METTL3调控miR-126介导TGF-β/Smad信号通路影响糖尿病肾病的机制研究

目的:建立糖尿病肾病(Diabetes Kidney Disease,DKD)大鼠模型,探讨METTL3调控糖尿病肾病的作用机制。方法:将SD大鼠适应性喂养7d后,按照随机数字法分为4组,正常对照组(Control组)、糖尿病肾病模型组(DKD组)、糖尿病肾病模型+METTL3干扰对照组(DKD+NC组)和糖尿病肾病模型+METTL3干扰组(DKD+siMETTL3组),每组8只。造模结束后收集大鼠血液标本及肾脏组织,采用全自动生化分析仪分析空腹血糖(Fasting blood glucose,FBG)、尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、24h尿蛋白(Uridine triphosphate,UTP)的表达水平,RT-qPCR法检测miR-126的基因表达,ELISA检测TGF-β1的表达,Western blotting检测METTL3、smad2、smad3、smad7的蛋白水平。结果:与Control组相比,DKD组的FBG、BUN、UTP、TGF-β1、METTL3、smad2、smad3显著升高(P<0.05),体质量、miR-126、smad7显著降低(P<0.05);与DKD组比较,DKD+siMETTL3组的FBG、BUN、UTP、TGF-β1、METTL3、smad2、smad3显著降低(P<0.05),体质量、miR-126、smad7显著升高(P<0.05)。结论:METTL3可以通过调控miR-126及TGF-β/smad通路,介导DKD的进展。

超脉冲二氧化碳点阵激光治疗对凹陷性痤疮瘢痕TGF-β、EGF及bFGF水平变化的影响

目的 研究超脉冲二氧化碳点阵激光治疗对凹陷性痤疮瘢痕转化生长因子-β(TGF-β)、表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平变化的影响。方法 选取2020年4月至2022年2月于自贡市第一人民医院就诊的凹陷性痤疮瘢痕患者104例,依据治疗方案分为对照组(n=51,常规手术治疗)和观察组(n=53,超脉冲二氧化碳点阵激光治疗)。比较两组临床疗效、皮肤情况、血管内皮因子(TGF-β、EGF、bFGF)水平、复发及不良反应发生率。结果 观察组临床总有效率(84.91%)高于对照组(62.75%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组紫质、纹理、色素斑、毛孔评分均下降,且观察组上述评分均比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组TGF-β、bFGF水平比对照组高,EGF水平比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组复发率比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组不良反应总发生率(19.61%)比对照组低(5.66%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 应用超脉冲二氧化碳点阵激光治疗凹陷性痤疮瘢痕患者疗效显著,可有效改善瘢痕组织中的TGF-β、EGF、bFGF表达水平,安全性良好。

基于TGF-β/BMP/Smad信号通路治疗激素性股骨头坏死中医药研究进展

激素性股骨头坏死(steroid-induced osteonecrosis of the femoral head,SIONFH)是由于糖皮质激素使用不当或过度而引起的髋关节疾病,发病机制尚未统一,临床疗效亦不佳。当前,没有效果明确的药物可以延缓疾病进程,而中医药治疗SIONFH在临床上取得一定疗效。即便如此,仍未能完整的从分子生物及细胞生物学角度阐明中药治疗SIONFH的作用机制。转化生长因子-β(TGF-β)/骨形态发生蛋白(BMP)/Smad信号通路的转导是防治SIONFH的研究热点之一,故该文阐明了该信号通路的转导机制以及与SIONFH的联系,检索了基于该通路治疗SIONFH的全部中药及复方并阐述其影响机制。基于中医对SIONFH的认识,现临床上使用补肝肾强筋骨以及活血祛瘀通络类的方药治疗SIONFH,且具有良好的疗效。中药通过调控该通路,可刺激骨髓间充质干细胞成骨分化,降低破骨细胞含量,减少脂肪生成,改善微循环,抗氧化损伤,促进股骨头内血管新生,从而促进股骨头损伤的修复。现基于TGF-β/BMP/Smad信号通路对中医药治疗SIONFH的研究进展做一综述,期许为中医药治疗SIONFH提供理论依据及参考。

