PCNA、EGFR、TGFβRⅠ和TG FβRⅡ在胃癌组织中表达的临床意义

目的:通过检测胃癌和癌旁组织中的增殖细胞核抗原(PCNA)、表皮生长因子受体(EGFR)、转化生长因子βⅠ型和Ⅱ型受体(TGF茁RⅠ和TGF茁RⅡ),探讨表达的临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测38例手术切除的胃癌实质组织和癌远侧切端正常胃组织中PCNA、EGFR、TGF茁RⅠ和TGF茁RⅡ的表达。分析采用t检验、χ2检验和精确概率法。结果:胃癌组织与癌旁正常组织比较,PCNA标记指数和EGFR阳性率升高,TGF茁RⅠ和TGF茁RⅡ的阳性率降低,差异有显著性(P<0.05);经统计学处理,有浆膜外侵者PCNA的标记指数高于无浆膜外侵者,有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者,差异有显著性(P<0.05);EGFR的表达升高,TGF茁RⅠ和TGF茁RⅡ的表达降低,但统计学处理差异没有显著性(P>0.05)。结论:PCNA、EGFR的高表达和TGF茁RⅠ、TGF茁RⅡ的低表达可能与胃癌的发生及其恶性进展有关。

壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠TGF-β1及TβRⅠ/ⅡmRNA表达的影响

目的:研究中药壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠TGF-β1及TβRⅠ/ⅡmRNA表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。方法:采用四氯化碳(CCl4)复合因素大鼠肝纤维化模型,给予壮肝逐瘀煎灌胃,取血清及肝组织做检测,双抗体夹心ABC-ELISA法测定血清TGF-β1含量,实时荧光定量PCR技术对肝组织TβRⅠ/ⅡmRNA进行定量分析。结果:治疗6周后,与病理模型组大鼠比较,壮肝逐瘀煎治疗组肝小叶结构趋于正常,纤维间隔明显变薄,TGF-1β及TβRⅠ/ⅡmRNA明显降低(P<0.01)。结论:壮肝逐瘀煎能够显著改善肝纤维化大鼠肝组织的病理变化,具有明显的抗肝纤维化作用,其作用机制可能与壮肝逐瘀煎抑制TGF-β1及TβRⅠ/ⅡmRNA表达有关。

TGFβ1、TβRⅠ和TβRⅡ在膀胱癌中表达的临床及病理意义

目的 :探讨转化生长因子 β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)及其相关受体蛋白表达与人膀胱移行细胞癌 (TCCs)生物行为特征的关系。方法 :采用免疫组化方法检测 74例TCCs中TGFβ1及其受体TβRⅠ、TβRⅡ和PCNA蛋白表达。结果 :TGFβ1、TβRⅠ和TβRⅡ在TCCs中表达阳性率分别为 89.2 %、70 .3%和 4 8.6 % ,浸润性生长的膀胱癌TGFβ1过表达率为 83.8% ,明显高于表浅性生长组 (33.3% ) (P <0 .0 5 ) ;TGFβ1过表达与TCCs术后复发有关 (P <0 .0 5 ) ;TGFβ1表达强度与PCNA指数呈显著正相关 (P <0 .0 0 5 ) ;TβRⅡ阳性表达与TCCs浸润程度负相关 (P <0 .0 0 5 ) ,TGFβ1及其受体的共同表达与TCCs浸润程度有密切关系 (P <0 .0 0 5 )。 结论 :TGFβ1在TCCs的发生、发展过程中发挥双向调节作用 ,其负性调节作用的丧失与TβRⅡ失表达有关 ;TGFβ1过度表达与肿瘤细胞增殖、浸润性生长、复发等生物学行为关系密切 。

