PCNA、EGFR、TGFβRⅠ和TG FβRⅡ在胃癌组织中表达的临床意义

目的:通过检测胃癌和癌旁组织中的增殖细胞核抗原(PCNA)、表皮生长因子受体(EGFR)、转化生长因子βⅠ型和Ⅱ型受体(TGF茁RⅠ和TGF茁RⅡ),探讨表达的临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测38例手术切除的胃癌实质组织和癌远侧切端正常胃组织中PCNA、EGFR、TGF茁RⅠ和TGF茁RⅡ的表达。分析采用t检验、χ2检验和精确概率法。结果:胃癌组织与癌旁正常组织比较,PCNA标记指数和EGFR阳性率升高,TGF茁RⅠ和TGF茁RⅡ的阳性率降低,差异有显著性(P<0.05);经统计学处理,有浆膜外侵者PCNA的标记指数高于无浆膜外侵者,有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者,差异有显著性(P<0.05);EGFR的表达升高,TGF茁RⅠ和TGF茁RⅡ的表达降低,但统计学处理差异没有显著性(P>0.05)。结论:PCNA、EGFR的高表达和TGF茁RⅠ、TGF茁RⅡ的低表达可能与胃癌的发生及其恶性进展有关。

胰腺癌中TGFβⅠ和TGFβⅡ受体的研究

目的:通过对TGFβⅠ和TGFβⅡ受体的基因表达分析,了解两种受体的基因表达与胰腺癌的相关性。方法:对12例正常胰腺组织和35例胰腺癌标本进行ABC免疫组织化学染色分析,P<005有意义。结果:TGFβⅠ和TGFβⅡ受体的阳性率分别为686%(24/35)和60%(21/35)两者均阳性为514%(18/35);并发现两种受体的基因表达与胰腺癌的分期有关(P<001),而TGFβⅡ受体与胰腺癌的分化程度有关(P<005)。结论:提示两种受体的表达与胰腺癌的发生有关,且对此癌的诊断有意义。

脂溢性角化病皮损的表皮中TGF-βⅠ型和Ⅱ型受体表达下调

目的探讨转化生长因子-β受体(transform ing growth factorβreceptor,TGF-βR)在脂溢性角化病皮损中表达水平的变化及其意义。方法采用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-tim e PCR)和S-P免疫组织化学技术分别检测脂溢性角化病及正常对照皮肤中I型和Ⅱ型TGF-β受体(TGF-βRⅠ,TGF-βRⅡ)的表达。结果TGF-βRⅠ和TGF-βRⅡ在脂溢性角化病皮损表皮中的表达较正常表皮显著降低。结论脂溢性角化病皮损中表皮TGF-β受体表达下调有助于表皮细胞的异常增生,促进了该表皮肿瘤的形成。

急性白血病患者血清及骨髓TGF-β_1及其Ⅰ、Ⅱ型受体水平测定的临床意义

目的 探讨转化生长因子 β1(TGF β1)及其Ⅰ、Ⅱ型受体 (TGFR1,TGFR2 )对白血病预后的意义。方法 采用SABC免疫组织化学方法观察TGF β1及TGFR1,TGFR2 在急性白血病患者的表达情况 ,并用ELISA法测定白血病患者血清及骨髓TGF β1水平。结果 白血病细胞TGF β1表达水平与对照组比较差异无显著性 (P >0 .0 5)。初诊患者的TGFR1及TGFR2 表达水平非常显著低于对照组 (P <0 .0 1) ,急性非淋巴白血病 (ANLLL)和急性淋巴白血病 (ALL)之间差别无显著性 (P >0 .0 5)。经治疗达完全缓解 (CR)后 ,这 2型受体的表达水平上升至接近正常 ,病情复发时则又降低。结论 TGF β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体水平的测定有助于判断白血病的预后。

海南血竭总黄酮对肝纤维化大鼠TGFβ1及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的：探讨海南血竭总黄酮对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白沉积及转化生长因子β1（TGFβ1）表达的影响。方法：采用CCl4诱导的大鼠产生肝纤维化模型,设置模型组、空白组、秋水仙碱治疗组、海南血竭总黄酮治疗组,分别灌胃给药。实验末期,取肝,采用HE染色,观察肝脏组织的病理学变化。采用免疫组化（SP）法,RT-PCR法观察TGFβ1的表达。采用免疫组化（SP）法观察I、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果：与正常对照组比较,四氯化碳模型大鼠肝脏出现典型的纤维化表现,肝脏胶原纤维间隙广泛形成,肝小叶与肝窦内胶原增生沉积明显,Ⅰ、Ⅲ型胶原（0.58±0.09）vs（7.40±0.55）,（1.36±0.27）vs（6.48±0.82）,（P均〈0.001）及TGFβ1表达明显增加;大剂量血竭总黄酮应用可以明显减轻肝脏胶原纤维增生沉积（P〈0.05）,抑制肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白（2.38±0.57）vs（7.40±0.55）,（2.13±0.44）vs（6.48±0.82）,（P〈0.050.01）及TGFβ1表达。结论：海南血竭总黄酮可抑制肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGFβ1表达,发挥对肝纤维化的抑制作用。