基于TGF-β相关基因构建并验证子宫内膜癌风险预后模型

目的:探索基于TGF-β相关基因的子宫内膜癌(EC)预后模型,用于精准评估EC患者的预后。方法:从TCGA数据库下载EC患者的基因表达谱数据和临床资料。筛选EC和正常组织差异表达的TGF-β相关基因。采用单因素回归分析筛选EC预后相关基因。将TCGA整体人群按1∶1分成训练集和验证集。对训练集人群进行多因素Cox回归分析构建风险预后模型,利用生存分析、ROC曲线等在验证集和整个队列中验证预后模型的预测准确性。分析临床特征与模型之间的相关性,并基于TGF-β相关基因预后模型和独立预后的临床特征因素建立Nomogram图。在体外验证BMPR1B对EC生物学功能的影响。结果:构建并验证了6个TGF-β相关基因(PPP2R1B、GDF7、E2F5、BMPR1B、GDF6、TNF)的EC预后模型。K-M曲线分析提示,高风险评分患者较低风险评分患者预后更差。ROC曲线分析提示,该预后模型对于预测患者1、3、5年生存率具有较好的准确性。GESA富集分析显示,与低风险患者相比,高风险患者在细胞周期、DNA复制等方面作用显著。基于TGF-β相关基因和临床特征因素构建了Nomogram图,校准曲线评估其预测准确性较好。敲低BMPR1B表达可显著抑制EC的增殖、迁移和侵袭。结论:本研究构建并验证了一种基于TGF-β相关基因的EC患者预后模型,该模型可用于准确预测EC患者的预后,并基于独立预后因素构建Nomogram图,有助于协助临床医生准确判断患者预后并做出最佳临床决策。BMPR1B是EC的潜在治疗靶点。

泰山磐石散对复发性流产小鼠母胎界面TGF-β、VEGF、PIGF影响

目的 观察泰山磐石散对复发性流产(RSA)小鼠母胎界面血管生成相关调控因子[转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘生长因子(PIGF)]、胎盘蜕膜组织病理学形态的影响,并探讨其降低流产率的作用机制。方法 构建RSA小鼠模型32只,将造模成功的小鼠随机分为4组:模型组及泰山磐石散高、中、低剂量组,每组各8只;构建正常妊娠小鼠模型8只,作为空白组。自妊娠第1天,分别予相应药物干预,14 d后处死孕鼠,收集样本并计算小鼠流产率;采用苏木精-伊红(HE)染色对小鼠胎盘蜕膜组织病理形态变化进行观察;采用ELISA法检测小鼠血清中TGF-β、VEGF、PIGF含量。结果 模型组胎盘及蜕膜组织细胞形态不规则,排列紊乱,血管壁不完整且血管数量明显减少;经泰山磐石散方药干预后,各中药组小鼠胎盘及蜕膜组织病理形态均得到明显改善。与空白组相比,模型组小鼠流产率明显增加(P<0.05),血清中TGF-β、VEGF、PIGF含量显著降低(P<0.05);与模型组比较,泰山磐石散高、中剂量组均可有效降低小鼠流产率(P<0.05),且显著升高血清中TGF-β、VEGF、PIGF含量(P<0.05),其中泰山磐石散高剂量组降低流产率、升高血管生成相关调控因子情况尤为显著。结论 泰山磐石散通过上调TGF-β、VEGF、PIGF含量,参与复发性流产小鼠母胎界面的血管重塑过程,改善血管壁通透性,维持血流供应,从而改善胎盘蜕膜组织病理形态,发挥防治流产作用,提高RSA小鼠胚胎存活率。

