胃癌及癌前病变组织中TGFα和cyclin E的表达及两者关联性分析

背景与目的:研究发现,转化生长因子α(transforminggrowthfactoralpha,TGFα)或细胞周期素E(cyclinE)表达增高与肿瘤的发生、发展关系密切。但在胃癌前病变中的表达报道较少;两者表达的关联性分析未见报道。本研究旨在检测TGFα和cyclinE在慢性浅表性胃炎、胃癌前病变和胃癌组织中的表达情况,分析两者表达的关联性。方法:用免疫组织化学方法,检测TGFα和cyclinE在上述组织中的表达,分析两者表达在不同病理组织中的差异,以及两者表达的关联性。结果:在慢性浅表性胃炎、肠上皮化生、不典型增生及胃癌组织中,TGFα表达的阳性率分别为15.1%、53.6%、51.7%和61.7%,cyclinE分别为7.5%、28.6%、37.9%和42.6%,两者在肠上皮化生、不典型增生和胃癌的表达均高于在慢性浅表性胃炎的表达(均P<0.05)。在中-高分化腺癌和低分化腺癌,TGFα表达的阳性率分别为41.7%和81.0%,cyclinE分别为16.7%和57.1%,两者在低分化腺癌的表达均高于在中-高分化腺癌的表达(均P<0.05)。在胃慢性炎症组织(含癌前病变)以及在胃癌组织,TGFα和cyclinE的表达均存在显著的关联(分别为P<0.001和P=0.005)。结论:在慢性浅表性胃炎、癌前病变和胃癌组织中,TGFα和cyclinE的表达随病变严重程度以及胃癌恶性程度的增高而增高;

清肝化瘀方含药血清对TGFα诱导SMMC-7721细胞Raf-MEK-ERK信号传导的影响

目的:观察清肝化瘀方含药血清对TGFα诱导人肝癌细胞, 对Raf-MEK-ERK信号传导的影响. 方法:采用血清药理学方法,以病理鼠血清作对照,用Western免疫印迹方法检测清肝化瘀方含药血清对Raf、MEK、ERK蛋白表达影响,RT-PCR方法检测清肝化瘀方含药血清对MEK1mRNA表达影响. 结果:清肝化瘀方含药血清能抑制Raf、MEK、ERK蛋白的表达,但以抑制MEK蛋白为主(P<0.05),能抑制MEK1 mRNA的表达(p<0.05). 结论:清肝化瘀方含药血清能够抑制TGFa诱导的人肝癌细胞增生,阻断TGFa在细胞内的信号传导.

雌激素诱发大鼠原位与移植垂体催乳素瘤中催乳素基因与TGFα和TGFβ1基因的表达

利用本实验室建立的17β雌二醇(17βestradiol,E2)诱致SpragueDawley(SD)大鼠原位垂体和异体移植于肾囊的垂体同时形成催乳素(prolactin,PRL)瘤的动物模型,采用Northern印迹杂交方法,我们观察了E2长期作用(120d)后诱发的原位与移植垂体PRL瘤中PRL基因和两种转化生长因子(transforminggrowthfactor,TGF)TGFα和TGFβ1基因表达水平的改变。结果表明:在E2长期作用后,原位垂体与异体移植于肾囊,从而远离下丘脑的垂体均可形成垂体PRL瘤;原位与移植垂体PRL瘤中均表现PRL基因的高表达,但移植瘤中的PRL基因表达水平低于原位垂体瘤;此外,仅在原位垂体PRL瘤中发现上述两种转化生长因子呈较高水平的表达,移植垂体PRL瘤与正常垂体中均检测不到这两种转化生长因子的表达。上述结果提示,TGFα和TGFβ1可能涉及E2诱发的原位垂体PRL瘤形成;

