比较不同方法肝脏靶向性导入抗TGF-β_1 siRNA对肝细胞TGF-β/Smad信号传导通路的影响

目的比较抗TGF-β1 siRNA靶向性进入肝细胞的4种转染方式在抗肝损伤与纤维化及对TGF-β/Smad信号传导通路影响中的效果差异,并探讨各自的优劣。方法已启动肝组织中的TGF-β/Smad信号传导通路的50只模型鼠,随机分为模型对照组、尾静脉直接注射组、脂质体包裹组、流体动力学法组和肝动脉插管组,每组10只;将构建的TGF-β1 siRNA质粒分别通过尾静脉直接注射、脂质体包裹、流体动力学法、肝动脉插管等方式导入肝脏靶细胞;分别检测血清指标ALT、AST、HA;取肝组织,HE染色病理检测;RT-PCR技术检测Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β1和Smad3 mRNA表达;免疫组化技术检测Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β和Smad3蛋白表达。结果抗TGF-β1siRNA质粒经过以上4种导入方法转染入靶细胞,均能有效地阻断大鼠肝组织中的TGF-β/Smad信号传导通路的传导(P<0.05);4种导入方法比较,肝动脉插管组与脂质体包裹组效果相当(P>0.05),优于尾静脉直接注射组及流体动力学法组(P<0.05),尾静脉直接注射组效果最差(P<0.05)。结论抗TGF-β1siRNA质粒经肝动脉插管途径转染,是一种安全、高效的外源基因肝脏靶向导入转染方法。

青光安缓释剂对抗青光眼术后滤过道瘢痕化TGF-β/Smad信号传导通路相关mRNA的影响

目的:观察青光安缓释剂对抗青光眼术后滤过道瘢痕化过程中TGF-β/Smad信号传导通路相关mRNA的影响,探讨青光安缓释剂对滤过道瘢痕化的效果及作用机制,并判断其安全性。方法:通过高通量中药筛选体系提取4种青光安有效组份,并制成缓释药膜。将48只实验用兔分为8组,每组6只。分别为:A:空白组;B:模型组;C:MMC对照组;D:有效组份1组;E:有效组份2组;F:有效组份3组;G:有效组份4组;H:安慰剂组。除A组外,其余各组兔眼行常规小梁切除+虹膜根部切除术;C组在术中联合应用MMC;D、E、F、G 4组分别在结膜下植入相对应的青光安缓释药膜;H组植入安慰剂膜片。术后各组进行眼部常规检查。用药4周后处死实验用兔,取术眼滤过道巩膜组织,进行HE染和Real-time PCR法检测,并进行统计学分析。结果:(1)术后C、E两组眼压回升缓慢,第4周时两组眼压低于其他各组(P<0.05)。(2)C、E组术后都能维持有效滤过泡,B组滤过泡在术后两周内基本都变为无功能滤过泡或消失,D、F、G、H组在术后第4周都有少量功能性滤过泡存在。(3)HE染色见C、E两组滤过道轮廓清晰,纤维细胞及炎症细胞少,其他各手术组滤过道轮廓消失,被大量纤维细胞和炎症细胞填充。(4)C组Smad3、Smad4的mRNA表达值明显低于其他各组(P<0.01);C组和E组CollagenⅠ的mRNA表达值明显低于其他各组(P<0.01)。结论:青光安有效组份2可能与TGF-β竞争性结合TGF-β受体,或者可能通过影响炎症因子的生成减少TGF-β的产生,使TGF-β/Smad细胞信号传导通路的信号传导减弱,抑制滤过道瘢痕形成。且通过局部给药其不良反应小,安全性优于MMC。