TGFβ1对转染Smad4/Smad7基因的大鼠系膜细胞Ⅰ、Ⅳ型胶原表达的影响

目的 探讨Smad4 /Smad7信号蛋白在转化生长因子β1(TGFβ1)作用下对大鼠系膜细胞 (MsC)Ⅰ、Ⅳ型胶原表达的影响。方法 经脂质体介导分别将Smad4 /Smad7基因瞬时转染体外培养的大鼠MsC ,并用免疫荧光、RT PCR和Westernblot法检测其转染成功与否 ;再用Westernblot法分别观察转基因MsC及其在TGFβ1作用下 ,其Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白表达的改变。结果 与转染空载体的MsC相比较 ,转染Smad4基因的MsC ,其Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白表达分别增强 1.2和 1.8倍 ,经TGFβ1作用后升高 1.8和 3.3倍 (P <0 .0 1) ;而转染Smad7基因的MsC ,其Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白表达分别下降 1.4和 1.9倍 ,经TGFβ1作用后则降低 1.7和 2 .4倍 (P <0 .0 1)。 结论 TGFβ1/Smad信号通路可从正反两方面调节MsCⅠ。

良性胆管狭窄组织中TGF-β_1及TβRⅠ的表达意义

目的:研究转化生长因子-β1(TGF-β1)、转化生长因子-βⅠ型受体(TβRⅠ)在良性狭窄胆管组织中的表达,探讨其信号转导在良性胆管狭窄形成机制中的作用.方法:采用免疫组织化学SABC法检测TGF-β1,TβRⅠ在23例良性狭窄胆管组织、6例正常胆管组织中的表达.结果:TGF-β1,TβRⅠ在狭窄胆管组织中的阳性率分别为91.3%,82.6%,在正常胆管组织中的阳性率分别为33.3%,16.7%,组间有明显差异(P<0.05).结论:良性胆管狭窄组织中TGF-β1,TβRⅠ的高表达是造成成纤维细胞增殖旺盛,细胞外基质过度沉积,瘢痕增生的重要因素.

骨髓纤维化患者TGF-β_1及其Ⅰ、Ⅱ型受体测定的临床意义

目的 研究转化生长因子 β1(TGF β1)及其Ⅰ、Ⅱ型受体 (TGFR1及TGFR2 )在骨髓纤维化发生、发展中的作用 ,并观察其在骨髓纤维化预后方面的意义。方法 用SABC免疫组织化学方法观察TGF β1及TGFR1、TGFR2在 2 3例骨髓纤维化患者骨髓组织的表达情况 ,并应用ELISA法测定骨髓纤维化患者血清中的TGF β1水平。结果 原发性和继发性骨髓纤维化患者骨髓组织TGF β1及TGFR1的表达水平均明显高于对照组 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,而TGFR2的表达水平与对照组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。骨髓纤维化患者血清TGF β1水平明显高于对照组 ,差异非常显著 (P <0 .0 1) ,继发性骨髓纤维化患者升高更明显 ,骨髓纤维化临床缓解后血清TGF β1水平下降至接近正常。结论 TGF β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体参与骨髓纤维化的发生 ,骨髓纤维化患者TGF β1、TGFR1的检测有助于判断其预后。