TGF-β受体TβRⅠ、TβRⅡ在实验性鼠牙髓炎中的定量分析

目的:观察研究转化生长因子-β受体TβRⅠ、TβRⅡ在大鼠可复性牙髓炎中在不同时间段动态变化特点,分析TGF-β受体TβRⅠ、TβRⅡ在牙髓炎发生、发展及转归的意义。方法:通过对大鼠上颌第1磨牙进行机械性不喷水均匀磨除釉质,酸蚀剂处理暴露的牙本质,建立实验性大鼠可复性牙髓炎模型;将牙髓炎模型组织块连续切片后采用免疫组化法染色,光镜观察、单因素方差分析(ANOVA)、Tukey检验。结果:在可复性牙髓炎症组织中TGF-β受体TβRⅠ、TβRⅡ的表达明显增强,且随时间呈动态变化趋势,TβRⅠ、TβRⅡ在3d达到最高,之后略有下降。结论:TGF-β受体TβRⅠ、TβRⅡ参与牙髓组织损伤修复并发挥重要作用。

TGFβRⅠ、TGFβRⅡ、FSH和TGFβ1对猪颗粒细胞增殖凋亡的影响

为研究TGF-β通路对猪颗粒细胞增殖、凋亡的影响,本研究对TGF-β通路基因进行调控处理,设计并筛选可高效干扰TGFβRⅠ及TGFβRⅡ表达的载体,转染不同干扰载体及添加10 ng/m L TGFβ1和25 ng/m L FSH,采用Westernblot、MTT和流式细胞法检测不同处理对颗粒细胞TGFβ RI和TGFβ RII蛋白表达量和细胞增殖凋亡的影响。结果表明:成功筛选出干扰效率最高的p OSP1-TGFβRⅠ-sh5和p OSP1-TGFβRⅡ-sh3载体,对TGFβRⅠ和TGFβRⅡ的抑制率分别为78.00%和84.10%;转染后TGFβRⅠ干扰组的TGFβRⅠ蛋白表达量显著低于其阴性对照组;TGFβRⅡ干扰组、TGFβ1组和FSH组的TGFβRⅡ蛋白表达量显著低于其阴性对照组;TGFβ RI干扰组、TGFβ RII干扰组的增殖抑制率极显著高于PLL3.7空载体组,TGFβ 1组细胞增殖抑制率极显著高于空白对照组且FSH组的增殖抑制率显著高于空白对照组;TGFβRⅠ干扰组和TGFβRⅡ干扰组细胞凋亡率极显著高于PLL3.7空载体组;TGFβ1组和FSH组细胞凋亡率极显著高于空白对照组。总之,RNAi介导的TGFβRⅠ和TGFβRⅡ沉默和外源因子(10 ng/m L TGFβ1和25 ng/m L FSH)引起的TGFβRⅡ蛋白下调,均会减弱TGF-β信号传导通路对卵泡颗粒细胞的促进作用,进而抑制卵泡颗粒细胞的增殖,促进其凋亡。

结直肠癌组织IGF-ⅠR和IGF-Ⅰ与IGF-Ⅱ表达及其意义的研究

目的:通过检测结直肠癌中IGF-ⅠR,IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ的表达情况,分析IGF-ⅠR,IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ的表达与临床病理因素之间的关系及三者表达的相关性,探讨IGF系统在结直肠癌发生发展中的作用。方法:应用免疫组织化学SP法检测104例结直肠癌患者癌组织、癌旁组织、正常组织IGF-ⅠR,IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ单一和联合表达的情况。结果:1)IGF-ⅠR,IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ在癌组织中表达的阳性率均显著高于癌旁组织和正常组织,P<0.05,IGF-ⅠR、IGF-Ⅱ在癌旁和正常组织中表达的阳性率差异无统计学意义,P>0.05,IGF-Ⅰ在癌旁和正常组织中表达的阳性率的差异具有统计学意义。2)IGF-ⅠR,IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ在癌组织中的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、Duke分期、TNM分期、原发肿瘤浸润深度T、局部淋巴结转移情况N等均无明显相关,而IGF-ⅠR的表达与肿瘤部位的关系具有统计学意义。3)IGF-ⅠR与IGF-Ⅰ在癌组织中的表达无明显相关,P>0.05,IGF-ⅠR与IGF-Ⅱ在癌组织中的表达的相关性处于临界状态(P=0.05)。结论:IGF系统在结直肠癌的发生发展中的作用不明显,有待于进一步深入研究。

