虎杖苷通过抑制TGF-β/Smad信号通路改善动脉粥样硬化大鼠动脉粥样硬化斑块和内皮炎症反应

目的:探讨虎杖苷通过抑制转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路对动脉粥样硬化(AS)大鼠AS斑块和内皮炎症反应的改善作用。方法:将60只大鼠随机分成空白对照组、模型对照组、虎杖苷低、中、高剂量组和阳性对照组,每组10只。正常对照组大鼠用普通饲料喂养,其余各组大鼠采用高脂饲料喂养与维生素D3腹腔注射联合的方法制备AS大鼠模型。虎杖苷低、中、高剂量组大鼠每天灌胃虎杖苷40、80、160 mg/kg,阳性对照组大鼠每天灌胃辛伐他汀5 mg/kg,模型对照组和空白对照组大鼠每天灌胃等量生理盐水。给药结束后,油红O染色观察大鼠主动脉AS斑块形成情况;全自动生化分析仪检测大鼠三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;酶联免疫吸附法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6、IL-8、C反应蛋白(CRP)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、同型半胱氨酸(Hcy)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、内皮素-1(ET-1)含量;蛋白免疫印迹法检测大鼠TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达水平。结果:与空白对照组相比,模型对照组大鼠主动脉内壁出现大量AS斑块,血清中TG、TC、LDL-C水平及TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、MCP-1、Hcy、ICAM、ET-1含量明显升高,HDL-C水平明显降低,主动脉组织中TGF-β1蛋白表达、p-Smad2/3/Smad2/3显著升高(P<0.05)。虎杖苷干预后AS大鼠主动脉内壁斑块面积明显减小,血清中TG、TC、LDL-C水平及TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、MCP-1、Hcy、ICAM、ET-1含量显著降低,HDL-C水平显著升高,主动脉组织中TGF-β1蛋白表达、p-Smad2/3/Smad2/3明显减小(P<0.05),以上指标变化均呈剂量依赖性(P<0.05)。阳性对照组TC、LDL-C、HDL-C水平与虎杖苷高剂量组无明显差异(P>0.05),其余指标均比虎杖苷高剂量组更低(P<0.05)。结论:虎杖苷通过调节血脂、降低细胞炎症因子的表达,从而减少AS斑块的形成,改善AS大鼠体内的炎症反应,其机制与抑制TGF-β/Smad信号通路激活有关。

METTL3调控miR-126介导TGF-β/Smad信号通路影响糖尿病肾病的机制研究

目的:建立糖尿病肾病(Diabetes Kidney Disease,DKD)大鼠模型,探讨METTL3调控糖尿病肾病的作用机制。方法:将SD大鼠适应性喂养7d后,按照随机数字法分为4组,正常对照组(Control组)、糖尿病肾病模型组(DKD组)、糖尿病肾病模型+METTL3干扰对照组(DKD+NC组)和糖尿病肾病模型+METTL3干扰组(DKD+siMETTL3组),每组8只。造模结束后收集大鼠血液标本及肾脏组织,采用全自动生化分析仪分析空腹血糖(Fasting blood glucose,FBG)、尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、24h尿蛋白(Uridine triphosphate,UTP)的表达水平,RT-qPCR法检测miR-126的基因表达,ELISA检测TGF-β1的表达,Western blotting检测METTL3、smad2、smad3、smad7的蛋白水平。结果:与Control组相比,DKD组的FBG、BUN、UTP、TGF-β1、METTL3、smad2、smad3显著升高(P<0.05),体质量、miR-126、smad7显著降低(P<0.05);与DKD组比较,DKD+siMETTL3组的FBG、BUN、UTP、TGF-β1、METTL3、smad2、smad3显著降低(P<0.05),体质量、miR-126、smad7显著升高(P<0.05)。结论:METTL3可以通过调控miR-126及TGF-β/smad通路,介导DKD的进展。