雌二醇对肝纤维化大鼠Ⅰ,Ⅲ型胶原及TGFβ_1表达的影响

目的:观察雌二醇对肝纤维化大鼠肝脏胶原沉积和转化生长因子β_1(TGF β_1)表达的影响,研究雌激素对肝纤维化形成的抑制作用,并探讨其可能的机制。方法:设立模型组、治疗对照组、雌二醇组和正常对照组,以四氯化碳复合因素诱导大鼠肝纤维化动物模型,雌二醇组在四氯化碳应用的同时皮下注射苯甲酸雌二醇1mg/kg,2次/wk,共8wk。大鼠肝脏HE染色与Masson染色,分级观察肝组织的炎性坏死与胶原纤维沉积变化,并观察对大鼠肝纤维化形成过程中肝脏表达Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白及对TGF β_1的影响。结果:与正常对照组比较,四氯化碳模型大鼠出现典型的肝纤维化表现,肝脏胶原纤维间隔广泛形成,肝小叶与肝窦内胶原增生沉积明显,Ⅰ,Ⅲ型胶原(0.58±0.26vs 6.34±2.24,1.07±0.49 vs 5.28±1.28,P值均<0.001)及TGF β_1基因表达明显增多;雌二醇应用可以明显减轻肝脏内胶原纤维增生沉积P<0.05),抑制肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白(2.47±0.76 vs 6.34±2.24,3.02±1.20 vs5.28±1.28,P值均<0.05)及TGF β_1的合成表达。结论:雌二醇可抑制肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白及TGF β_1的合成表达,发挥对肝纤维化的抑制作用。

红花黄色素对实验性肾间质纤维化大鼠TGF-β及Ⅰ型胶原表达的影响

目的观察红花黄色素注射液对肾间质纤维化大鼠TGF-β及Ⅰ型胶原表达的影响,并探讨其肾脏保护机制。方法45只雄性SD大鼠,随机分为假手术组(A组)、单侧输尿管梗阻(Unilateral ureteral obstruction;UUO)组(B组)、UUO+红花黄色素治疗组(C组),各15只。C组红花黄色素5 mg/kg.d,造模术前1天开始腹腔注射给药,各组术后10 d处死大鼠,处死后取术侧肾组织行HE、Masson染色,转化生长因子(Transforming growth factor-β;TGF-β1),Ⅰ型胶原(CollagenⅠ,ColⅠ)免疫组化检测、结果应用图像分析系统进行半定量分析。结果B组、C组可见明显肾间质纤维化的病理改变。C组与B组相比,肾间质纤维化病变程度较轻。免疫组化结果提示:C组与B组相比TGF-β1、ColⅠ表达减少(P<0.01)。结论注射用红花黄色素对大鼠肾间质纤维化有保护作用,这种作用可能是通过抑制TGF-β1的表达,减少Ⅰ型胶原合成的作用实现的。

病理性瘢痕组织中TGF-β_1及其Ⅰ、Ⅱ型受体的表达

目的检测病理性瘢痕组织中TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体(TβRⅠ,TβRⅡ)。方法应用免疫组织化学SABC法检测60例病理性瘢痕(增生期瘢痕23例,退化期瘢痕9例;早期瘢痕疙瘩10例,晚期瘢痕疙瘩18例)、15例正常皮肤及15例非病理性瘢痕组织中TGF-β1、TβRⅠ和TβRⅡ的表达。结果病理性瘢痕组织中,TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ阳性表达率均高于非病理性瘢痕与正常皮肤组织(P<0.01)。增生期瘢痕组织中TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ阳性表达率均高于退化期瘢痕组织(P<0.05或0.01)。瘢痕疙瘩组织中,早期病变与晚期病变组织比较,TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ阳性表达率差异均无统计学意义(P>0.05)。病理性瘢痕组织中,TβRⅠ、TβRⅡ表达呈正相关(r=0.53,P<0.01)。结论病理性瘢痕的发生与TGF-β信号转导异常活化有关。

冲击波干预成人骨髓间充质干细胞后IGF-Ⅰ和TGF-β1的表达及意义

[目的]在体外成功分离培养骨髓间充质干细胞(hMSCs)和测得理想冲击波(ESW)干预能量的基础上,观察体外冲击波干预后成骨活性因子IGFⅠ和TGFβ1表达,探讨其促进成骨作用。[方法]将5kV、100频次的体外冲击波作用于第1代骨髓间充质干细胞,采用免疫细胞化学法隔代观察(P1P11)胰岛素样生长因子Ⅰ(IGFⅠ)和转化生长因子β1(TGFβ1)的表达,计数阳性率;并进行统计学分析,设定P<0.05为有统计学差异。[结果]ESW干预后的第3代细胞IGFⅠ染色,胞浆及胞核中出现大量黄色棕黄色颗粒,对照组无明显着色;第7代干预组IGFⅠ呈强阳性(87.9%);TGFβ1出现较晚,第9代细胞TGFβ1阳性率为72.2%,随后开始下降;与对照组差异显著(P<0.01)。[结论]ESW干预能够提高hMSCs增殖活性,IGFⅠ和TGFβ1等的不同时期和不同程度表达是体外冲击波促进hMSCs成骨活动的适时信号和有力证据。