黄芪甲苷对紫外线诱导皮肤成纤维细胞表达TGFβ RⅡ与Smad7的影响

目的:探讨黄芪甲苷对紫外线诱导皮肤成纤维细胞TGFβRⅡ、Smad7mRNA以及蛋白质表达的影响。方法:培养原代人皮肤成纤维细胞,UVA及UVB分别照射人成纤维细胞,黄芪甲苷进行干预,MTT法检测细胞增殖活性,以ELISA法检测Smad7的生成量,半定量RT-PCR法检测TGFβRⅡ、Smad7的mRNA表达,Western blot法检测TGFβRⅡ的蛋白表达。结果:不同浓度的黄芪甲苷干预组与正常对照组相比,成纤维细胞增殖活性随浓度增加而增强,药物浓度为40μg/ml时最显著(P<0.05);UV辐射组与正常组相比,细胞上清液中Smad7蛋白含量明显增高,细胞内TGFβRⅡ的mRNA和蛋白表达均下降,Smad7mRNA表达增强;黄芪甲苷干预后,细胞上清液中Smad7蛋白含量下降,细胞内TGFβRⅡ的mRNA以及蛋白表达水平明显增高,Smad7mRNA表达下降(P<0.05)。结论:黄芪甲苷可能通过提高成纤维细胞的增殖活性,上调TGFβRⅡmRNA、蛋白水平以及下调Smad7mRNA、蛋白水平的表达来对抗紫外线抑制TGF-β/Smad信号通路的传导,缓解皮肤光老化进程。

IGF-Ⅱ和IGF-Ⅰ R在大肠癌中的表达

目的研究胰岛素样生长因子-(IGF-)和胰岛素样生长因子受体(IGF-R)在国人大肠癌中的表达情况及其与临床病理的关系。方法应用免疫组织化学过氧化物酶标记链霉卵白素法(S-P)对40例大肠癌患者的大肠癌组织、距大肠癌原发灶1cm癌旁组织、距大肠癌原发灶10cm以上大肠组织和10例非肿瘤患者的正常大肠组织标本,进行IGF-和IGF-R的抗原染色。结果1大肠癌组织和癌旁组织中IGF-和IGF-R的表达率显著高于切缘组织和正常大肠组织的表达率(P<0.05)。癌组织和癌旁组织中IGF-和IGF-R的表达率无显著性差异(P>0.05)。切缘组织和正常大肠组织中IGF-和IGF-R的表达率无显著性差异(P>0.05)。2在有淋巴结转移和Dukes分期C期及浸透全层组中IGF-和IGF-R的表达率分别显著高于无淋巴结转移组和Dukes分期A、B期及未浸透全层组中GF-和GF-R的表达率(P<0.05)。结论IGF-、IGF-R的高表达与大肠癌的发生发展和侵袭转移密切相关。

壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠TβRⅠ/Ⅱ、Smad3、Smad4、Smad7表达的影响

目的:研究壮肝逐瘀煎对肝纤维化(HF)大鼠TβRⅠ/Ⅱ、Smad3、Smad4、Smad7表达的影响,探讨其抗HF的作用机制。方法:44只wistar大鼠随机取8只作为正常对照组,正常饲养。剩余大鼠采用CCl4复合因素法进行HF造模,第4w随机处死4只,证实HF形成后,随机分为病理模型组、壮肝逐瘀煎组、秋水仙碱组、大黄虫丸组。病理模型组予生理盐水灌胃,其余3组分别给予相应药物灌胃。12w后获取肝组织,苏木精-伊红染色,观察HF的程度。免疫组织化学染色、图像分析方法对TβRⅠ/Ⅱ、Smad3、Smad4、Smad7的组织分布进行半定量分析。结果:壮肝逐瘀煎组、秋水仙碱组、大黄虫丸组与病理模型组比较,肝小叶结构趋于正常,纤维间隔明显变薄,肝组织TβRⅠ/Ⅱ、Smad3、Smad4表达显著减少(P<0.01),Smad7表达显著增加(P<0.01),壮肝逐瘀煎组优于秋水仙碱组、大黄虫丸组。结论:壮肝逐瘀煎能够显著改善HF大鼠肝组织的病理变化,具有明显的抗HF作用,其作用机制可能与壮肝逐瘀煎调控TβRⅠ/Ⅱ、Smad3、Smad4、Smad7的表达有关。

