防疤烧伤膏对大鼠创面愈合过程中TGFβ_1基因表达的影响

目的:观察防疤烧伤膏对大鼠伤口愈合过程中 TGFβ_1,mRNA 表达及蛋白含量的影响。方法:采用大鼠皮肤切除致伤模型,创面外用防疤烧伤膏,并采用碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth,bFGF)和空白处理作为阳性和阴性对照。伤后3、7、14d 取创面组织,经10%中性福尔马林固定,石蜡包埋,切片后采用免疫组化和原位杂交的方法检测伤口组织中 TGFβ_1mRNA 和其蛋白含量的变化。结果:与空白对照组相比,防疤烧伤膏处理后的创面组织细胞内 TGFβ_1的 mRNA 和蛋白含量明显减少。结论:防疤烧伤膏在促进创面愈合的同时,能通过抑制创面组织细胞中 TGFβ_1的基因表达和蛋白含量的升高,因此,可能使伤口愈合后的瘢痕形成减少。

尿毒清颗粒对腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭大鼠肾皮质TGF-β_1及其下游基因mRNA表达的影响

为了研究尿毒清颗粒的作用机制,以灌胃腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭Wistar大鼠为实验材料,用SYBR Green I实时荧光定量PCR(Real-time Fluorescent Quantitative PCR,Real-time FQ-PCR)技术检测了大鼠肾皮质转化生长因子-β1(Transfer Growth Factor-β1,TGF-β1)及其下游基因mRNA的表达变化,利用免疫组织化学(Immuno Histo Chemistry,IHC)技术检测了CRF大鼠肾皮质TGF-β1蛋白表达的变化.结果发现,尿毒清颗粒可以降低慢性肾功能衰竭大鼠肾皮质TGF-β1及其下游基因mRNA的表达,能够降低大鼠肾皮质TGF-β1蛋白的表达,P<0.05,差异具有显著性.尿毒清颗粒可以通过TGF-β1通路起到缓解慢性肾功能衰竭大鼠病理变化的作用,为尿毒清颗粒治疗慢性肾功能衰竭药理机制研究提供了实验基础.

紫外线照射对小鼠创面TGFβ_1基因表达和蛋白含量影响的研究

目的 研究紫外线照射不同次数对小鼠烫伤皮肤TGFβ1 基因表达及其蛋白含量的影响。方法 3 6只昆明种小鼠 (18～ 2 0g) ,随机分为 6组 :①正常皮肤组 (NS组 ) ;②烫伤后 1d对照组 (B1 C组 ) ;③烫伤后 7d对照组 (B7C组 ) ;④紫外线照射 1次组 (UV1 组 ) ;⑤紫外线照射 3次组 (UV3组 ) ;⑥紫外线照射 5次组 (UV5组 )。致B1 C、B7C、UV1 、UV3、UV5组小鼠皮肤深Ⅱ度烫伤 ,然后用紫外线以不同次数照射UV1 、UV3、UV5组小鼠烫伤创面 ,用原位杂交、免疫组化的方法检测TGFβ1 mRNA及其蛋白表达水平。结果 UV1 、UV3、UV5组TGFβ1 mRNA及蛋白含量明显增加。图象分析表明 :NS组、B1 C组均与UV1 、UV3、UV5组之间具有极显著性差异 (P <0 .0 0 1)。UV3、UV5组较UV1 组的TGFβ1 蛋白表达水平高 (P <0 .0 5 ) ,但UV3与UV5组之间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 紫外线可促进小鼠创面TGFβ1 表达 ,TGFβ1 的表达和蛋白含量的变化与创面愈合有关。

实验性骨延长区TGF-β_(1)的基因表达和细胞定位

目的 了解骨延长过程中TGF β1 基因在骨延长区组织细胞的表达和定位 ,从分子水平探讨延长区骨修复的机制。方法 采用胫骨上干骺端截骨延长 (1.0mm d)动物模型 ,14只山羊分 7个时相点取材。通过延长区组织冰冻切片 ,TGF β1 地高辛标记的cDNA探针原位杂交。结果 延长早期延长区阳性表达细胞逐渐增加 (15d)至最高峰 ,此阶段主要定位于增生的纤维细胞和血管内皮细胞 ;以后细胞阳性表达率迅速下降 ,定位于延长区骨小梁边缘的成骨细胞。结论 TGF β1 在延长区骨修复过程中具有重要作用 ,提高和维持延长区TGF β1 基因高水平有效表达 ,可能对促进和加快延长区骨愈合具有重要的意义。