基于TGF-β/Smads信号传导通路探讨姜黄素抑制前列腺癌DU-145细胞增殖的机理

目的:基于TGF-β/Smads信号传导通路,观察中药提取物姜黄素对人雄激素非依赖性前列腺癌DU-145细胞的影响,从而探讨姜黄素抑制DU-145细胞增值的机理。方法:分别用12.5、6.25以及3.125μmol/L姜黄素作用DU-145细胞48 h后,光镜观察细胞形态变化,以MTT法检测DU-145细胞生长情况,以RT-PCR法检测TGF-β,Smad2,Smad4和Smad7基因表达情况。结果:姜黄素能显著抑制DU-145细胞生长,呈一定的量效关系;RT-PCR法检测DU-145细胞TGF-β,Smad2和Smad4基因表达均不同程度增加,而Smad7的基因表达不同程度减少。结论:姜黄素通过对TGF-β及下游蛋白Smad2、Smad4、Smad7的影响,进而调节TGF-β/Smads信号传导通路,这可能是姜黄素促进DU-145细胞凋亡和抑制其生长的重要分子机制。

强脉冲光对皮肤成纤维细胞TGF-β/Smads信号传导通路表达的影响

目的:探讨强脉冲光对皮肤成纤维细胞TGF-β/Smads信号传导通路表达的影响。方法:将原代培养人正常皮肤成纤维细胞分为2组,即强脉冲光(IPL)照射组和未用IPL照射的对照组。采用Western blot和RT-PCR法分别检测2组细胞的TGFβ受体Ⅱ、Smad4、Smad7蛋白和mRNA水平,并比较两组的差异性。结果:IPL照射后皮肤成纤维细胞的TGFβ受体Ⅱ、Smad4蛋白和mRNA表达水平均升高,Smad7蛋白和mRNA表达水平降低,与对照组比较差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论:IPL照射人皮肤成纤维细胞后,TGF-β/Smads信号传导通路活性增强,其在IPL非剥脱性嫩肤机制中占有重要地位。

构建启动大鼠肝组织中TGF-β/Smad信号传导通路的急性肝损伤动物模型

目的在传统CCl4急性肝损伤模型的基础上,构建启动大鼠肝组织中的TGF-β/Smad信号传导通路的急性肝损伤动物模型。方法将30只大鼠随机分为3组,每组各10只,分别为模型组,对照组和空白组,模型组大鼠予小动脉夹夹闭肝总动脉15min手术处理,随后分别在第6天和第10天,予25%CCl4花生油溶液6mL/kg体重腹腔注射;对照组则单用两次CCl4,空白组不做任何处理;第二次CCl448h后处死所有动物。结果模型组与对照组及空白组比较:血清指标ALT、AST、HA显著上升(P<0.01);肝组织HE染色病理观测,肝组织出现明显炎症、变性、坏死,纤维组织增生等现象;PT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β1、Smad3mRNA表达显著增强(P<0.01);免疫组化检测Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β1、Smad3蛋白的表达增强(P<0.01)。结论成功启动急性肝损伤大鼠肝组织中的TGF-β/Smad信号传导路,该急性肝损伤动物模型兼备肝纤维化活跃,和TGF-β/Smad信号传导通路信号增强特征,在评价早期抗肝纤维化药物及方法时具有耗时少、有效和经济的特点,值得进一步研究。

人乳头瘤病毒16型E7蛋白和TGF-β1/Smads信号传导通路在宫颈病变中的表达及其意义

目的:检测宫颈病变组织中人乳头瘤病毒16型(HPV-16)E7蛋白以及转化生长因子β1(TGF-β1)介导的细胞信号传导通路中TGF-β1及其Ⅱ型受体(TβRⅡ)和Smad4蛋白的表达,探讨人乳头瘤病毒感染和TGF-β1/Smads信号传导通路在肿瘤形成及演进过程中可能的作用机制。方法:免疫组织化学SP法检测141例石蜡包埋的不同病变宫颈组织中E7,TGF-β1,TβRⅡ和Smad4的表达,通过计算机图片摄像分析系统统计其在各种病变中表达水平的差异。结果:病变由良性到恶性的发展过程中,TGF-β1和Smad4的表达水平逐渐增高(P<0·001,P<0·05);肿瘤分化程度降低,TGF-β1的表达水平增高(P<0·001)。TβRⅡ表达在不同阶段和组织学类型的宫颈病变中无显著差异(P>0·05)。E7蛋白阳性者TGF-β1的表达水平较阴性者高(P<0·05),而TβRⅡ和Smad4的表达则无显著差异(P>0·05)。结论:TGF-β1在宫颈病变中的表达与病变良恶性和肿瘤分化程度有关,TGF-β1高表达是宫颈恶性肿瘤的表现之一;HPV-16感染可能影响到TGF-β1/Smads信号传导通路的功能。