应激状态下胃粘膜耐受性细胞保护中TGFα,EGFR的免疫组化研究

目的：探讨应激状态下胃粘膜耐受性细胞保护中转化生长因子α（ＴＧＦα）、表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）表达水平的变化。方法： 采用重复浸水束缚应激（ＷＲＳ）制作动物模型；应用免疫组织化学方法动态检测ＴＧＦα及ＥＧＦＲ表达水平的变化。结果：ＴＧＦα主要位于正常粘膜增殖带细胞的胞质内，同时在胃腺基底部、主细胞及壁细胞上亦有表达，其表达部位较广泛；ＥＧＦＲ则定位于粘膜增殖带细胞的胞质及胞膜，以胞膜为主。单次应激使上述２ 种细胞因子的表达均明显减弱，坏死区表达缺失。重复应激后，ＴＧＦα及ＥＧＦＲ的表达明显增强，而且除了粘膜增殖带外，在粘膜的其他部位（包括胃腺腔内）亦有较强表达。结论：胃粘膜耐受性细胞保护作用伴有ＴＧＦα及ＥＧＦＲ表达水平的增强，表明它们在这一现象中有重要的调节作用。

人脑星形细胞瘤EGF、TGFα及其受体EGFR的表达

目的 讨论EGF、TGFα及其受体EGFR的表达与人脑星形细胞瘤发生、发展的联系及其相互关系。方法 用原位杂交及免疫组化技术从mRNA及蛋白水平检测 2 5例人脑星形细胞瘤标本的EGFmRNA和TGFαmRNA基因表达 ,同时检测 5 5例人脑星形细胞瘤标本的EGF、TGFα和EGFR蛋白的表达。结果 2 5例星形细胞瘤原位杂交中EGFmRNA阳性率为 80 % ,TGFαmRNA阳性率为 76 % ,两者的表达水平与肿瘤的病理组织学分级呈正相关。 5 5例星形细胞瘤的免疫组化染色中 ,ihEGF、ihTGFα及ihEGFR的阳性率分别为 85 4 %、94 5 %、98 1% ,三者的表达水平均与肿瘤的病理组织学分级差异显著。EGFmRNA与ihEGF表达及TGFαmRNA与ihTGFα表达均呈正相关。结论 EGF、TGFα及EGFR在人脑星形细胞瘤中的表达与肿瘤组织学分级有关 。

TGFα对胃癌细胞cyclin E和cyclin D1表达的影响

目的探讨TGFα对胃癌细胞cyclinE和D1表达的促进作用,为研究TGFα促胃癌发生发展机制提供重要信息。方法①细胞体外培养,用无血清RPMI-1640阻断法进行G0/G1期同步化,用碘化丙啶染色和流式细胞术,检测其同步化率;②细胞经G0/G1期同步化后,给予2.5%低浓度血清+RPMI-1640培养处理,以及在此基础上分别加入10、30、50μg/LTGFα处理,均作用5h;用免疫荧光染色及流式细胞术,检测细胞cyclinE和D1的表达情况。结果细胞经无血清RPMI-1640阻断法处理,其G0/G1期的百分率由常规培养的54%上升到72%;加入TGFα处理后,细胞cyclinE和D1表达均显著高于单用低血清培养(均P<0.001),并随TGFα剂量的增加而增加;当TGFα浓度为50μg/L时,两者的表达与单用低血清培养比,分别增加了25.18%和27.52%(均P<0.001)。结论TGFα可显著促进胃癌细胞cyclinE和D1的表达,从而发挥其促细胞周期进程的作用。

慢性胃病、胃癌患者TGFα和cyclin E表达与脾证分型的关系

目的:探索慢性胃病、胃癌中 TGFα和 cyclin E 表达与脾证分型的关系。方法:在慢性胃病和胃癌患者中,选取中医脾气(阳)虚、脾阴虚、脾胃湿热、寒湿困脾证患者共143例,进行胃粘膜组织的 TGFα和 cyclin E 免疫组化染色,对各证型的 TGFα和 cyclin E 表达进行比较,并分析它们表达的相关性。结果:TGFα和 cyclin E 在上述四种脾证分型中的表达有显著性差异,TGFα表达的阳性率分别为15.8%、33.3%、41.2%和19.0%,cyclin E 则分别为7.9%、27.3% 31.4% 5和14.3%。TGFα和 cyclin E 表达存在显著的相关关系。结论:在慢性胃病、胃癌中,TGFα和 cyclin E 表达在不同中医证型中有明显差异,在脾胃湿热和脾阴虚证型中较高,在寒湿困脾和脾气(阳)虚证型中较低。TGFα和cyclin E 表达存在相关关系。