人脑胶质瘤免疫抑制因子TGFβ_2及TGFβ_1的基因表达

目的 研究人脑胶质瘤主要免疫抑制因子转化生长因子TGFβ2 及TGFβ1的基因表达与其胶质瘤恶性程度的关系。方法 采用Northern杂交、免疫组化和Western杂交法检测了 5 0例胶质瘤、3例恶性胶质瘤体外细胞系和 8例正常脑组织TGFβ2 的表达水平。同时检测其同型异构体TGFβ1的表达水平。结果 正常脑组织几无TGFβ2 和TGFβ1表达 ,而胶质瘤均表达 2 .8和 /或 5 .1kb的TGFβ2 mRNA片段和约 2 5 0 0 0u及 30 0 0 0u的蛋白 ;TGFβ2 和TGFβ1表达水平随肿瘤恶性程度增高而增高。结论 TGFβ2 和TGFβ1表达水平与肿瘤恶性程度呈正相关 ,TGFβ2 和TGFβ1可作为恶性胶质瘤免疫基因治疗的候选基因。

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β_1mRNA基因表达的影响

目的:采用治疗小儿病毒性肺炎痰热闭肺证的有效中药制剂清肺口服液,研究其对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞的转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA基因表达的影响。方法: 以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,用清肺口服液含药血清作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测不同组细胞TGF-β1的mRNA 基因表达,并进行比较。结果:病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1mRNA基因表达明显增强(P <0．01),含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TGF-β1的mRNA表达(P<0．01)。结论:腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高;清肺口服液可下调TGF-β1的mR- NA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。

增生性瘢痕形成和成熟过程中TGF-β_1及其下游信号分子的基因表达变化

目的:探讨转化生长因子-β_1(TGF-β_1)及其下游信号分子 smad2,smad3和 smad4在伤后不同时期的增生性瘢痕组织中的表达变化规律及其可能的生物学意义。方法:用病理学技术检测增生性瘢痕和正常皮肤的结构特征后,提取16例不同发生时期的增生性瘢痕(4个月～11年)和8例正常皮肤组织的总 RNA 后,分离mRNA,用 RT-PCR 方法检测这4种基因在不同组织中的表达变化规律。结果:TGF-β_1,smad2,smad3和smad4基因在正常皮肤和增生性瘢痕中都有表达。TGF-β_1在不同类型组织中表达水平相近似。与正常皮肤相比,smad2,smad3和 smad4基因的转录本含量在增殖期的增生性瘢痕中明显升高,在成熟期的增生性瘢痕中smad2基因表达量恢复到正常皮肤水平,而 smad3和 smad4基因表达虽有所减弱,但两种基因的 mRNA 含量仍明显高于正常皮肤(P<0.05)。结论:信号分子 smad2,smad3和 smad4基因表达增强可能是增生性瘢痕形成的机制之一,而 smad2表达降低,其介导的信号通路减弱可能与增生性瘢痕达到相对稳定的成熟状态有关,而TGF-β_1在增生性瘢痕形成过程中的作用需进一步研究。

雌激素诱发大鼠原位与移植垂体催乳素瘤中催乳素基因与TGFα和TGFβ1基因的表达

利用本实验室建立的17β雌二醇(17βestradiol,E2)诱致SpragueDawley(SD)大鼠原位垂体和异体移植于肾囊的垂体同时形成催乳素(prolactin,PRL)瘤的动物模型,采用Northern印迹杂交方法,我们观察了E2长期作用(120d)后诱发的原位与移植垂体PRL瘤中PRL基因和两种转化生长因子(transforminggrowthfactor,TGF)TGFα和TGFβ1基因表达水平的改变。结果表明:在E2长期作用后,原位垂体与异体移植于肾囊,从而远离下丘脑的垂体均可形成垂体PRL瘤;原位与移植垂体PRL瘤中均表现PRL基因的高表达,但移植瘤中的PRL基因表达水平低于原位垂体瘤;此外,仅在原位垂体PRL瘤中发现上述两种转化生长因子呈较高水平的表达,移植垂体PRL瘤与正常垂体中均检测不到这两种转化生长因子的表达。上述结果提示,TGFα和TGFβ1可能涉及E2诱发的原位垂体PRL瘤形成;