胰腺上皮内瘤变和胰腺癌组织中TGF-β/Smad信号通路相关蛋白表达

目的探讨转化生长因子(TGF)β/Smad信号传导通路中Smad相关蛋白、TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体在胰腺上皮内瘤变(PanIN)和胰腺癌组织中表达的意义。方法用免疫组化EnVision法和SP法检测266灶不同级别PanINs和121例胰腺癌组织中Smad相关蛋白、TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体的表达,并联系临床病理学指标进行相关分析。结果高级别PanIN病灶Smad4表达率(60.6%,20/33)低于低级别PanINSmad4表达率(79.8%,186/233)(P<0.05);而高级别PanIN中Smad7,TGFβ1,TGFβRⅡ表达率明显高于低级别PanIN(P<0.05)。胰腺癌组织中,Smad4蛋白表达率在淋巴结转移组和神经受累组低于各自对照组(P<0.05);Smad7、TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体的表达率在淋巴结转移组和神经受累组则分别高于各自对照组(P<0.05)。PanIN和胰腺癌组织中Smad2、4、7蛋白,TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体表达率的差异具有显著性(P<0.01)。结论从低级别PanINs到高级别PanINs再到胰腺癌中,Smad4蛋白表达率逐渐降低,而Smad7、TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体表达率逐渐升高,支持胰腺癌形成的分子模型。

TGF-β/Smad信号转导通路对紫外线致人工皮肤光损伤中MMP-1、pro-collagen Ⅰ mRNA表达影响的初步研究

目的探讨人工皮肤光损伤中TGF-β/Smad信号转导通路与基质金属蛋白酶1及Ⅰ型前胶原蛋白的相互作用。方法以紫外线照射人工皮肤后,通过Real-Time RT-PCR法(荧光染料掺入法)检测其中基质金属蛋白酶1、Ⅰ型前胶原蛋白、TGFβRⅠ及TGFβRⅡmRNA的表达量。结果紫外线使人工皮肤中基质金属蛋白酶1(MMP-1)的mRNA表达量明显增加,而Ⅰ型前胶原蛋白mRNA的表达下调(P<0.05),TGFβRⅡmRNA表达显著下调(P<0.01);加入TGF-β1后MMP-1表达显著下调(P<0.01),Ⅰ型前胶原蛋白及TGFβRⅡmRNA表达显著增高(P<0.01);而UV照射后8小时加入TGF-β1,MMP-1表达量较对照组高(P<0.05),Ⅰ型前胶原蛋白及TGFβRⅡmRNA表达量均较对照组低(P<0.05)。结论 UV可以抑制人工皮肤中Ⅰ型前胶原mRNA的表达、上调MMP-1的表达,而这种调控作用可能与TGF-βRⅡ的表达受抑制,TGF-β/Smad信号传导通路被削弱有关。