TGFα、EGF对绵羊卵母细胞成熟的影响

采用地衣红染色和免疫荧光的方法,观察了培养在基础培养液加BSA、血清、BSA+EGF和BSA+TGFα四组成熟培养液中绵羊卵母细胞的核成熟状态和α-微管蛋白分布,以及成熟培养后皮质颗粒(CG)的分布情况。结果表明培养22h的上述各组卵母细胞的核成熟率分别为63.5%、75.2%、73.1%、69.8%,处于第一次减数分裂末期的比率分别为27.0%、16.3%、15.9%、16.9%,EGF、TGFα和血清的添加明显提高了核的成熟率(P<0.05),显著减少了处于第一减数分裂末期的比例(P<0.05);α-微管蛋白的正常率(66.6%、66.6%、73.6%)也显著高于BSA组(43.3%)(P<0.05);CG发生迁移较好的卵母细胞比率分别为33.9%、58.8%、54.7%、47.9%,与BSA组相比,EGF和血清的添加明显促进了CG向皮质区的迁移(P<0.05)。实验表明TGFα和EGF均促进了绵羊卵母细胞成熟过程中从第一减数分裂末期向第二减数分裂中期的转变,并且能够替代血清中的某些成分促进和改善体外成熟卵母细胞核成熟的质量,EGF比TGFα更能促进绵羊卵母细胞胞质的成熟。

TGFα-PE40对人乳腺癌细胞生长的抑制作用

用免疫组化LSAB法检测人乳腺癌SK BR 3细胞表皮生长因子受体 (EGFR)的表达 ,用结晶紫染色法和3 H 亮氨酸掺入法检测TP40对SK BR 3细胞生长及蛋白质合成的抑制 ,用过量EGF竞争拮抗TP40的细胞毒作用。结果显示 :SK BR 3细胞免疫组化显示出大量棕黄色的EGFR阳性染色。TP40浓度为 1～ 10 0 μg/L时 ,对SK BR 3细胞生长及蛋白质合成呈剂量依赖性抑制。过量EGF能完全拮抗TP40的细胞毒作用。提示 :人乳腺癌SK BR 3细胞能高水平地表达EGFR ,重组TP40对SK BR 3细胞生长具有较强的抑制作用 ,作用部位为细胞的EGFR。

TGFα、EGFR反义寡聚核苷酸对大肠癌生长的抑制作用

研究转化生长因子α(TGFα)、表皮生长因子受体 (EGFR)反义寡聚核苷酸 (ASODN)对人大肠癌生长增殖的作用。反义TGFα、反义EGFR及无关对照ODN经阳离子脂质体包裹后转染人大肠癌HR8348细胞。采用噻唑蓝比色法 (MTT法 ) ,细胞周期分析 ,裸鼠体内接种等方法测定瘤细胞体内外增殖的变化。与对照组HR8348细胞相比 ,经TGFα反义ODN处理的HR8348细胞体外增殖速度减慢 (抑制率达 80 % )、DNA合成受抑、裸鼠体内成瘤率下降 (2 5 %∶ 10 0 % )。经EGFR反义ODN处理的HR8348细胞也得到了类似的结果。TGFα反义ODN、EGFR反义ODN均能有效抑制大肠癌细胞的体内外生长增殖。

下颌单颗后牙即刻种植负载后种植体周围龈沟液TNF-α、IL-1β、TGFα及OCN的变化及意义

目的本研究旨在研究下颌单颗后牙进行即刻种植负载后种植体周围龈沟液中TNF-α,IL-1β,TGFα,OCN的变化及意义,以期从分子水平比较种植体植入后周围组织随时间发生的微观变化。方法本研究共纳入40名患者(男22例,女18例),共植入40枚种植体,植入3d后对种植体进行负载,采集7、15、30、60、90d种植体周围龈沟液,并采用酶联免疫吸附法对其进行分析。结果 TNF-α、IL-1β在7d时高表达(P<0.05),随后缓慢下降。TGFα在15d时达到高峰(P<0.05),随后缓慢下降。OCN逐渐增高,15d后释放加快(P<0.05),在60d后维持高峰状态。但TNF-α,IL-1β,TGFα,OCN在60d后水平皆趋于稳定(P> 0.05)。结论 60d后种植体周围龈沟液中TNF-α,IL-1β,TGFα,OCN的浓度趋于平稳,表明机体已适应前期的负载,提示即刻负载相比于延期负载,在不影响种植体骨结合的情况下,可以缩短患者永久冠修复的时间。