TGFβ1对转染Smad4/Smad7基因的大鼠系膜细胞Ⅰ、Ⅳ型胶原表达的影响

目的 探讨Smad4 /Smad7信号蛋白在转化生长因子β1(TGFβ1)作用下对大鼠系膜细胞 (MsC)Ⅰ、Ⅳ型胶原表达的影响。方法 经脂质体介导分别将Smad4 /Smad7基因瞬时转染体外培养的大鼠MsC ,并用免疫荧光、RT PCR和Westernblot法检测其转染成功与否 ;再用Westernblot法分别观察转基因MsC及其在TGFβ1作用下 ,其Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白表达的改变。结果 与转染空载体的MsC相比较 ,转染Smad4基因的MsC ,其Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白表达分别增强 1.2和 1.8倍 ,经TGFβ1作用后升高 1.8和 3.3倍 (P <0 .0 1) ;而转染Smad7基因的MsC ,其Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白表达分别下降 1.4和 1.9倍 ,经TGFβ1作用后则降低 1.7和 2 .4倍 (P <0 .0 1)。 结论 TGFβ1/Smad信号通路可从正反两方面调节MsCⅠ。

人TGFβ_1cDNA高表达重组质粒的构建

目的为了得到基因工程制备的人重组TGFβ1，构建人TGFβ；cDNA高表达重组质粒。方法从人血小板中提取总RNA，经RT－PCR得到TGFβ；cDNA基因，并克隆到表达质粒pBLMVL2中，构建了在PL启动控制基因表达质粒pBLMVL2－TGFβ；，使其在大肠杆菌中进行温敏诱导表达。结果RT－PCR得到的TGFβcDNA经DNA序列分析与文献报道一致，pBLMVL2－TGFβ1在大肠杆菌中表达产物人重组TGFβ1经还原型SDS－PAGE电泳，呈一条蛋白条带，分子量12．5kd，表达产物约占全菌蛋白20％。结论构建的重组质粒pBLMVL2－TGFβ1能高表达人重组TGFβ1。

人成熟型TGF-β_1基因T克隆载体的构建

目的 构建人成熟型TGF β1基因T克隆载体 ,为进一步研究人成熟型TGF β1的原核表达和功能打下基础。方法 应用RT PCR技术从人外周血单个核细胞扩增人成熟型TGF β1编码区cDNA基因 (336bp) ,并将其克隆至pUCM T载体 ,经限制性核酸内切酶EcoRI,HindIII的酶谱分析和DNA测序分析证实。结果 成功构建人TGF β1/T载体 ,可进一步用于基因表达和表达产物的功能研究。结论 人TGF β1/T载体的构建 ,为进一步研究其基因表达和功能打下基础 。

曲格列酮对转化生长因子-β_1诱导的HK-2细胞纤连蛋白和胶原Ⅰ型基因表达的影响

目的观察曲格列酮对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)细胞外基质纤连蛋白和胶原Ⅰ型的影响,探讨曲格列酮抗肾间质纤维化的潜在作用。方法将曲格列酮0,0.25,0.5,1,2.5,5和10μmol.L-1预处理HK-2细胞2h,随后加入TGF-β15mg.L-1作用24h,利用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测曲格列酮对HK-2细胞的毒性作用;曲格列酮0,1,2.5,5和10μmol.L-1预处理HK-2细胞2h,再加入TGF-β15mg.L-1作用24h,通过实时荧光定量PCR检测HK-2细胞外基质主要成分胶原Ⅰ型mRNA和纤连蛋白mRNA表达。结果曲格列酮0.25～5μmol.L-1对HK-2细胞膜完整性无影响,LDH的释放与正常对照组无明显差异,曲格列酮10μmol.L-1组LDH释放率为(10.7±5.3)%,明显高于正常对照组(P<0.01)。与正常对照组相比,曲格列酮1,2.5,5和10μmol.L-1单独作用并没有增加HK-2细胞外基质中胶原Ⅰ型纤维和纤连蛋白的表达,而TGF-β1刺激下胶原Ⅰ型纤维和纤连蛋白表达明显上调,曲格列酮提前干预下纤连蛋白mRNA及胶原Ⅰ型mRNA表达下降,曲格列酮2.5,5和10μmo.lL-1可显著下调纤连蛋白mRNA表达(P<0.05,P<0.01);曲格列酮5和10μmol.L-1可显著下调胶原Ⅰ型mRNA表达(P<0.05)。结论曲格列酮可能具有拮抗肾间质纤维化的潜在作用,其作用机制可能与抑制HK-2细胞纤连蛋白和胶原Ⅰ型纤维的增加有关。