用艾灸疗法调控TGF-β/Smad信号传导通路在逆转慢性萎缩性胃炎癌前病变中的效果

目的:研究应用艾灸疗法调控TGF-β/Smad信号传导通路在逆转慢性萎缩性胃炎癌前病变方面的效果。方法:选择纯系合格Wistar大鼠120只,将其随机分为正常组、模型组、艾灸胃经穴组、对照点组、艾灸胃经穴+LY2109761组和对照点+LY2109761组,每组各20只大鼠。对各组大鼠均进行相应的处理,然后比较其胃黏膜组织表皮生长因子(EGF)、转化生长因子-β(TGF-β)、Smad3的水平、胃黏膜细胞P53、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、核仁组成区相关蛋白(Ag-NORs)、增殖细胞核抗原(PCNA)的水平。结果:与模型组大鼠、艾灸胃经穴组大鼠、对照点组大鼠、对照点+LY2109761组大鼠相比,艾灸胃经穴+LY2109761组大鼠胃黏膜组织EGF、TGF-β的水平、胃黏膜细胞P53、Bcl-2、Ag-NORs、PCNA的水平均较低,其胃黏膜组织Smad3的水平较高,P<0.05。结论:应用艾灸疗法调控干预TGF-β/Smad信号传导通路,可抑制胃癌的发生与发展。

Hippo信号通路与炎症的研究进展

Hippo信号通路是由一系列发生级联反应激酶构成的,调控细胞增殖和凋亡的一条关键信号转导通路,该信号通路最先于果蝇体内发现,且进化上高度保守。在哺乳动物中,早期研究主要集中于Hippo信号在肿瘤、心血管系统、免疫系统等疾病的调控,随着对Hippo信号通路的研究不断深入,近年来研究发现,Hippo与某些炎症疾病相关,特别是以Hippo通路为信号传导的中心,与某些炎症因子的信号通路存在交互作用,进而参与炎症的发生、发展过程。本文就Hippo信号通路与免疫细胞分化发育、Toll样受体信号传导通路、TGF-β/Smad信号通路,以及与G蛋白偶联受体之间的相互作用来阐述Hippo信号通路对炎症的调控机制,为研究Hippo信号通路调控炎症的机理提供思路。

川芎嗪对成纤维细胞及TGF-β/Smads信号传导的影响

目的研究川芎嗪对成纤维细胞和TGF-β信号传导通路的影响，探讨其抗纤维化作用的机理。方法以NIH3T3成纤维细胞为模型，通过H^3-thymidine DNA掺入量测定川芎嗪对成纤维细胞生长和增殖的影响；通过Ⅰ型胶原的免疫荧光染色实验，观察川芎嗪对成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白表达的影响；并利用MvlLu-（CAGA）12-Luc稳定细胞系，探讨川芎嗪对TGF-β／Smads信号传导通路的影响。结果川芎嗪可抑制成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达。无病理因子刺激的情况下，川芎嗪在0．2～20mg／L剂量范围内对NIH3T3细胞增殖和TGF-β信号传导的影响不明显；而在TGF-β刺激的情况下，在川芎嗪浓度为20mg／L时，对NIH3T3细胞增殖出现明显的抑制作用（P〈0．05）。川芎嗪在0．2～20mg／L剂量范围内，对于正常情况下TGF-β响应的细胞荧光酶活性影响不明显；而在TGF-β（2μg／L）刺激的情况下，各剂量组都对TGF-β响应的荧光酶活性表现了明显的抑制（P〈0．05或P〈0．001）。结论川芎嗪能抑制成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达和成纤维细胞的增殖，抑制TGF-β／Smads信号传导通路，可能是其发挥抗纤维化作用的机理之一。

青光安缓释剂对抗青光眼术后滤过道瘢痕化TGF-β/Smad信号传导通路相关蛋白的影响

目的:观察青光安缓释剂对抗青光眼术后滤过道瘢痕化过程中TGF-β/Smad信号传导通路相关蛋白的影响,探讨其作用机制。方法:将48只实验用兔分为空白组、模型组、MMC组、青光安组分1~4组和安慰剂组。除空白组外,其余各组行小梁切除+虹膜根部切除术,并进行相对应的处理。术后眼部常规检查,用药4周后进行术眼HE染色和相关蛋白检测。结果:术后MMC组和青光安组分2组眼压低于其他各组(P<0.05);两组滤过道轮廓清晰,纤维细胞及炎症细胞较其他各组少,且两组CollagenⅠ蛋白量明显低于其他各组(P<0.01);而MMC组Smad3、Smad4的蛋白量明显低于其他各组(P<0.01);结论:青光安组分2能使TGF-β/Smad通路的信号传导减弱,抑制滤过道瘢痕形成,安全性优于MMC。