扶正化瘀方调控TGF-β/Smad信号通路对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的影响

目的探讨扶正化瘀方对博来霉素诱导肺纤维化小鼠的作用。方法将小鼠随机分为模型组、扶正化瘀方组(5.6 g/kg)和尼达尼布组(60 mg/kg),每组15只,采用无创气管插管经气道滴注博来霉素(2.5 mg/kg)复制小鼠肺纤维化模型;另取10只正常小鼠予气道滴注等体积生理盐水,作为正常组。造模7 d后,各组灌胃相应剂量药物,连续给药14 d。末次给药24 h后,使用肺功能仪测定小鼠气道狭窄指数、呼吸频率和潮气量,试剂盒检测血清羟脯氨酸(Hyp)水平,苏木素-伊红和Masson染色分别观察肺组织炎症和胶原沉积水平,ELISA法检测肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6水平,免疫组化观察肺组织α-SMA表达,蛋白印迹法检测小鼠肺组织α-SMA、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠呼吸急促,体质量降低(P<0.01),Penh值增加(P<0.01),f、TV减少(P<0.01),肺组织大量炎性细胞浸润和大量胶原纤维沉积并有纤维节结生成,血清Hyp、IL-6、TNF-α水平升高(P<0.01),肺组织α-SMA、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,扶正化瘀方组和尼达尼布组小鼠呼吸平稳,Penh值降低(P<0.01),f、TV增加(P<0.01),肺组织炎性细胞浸润和胶原纤维沉积减少(P<0.01),血清Hyp、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.01),肺组织α-SMA、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达降低(P<0.01)。结论扶正化瘀方可抑制博来霉素诱导的小鼠实验性肺纤维化,其作用机制可能与调控TGF-β/Smad信号通路有关。

甘草甜素调节TGF-β/Smad信号通路对肺癌荷瘤小鼠放射性肺损伤的影响

目的 研究甘草甜素(GL)是否可以通过调节TGF-β/Smad信号通路对肺癌荷瘤小鼠放射性肺损伤(RILI)产生影响。方法 取48只小鼠,先随机选出12只小鼠作为NC组,其余小鼠构建肺癌荷瘤小鼠模型并采用X射线照射全胸建立RILI模型,再将小鼠随机分为照射+Model组、照射+GL组(10 mg/kg)、照射+GL+SRI-011381组(10 mg/kg+30 mg/kg TGF-β激动剂)。使用酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;HE染色法检测小鼠肺组织病理损伤;试剂盒检测小鼠肺组织中羟脯氨酸(HYP)、髓过氧化物酶(MPO)含量;免疫组化法(IHC)检测肺组织中TGF-β、α-SMA表达;Western Blot检测小鼠肺组织中TGF-β1、p-Smad2/3、Smad7蛋白表达。结果 与NC组比较,照射+Model组小鼠血清中IL-6、TNF-α水平、HYP、MPO、TGF-β和α-SMA表达、TGF-β1、p-Smad2/3蛋白表达升高,肺组织病理损伤加重,Smad7蛋白表达降低(P<0.05);与照射+Model组比较,照射+GL组小鼠血清中IL-6、TNF-α水平、HYP、MPO、TGF-β和α-SMA表达、TGF-β1、p-Smad2/3蛋白表达减少,肺组织病理损伤减轻,Smad7蛋白表达增加(P<0.05);照射+GL+SRI-011381组中实验检测结果则与照射+GL组结果趋势相反,表明SRI-011381干预后减弱了GL对肺癌荷瘤小鼠RILI的改善作用。结论 甘草甜素可以通过抑制TGF-β/Smad信号通路对肺癌荷瘤小鼠放射性肺损伤进行修护改善。

黄精多糖对妊娠期高血压模型大鼠胎盘组织TGF-β/Smad信号通路的作用研究

[目的]探讨黄精多糖对妊娠期高血压模型大鼠胎盘功能的影响与机制。[方法]受孕雌性大鼠随机分为对照组、模型组、黄精多糖(低、中、高)剂量组(100、200、400 mg/kg)和硫酸镁组(100 mg/kg),每组10只。除对照组外,其余组大鼠皮下注射L-精氨酸甲酯构建妊娠期高血压模型。检测血压、24 h蛋白尿、胎鼠体质量、胎盘质量;苏木素-伊红(HE)检测胎盘组织病理学;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测胎盘组织白介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;Western Blot检测胎盘组织紧密连接蛋白-1(ZO-1)、封闭蛋白(OCLN)、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、p-Smad3、Smad3蛋白表达。[结果]与对照组比较,模型组大鼠血压、24 h尿蛋白、IL-6、TNF-α含量及TGF-β1、p-Smad3蛋白表达显著升高,胎鼠体质量、胎盘质量、IL-10含量及ZO-1、OCLN、VEGF蛋白表达显著降低(P<0.05),且胎盘组织出现病理学损伤。与模型组比较,各给药组大鼠血压、24 h尿蛋白、IL-6、TNF-α含量及TGF-β1、p-Smad3蛋白表达显著降低,胎鼠体质量、胎盘质量、IL-10含量及ZO-1、OCLN、VEGF蛋白表达显著升高(P<0.05),同时胎盘组织病理学损伤减轻。[结论]黄精多糖可抑制妊娠期高血压模型大鼠胎盘中TGF-β/Smad信号通路激活,改善胎盘功能障碍。