TGF-β信号通路对牙源性黏液瘤来源的间充质干细胞成骨分化的影响分析

目的探究转化生长因子-β(TGF-β)信号通路对牙源性黏液瘤(OM)来源的间充质干细胞(OMMSC)成骨分化的影响。方法选择2018年至2020年南京大学医学院附属口腔医院收治的OM患者2例,经手术取部分病灶标本进行OMMSC分离培养。另外选择于该院接受牙种植治疗的年轻患者5例,抽取颌骨骨髓进行颌骨骨髓来源的间充质干细胞(JBMSC)分离培养。通过细胞增殖实验、流式细胞术检测、茜素红S染色进行细胞鉴定。成骨培养7 d后通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β信号通路以及成骨相关基因的表达情况。观察小分子药物SB431542及TGF-β1干预对OMMSC、JBMSC成骨分化能力的影响。结果经分离获得的OMMSC、JBMSC具有梭形形态,表达间充质干细胞表面标志物,并具有成骨分化能力,符合间充质干细胞的特征。与JBMSC相比,OMMSC具有更强的增殖能力。RT-PCR检测结果显示,TGF-β/Smad信号相关因子在OMMSC中呈高表达(P<0.05),成骨相关因子骨桥蛋白(OPN)表达降低(P<0.05)。茜素红S染色结果显示SB431542可显著促进OMMSC成骨分化,而TGF-β1对OMMSC成骨分化有抑制作用。结论该研究成功对OMMSC进行了分离,发现TGF-β信号相关因子在OMMSC中呈高表达,抑制TGF-β信号转导通路可增强OMMSC的成骨能力,为改善OM患者骨缺陷提供参考。

内皮素-1调控SOCC/TGF-β参与房颤大鼠发生心房纤维化

目的探讨内皮素-1(ET-1)对心房颤动(AF)大鼠心房纤维化的作用和机制。方法14只成年雄性SD大鼠随机分配为对照(NC)组、房颤(AF)组;采用连续1周每日尾静脉注射1次氯化钙-乙酰胆碱混合液0.1 ml/100 g的方法建立AF大鼠模型,NC组同等方式注射等量生理盐水;各组均在第1天及第8天记录窦性或AF心电图,超声心动图监测心房大小和心功能;采用HE染色及Masson染色观察心房组织纤维化情况;采用Western blot法检测心房组织中内皮素-1(ET-1)、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、转化生长因子(TGF)-β、钙库操纵性钙通道(SOCC)蛋白Orai1和基质相互作用分子1(STIM1)的表达;培养小鼠心房肌细胞HL-1细胞,以梯度浓度的ET-1处理24 h后,采用Western blot法观察HL-1细胞ET-1/SOCC/TGF-β信号通路中TGF-β、Orai1及STIM1蛋白表达变化;利用siRNA转染方法敲低HL-1细胞中Orai1表达,以合适浓度的ET-1处理细胞24 h,Western blot检测HL-1细胞中TGF-β蛋白的表达情况。结果与NC组相比,超声心动图显示AF大鼠心脏左房内径(LAD)增加(P<0.05);HE和Masson染色结果显示AF组大鼠心房组织纤维化(P<0.05),Western blot检测结果提示AF组心房组织中ET-1、Orai1、STIM1、TGF-β、COL-Ⅰ蛋白表达较NC组增加(P<0.05)。ET-1处理HL-1细胞后,HL-1细胞Orai1、STIM1、TGF-β蛋白表达增多(P<0.05)。敲低HL-1细胞中Orai1表达后,ET-1的处理不再使TGF-β的表达上调。结论AF大鼠心房组织ET-1表达增多,并通过ET-1/SOCC/TGF-β信号通路促进心房纤维化。