清肝化瘀方含药血清对TGFα诱导人肝癌细胞SMMC-7721 MEK表达的影响

目的观察清肝化瘀方含药血清对TGFα诱导人肝癌细胞增殖和信号传导因子MEK影响。方法采用血清药理学方法,以病理鼠血清作对照,应用MTT比色法观察清肝化瘀方含药血清对TGFα诱导人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用。用Western免疫印迹方法检测对MEK蛋白表达影响,RT-PCR方法检测对MEK1mRNA表达影响。结果肝化瘀方含药血清对TGFα诱导的肝癌细胞SMMC-7721增殖有明显的抑制作用,抑制效应呈时间依赖性。清肝化瘀方含药血清能抑制MEK蛋白的表达和MEK1的mRNA的表达。结论清肝化瘀方含药血清能抑制TGFα诱导的人肝癌细胞增殖,抑制MEK1的mRNA的表达和MEK蛋白的表达,阻断TGFα在细胞内的信号传导。

肝病患者血清TGFα含量与肝功能的关系研究

探讨肝病患者血清TGFα的变化规律及其与肝功能损害的关系。用放射免疫法测定 172例各型肝病患者血清TGFα含量 ,测定各项肝功能指标 :ALT、AST、γ -GT、AKP、TB、A/G、AFP等。 (1)急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化代偿期、肝硬化失代偿期、肝癌患者血清TGFα含量 (x±s)分别为 :(14 19± 7 30 )pg/ml、(11 2 8± 6 84) pg/ml、(8 14± 5 5 5 ) pg/ml、(16 0 2± 9 81) pg/ml、(19 89± 9 0 9)pg/ml,明显高于对照组 (6 86± 0 ,89) pg/ml((P <0 0 5 )。 (2 )TGFα和肝功能指标ALT、AST、γ -GT、AFP的相关有显著性意义 (P <0 0 0 5 ) ;而和AKP、TB、A/G的相关无显著性 (P >0 5 0 )。TGFα与肝病的慢性化及肝功能损害严重程度相关 ,检测血清TGFα对慢性肝病的预后估计尤其是肝硬化恶变有一定的作用。

TGFα-PE40诱导人肝癌SMMC-7721细胞的凋亡

目的 探讨基因重组转化生长因子α－绿脓杆菌外毒素融合蛋白（ＴＧＦα－ＰＥ４０，简称ＴＰ４０）体外诱导人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１凋亡的作用。方法以不同浓度的ＴＰ４０作用于体外培养的肝癌细胞，用流式细胞仪、电子显微镜和琼脂糖电泳的方法分析和检测细胞凋亡。结果在０．０１ｎｇ／ｍｌ浓度时，ＴＰ４０作用于培养肝癌细胞２０小时后，肿瘤细胞的凋亡率为５．６０％；０．０５ｎｇ／ｍｌ时，凋亡率为１７．２２％；０．１ｎｇ／ｍｌ时，凋亡率为 ３７．０４％。电镜显示出典型的细胞核固缩、碎裂征象，琼脂糖电泳呈特征性的“梯状”带。结论 低浓度ＴＰ４０可作为细胞凋亡诱导剂用于肝癌治疗。

疏肝和胃丸对应激大鼠胃黏膜组织血清EGF和TGFα含量的影响

目的:观察疏肝和胃丸对应激大鼠胃黏膜组织及血清EGF和TGFα含量影响。探讨该方对胃黏膜的保护作用机制。方法:采用冷水-束缚应激性胃黏膜损伤大鼠模型,在预先给予疏肝和胃丸混悬液给动物灌胃7d后,观察胃黏膜组织及血清EGF和TGFα含量的变化。结果:疏肝和胃丸能显著提高大鼠胃黏膜及血清EGF、TGFα含量。结论:疏肝和胃丸对应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜保护作用机制可能与激发体内合成和释放内源性EGF、TGFα,促进胃黏膜的新生修复有关。