TGF-β_1在db/bd自发性糖尿病小鼠颌下腺表达的研究

目的探讨db/db自发性糖尿病小鼠颌下腺转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达与其形态学改变的关系。方法引进日本表型正常隐性基因小鼠,近亲交配,其纯合子后代,即为db/db(单基因遗传自然发病型)型糖尿病小鼠。取3、4、6、8、10月龄db/db糖尿病小鼠颌下腺(实验组)及相应月龄的db/+m正常小鼠颌下腺(对照组)。每组五只,HE及SP免疫组化染色后行图像分析,光镜观察颌下腺的病理形态学改变,统计TGF-β1阳性表达的细胞数。结果随着糖尿病发展,颌下腺实质组织萎缩,细胞缩小,形态不规则,排列不整齐,间质纤维增生,TGF-β1阳性细胞数逐渐增加,呈上升趋势,且明显高于同龄对照组p<0.01。结论db/db糖尿病使小鼠颌下腺TGF-β1表达增强,同时有间质纤维增强,TGF-β1表达上调可能与糖尿病间质纤维增生密切相关。

金堂黑山羊TGFβR1基因克隆及表达分析

为了探讨金堂黑山羊转化生长因子β受体1(transforming growth factorβreceptor 1,TGFβR1)基因的基本特点,克隆了TGFβR1基因,并对其核酸序列及编码蛋白进行分析,同时采用qRT-PCR方法检测TGFβR1基因在金堂黑山羊7种组织/器官中的表达情况。结果表明:克隆获得TGFβR1基因的序列长度为1 715 bp(GenBank登录号为MK397779),其开放阅读框(ORF)长度为1 506 bp,共编码501个氨基酸;在同源性比较中,金堂黑山羊TGFβR1序列与西藏绒山羊的同源性最高,达99.9%;TGFβR1蛋白相对分子质量为55.9 ku,等电点为7.19,预测为亲水性蛋白,其二级结构主要为随机卷曲和α-螺旋,有5个O-糖基化位点、3个N-糖基化位点和50个磷酸化位点。组织表达分析显示TGFβR1基因在脾脏中表达量最高。说明TGFβR1基因可能参与了机体的免疫应答。

TGF-β_1和P 27 Kipl表达与星形细胞瘤分化及Ki 67相关性分析

为探讨星形细胞瘤中 TGF-β_1和 P27 Kipl 表达与星形细胞瘤增殖分化的关系,利用免疫组化方法检测了31例星形细胞瘤中的 TGF-β_1和 P27 Kipl 及 Ki67的蛋白表达。结果表明.分化高、恶性度低的肿瘤TGF-β_1、Ki 67表达阳性低,而 P27 Kipl 表达阳性高;分化低、恶性度高的肿瘤 TGF-β_1、Ki 67的蛋白表达增高,P27 Kipl 表达减低。二组间差异有非常显著的意义(P<0.01)。P27 Kipl 与 Ki 67呈负相关(r=-0.458)。P27 Kipl 阳性者平均生存期较阴性者长。上述结果提示,TGF-β_1和 P27 Kipl 与星形细胞瘤的增殖分化有关,P27 Kipl 的失活可作为判断星形细胞瘤恶性程度和预后的参考指标。