miR-1273g-3p调控TGF-β/Smad4信号通路影响结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-1273g-3p调控转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)/mothers against decapentaplegic homolog 4(Smad4)信号通路对结直肠癌细胞生物学功能的影响。方法 采用人结肠上皮细胞株NCM460为对照,对人结直肠癌细胞株HCT116和SW480采用qRT-PCR检测细胞的miR-1273g-3p表达。采用Western blot检测TGF-β和Smad4蛋白的表达。将miR-1273g-3p抑制剂转染至HCT116和SW480细胞中(miR-1273g-3p抑制剂组),并设立转染抑制剂对照剂的空载对照(抑制剂对照组)。采用qRT-PCR验证转染效果。将转染后的HCT116细胞皮下注射至BALB/c裸鼠体内。采用qRT-PCR和Western blot检测转染后细胞中TGF-β和Smad4 mRNA和蛋白的表达。采用细胞增殖和细胞毒性分析(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、划痕实验和transwell小室侵袭实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。通过BiBiServ及TargetScan网站预测mi R-1273g-3p与TGF-β的相关性,并用双荧光素酶报告基因实验验证miR-1273g-3p与TGF-β的结合情况。结果 与人结肠上皮细胞NCM460比较,人结直肠癌细胞HCT116和SW480中miR-1273g-3p、TGF-β蛋白和Smad4蛋白均高表达(均P<0.01)。瞬时转染48 h后,与抑制剂对照组比较,miR-1273g-3p抑制剂组miR-1273g-3p表达降低(P<0.01),TGF-β和Smad4的mRNA和蛋白表达均减少(均P<0.01),细胞的增殖、迁移和侵袭能力均降低(均P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果表明,miR-1273g-3p可以靶向结合TGF-β;SW480细胞中,miR-1273g-3p抑制野生型TGF-β-3’ untranslated region(UTR)质粒转染的荧光素酶活性(P<0.01),而对突变型TGF-β-3’UTR质粒转染的荧光素酶活性无影响(P>0.05)。结论 抑制miR-1273g-3p的表达可抑制结直肠癌细胞HCT116和SW480的增殖、迁移和侵袭能力。此作用可能与TGF-β/Smad4信号通路有关。

去泛素化酶对TGF-β/Smads通路调控机制研究进展

去泛素化是指在蛋白质底物与泛素分子结合的复合物中去除泛素蛋白的一种重要翻译后修饰方式(post translational modifications,PTMs),可通过蛋白功能调节多种细胞生理功能;TGF-β/Smads通路可调控细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移、DNA修复参与炎症、胚胎发育、组织修复、调节免疫功能。文献报道,去泛素化酶可以调控TGF-β/Smads通路,但是具体作用机制尚不清楚。本文对不同去泛素化酶调控TGF-β/Smads通路具体作用机制进行综述。

甘草甜素调节TGF-β/Smad信号通路对肺癌荷瘤小鼠放射性肺损伤的影响

目的 研究甘草甜素(GL)是否可以通过调节TGF-β/Smad信号通路对肺癌荷瘤小鼠放射性肺损伤(RILI)产生影响。方法 取48只小鼠,先随机选出12只小鼠作为NC组,其余小鼠构建肺癌荷瘤小鼠模型并采用X射线照射全胸建立RILI模型,再将小鼠随机分为照射+Model组、照射+GL组(10 mg/kg)、照射+GL+SRI-011381组(10 mg/kg+30 mg/kg TGF-β激动剂)。使用酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;HE染色法检测小鼠肺组织病理损伤;试剂盒检测小鼠肺组织中羟脯氨酸(HYP)、髓过氧化物酶(MPO)含量;免疫组化法(IHC)检测肺组织中TGF-β、α-SMA表达;Western Blot检测小鼠肺组织中TGF-β1、p-Smad2/3、Smad7蛋白表达。结果 与NC组比较,照射+Model组小鼠血清中IL-6、TNF-α水平、HYP、MPO、TGF-β和α-SMA表达、TGF-β1、p-Smad2/3蛋白表达升高,肺组织病理损伤加重,Smad7蛋白表达降低(P<0.05);与照射+Model组比较,照射+GL组小鼠血清中IL-6、TNF-α水平、HYP、MPO、TGF-β和α-SMA表达、TGF-β1、p-Smad2/3蛋白表达减少,肺组织病理损伤减轻,Smad7蛋白表达增加(P<0.05);照射+GL+SRI-011381组中实验检测结果则与照射+GL组结果趋势相反,表明SRI-011381干预后减弱了GL对肺癌荷瘤小鼠RILI的改善作用。结论 甘草甜素可以通过抑制TGF-β/Smad信号通路对肺癌荷瘤小鼠放射性肺损伤进行修护改善。