TGFβ1、TGFβ2和TβRⅡ在口腔鳞癌中的表达和意义

目的 :探讨转化生长因子TGFβ1、TGFβ2及其Ⅱ型受体TβRⅡ与口腔鳞癌发生和发展的关系。方法 :采用SABC免疫组化法检测 40例口腔鳞癌术后标本和 2 0例正常口腔粘膜中TGFβ1、TGFβ2及其受体TβRⅡ的表达。 结果 :口腔鳞癌和正常口腔粘膜中均表达TGFβ1、TGFβ2和TβRⅡ ,但程度不同。与正常口腔粘膜相比 ,TGFβ1、TGFβ2在口腔鳞癌中呈过表达 ,而TβRⅡ则表达下降。口腔鳞癌临床分期、有无颈淋巴结转移及病理分级与TGFβ1、TGFβ2过表达及TβRⅡ表达下降有关。 结论 :TGFβ1、TGFβ2和TβRⅡ可能参与了口腔鳞癌的发生发展及颈淋巴结转移过程 ,是口腔鳞癌发生发展及预后的一个指标。

壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠TβRⅠ/ⅡmRNA表达的影响

目的:研究中药壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠TβRⅠ/ⅡmRNA表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。方法:采用四氯化碳(CCl4)复合因素制备大鼠肝纤维化模型后,大鼠灌胃壮肝逐瘀煎,取肝组织作病理学检查,并通过实时荧光定量PCR技术对肝组织TβRⅠ/ⅡmRNA进行定量分析。结果:与病理模型组大鼠比较,RT-PCR显示经壮肝逐瘀煎治疗,大鼠肝内TβRⅠ/ⅡmRNA明显降低,肝小叶结构趋于正常,纤维间隔明显变薄。结论:壮肝逐瘀煎能够显著改善肝纤维化大鼠肝组织的病理变化,具有明显的抗肝纤维化作用,其作用机制可能与其下调TβRⅠ/ⅡmRNA表达的作用有关。

益气活血软坚解毒方对荷H22肝癌小鼠抑瘤作用及肿瘤组织VEGF、TGF-β1RⅡ表达影响的研究

目的:探讨益气活血软坚解毒方对H22肝癌小鼠的抑瘤作用,并初步探索其作用机制。方法:采用H22肝癌移植瘤小鼠模型,分荷瘤阴性对照组、益气活血软坚解毒方低、中、高剂量组和阳性对照组,观察益气活血软坚解毒方对荷H22肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用,并运用荧光定量RT-PCR法评价益气活血软坚解毒方对H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤组织VEGF、TGF-β1RⅡ表达的作用。结果:益气活血软坚解毒方低、中、高剂量组和CTX组对移植性荷H22肝癌小鼠的抑瘤率分别为17.72%、33.99%、23.73%、43.95%;与生理盐水组相比,益气活血软坚解毒方低、中、高剂量组和CTX组瘤重均有显著性差异(P<0.01)。益气活血软坚解毒方能下调H22肝癌小鼠肿瘤组织VEGF、上调TGF-β1RⅡ的表达水平,且低剂量组或中剂量组与生理盐水组相比有显著差异,高剂量组与生理盐水组相比差异非常显著。结论:益气活血软坚解毒方对H22肝癌荷瘤小鼠有明显的抑瘤作用,其抑瘤作用可能与下调肿瘤组织VEGF,上调TGF-β1RⅡ表达水平有关。

