TFPI-1,FV∏α-TF和FXα等因子的凝血动力数学模型.通过对模型的分析和数值模拟得到了一些与临床医学及实验相吻合的结论,展现出模型化方法的重要作用及预测能力.

血液透析对尿毒症患者血浆TFPI水平的影响和临床意义

目的 观察尿毒症患者血浆组织因子途径抑制物(tissue factor pathway inhibior，TFPI)含量及活性在血液透析中的变化，并探讨其临床意义。方法 TFPI含量测定采用双抗体夹心ELISA法，TFPI活性用发色底物法测定。结果 维持性血液透析患者，析前血浆TFPI抗原含量及活性较正常对照组增高(P<0．05)，透析过程1、2及4h的血浆TFPI水平均较透析前显著增高(P<0．01)，透析过程各时间点血浆TFPI的差异无显著性(P>0．05)，铜仿膜及聚砜膜两种不同透析膜组，血浆TFPI无显著差异(P>0．05)。结论 维持性血液透析患者血浆TFPI增高，透析过程可进一步增高，铜仿膜及聚砜膜两种不同透析膜对血浆TFPI无明显不同的影响。

组织因子通路抑制因子TFPI

组织因子通路抑制因子(TFPI)是近年来受到国内外高度重视的一种新的生理性凝血调节因子。本文从TFPI的作用、性质、分布、合成和代谢、正常与异常人体血浆TFPI的含量、天然抗凝剂的依据、重组TFPI作为治疗药物等方面探讨了TFPI作为预防和治疗血栓性疾病的天然抗凝剂的可能性。

老年人脑血管疾病急性期血浆TFPI含量变化及其意义

目的 :探讨出血和缺血性脑血管病患者血浆中组织因子途径抑制物 (TFPI)改变及其临床意义。方法 :对发病 1～ 3天的急性脑血管病患者 ,采用双夹心ELISA抗原测定法检测血浆中TFPI抗原含量。结果 :出血 (HCVD)组患者血浆TFPI含量为 146 0 8± 2 1 36 (117- 186ng/ml) x±s与对照组 144 80± 2 3 18ng/ml相比 ,无显著差异 (P >0 0 5) ;ICVD组 16 5 53± 6 7 50(81- 2 84ng/ml) x±s血浆TFPI含量明显高于对照组 ,差异显著 (P <0 0 1)。结论 :监测脑血管病病人的TFPI对指导临床治疗有一定意义。

氨基酸序列突变对TFPI生物半衰期和生物活性的影响

通过对个别氨基酸突变的研究,获得了保持良好生物活性的长半衰期组织因子途径抑制因子(tissue factor pathwayinhibitor,TFPI)重组蛋白的有效途径.采用定点诱变和基因重组技术,首先在TFPI cDNA特定位点形成一个位点的沉默突变,以提高TFPI在毕赤酵母细胞内的表达量,此cDNA称为mTFPI.在此基础上,通过系列位点突变,形成3个羧基端突变体:m0TFPI、m1TFPI和m2TFPI.将上述4种TFPI cDNA与表达质粒pPic9连接,转染大肠杆菌,通过PCR和DNA测序确认重组质粒,转染酵母细胞GS115,甲醇诱导表达重组蛋白.采用层析方法纯化TFPI重组蛋白,用125I标记重组蛋白,静脉注射给药,比较四者在SD大鼠体内血浆代谢清除速度.用底物显色法测定重组蛋白抑制凝血因子Xa(Fxa)的活性,比较各株TFPI重组蛋白突变体在体内、体外对FXa的抑制作用及肝素对各株TFPI重组蛋白功能的影响.结果显示,相比野生型TFPI重组蛋(mTFPI)而言,3株羧基端突变体m0TFPI、m1TFPI、m2TFPI在SD大鼠体内血浆代谢清除时间均有不同程度延长,其生物代谢半衰期分别是mTFPI的1.5倍、1.9倍和大于2倍,与m-TFPI相比,3个rTFPI突变体在体内、体外抑制FXa的作用无明显减弱,与肝素的结合能力及协同能力也无明显减弱.结果表明,m0TFPI、m1TFPI和m2TFPI在生物半衰期得到明显延长的同时,仍保持良好的抑制Fxa的生物活性.