益气活血通络汤与低分子肝素抗凝对大鼠骨折愈合、血液流变学及TGF-β1表达的影响

目的探究益气活血通络汤与低分子肝素抗凝对大鼠骨折愈合、血液流变学及转化生长因子(TGF)-β1表达的影响。方法选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(A)组、模型(B)组、益气活血通络汤(C)组、低分子肝素(D)组、益气活血通络汤联合低分子肝素(E)组,每组10只,对B、C、D、E组采用骨钳截断加克氏针髓内固定法建立胫骨骨折模型,A组不建立该模型,建模成功后,C组4 g/kg益气活血通络汤灌胃,D组500 U/kg低分子肝素灌胃,E组给予益气活血通络汤联合低分子肝素治疗,A组、B组同期灌胃同体积生理盐水,X线摄片检测骨折愈合程度,苏木素-伊红(HE)染色法检测骨组织病理形态,全自动血流变仪检测血液流变学相关指标,免疫组化法检测骨组织中TGF-β1蛋白表达。结果与A组相比,B组骨折线清晰,且没有形成明显骨痂;与B组相比,C、D、E组骨愈合速度明显加快,C、D组骨折线仍可见但折断端边缘趋于模糊,且形成明显骨痂,而E组骨折基本消失,髓腔再通,外骨痂减少,可见大部分骨痂长入骨折线,已有骨外膜形成并可见骨连接形成;A组骨组织形态完整,骨小梁生长旺盛,排列规则有序,且无坏死区域;B组骨组织形态紊乱,出现部分坏死区域,并可见少量纤维组织;C、D组骨痂组织中可见大量肉芽组织、纤维组织长入,成软骨细胞增生活跃,并有网状交织的骨小梁;E组骨组织形态已趋于完整,排列有序且部分已被正常组织替代,骨小梁排列相对规则,可见部分成熟板状骨形成;与A组比较,B、C、D、E组软骨比例、胫骨组织TGF-β1蛋白表达显著降低,纤维性骨痂比例、全血低切黏度、中切黏度、高切黏度及血浆黏度显著升高(P<0.05);与B组比较,C、D、E组软骨比例、胫骨组织TGF-β1蛋白表达显著升高,纤维性骨痂比例、全血低切黏度、中切黏度、高切黏度及血浆黏度显著降低(P<0.05);与C、D组相比,E组上述指标变化显著(P<0.05),而各组骨性骨痂相比无明显差异(P>0.05)。结论益气活血通络汤联合低分子肝素抗凝具有显著疗效,其可显著促进骨折愈合,改善血液流变学,并促进TGF-β1表达。

白术内酯Ⅲ调节TGF-β/Smad信号通路对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的保护作用

目的 探讨白术内酯Ⅲ调节转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的保护作用。方法 气管内注射博来霉素构建肺纤维化小鼠模型,随机分为模型组、白术内酯Ⅲ低剂量(10mg/kg)组、白术内酯Ⅲ高剂量(20mg/kg)组、白术内酯Ⅲ高剂量(20mg/kg)+SRI-011381(TGF-β激活剂,10mg/kg)组,每组12只,另取12只小鼠气管内注射等剂量生理盐水,设为对照组,分组处理后检测动脉血气指标氧分压(PaO_(2))和二氧化碳分压(PaCO_(2))并计算氧合指数(OI);HE染色检测各组小鼠肺组织病理形态;天狼星红染色检测各组小鼠肺组织纤维化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组小鼠肺组织羟脯氨酸(HYP)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、TGF-β1水平及血清IL-1β、TNF-α、TGF-β1水平;免疫印迹法检测各组小鼠肺组织胶原生成及TGF-β/Smad通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组小鼠肺组织发生肺泡间隔明显增厚及炎性细胞浸润等病理损伤,肺组织CVF及HYP水平、血清及肺组织IL-1β、TNF-α、TGF-β1水平、CollagenⅠ及CollagenⅢ、TGF-β1蛋白表达、p-Smad3/Smad3显著升高(P<0.05)。与模型组比较,白术内酯Ⅲ低剂量组、白术内酯Ⅲ高剂量组小鼠肺组织病理损伤均减轻,肺组织CVF及HYP水平、血清及肺组织IL-1β、TNF-α、TGF-β1水平、CollagenⅠ及CollagenⅢ、TGF-β1蛋白表达、p-Smad3/Smad3均降低(P<0.05);白术内酯Ⅲ高剂量组小鼠肺组织病理损伤相比白术内酯Ⅲ低剂量组进一步减轻,肺组织CVF及HYP水平、血清及肺组织IL-1β、TNF-α、TGF-β1水平、CollagenⅠ及CollagenⅢ、TGF-β1蛋白表达、p-Smad3/Smad3进一步降低(P<0.05)。与白术内酯Ⅲ高剂量组比较,白术内酯Ⅲ高剂量+SRI-011381组小鼠肺组织病理损伤加重,肺组织CVF及HYP水平、血清及肺组织IL-1β、TNF-α、TGF-β1水平、CollagenⅠ及CollagenⅢ、TGF-β1蛋白表达、p-Smad3/Smad3升高(P<0.05)。结论 白术内酯Ⅲ可通过抑制TGF-β/Smad信号激活而减轻博来霉素诱导的炎症,进而降低胶原蛋白表达,减轻肺纤维化。

