肾衰饮通过TGFβ1/MKK3/p38MAPK/CTGF途径对肾间质纤维化大鼠的影响及分子机制

目的从TGFβ1/MKK3/p38MAPK/CTGF途径角度,探讨肾衰饮延缓大鼠肾间质纤维化的可能作用机制。方法将60只雄性SD大鼠适应性喂养3天后,按体重随机分为两组,即假手术组10只,造模组50只。造模采用左侧输尿管结扎术建立肾间质纤维化大鼠模型。造模成功后,将大鼠再随机分为五组:模型组,肾衰饮低剂量组,肾衰饮中剂量组,肾衰饮高剂量组及尿毒清组。分别按人与大鼠1:1/2,1:1,1:2和1:1灌胃各给药组大鼠,假手术组与模型组予生理盐水0.00015ml/10g灌胃,M组:9.56 g/(kg·d)。实验期间进行一般情况观察,灌胃治疗14天后结束实验,各组大鼠禁食、不禁水12小时,第二日早8:00称重,进行取材。收集24小时尿,全自动生化分析仪一次性检测尿肌酐(UCr)、微球蛋白(β2-MG)及尿微量白蛋白(mAlb)含量,髂总动脉分支处穿刺采血测定血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)含量;HE染色和Masson染色观察肾脏组织病理学改变及胶原沉积情况;免疫组织化学法检测肾脏组织相关蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肾脏组织miRNA21及相关mRNA的表达水平;免疫印迹法(Western Blot)检测肾脏组织相关蛋白表达水平。结果与假手术组大鼠比较,模型组大鼠精神倦怠,明显消瘦,排便、排尿异常。Scr、BUN、Ucr、β2-MG、mAlb显著升高(P<0.01)。HE染色模型组大鼠可见系膜增生,肾小管扩张或萎缩,肾小球硬化且形态不规则,球囊粘连,纤维化组织增多,间质增宽,可见炎性细胞浸润。Masson染色可见大鼠肾脏组织可见系膜增厚,可见大量肌成纤维广泛表达和胶原纤维沉积,模型组大鼠肾脏组织模型组大鼠肾脏组织TGF-β1、ASK-1、MKK3、CTGF、α-SMAmRNA的表达显著增高(P<0.01或P<0.05),E-cadherinmRNA的表达明显降低(P<0.05),TGF-β1、ASK-1、MKK3、p-p38MAPK、p-ATF2、CTGF、MEF2C蛋白水平显著增高(P<0.01或P<0.05);经给药治疗后,各给药组大鼠上述指标均明显好转(P<0.01或P<0.05),其中以肾衰饮高剂量组最为显著,明显优于尿毒清组(P<0.01或P<0.05)。结论肾衰饮可能通过抑制TGFβ1/MKK3/p38MAPK/CTGF途径,改善ECM降解酶系统功能异常,延缓肾间质纤维化。

黄芪三萜皂苷通过抑制TGF-β1/Smad2、p38MAPK信号抑制CVB3诱导的心肌纤维化

目的本文旨在研究黄芪三萜皂苷(astragalus saponins,AST)对CVB3诱导心肌纤维化的保护作用及机制。方法使用CVB3病毒和BALB/c小鼠制备病毒性心肌炎模型并使用AST进行干预。记录不同处理组小鼠的生存曲线、检测不同干预组小鼠外周血中CK-MB水平、心肌组织HE染色和天狼星红染色检测心肌损伤和纤维化水平及通过western blot和qPCR检测心肌组织中TGF-β1、Smad2及p38MAPK水平以研究AST的作用机制。结果 AST能够显著提高小鼠的生存率,显著降低CVB3诱导的心肌损伤和外周血中CK-MB水平。与CVB3组小鼠比较,AST干预组小鼠心肌组织纤维化面积显著减少。无论是RNA水平还是蛋白水平,CVB3能够显著诱导TGF-β1、Smad2及p38MAPK在心肌组织中的表达,而AST对此具有显著地抑制作用。结论 AST对CVB3诱导的心肌组织纤维化具有显著地抑制作用,这种保护作用与抑制CVB3诱导的TGF-β1/Smad2、p38MAPK信号在心肌组织中的活化有关。