TGF-β/Smad信号通路在肝硬化中的作用及其机制的研究进展

肝硬化是一种或多种原因引起的慢性肝病发展到肝细胞弥漫性变性坏死、纤维组织增生和肝细胞结节状再生的病理阶段。肝纤维化是肝硬化的必然历经阶段和重要步骤,通过破坏正常的肝脏组织和细胞功能进而导致肝硬化。转化生长因子-β(transforming growth factor beta,TGF-β)是一种分泌性多肽信号分子,具有调节细胞生长和分化、修复损伤组织、调节免疫功能等作用,可影响肝纤维化、肝硬化的生物学过程。而TGF-β/果蝇母本抗生存因子蛋白(smallmother againstdecapentaplegic,Smad)信号通路在肝硬化的发生、发展及靶向治疗中尤为关键。探讨TGF-β/Smad信号通路在肝硬化中的作用及其机制的研究进展对预防、治疗肝硬化具有重要现实意义。本文对TGF-β/Smad信号通路在肝硬化中的作用及其机制的研究进展作一综述。

miR-335-5p调控TGF-β/Smad信号通路抑制胃癌细胞EMT及侵袭和迁移

目的:基于TGF-β/Smad信号通路探讨上调微小RNA(miR)-335-5p对胃癌细胞侵袭、迁移及EMT分子表达的影响。方法:使用miR-335-5p慢病毒载体感染胃癌细胞,通过嘌呤霉素筛选构建稳转细胞株,采用划痕和Transwell实验观察上调miR-335-5p对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响。用RT-qPCR实验和Western-blot实验检测上调miR-335-5p对胃癌细胞TGF-β信号通路中关键基因和上皮间质转化(EMT)相关基因的mRNA和蛋白表达量的影响。结果:划痕结果显示,与阴性对照组相比,上调miR-335-5p后,两株胃癌细胞的愈合率明显降低(P<0.05,P<0.01)。Transwell迁移和侵袭实验结果显示,两株胃癌细胞miR-335-5p过表达组穿过小室的细胞数相对于阴性对照组明显降低(P<0.05,P<0.01)。RT-qPCR和Western-blot实验结果显示,两株胃癌细胞miR-335-5p过表达组的TGF-β1、TGF-β2、TGF-βR2、p-Smad2、p-Smad3和Smad4蛋白表达量明显低于阴性对照组(P<0.05,P<0.01)。miR-335-5p过表达后,两株胃癌细胞的α-平滑肌肌动蛋白(α-SmA)、I型胶原(Collagen 1)、N-钙黏着蛋白(N-cadherin)、细胞角蛋白(Cytokeratin18)、Claudin7蛋白(Claudin7)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子1(Snail1)、锌指转录因子2(Snail2)、纤连蛋白1(FN1)、Twist相关蛋白2基因(Twist2)的mRNA和蛋白表达量明显低于阴性对照组(P<0.05,P<0.01),E-钙黏着蛋白(E-cadherin)的mRNA和蛋白表达量高于阴性对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:过表达miR-335-5p通过TGF-β/Smad信号通路调控胃癌细胞的EMT,从而抑制胃癌细胞的侵袭和迁移。