动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者TGF-β/Smads信号转导通路与认知功能障碍的关系

目的探讨动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aneurysmal subarachnoid hemorrhage,aSAH)患者外周血内转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)/苏氨酸激酶受体(aerine-threonine kinase receptors,Smads)信号转导通路相关因子与认知功能障碍的关系。方法回顾性选取2018年10月至2022年3月崇左市人民医院收治的100例aSAH患者的临床资料,根据患者蒙特利尔认知评估量表(montreal cognitive assessment scale,MoCA)评分分组,其中存在认知功能障碍54例,无认知功能障碍46例。比较2组临床资料、外周血TGF-β、Smad1、Smad3及Smad7 mRNA表达水平;多因素分析通路相关因子与aSAH患者认知功能障碍的关系;采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)评估通路相关因子对aSAH患者认知功能障碍的预测价值。结果认知功能障碍组患者外周血TGF-β、Smad1、Smad3、Smad7 mRNA表达水平较无认知功能障碍组高(P<0.05);多因素显示,通路相关因子与aSAH患者认知功能障碍显著相关(P<0.05);ROC显示,通路相关因子联合预测aSAH患者认知功能障碍的曲线下面积(area under the curve,AUC)优于单独预测(P<0.05)。结论aSAH患者外周血内TGF-β/Smads信号转导通路相关因子高表达,提示该通路可能与患者认知功能障碍有关。

TGF-β/SMAD信号通路在哺乳动物卵巢发育调控中的作用研究进展

TGF-β/SMAD信号转导通路是典型的跨膜转导通路,该通路通过一组配体与受体结合,将细胞外的信号转导入细胞内,激活下游的SMAD蛋白、转录调节靶基因,从而介导配体对细胞的生物学作用。在卵母细胞成熟过程受到多种因子调控,其中一些细胞外信号通过TGF-β/SMAD信号通路发挥调控作用。TGF-β/SMAD信号通路主要通过不同的下游信号分子SMADs以自分泌/旁分泌途径方式发出信号,调控颗粒细胞增殖和卵母细胞生长,影响着卵巢发育。近年来,TGF-β/SMAD信号通路对卵巢发育的调控机制已成为生殖生理学领域研究热点之一,本文综述了TGF-β/SMAD蛋白的受体、TGF-β/SMAD信号通路,并分别从配体、调控因子以及与其他通路的作用关系的角度阐述了不同家畜TGF-β/SMAD通路在卵巢发育中的调控作用,为卵巢发育的调控机制研究提供思路,同时为畜牧业生产提供理论基础。

石蒜碱调控G3BP1/TGF-β/Smad信号通路抑制食管癌细胞增殖

目的:探讨石蒜碱对食管癌细胞增殖的影响,并分析其机制。方法:细胞计数8(cell counting kit-8,CCK-8)法分析细胞增殖抑制率,Western blot法分析GTP酶激活蛋白-Src同源结构域3-结合蛋白1[GTPase activating protein(SH3 domain)binding protein 1,G3BP1]、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3水平。敲低或过表达G3BP1,观察其对细胞增殖抑制率以及G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平的影响。裸鼠成瘤实验验证石蒜碱对裸鼠体内瘤体的瘤重、瘤体积及G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平的影响。结果:2~64μmol/L石蒜碱抑制ECA109细胞增殖,石蒜碱48 h IC50为(16.21±2.35)μmol/L。4、8、16μmol/L的石蒜碱能下调G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3的水平。敲低G3BP1的表达能明显提高石蒜碱对ECA109细胞增殖的抑制作用,促进石蒜碱降低G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平(P<0.05);上调G3BP的表达能明显下调石蒜碱对ECA109细胞增殖的抑制作用,抑制石蒜碱降低G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平(P<0.05)。体内实验显示,与模型对照组比较,25、50、100 mg/kg石蒜碱能降低瘤体体积、瘤体质量,下调瘤体G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平(P<0.05)。结论:石蒜碱能抑制ECA109细胞的增殖,对裸鼠体内ECA109细胞移植瘤抑瘤效果明显,其机制与调控G3BP1/TGF-β/Smad信号通路有关。