TGFβ_1反义RNA对腹膜间皮细胞分泌细胞外基质的影响

目的 :研究转化生长因子 β1(TGFβ1)反义RNA对体外培养的人腹膜间皮细胞 (HPMC)细胞外基质合成与分泌的影响。方法 :将反义TGFβ1基因真核表达载体转染HPMC ,用ELISA法检测转染细胞上清液中纤维连接蛋白 (FN)和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI 1)的蛋白质水平 ;用半定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)法检测转染细胞内FN ,PAI 1和胶原Ⅰ (ColⅠ )的mRNA表达 ,并与未转染HPMC对照组和转染空载体组比较其变化。结果 :TGFβ1反义RNA转染HPMC后 ,与对照组相比 ,转染 2 4h后 ,FN ,ColⅠ ,PAI 1mRNA分别下调 17% ,2 6 % ,9.6 % ;转染 4 8h后FN ,PAI 1蛋白含量亦明显下降 (P <0 .0 5 )。结论 :人反义TGFβ1基因真核表达载体可抑制HPMC合成细胞外基质 。

温阳消癥方调控LncRNA MEG3对TGF-β_(1)诱导的肾小管上皮细胞纤维化因子的影响

目的:探讨温阳消癥方对TGF-β_(1)诱导的人近端肾小管上皮细胞LncRNA MEG3的调控作用及对纤维化因子的影响。方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK-2),分为对照组、TGF-β_(1)组、TGF-β_(1)+3.5 mg/ml温阳消癥组、TGF-β_(1)+14 mg/ml温阳消癥组,MTT法检测细胞增殖,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)及结缔组织生长因子(CTGF)mRNA及长链非编码RNA母系表达基因3(LncRNA MEG3)表达,蛋白质印迹法检测α-SMA、FN、CTGF蛋白表达。结果:3.5、7、14 mg/ml温阳消癥不影响细胞增殖,35 mg/ml组细胞增殖明显降低(P<0.01);与对照组比较,TGF-β_(1)组中α-SMA、FN、CTGF mRNA、LncRNA MEG3及FN、CTGF蛋白表达显著升高(P<0.01),α-SMA蛋白表达升高(P<0.05);与TGF-β_(1)组比较,两个温阳消癥方治疗组α-SMA、FN、CTGF mRNA、LncRNA MEG3、FN蛋白表达,及TGF-β_(1)+14 mg/ml温阳消癥组α-SMA、CTGF蛋白表达均显著降低(P<0.01),TGF-β_(1)+3.5 mg/ml温阳消癥组α-SMA、CTGF蛋白表达降低(P<0.05);与TGF-β_(1)+3.5 mg/ml温阳消癥组相比,TGF-β_(1)+14 mg/ml温阳消癥组α-SMA、CTGF mRNA及CTGF蛋白表达均显著降低(P<0.01),FN mRNA及LncRNA MEG3表达降低(P<0.05)。结论:温阳消癥方可下调LncRNA MEG3的表达,抑制TGF-β_(1)诱导的HK-2细胞纤维化,其抑制纤维化的作用可能和调控LncRNA MEG3的表达有关。

姜黄素影响Aβ_(25-35)诱导PC12细胞周期变化与细胞凋亡的可能机制

目的探讨姜黄素(curcum in,Cur)对β-淀粉样肽(25-35)[β-amyloidpeptide-(25-35),Aβ25-35]诱导体外血清饥饿培养的PC12细胞周期异常与凋亡保护作用的可能机制。方法5μmol.L-1Cur预处理同步于G0期的PC12细胞,加入终浓度为25μmol.L-1Aβ25-35处理0～20h,用RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测p21、CDK4、E2F1、bax的表达。结果与Aβ25-35诱导组比较,Cur保护组p21mRNA和p21蛋白的表达增加;CDK4、E2F1、baxmRNA和CDK4、Bax蛋白的表达降低。结论Cur可能通过上调p21的表达,下调CDK4、E2F1、bax的表达,对Aβ25-35诱导的PC12细胞周期异常与凋亡起保护作用。

肾癌转化生长因子β1表达及与预后的关系

目的 探讨转化生长因子 β1(TGFβ1)在肾癌发生、发展中的作用及与预后关系。 方法 采用免疫组化ABC法对 4 5例肾癌组织中TGFβ1表达进行了研究 ,对患者存活率进行回顾性随访。 结果 癌旁肾组织中TGFβ1阳性表达率显著高于肾癌组织。TGFβ1阳性表达率随肾癌病理分级和临床分期的上升而下降 ,染色强度也减弱。TGFβ1阳性表达组 3年及 5年存活率高于阴性表达组。结论 TGFβ1为肾癌的负性调节因子 ,对抑制肾癌的恶性转化和进展可能有重要的意义。