平喘Ⅰ号对呼吸道合胞病毒哮喘小鼠NF-κB、TGF-β影响的研究

目的:观察平喘Ⅰ号对呼吸道合胞病毒(RSV)感染引起BALB/c小鼠哮喘模型肺组织中核转录因子-κB(NF-κB)、转化生长因子-β(TGF-β)含量的影响,探讨其治疗哮喘发作的作用机制。方法:72只BALB/c小鼠随机分成6组,随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松组、平喘Ⅰ号低、中、高剂量组,每组12只。予RSV致敏,除正常对照组和模型对照组用等量生理盐水外,其余各组用相应药物干预。末次激发48h后取肺组织病理切片采用免疫组化法测定各组NF-κB和TGF-β含量。结果:与正常对照组比较,哮喘模型组小鼠肺组织中NF-κB、TGF-β含量明显增高(P<0.01)。与模型对照组比较,平喘Ⅰ号各剂量组和地塞米松组均可降低哮喘小鼠肺组织中NF-κB和TGF-β水平(P<0.01或P<0.05),其中平喘Ⅰ号高剂量组与地塞米松组水平接近。结论:平喘Ⅰ号能降低哮喘小鼠肺组织中NF-κB、TGF-β含量,并具有量效关系。由此推测,通过降低肺组织中NF-κB和TGF-β水平,从而减轻气道炎症反应和气道组织的重构,是平喘Ⅰ号治疗哮喘的作用机制之一。支气管哮喘(简称哮喘)是由多种细胞(如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、淋巴细胞等)和细胞组分共同参与的气道慢性炎症性疾病。本病反复发作,可产生气道不可逆性狭窄和气道重塑,致使病情缠绵难愈。平喘Ⅰ号是治疗哮喘急性发作的经验方,经过长期的临床治疗和观察,证实对小儿哮喘发作有良好的治疗作用。本研究的主要目的是观察哮喘小鼠肺组织中核转录因子-κB(NF-κB)、转化生长因子-β(TGF-β)的含量变化,探讨平喘Ⅰ号治疗哮喘的可能作用机理。

TGF-β增强rhBMP-2诱导成骨中Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA及碱性磷酸酶的表达

目的 :对TGF β增强rhBMP 2诱导成骨中CollagenⅠ、ⅡmRNA及碱性磷酸酶 (ALP)的表达进行研究。方法 :BALB/c小鼠 110只随机分 2组 ,每组 5 5只。rhBMP 2 /TGF β为实验组 ,rhBMP 2为对照组 ,于术后 3～2 1d 8个时间点取材 ,用原位杂交方法对新生骨组织中的Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA进行检测 ;对ALP活性进行定量分析 ,观察 2组在诱导成骨中CollageⅠ、ⅡmRNA及ALP的表达情况。结果 :(1)Ⅱ型胶原mRNA的出现是和成软骨、软骨细胞的出现相伴随的 ;(2 )做为成骨细胞成熟标志物的Ⅰ型胶原mRNA、ALP在软骨形成期即有表达 ,随着成骨细胞的出现 ,骨组织的形成Ⅰ型胶原mRNA仍表现为高表达 ,而ALP的表达则呈下降趋势 ;(3 )实验组CollagenⅠ、ⅡmRNA及ALP的表达早于对照组。结论 :TGF β增强了rhBMP 2诱导成骨中CollagenⅠ、ⅡmRNA及ALP的表达。

肝细胞癌中Smad7和TGFβRⅠ的表达及与其临床病理的关系

目的 研究Smad7、TGFβRⅠ蛋白在肝细胞癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)中的表达及与其临床病理的关系 ,探讨Smad7在HCC发生、发展中的作用。方法 应用SP免疫组化染色法 ,检测 62例HCC中Smad7、TGFβRⅠ蛋白表达情况 ,并分析它们与HCC临床病理的关系。 结果 62例HCC组织中Smad7、TGFβRⅠ蛋白的阳性表达率分别为 85 .48%、2 9.0 3 % ,Smad7表达明显高于正常肝组织 ,而TGFβRⅠ表达明显低于正常肝组织 (P <0 .0 5 ) ,两者在HCC中表达呈负性相关。且Smad7蛋白表达与肿瘤的临床分期及有无瘤栓、包膜完整性、复发时间长短、血AFP、肿瘤结节数及有无转移有相关性。结论 Smad7与HCC发生、发展密切相关。