基于TGF-β/Smad信号通路研究NF-κB在电针抗慢性疲劳综合征中的作用及机制

目的 观察电针干预对慢性疲劳综合征(CFS)大鼠核转录因子(NF)-κB表达的影响,探索电针治疗CFS的作用机制。方法 清洁级SD雄性大鼠36只,随机将大鼠分为对照组、模型组、电针组各12只,采用负重强迫游泳联合慢性应激刺激造模建立CFS动物模型,电针组选取双侧感觉区、百会、宁神进行治疗,检测各组大鼠行为学指标(鼠尾悬挂实验,力竭游泳实验,水迷宫实验);酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆褪黑素含量;免疫组化法(IHC)检测NF-κB p65蛋白表达;实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测大鼠转化生长因子(TGF)-β1、Smad4 mRNA表达;Western印迹检测大鼠TGF-β1、Smad4蛋白的表达。结果 与对照组比较,模型组鼠尾悬挂实验挣扎次数减少,静止时间明显延长,力竭游泳时间明显缩短,水迷宫用时明显延长,有效区停留时间明显缩短;褪黑素含量昼夜波动程度减弱,变化趋势与对照组不同,海马区NF-κB p65阳性表达细胞数量增多,颜色较深,TGF-β1、Smad4 mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.05);与模型组比较,电针组鼠尾悬挂实验静止时间明显缩短,挣扎次数明显增加,力竭游泳时间明显延长,水迷宫用时明显缩短,有效区停留时间明显延长(P<0.05);褪黑素含量昼夜波动程度明显增强,变化趋势与对照组相似,海马区NF-κB p65阳性表达细胞数量明显减少,颜色较浅,TGF-β1、Smad4的mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论 电针治疗可明显改善CFS大鼠的疲劳状态和学习能力,降低海马区NF-κB蛋白表达,可能是通过调控TGF-β/Smad通路实现的。

人参皂苷Rg3对低密度脂蛋白诱导的肾小球系膜细胞TGF-β/Smad/NF-κB通路及细胞凋亡的影响

目的人参皂苷Rg3对低密度脂蛋白(LDL)诱导人肾小球系膜细胞(HMC)转化生长因子(TGF)-β/Smad/核因子(NF)-κB通路及细胞凋亡的影响。方法将培养的HMC,分别为对照组(不做任何处理)、LDL组(40μg/ml的LDL处理)、LDL 40μg/ml+人参皂苷Rg315μmol/L组(低浓度组)、LDL 40μg/ml+人参皂苷Rg330μmol/L组(中浓度组)、LDL 40μg/ml+人参皂苷Rg360μmol/L组(高浓度组)。用噻唑蓝(MTT)法检测HMC增殖活性;Western印迹检测通路相关蛋白TGF-β、Smad2、Smad3、NF-κB及细胞凋亡相关蛋白、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶酶(caspase)-3蛋白的表达水平。结果与对照组相比,LDL组HMC增殖活性、TGF-β、Smad2、Smad3、NF-κB蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与LDL组相比,低、中、高浓度组HMC增殖活性、TGF-β、Smad2、Smad3、NF-κB、Bcl-2蛋白表达水平明显降低,HMC凋亡率、Bax和Caspase-3蛋白水平明显升高,并呈浓度依赖性(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3可抑制LDL诱导的HMC增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与TGF-β/Smad/NF-κB信号通路密切相关。