黄芪甲苷通过调控TGF-β/Smad信号通路抑制胃癌的侵袭、迁移及上皮间质转化的研究

目的:探讨黄芪甲苷通过TGF-β/Smad信号通路对胃癌侵袭、迁移及上皮间质转化(EMT)相关分子表达的影响。方法:通过划痕和Transwell实验检测黄芪甲苷对胃癌细胞侵袭和迁移的影响。采用qRT-PCR和Western-blot技术分别检测黄芪甲苷对TGF-β/Smad信号通路中关键基因及EMT相关标志物mRNA和蛋白表达水平的影响。结果:划痕实验结果发现,低浓度的黄芪甲苷干预后的两株胃癌细胞愈合率明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),并且随着黄芪甲苷的浓度增加,愈合程度逐渐减弱。Transwell迁移和侵袭实验结果发现,黄芪甲苷干预两株胃癌细胞后穿过小室的细胞数明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。qRT-PCR和Western-blot实验结果发现,黄芪甲苷组的TGF-β1、TGF-β2、TGF-βR2、p-Smad2、p-Smad3和Smad4蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.05,P<0.01),黄芪甲苷组和对照组之间Smad2、Smad3的蛋白表达水平以及TGF-β1、TGF-β2、TGF-βR2、Smad2、Smad3和Smad4的mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05)。黄芪甲苷组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(Collagen I)、N-钙黏着蛋白(N-cadherin)、细胞角蛋白18(Cytokeratin18)、Claudin7蛋白(Claudin7)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子1(Snail1)、锌指转录因子2(Snail2)、纤连蛋白1(FN1)、Twist相关蛋白2(Twist2)的mRNA和蛋白表达水平低于对照组(P<0.05,P<0.01),E-钙黏着蛋白(E-cadherin)的mRNA和蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芪甲苷通过TGF-β/Smad信号通路调控胃癌细胞的EMT,从而抑制胃癌细胞的侵袭和迁移。

TGF-β/SMAD信号通路在哺乳动物卵巢发育调控中的作用研究进展

TGF-β/SMAD信号转导通路是典型的跨膜转导通路,该通路通过一组配体与受体结合,将细胞外的信号转导入细胞内,激活下游的SMAD蛋白、转录调节靶基因,从而介导配体对细胞的生物学作用。在卵母细胞成熟过程受到多种因子调控,其中一些细胞外信号通过TGF-β/SMAD信号通路发挥调控作用。TGF-β/SMAD信号通路主要通过不同的下游信号分子SMADs以自分泌/旁分泌途径方式发出信号,调控颗粒细胞增殖和卵母细胞生长,影响着卵巢发育。近年来,TGF-β/SMAD信号通路对卵巢发育的调控机制已成为生殖生理学领域研究热点之一,本文综述了TGF-β/SMAD蛋白的受体、TGF-β/SMAD信号通路,并分别从配体、调控因子以及与其他通路的作用关系的角度阐述了不同家畜TGF-β/SMAD通路在卵巢发育中的调控作用,为卵巢发育的调控机制研究提供思路,同时为畜牧业生产提供理论基础。

化痰祛瘀法对腹膜纤维化大鼠TGF-β/Smad信号通路的影响

【目的】探讨化痰祛瘀法对腹膜纤维化大鼠转化生长因子-β(TGF-β)/Smad信号通路的影响。【方法】选用健康SD雄性大鼠60只,随机分为5组,每组12只,分别为:空白组、模型组、西药组、中药高剂量组、中药低剂量组。复制大鼠腹膜纤维化模型后,即实验第5周开始,中药高、低剂量组分别给予化痰祛瘀中药50、25 mg.kg-1.d-1,西药组给予贝那普利5 mg.kg-1.d-1,模型组及空白组灌服注射用水,每天1次,共4周。实验第8周结束后留取腹膜组织,采用免疫组化法测定脏层腹膜p-Smad2/3、Smad7和TGF-β1表达情况。【结果】中药高剂量组、中药低剂量组、西药组Smad7表达均显著增加,与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05);中药高剂量组Smad2/3、TGF-β1表达显著降低,与中药低剂量组、西药组比较差异均有统计学意义(P<0.05);中药高剂量组Smad7表达显著升高,与中药低剂量组、西药组比较差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】化痰祛瘀中药防治腹膜纤维化的作用与其能上调TGF-β抑制性信号蛋白Smad7的表达,抑制TGF-β受体调控信号蛋白Smad2/3表达有关。