胰腺癌中TGFβⅠ和TGFβⅡ受体研究

目的通过对TGFTGFβⅠ和TGFβⅡ受体的基因表达分析,了解两种受体的基因表达与胰腺癌的相关性。方法对12例正常胰腺组织和35例胰腺癌标本进行ABC免疫组织化学染色分析,结果以P＜0.05有意义。结果TGFβⅠ和TGFβⅡ受体的阳性率分别为68.6％（24／35）和60％（21／35）两者均阳性为51.4（18／35）;并发现两种受体的基因表达与胰腺癌的分期有关（P＜0.01）,而TGFβⅡ受体与胰腺癌的分化程度有关（P＜0.05）。结论结果提示两种受体的表达与胰腺癌的发生有关,且对此癌的诊断有意义。

三七总皂甙对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β_1的影响

目的 :观察三七总皂甙对肝纤维化大鼠胶原合成及TGF β1表达的影响。方法 :用四氯化碳复合因素致大鼠肝纤维化模型 ,同时给与三七总皂甙治疗 ,免疫组化观察Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF β1的合成表达 ,纤维化程度分级。结果 :三七总皂甙能抑制肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF β1的合成表达 ,减轻肝纤维化程度。结论 :三七总皂甙具有抗肝纤维化作用 。

抗TGF-β2抗体对滤过泡瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的观察抗转化生长因子-β2(TGF-β2)抗体对体外培养的滤过泡成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响。方法利用手术修复人眼小梁切除术后失败滤过泡修复时切除下来的瘢痕组织进行组织块培养,获得成纤维细胞(FB)。将0、0.01、0.1、1μg/mL抗TGF-β2抗体作用于FB24h以及0.14μg/mL(半数抑制率质量浓度,IC50)抗体作用0、24、48、72h,通过生物化学显色法、RT-PCR法检测抗TGF-β2抗体对成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达量。结果在FB中加入0、0.01、0.1、1μg/mL抗TGF-β2抗体作用24h及IC50质量浓度处理0、24、48、72h,结果显示随着抗TGF-β2抗体质量浓度增加及作用时间延长,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达依次减少,羟脯氨酸(HPr)及胶原含量逐渐降低(P<0.05)。结论抗TGF-β2抗体能减少Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达及合成。

肾清饮对肾间质纤维化大鼠Ⅰ型胶原及TGF-β_1表达的影响

目的:探讨中药复方肾清饮(SQY)对实验性大鼠肾间质纤维化的影响及其机制。方法:40只雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、SQY预防组、SQY治疗组和苯那普利组,每组8只。适应性饲养1周后,除正常对照组外其余均采用腺嘌呤灌胃法建立大鼠肾间质纤维化动物模型,6周后采血分离血浆测定内皮素-1(ET-1)含量,处死大鼠,分离肾脏,应用HE及Masson染色,观察肾脏组织病理学改变,免疫组化方法检测肾组织Ⅰ型胶原(ColⅠ)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果:肾清饮及苯那普利各组可减轻肾小管-间质损害及纤维化程度;免疫组化半定量分析显示各治疗组肾脏ColⅠ、TGF-β1的表达量和血浆ET-1含量均少于模型组(P<0.05)。结论:肾清饮有防治肾间质纤维化的作用,其机制可能是通过减少肾组织ColⅠ的沉积、减少血浆ET-1含量和降低肾组织TGF-β1表达而发挥作用。

大鼠TGF-β1 mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法的建立

目的 建立检测大鼠TGF- β1mRNA表达水平的SYBRGreenⅠ荧光定量RT- PCR方法。方法 摸索SYBRGreenⅠ工作液的配制方法,筛选PCR反应液,优化反应中引物和MgCl2 的浓度,以actin为对照,建立大鼠TGF -β1mR NA表达水平的SYBRGreenⅠ荧光定量RT PCR方法并检测大鼠肾皮质TGF -β1mRNA表达水平。结果 SYBRGreenⅠ工作液,4 0倍水溶液稳定性好,最佳反应稀释度为1∶1 0 0 0 0。大鼠TGF β1表达水平的SYBRGreen荧光定量PCR方法,TGF- β1和actin的最佳MgCl2 反应浓度分别为2 5mM和3 5mM ,引物浓度分别为0 . 8μM和0. 5μM ,特异扩增产物的熔解温度分别为88 1和88 .6℃,因此选择在85℃时收集荧光信号。正常大鼠TGF- β1的Ct值在2 9 0 3,actin的Ct值在2 4 .86 ,扩增效率分别为0 . 995和1 . 0 8。结论 通过优化反应条件和特异性分析,成功地建立了特异、敏感的大鼠TGF- β1mRNASYBRGreenⅠ荧光定量RT PCR。SYBRGreenⅠ荧光定量PCR快速、敏感、特异、经济,可以满足临床和科研的需要。