IGF-Ⅱ,IGF-Ⅰ R在结肠腺瘤中的表达及其生物学意义

目的:观察IGF-Ⅱ,IGF-ⅠR在结肠腺瘤中的表达,探讨其生物学意义。方法:免疫组化方法分别检测IGF-Ⅱ,IGF-ⅠR,PCNA在正常结肠黏膜组(A组n=20)、低级别上皮内瘤变组(B组n=50)、高级别上皮内瘤变组(C组n=50)和结肠癌组(D组n=20)中的表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:IGF-Ⅱ,IGF-ⅠR,PCNA在结肠癌组和高级别上皮内瘤变组中呈高表达,两者之间无显著差异(P>0.05),分别与低级别上皮内瘤变组、正常大肠黏膜组相比表达有显著差异(P<0.01);低级别上皮内瘤变组、高级别上皮内瘤变组、结肠癌组的凋亡指数(apoptotic index,AI)逐渐降低,且两两比较有显著差异(P<0.01)。IGF-Ⅱ,IGF-ⅠR的表达与增殖指数(proliferative index,PI)成正相关、与AI成负相关;PI,AI在低级别上皮内瘤变组IGF-Ⅱ,IGF-ⅠR阴性和阳性中无显著差异(P>0.05),在高级别上皮内瘤变组则有显著差异(P<0.01)。结论:IGF-Ⅱ,IGF-ⅠR的异常表达与结肠腺瘤癌变密切相关;IGF-Ⅱ,IGF-ⅠR促进细胞异常增殖,抑制肿瘤细胞凋亡,在结肠腺瘤癌变过程中起了重要的作用。

益气降浊颗粒对冠心病(痰浊血瘀型)家兔血脂、miR-21及TGFβRⅡ表达的影响

目的观察益气降浊颗粒对冠心病(痰浊血瘀型)家兔血管内micro RNA-21(mi R-21)和TGFβRⅡm RNA表达水平的影响。方法本实验采用冠心病(痰浊血瘀型)家兔模型作为研究对象,运用荧光定量PCR技术观察mi R-21和TGFβRⅡm RNA在家兔主动脉的表达情况。结果实验中空白组、中药组、模型组中TGFβRⅡ的表达与mi R-21具有相关性(r=-0.564,P<0.05),而中药干预下的动脉硬化模型家兔TGFβRⅡ的表达水平较模型组显著降低,同时可使血脂TC、TG、LDL-C水平降低,HDL-C水平升高(P<0.05)。结论益气降浊颗粒可以显著降低血管中mi R-21和TGFβRⅡ的表达,益气降浊颗粒可能通过调节mi R-21和TGFβRⅡ的表达发挥其稳定斑块的作用。

人重组TGF-β RⅡ亲和核酸筛选方法的建立

目的通过筛选转化生长因子-β受体Ⅱ(TGF-βRⅡ)亲和核酸,探寻拮抗TGF-β活性的新方法。方法以ssDNA5′-TAATACGACTCACTATAGGGAGGACGATGCGG-N60-CAGACGACTCGCCCGA-3′为模板,体外转录获取初始RNA随机库;以人体外重组TGF-βRⅡ为靶目标蛋白行SELEX实验,共进行8轮循环筛选。通过膜结合实验监测筛选所得RNA富集库对TGF-βRⅡ亲和性的进化状态,凝胶阻滞实验检测亲和核酸序列与TGF-βRⅡ的结合强度。结果随着筛选进行,RNA富集库沿着与靶蛋白TGF-βRⅡ亲和性加强的方向进化;从第8轮富集库中分离出两类优势序列,序列A和序列B。膜结合实验显示序列A、B对TGF-βRⅡ有明显的亲和性,但凝胶阻滞实验显示序列A、B均无与蛋白结合的阻滞带出现。结论筛选所得序列A及B与靶蛋白TGF-βRⅡ的亲和性及特异性还不理想,但先导序列A及B的获得为通过后SELEX技术进一步寻找最佳结合序列奠定了基础。