吡菲尼酮抑制TGF-β/Smad信号通路缓解四氯化碳诱导的小鼠肝硬化

目的:探究吡菲尼酮治疗四氯化碳诱导的小鼠肝硬化中的作用与机制。方法:60只C57BL/6雄性小鼠,随机分为空白组、模型组和低中高给药组,每组12只,小鼠腹腔注射20%CCl4大豆油溶液(5 ml/kg),每周2次,连续造模7周,自造模开始后第3周自由饮用20%乙醇水溶液。低中高剂量组分别按小鼠体重灌胃50、100和200 mg/kg的吡菲尼酮溶液,模型组和空白组分别灌胃给予相等体积的空白溶剂,造模结束后按照上述给药方式分组给药治疗,每天灌胃1次,治疗2周。比较分析治疗前后ALT、AST指标,小鼠肝脏指数、脾脏指数、TGF-β1和Smad3基因和蛋白表达水平。结果:模型组中小鼠血清ALT、AST含量显著上升(P<0. 05),吡菲尼酮灌胃治疗后3组小鼠血清ALT、AST含量显著下降(P<0. 05)。模型组与空白对照组相比肝脏、脾脏指数显著上升(P<0. 05),给药治疗后肝脾肿胀与模型组相比显著下降(P<0. 05)。模型组较空白组,其TGF-β1阳性细胞数目显著增多,给药后阳性细胞数目与模型组相比显著减少。Smad3基因表达水平比较,模型组比空白组显著升高(P<0. 05),各给药组小鼠肝脏组织TGF-β1和Smad3蛋白的基因水平较模型组相比显著下降(P<0. 05)。同时TGF-β1和Smad3蛋白的表达显著增高,给药后各组小鼠的TGF-β1和Smad3的表达有所下调。结论:吡菲尼酮能够通过抑制TGF-β/Smad信号通路关键TGF-β1、Smad3基因和蛋白表达缓解四氯化碳诱导的小鼠肝硬化。

冠心舒通胶囊抑制TGF-β/Smad信号通路改善异丙肾上腺素诱导的大鼠心脏重塑机制研究

目的探讨冠心舒通胶囊对异丙肾上腺素(isproterenol,ISO)诱导的大鼠心脏重塑的改善作用和对TGF-β/Smad信号通路的影响。方法将SD雄性大鼠随机分为6组,即正常对照组,模型组,冠心舒通胶囊低、中、高剂量组(1.2、2.4、4.8g·kg^-1),普萘洛尔组(0.5g·kg^-1),采用大鼠皮下多点注射ISO(5mg·kg^-1)连续7d建立心脏重塑模型,造模启动后第2天开始灌胃给药,每日1次,连续1个月,采用心脏多普勒超声检测大鼠左室射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)、左室舒张末期容积(EDV)、左室收缩末期容积(ESV)、左室舒张末期直径(LVIDd)、左室后壁厚度(LVPWd),测定全心质量指数(HMI),左心室质量指数(LVMI),评价大鼠心脏功能;Masson染色观察大鼠心肌病理形态学变化,计算心肌胶原容积分数(CVF);生化法检测心肌组织羟脯氨酸(Hydro)的含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测心肌组织中TGF-β、Smad2/3、Caspase-3蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠心脏EF、FS降低,EDV、ESV、LVIDd、LVPWd和HMI、LVM1值均显著升高;心肌纤维化加重,CVF值及Hydro的含量升高;血清炎症因子TNF-α、IL-6水平明显增加;心肌组织中TGF-β、Smad2/3、Caspase-3蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,冠心舒通胶囊中、高剂量组可改善ISO诱导的大鼠心脏功能异常;并降低心肌纤维化水平及Hydro含量;降低血清炎症因子TNF-α,IL-6含量;同时抑制心肌组织TGF-β、Smad2/3、Caspase-3蛋白表达,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)结论冠心舒通胶囊可改善ISO诱导的大鼠心脏重塑,其机制可能与抗炎、抑制TGF-β/Smad信号通路有关。