黄芪甲苷激活TGF-β1/Smad2信号通路诱导骨髓间充质干细胞向周细胞分化的作用研究

目的:观察黄芪甲苷促进大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cell,MSCs)向周细胞分化的作用,揭示中药黄芪治疗缺血性心脏病的意义。方法:本研究以大鼠骨髓间充质干细胞为研究对象,采用全骨髓培养法,从SD大鼠乳鼠(5d-7d)股骨提取原代细胞,体外传代纯化,P4-P5代用于实验。实验分阴性对照组,大鼠BMSCs 15%胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)向周细胞分化的作用,揭示中药黄芪治疗缺血性心脏病的意义。方法:本研究以大鼠骨髓间培养基培养,不给予药物干预;阳性对照组,给予转化生长因子β1(TGF-β1)5 ng/mL干预3天;黄芪甲苷(Astragaloside,Ast)组,给予黄芪甲苷4μg/mL分别干预1 d、2 d、3 d、5 d、7d;阻断剂组,TGF-β1受体阻断剂sb431542预处理后,再加入黄芪甲苷4μg/mL分别诱导1 d、2 d、3 d。实时定量PCR(RT-PCR)检测神经元-胶质细胞抗原2(Neuron-glial antigen 2,NG2)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)信使核糖核酸(mRNA)表达;印迹法(Western blot)检测NG2、α-SMA、Smad2/3、p-Smad2蛋白表达。结果:经黄芪甲苷诱导刺激后,大鼠骨髓间充质干细胞在mRNA和蛋白水平上,NG2、α-SMA的表达量均升高;Ast 3d组,与阴性对照组和阳性对照组相比,NG2、α-SMA蛋白和mRNA的表达量均显著升高(p<0.05)。黄芪甲苷刺激细胞后,TGF-β1/Smad2信号传导通路被激活,从第一天开始,p-Smad2蛋白表达量升高,第3天到达顶峰,随后降低;其中第三天,p-Smad2蛋白表达量显著高于Ast 0d组(p<0.01)。加入阻断剂后,黄芪甲苷受到sb431542影响,对细胞的作用减弱,NG2、α-SMA蛋白和mRNA表达量均下调;sb431542+Ast 3d组,与Ast 3d组相比,NG2、α-SMA蛋白和mRNA的表达量显著降低(p<0.001)。受阻断剂的影响,黄芪甲苷对TGF-β1/Smad2信号传导通路的作用减弱,前三天p-Smad2蛋白的表达量均降低,sb431542+Ast 3d组,与Ast 3d组相比,p-Smad2蛋白的表达量显著降低(p<0.001)。结论:黄芪甲苷具有促进大鼠BMSCs向周细胞分化的作用,其机制与激活TGF-β1/Smad2信号传导通路相关。

芪珠方对肝纤维化模型大鼠TGF-β1/Smad信号通路的作用

目的观察芪珠方的不同提取物对大鼠肝脏TGF-β1,Smad4,Smad 7蛋白与mRNA表达的影响,探讨芪珠方抗肝纤维化的作用机制。方法 70只大鼠随机分为正常组,模型组,芪珠方醇提高剂量组,芪珠方醇提低剂量组,芪珠方水提高剂量组,芪珠方水提低剂量组,秋水仙碱组。除正常组外,其余各组大鼠皮下注射40%四氯化碳(CCl_4)橄榄油造模,首次5ml·kg^(-1),以后每次3ml·kg^(-1),每周2次,共8周。于造模开始次日给药,芪珠方高,低剂量组16.2,9.72g·kg^(-1)ig,秋水仙碱组5ml·kg^(-1)剂量ig,每日1次,连续8周。造模结束后所有大鼠处死,肝脏组织学观察,Western-blot检测TGF-β1, Smad4,Smad 7蛋白表达,荧光定量PCR检测TGF-β1,Smad4,Smad 7 mRNA表达。结果模型组大鼠肝组织纤维化程度,炎症程度高于正常组,肝组织内TGF-β1,Smad4的表达增加, Smad7的表达减少(P<0.05);经过芪珠方治疗后,治疗组与模型组相比肝组织纤维化和炎症程度降低,肝组织中TGF-β1,Smad4的表达降低,Smad7的表达增加(P<0.05)。结论芪珠方抗大鼠肝纤维化有显著效果,其作用机制与其能影响TGF-β1/Smad信号传导通路相关因子表达有关。