石蒜碱通过TGF-β/Smad信号通路调控自噬抑制食管癌细胞增殖

目的:探讨石蒜碱对食管癌细胞增殖的影响,并分析其机制。方法:细胞计数8(CCK-8)法分析细胞增殖抑制率,MDC染色法检测自噬泡,Western blot法分析LC3II/LC3I、Beclin-1、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、p-Smad2/Smad2水平,观察3-MA对石蒜碱调控自噬和凋亡的影响。裸鼠成瘤实验验证石蒜碱对裸鼠体内瘤体的瘤重、瘤体积及自噬、p-Smad2/Smad2水平的影响。结果:2、4、8、16、32、64μmol/L的石蒜碱抑制ECA109细胞增殖(F=22.412,P<0.05),IC50值为(15.56±2.16)μmol/L。4、8、16μmol/L石蒜碱促进自噬泡的产生,增加LC3II/LC3I、Beclin-1水平,降低TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平(P<0.05);3-MA可以逆转石蒜碱对自噬、凋亡及TGF-β/Smad信号通路和Bcl-2/Bax信号通路的影响;体内实验显示,100 mg/kg石蒜碱能降低瘤体体积、瘤体质量,下调p-Smad2/Smad2水平,上调LC3II/LC3I水平(P<0.05)。3-MA可以逆转石蒜碱对瘤体体积、瘤体质量及LC3II/LC3I、p-Smad2/Smad2水平的影响。结论:石蒜碱能抑制ECA109细胞的增殖,促进细胞凋亡,对体内ECA109细胞移植瘤抑瘤效果明显,其机制与调控TGF-β/Smad信号通路激活自噬有关。

NLRP6诱导胶质瘤细胞生物活性及对TGF-β1/Smad蛋白的作用

目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体(NLR)P6诱导胶质瘤细胞生物活性及对转化生长因子(TGF)-β1/Smad蛋白的作用。方法将胶质瘤细胞U251分为正常组(U251细胞)、NC组(U251细胞+NC-空转)和干预组(U251细胞+NLRP6-shRNA),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测24、48和72 h U251细胞增殖,Transwell小室法、流式细胞法、Western印迹和聚合酶链反应(PCR)法分别检测24 h后U251细胞迁移数目、凋亡率、TGF-β1/Smad蛋白和mRNA表达。结果与正常组比较,NC组及干预组细胞侵袭数目、TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平显著降低;细胞凋亡率、Smad4 mRNA及蛋白表达水平显著升高(均P<0.05)。与NC组比较,干预组细胞侵袭数目、TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平显著降低;细胞凋亡率、Smad4 mRNA及蛋白水平显著升高(均P<0.05)。结论沉默NLRP6能够降低胶质瘤细胞U251细胞活性,其作用机制可能与抑制TGF-β1水平及激活Smad4水平相关。

芪倍合剂对UC小鼠模型TGF-β1/Smad2信号通路及Th17/Treg平衡、炎性细胞因子表达的影响

目的探究芪倍合剂对溃疡性结肠炎(UC)小鼠模型转化生长因子(TGF)-β1/Smad2信号通路及T辅助细胞(Th)17/调节T细胞(Treg)平衡、炎性细胞因子表达的影响。方法30只小鼠随机分为对照组、UC组和UC+芪倍合剂组,每组10只。UC组和UC+芪倍合剂组通过葡聚糖硫酸钠构建UC模型,UC+芪倍合剂组通过芪倍合剂灌肠。比较两组结肠黏膜病变情况、外周血炎性细胞因子Th17、Treg和TGF-β1/Smad2信号通路水平。结果与对照组比较,UC组干预后每日疾病活动指数(DAI)评分、结肠病变程度、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1、Th17、Treg、Th17/Treg及结肠黏膜和淋巴细胞中的TGF-β1/Smad2通路水平显著升高,IL-4水平显著降低(P<0.05)。UC+芪倍合剂组干预后DAI评分、结肠病变程度、TNF-α、IL-1、Th17、Treg、Th17/Treg及结肠黏膜和淋巴细胞中TGF-β1/Smad2通路水平显著低于UC组,IL-4水平显著高于UC组(P<0.05)。结论芪倍合剂可以通过抑制结肠黏膜和淋巴细胞中TGF-β1/Smad2通路抑制炎性反应和调节Treg/Th17细胞平衡,从而起到缓解UC的作用。