加味麻杏石甘汤对放射性肺损伤TGF-β/Smad信号通路调控的研究

[目的]研究加味麻杏石甘汤对TGF-β/Smad信号通路的调控,阐述其抗放射性肺损伤的机制。[方法](1)清洁级SD大鼠分为中药组和正常对照组,中药组加味麻杏石甘汤灌胃3d后制备含药血清,正常对照组生理盐水灌胃制备大鼠血清;(2)小鼠肺泡Ⅱ型细胞培养,射线照射(频率为3.64Gy/min,总剂量为8Gy)造模,含药血清干预;(3)RNA干扰特异性沉默TGF-β1基因后,PCR检测TGF-β1、PAI-1、CTGFm RNA,Western-blot检测Smad蛋白水平,并行统计学比较。[结果](1)与大鼠血清组比较,10%含药血清组TGF-β1m RNA、P-Smad2表达下调(P<0.05);(2)沉默TGF-β1基因后,TGF-β1m RNA表达及其下游靶基因PAI-1m RNA、CTGF m RNA均出现一致性低表达(P<0.05),均明显低于未沉默TGF-β1基因的大鼠血清组(P<0.05);(3)10%含药血清+si RNA组与大鼠血清+si RNA组比较,不论是P-Smad2、P-Smad3,还是下游靶基因PAI-1m RNA、CTGF m RNA表达差异未见统计学意义(P>0.05);(4)10%含药血清+si RNA组Smad6、Smad7蛋白表达较大鼠血清+si RNA组均上升,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。[结论]加味麻杏石甘汤抵抗放射性肺损伤机制可能与干预TGF-β/Smad信号通路有关。

STK17A基因经TGF-β/SMAD信号通路调控宫颈癌细胞增殖凋亡及侵袭的机制研究

目的:探究丝氨酸/苏氨酸激酶17A(STK17A)基因介导转化生长因子β(TGF-β)/SMAD信号通路对宫颈癌细胞增殖、侵袭及凋亡的调控机制。方法:收集我院43例宫颈癌患者癌组织及癌旁组织。HE染色观察组织病理结构。免疫组化检测组织中STK17A阳性表达。筛选STK17A低表达宫颈癌细胞系并将细胞系分为阴性对照组(宫颈癌细胞转染含有无关序列的重组质粒)、基因沉默组(宫颈癌细胞转染含有STK17A shRNA的重组质粒)、基因过表达组(宫颈癌细胞转染含有STK17A片段的重组质粒)、通路抑制剂组(TGF-β/SMAD通路特异性抑制剂处理宫颈癌细胞)、联合组(TGF-β/SMAD通路抑制联合STK17A过表达处理细胞)。qRT-PCR和Western blot检测各组细胞STK17A、TGF-β1、SMAD3、E-cadherin、N-cadherin和TIMP3的表达。CCK-8检测各组细胞活力。细胞划痕和Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力。Annexin V-FITC/PI双染检测各组细胞凋亡情况。结果:与癌旁组织相比,宫颈癌组织排列紊乱,无极性(层次和结构)且STK17A低表达。细胞实验中:与阴性对照相比,过表达STK17A或抑制TGF-β/SMAD通路后,TGF-β1、SMAD3、E-cadherin mRNA和蛋白表达下调,但N-cadherin、TIMP3 mRNA和蛋白表达上调(均P<0.05)。同时,相对于阴性对照组,过表达STK17A或抑制TGF-β/SMAD通路后,24 h和48 h细胞活力受到明显抑制、细胞侵袭转移能力显著降低且细胞凋亡被显著诱导(均P<0.05)。结论:STK17A过表达可能通过抑制TGF-β/SMAD信号通路的活化进而抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭同时诱导其凋亡,STK17A有望成为宫颈癌治疗的潜在重要靶点。

肝卵圆细胞对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β/Smad信号通路的影响

目的:探讨肝卵圆细胞(HOCs)对肝纤维化(HF)大鼠肝组织TGF-β/Smad信号通路蛋白表达的影响。方法:采用CCl4和复方因素制备HF大鼠模型,取模型组大鼠分离纯化HOCs,从门静脉植入HF大鼠肝组织内,连续观察30d,同时以五灵胶囊为阳性对照。在植入后8d、15d、23d、30d各组大鼠尾静脉采血,酶法测定血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT),实验结束取肝组织Masson染色观察肝组织形态学变化,Western blotting检测肝组织Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(ERK)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-ERK)、转化生长因子β受体Ⅰ(TβRI)、转化生长因子β受体Ⅱ(TβRⅡ)、果蝇MAD类似基因2/3(Smad2/3)、果蝇MAD类似基因7(Smad7)蛋白的表达。结果:HOCs植入组与五灵胶囊组在植入后15d、23d、30dAST、ALT水平显著降低;肝组织胶原纤维增生程度明显减轻;肝组织表达ERK、p-ERK、TβRI、TβRⅡ蛋白作用显著降低,表达Smad7的作用显著增加。结论:植入HOCs可阻止大鼠HF的进展,其作用机制可能与其抑制肝组织内TGF-β/Smad信号通路p-ERK、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白的表达有关。