黄芪总苷液对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长作用研究

目的:探讨黄芪总苷液对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的抑制作用。方法:以正常皮肤为对照,用免疫组化检测瘢痕疙瘩组织标本中转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)及其转导因子(SMAD family member,Smad)的表达情况;不同浓度黄芪总苷液干预HFF-1人皮肤成纤维细胞后,MTT法检测其最适浓度;Real time-PCR测定成纤维细胞TGF-β的转导因子Smad2(SMAD family member 2),Smad3(SMAD family member 3),Smad4(SMAD family member 4),Smad7(SMAD family member 7)mRNA的表达;Western blot检测成纤维细胞TGF-βRⅡ,Smad2,Smad3,Smad4,Smad7的蛋白水平表达。结果:与正常皮肤组织相比,瘢痕疙瘩组织Smad蛋白表达水平明显提高(P<0.05),TGF-βRⅡ蛋白的表达水平在两组中没有明显差异(P>0.05)。MTT检测最适给药浓度为0.5μg·ml-1。两组细胞TGF-β/Smad信号通路相关蛋白表达量比较,给药组Smad2的表达水平明显提高,Smad3的表达水平明显降低(P<0.05)。结论:黄芪总苷液可能通过过表达Smad2以及抑制Smad3的表达来影响TGF-β/Smad通路过程从而抑制成纤维细胞的形成。

转化生长因子TGF-β及TGF-β／smad信号通路与脓毒症的研究进展

脓毒症是感染导致炎症反应失控的紊乱状态，其病情发展迅速，病死率高。据报道，美国每年约有75万例重症脓毒症患者，其中2115万例死于脓毒症相关器官功能不全，已超过了急性心梗的病死率而成为良性疾病的主要死因。目前脓毒症尚缺乏确切的治疗手段，成为危重病医学面临的一大难题。TGF-β作为多功能细胞因子，它和其胞内TGF-β／smad信号传导通路参与脓毒症的发病并发挥重要免疫调节作用。现将TGF-β及其下游信号通路与脓毒症的关系，及可能参与脓毒症发病的受体机制等方面的国内外研究和前景，综述如下。

TGF-β1与支气管哮喘

中医药治疗哮喘已突显出显著的临床疗效,但其作用机制有待进一步研究。因此设想以TGF-β1为靶点,从基因-基因、信号转导通路-细胞因子相互关系角度,进一步研究中医药在哮喘动物模型中的调控机制,对临床治疗哮喘提供科学依据。

β转化生长因子/Smads信号通路与创伤愈合的研究进展

创伤愈合是受多种因素调节的复杂过程,包括炎性反应、增殖和重塑[1].随着分子生物学等高新技术的渗透,创伤修复的研究也进入到一个更新、更高的阶段.目前认为,多种生长因子参与调控创伤愈合的过程,其中β转化生长因子（transforming growth factor β,TGF-β）在调节细胞增殖、分化、凋亡、炎性反应及创伤愈合的过程中发挥着重要作用[2].TGF-β通过特定的信号传导途径,调节相应靶基因的表达,进而调控多样化的生物学效应.Smads家族是一类新发现的TGF-β信号的细胞内介导者,它们可将TGF-β信号经跨膜的丝氨酸/苏氨酸激酶受体传导至细胞内,再由Smad蛋白传导至细胞核,并激活靶基因的转录.本文主要就TGF-β/Smads信号通路在创伤愈合的作用及其机制综述如下.