胃癌及癌前病变中Cylin D_1、TGFα的表达及意义

目的探讨细胞周期素D1(Cylin D1)、转化生长因子α(TGFα)在胃癌及癌前病变中的表达及意义。方法用免疫组织化学的方法检测Cylin D1、TGFα在10例正常胃组织、15例慢性浅表性胃炎、26例肠上皮化生、25例非典型增生及67例胃癌中的表达。结果Cylin D1、TGFα的表达在癌前病变出现,随病变加重表达增强;在胃癌中显著高于癌前病变(P<0.05),并且与胃癌的分化程度、有无淋巴结转移有关(P<0.05)。结论Cylin D1、TGFα与胃癌的发生、发展有密切关系,并且与胃癌的恶性程度有关,二者可能发挥协同作用。

PTK抑制剂对TGFα刺激的胃癌细胞增殖和DNA合成的抑制作用

目的探索蛋白酪氨酸激酶(PTK）剂Tyrphostin51对TGFα刺激的胃癌细胞增殖和DNA合成的抑制作用。方法利用细胞体外培养技术，观察PTK抑制剂Typhostin51对胃癌SGC7901细胞生长的抑制作用，用3H-TdR掺入法检测其对细胞DNA合成的影响；探索其对TGFα刺激的细胞生长和DNA合成的抑制效应。结果在TGFα刺激下，SGC7901增殖加快，细胞生长曲线上移，DNA合成增加；在Tyrphostin51作用下，细胞增殖有所减慢，生长曲线稍下移，DNA合成也减少；而TGFα刺激的细胞生长和DNA合成明显地被Tyrphostin51所抑制。结论PTK抑制剂Tyrphostin51能减缓血清刺激、明显抑制TGFα刺激的胃癌SGC7901细胞生长和DNA合成。

TGFα-PE40对人胰腺癌细胞生长的抑制作用

目的 探讨基因重组转化生长因子α 绿脓杆菌外毒素融合蛋白 (TGFα PE40 ,简称TP40 )对人胰腺癌细胞生长的导向抑制作用。方法 用免疫组化LSAB法检测人胰腺癌SW 1990细胞表皮生长因子受体(EGFR)的表达 ,用结晶紫染色法和 3H 亮氨酸掺入法检测TP40对SW 1990细胞生长及蛋白质合成的抑制 ,用过量被生长因子 (EGF)竞争拮抗TP40的细胞毒作用。结果 SW 1990细胞免疫组化显示出大量棕黄色的EGFR阳性染色。TP40浓度为 1～ 10 0ng/ml时 ,对SW 1990细胞生长及蛋白质合成呈剂量依赖性抑制。过量EGF能完全拮抗TP40的细胞毒作用。结论 人胰腺癌SW 1990细胞能高水平地表达EGFR ,重组TP40对SW 1990细胞生长具有较强的抑制作用 。

TGFα对肝癌细胞SMMC-7721增殖和ERK蛋白的影响

目的 观察TGFα诱导肝癌细胞增殖和对信号传导因子ERK蛋白表达的影响。方法 应用MTT比色法观察不同浓度TGFα对肝癌细胞SMMC 7721的增殖作用。用流式细胞术检测TGFα对肝癌细胞凋亡和细胞周期的影响。用免疫组化方法检测TGFα对ERK蛋白表达影响。结果 1μg/L TGFα作用24h SMMC- 7721细胞增殖率为3% (P>0 05);作用48h后增殖率达16% (P<0.05)。5μg/L TGFα作用24h增殖率达18% (P<0 .05); 作用48h增殖率达24% (P<0 .01), 增殖效应呈时间、剂量依赖性。5μg/L TGFα作用肝癌细胞48h能抑制肝癌细胞凋亡, 使细胞滞留于G2 M期, 增加PI。5μg/L TGFα能促进ERK蛋白在细胞核中的表达。结论 TGFα能促进肝癌细胞增殖, 增加ERK蛋白在细胞核中的表达。