五灵胶囊调节TGF-β/Smad信号通路蛋白对胶原Ⅰ、Ⅲ型表达的影响

目的探讨五灵胶囊(WL)调节肝纤维化大鼠肝组织及星状细胞(HSC)TGF-β/Smads信号转导蛋白对胶原Ⅰ和Ⅲ型(COL-Ⅰ、COL-Ⅲ)表达的影响。方法SD大鼠以高脂低蛋白饲养、饮用10%乙醇,皮下注射40%CCl4,隔4天注射1次,连续6周制备肝纤维化模型,灌胃给予WL3.86g/kg和秋水仙碱0.1mg/kg治疗1月;另体外分离HSC,以不同剂量的WL与HSC培养24h,最后3h加入TGF-β1 10ng/ml。实验结束后镜检肝细胞变性和肝组织纤维化程度,同时ELISA法测定血清COL-Ⅰ、COL-Ⅲ和培养液COL-Ⅰ含量,RT-PCR检测肝组织COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TGF-β1mRNA的表达。Western blot检测肝组织及HSC内COL-Ⅰ、ProCOL-Ⅰ、LN、α-SMA、ERK、p-ERK、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad2/3、Smad7蛋白表达。结果WL组大鼠肝细胞变性和肝纤维化程度明显减轻,血清COL-Ⅰ、COL-Ⅲ含量增加,COL-Ⅰ、COL-ⅢmRNA表达降低。Western blot结果显示,WL能明显下调肝组织α-SMA、LN、p-ERK、TβRⅠ、COL-Ⅰ、ProCOL-Ⅰ蛋白表达,对ERK、TβRⅡ、Smad2/3、Smad7蛋白表达无影响;显著下调HSCα-SMA、TβRⅡ、p-ERK、Smad7表达,呈浓度依赖性抑制HSC分泌COL-Ⅰ。结论WL抑制肝纤维化大鼠肝组织COL-Ⅰ、COL-Ⅲ合成并增加COL-Ⅰ降解,其作用位点是下调肝组织和HSC TGF-β/Smad、Ras/ERK信号通路蛋白p-ERK、TβRⅡ表达。

miR-423-5p调控TGF-β/Smad信号通路对肺癌脑转移模型大鼠的干预作用探究

目的探究miR-423-5p调控TGF-β/Smad信号通路对肺癌脑转移模型大鼠的干预作用。方法2019年2月—2020年1月于同济大学附属东方医院转化医学研究中心进行实验。选取SPF级大鼠60只,随机数字表法分为空白组、模型组、上调组、下调组各15只,除空白组外,其余大鼠建立肺癌脑转移模型,建模成功后,上调组、下调组大鼠分别静脉注射miR-423-5p mimics control、miR-423-5p mimics,空白组、模型组大鼠静脉注射等体积生理盐水。干预14 d后比较各组大鼠肺组织病理组织学变化,miR-423-5p表达量,血清癌胚抗原(CEA)、鳞状细胞癌相关抗原(SCC-Ag)、细胞角蛋白19血清片段21-1(CYFRA21-1)水平,肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、IL-6水平及TGF-β/Smad信号通路蛋白表达量。结果与空白组比较,模型组miR-423-5p表达量、CEA、SCC-Ag、CYFRA21-1、TNF-α、IL-1β、IL-6水平及TGF-β1、COl-1、Smad2/3、Vimentin蛋白表达量均升高(P均<0.01);与模型组比较,上调组上述指标水平升高,下调组降低(P均<0.01);与上调组比较,下调组上述指标水平均降低(t/P=9.513/0.001、5.936/0.001、5.819/0.001、4.833/0.001、4.465/0.001、7.416/0.001、4.114/0.001、7.320/0.001、6.479/0.001、5.504/0.001、4.880/0.001)。结论下调miR-423-5p可能通过作用于TGF-β/Smad信号通路,调控TGF-β1、COl-1、Smad2/3、Vimentin蛋白表达量,阻断炎性反应,抑制肺癌脑转移的发生发展。

