TGF-β1-Smads信号传导通路在感染日本血吸虫小鼠肝纤维化中的表达

目的探讨在BALB／c小鼠感染日本血吸虫后形成肝纤维化的过程中，转化生长因子-β（transforming growth factorsβ，TGF—β）l及其两类受体：TGF—β受体I（TβRI）、TGF-β受体Ⅱ（TBRⅡ）以及Smad2、Smad3、Smad4和Smad7在转录水平的表达。方法50只BALB／c小鼠感染日本血吸虫尾蚴，（20-4-1）条／只，用于构建肝纤维化模型，10只未感染的BALB／c小鼠作为健康对照组，分别在感染后8、12、16和24周处死小鼠取肝组织．同时取对照组小鼠肝组织。所获肝组织一部分立即液氮冷冻后，保存于-80℃，通过RT—PCR方法测定TGF-β1、TBRI、TBRⅡ和Smad2、Smad3、Smad4以及Smad7的mRNA水平，结果为相对值，以待测mRNA密度扫描计数与内参照B—actinmRNA密度扫描计数的比值表示。另一部分肝组织置入常规10％甲醛固定液中．用于伊红-苏木素（HE）染色和天狼猩红染色．其中HE染色用于测定血吸虫虫卵肉芽肿面积（每一个虫卵肉芽肿的最大长度与最大宽度的乘积，以mm^2表示），每份标本随机测量5个虫卵肉芽肿面积．求平均值．天狼猩红染色用于判断肝纤维化程度．并以下述方法计分：正常肝组织为0级，以20=1计分；胶原纤维包绕肉芽肿周围并插入其中为I级，以21=2计分；汇管区有大量纤维化，小叶间仅有少量纤维为Ⅱ级，以2z=4计分：纤维组织大量延伸至小叶间为Ⅲ级。以23=8计分。结果小鼠感染日本血吸虫8周后其肝脏中形成的虫卵肉芽肿周围出现胶原纤维．并随着感染时间的延长，胶原纤维逐渐增加。感染后16周，胶原纤维在肝小叶中分布明显，其肝纤维化程度计分为4．27±1．03分；至感染24周时，胶原沉积量达到顶峰，为6．90±1．57分；而正常小鼠肝组织的肝纤维化计分为1分。正常小鼠肝脏中TGF—BltuRNA的表达水平为0．30±0．18，其表达量在感染后8周达到高峰（0．87±0．76），而后下降，但在感染24周时，其表达量再次升高（1．34±0．52）。TBRⅡmRNA在感染8周时有所下降，为0．60±0．30，在感染12周时回升到正常水平．为0．92±0．21，在感染16周时，其表达量又下降为0．76±0．16，而在感染24周时升至1．16±0．73；而正常小鼠肝组织中T8RUmRNA的表达水平为1．16±0．25。感染后，Smad2mRNA在感染12周时和感染24周时均较正常对照（0．85±0．10）有所下降．分别为0．41±0．23和0．50±0．16。Smad3mRNA在感染16周时有所升高（0．62±0．09）．这种高水平表达持续到24周（0．61±0．14）。在肝纤维化形成过程中，Smad4mRNA和Smad7mRNA以及TBRImRNA的表达水平与正常对照组比较无明显差异。结论在日本血吸虫性肝纤维化形成过程中．下述因子的下调可能诱导肝纤维化形成：TβRIImRNA、Smad3mRNA和处于感染后期的Smad2mRNA．而Smad7mRNA的正常水平表达在肝纤维化形成中发挥促进作用。在感染早期．Smad2mRNA表达的下调可能抑制肝纤维化的形成．