肝细胞癌中Smad7和TGFβRⅠ的表达及与其临床病理的关系

目的 研究Smad7、TGFβRⅠ蛋白在肝细胞癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)中的表达及与其临床病理的关系 ,探讨Smad7在HCC发生、发展中的作用。方法 应用SP免疫组化染色法 ,检测 62例HCC中Smad7、TGFβRⅠ蛋白表达情况 ,并分析它们与HCC临床病理的关系。 结果 62例HCC组织中Smad7、TGFβRⅠ蛋白的阳性表达率分别为 85 .48%、2 9.0 3 % ,Smad7表达明显高于正常肝组织 ,而TGFβRⅠ表达明显低于正常肝组织 (P <0 .0 5 ) ,两者在HCC中表达呈负性相关。且Smad7蛋白表达与肿瘤的临床分期及有无瘤栓、包膜完整性、复发时间长短、血AFP、肿瘤结节数及有无转移有相关性。结论 Smad7与HCC发生、发展密切相关。

子宫内膜癌中TβRⅠ和TβRⅡ基因甲基化状态

目的探讨TβRⅠ和TβRⅡ基因甲基化与子宫内膜癌发生发展的关系。方法应用改进的甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)技术检测60例子宫内膜癌组织及60例癌旁正常组织中TβRⅠ、TβRⅡ基因启动子甲基化情况,分析两基因启动子甲基化与各临床指标之间的关系。结果 TβRⅠ在子宫内膜癌组和癌旁正常组的甲基化率分别为75.0%(45/60)和45.0%(27/60),子宫内膜癌组的甲基化率显著高于癌旁正常组(χ2=11.250,P=0.001)。TβRⅡ在子宫内膜癌组和癌旁正常组的甲基化率分别为68.3%(41/60)和36.7%(22/60),子宫内膜癌组的甲基化率显著高于癌旁正常组(χ2=12.063,P=0.000)。两基因启动子甲基化与临床指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TβRⅠ和TβRⅡ基因启动子甲基化可能与子宫内膜癌的发生有关。

高效液相色谱法测定云南红药胶囊中的三七皂苷R_1、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅰ的含量

目的建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定云南红药胶囊中三七皂苷R_1、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅰ的含量,为云南红药胶囊质量的全面评价提供了科学依据。方法采用Diamonsil C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,进行梯度洗脱(0~12 min,18.0%A;12~19 min,18.0%A→25.0%A;19~27 min,25.0%A→45.0%A;27~34 min,45.0%A→55.0%A;34~40 min,55.0%A→18.0%A),检测波长为203 nm。流速0.9 m L·min^(-1),柱温30℃,进样量为10μL。结果三七皂苷R_1、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅰ5个成分分别在7.32~146.40、4.70~94.00、3.85~77.00、6.97~139.40、11.09~221.80 mg·L^(-1)内与色谱峰峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率均在97.12%~99.86%,RSD≤1.37%(n=6)。结论该研究建立的HPLC法同时测定云南红药胶囊中的5个成分,样品处理方法简便,方法专属性强,测定结果准确,重复性好,为云南红药胶囊质量的全面评价提供了科学依据。

Bax和TGFβRⅡ基因在肺癌组织中的移码突变

目的 探讨Bax和TGFβRⅡ基因在肺癌组织中的移码突变及其与微卫星改变的关系。 方法 用PCR 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 银染法 ,检测 5 0例肺癌组织Bax和TGFβRⅡ基因移码突变及微卫星改变。结果 Bax基因 (G) 8移码突变 12例 ,占 2 4% (12 / 5 0 ) ,主要是碱基丢失。TGFβRⅡ的 (A) 10 未发现移码突变。Bax移码突变与微卫星不稳定和 /或杂合性缺失有密切关系 (P <0 .0 5 )。结论 肺癌组织中存在Bax基因移码突变且与微卫星改变密切相关 。