石蒜碱调控G3BP1/TGF-β/Smad信号通路抑制食管癌细胞增殖

目的:探讨石蒜碱对食管癌细胞增殖的影响,并分析其机制。方法:细胞计数8(cell counting kit-8,CCK-8)法分析细胞增殖抑制率,Western blot法分析GTP酶激活蛋白-Src同源结构域3-结合蛋白1[GTPase activating protein(SH3 domain)binding protein 1,G3BP1]、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3水平。敲低或过表达G3BP1,观察其对细胞增殖抑制率以及G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平的影响。裸鼠成瘤实验验证石蒜碱对裸鼠体内瘤体的瘤重、瘤体积及G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平的影响。结果:2~64μmol/L石蒜碱抑制ECA109细胞增殖,石蒜碱48 h IC50为(16.21±2.35)μmol/L。4、8、16μmol/L的石蒜碱能下调G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3的水平。敲低G3BP1的表达能明显提高石蒜碱对ECA109细胞增殖的抑制作用,促进石蒜碱降低G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平(P<0.05);上调G3BP的表达能明显下调石蒜碱对ECA109细胞增殖的抑制作用,抑制石蒜碱降低G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平(P<0.05)。体内实验显示,与模型对照组比较,25、50、100 mg/kg石蒜碱能降低瘤体体积、瘤体质量,下调瘤体G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平(P<0.05)。结论:石蒜碱能抑制ECA109细胞的增殖,对裸鼠体内ECA109细胞移植瘤抑瘤效果明显,其机制与调控G3BP1/TGF-β/Smad信号通路有关。

石蒜碱通过TGF-β/Smad信号通路调控自噬抑制食管癌细胞增殖

目的:探讨石蒜碱对食管癌细胞增殖的影响,并分析其机制。方法:细胞计数8(CCK-8)法分析细胞增殖抑制率,MDC染色法检测自噬泡,Western blot法分析LC3II/LC3I、Beclin-1、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、p-Smad2/Smad2水平,观察3-MA对石蒜碱调控自噬和凋亡的影响。裸鼠成瘤实验验证石蒜碱对裸鼠体内瘤体的瘤重、瘤体积及自噬、p-Smad2/Smad2水平的影响。结果:2、4、8、16、32、64μmol/L的石蒜碱抑制ECA109细胞增殖(F=22.412,P<0.05),IC50值为(15.56±2.16)μmol/L。4、8、16μmol/L石蒜碱促进自噬泡的产生,增加LC3II/LC3I、Beclin-1水平,降低TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平(P<0.05);3-MA可以逆转石蒜碱对自噬、凋亡及TGF-β/Smad信号通路和Bcl-2/Bax信号通路的影响;体内实验显示,100 mg/kg石蒜碱能降低瘤体体积、瘤体质量,下调p-Smad2/Smad2水平,上调LC3II/LC3I水平(P<0.05)。3-MA可以逆转石蒜碱对瘤体体积、瘤体质量及LC3II/LC3I、p-Smad2/Smad2水平的影响。结论:石蒜碱能抑制ECA109细胞的增殖,促进细胞凋亡,对体内ECA109细胞移植瘤抑瘤效果明显,其机制与调控TGF-β/Smad信号通路激活自噬有关。

甘草酸二铵对肝纤维化实验大鼠TGF-β/Smad信号转导通路相关因子的影响

目的初步探讨TGF-β/Smad信号转导通路相关因子TGF-β1、Smad3和Smad7与肝纤维化之间的相关性,以及甘草酸二铵对肝纤维化的干预作用。方法采用皮下注射四氯化碳法构建肝纤维化大鼠模型,实验分为正常对照组,模型对照组,甘草酸二铵组和复方鳖甲软肝片组;运用实时荧光定量RTPCR法检测各组大鼠肝组织TGF-β1、Smad3和Smad7 mRNA的表达变化,Western Blot法检测各组大鼠肝组织TGF-β1、Smad3和Smad7蛋白的表达变化。结果模型对照组与正常对照相比,TGF-β1和Smad3mRNA和蛋白的表达明显升高,Smad7蛋白的表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);给药各组与模型组相比,TGF-β1和Smad3 mRNA和蛋白的表达明显降低,Smad7蛋白的表达增多,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 TGF-β/Smad信号转导通路的激活促进肝纤维化的形成发展,给予甘草酸二铵干预后,可有效抑制TGF-β/Smad信号转导通路的活化,进而对肝纤维化起到保护作用,为防治肝纤维化提供新的作用靶点。