黄芪多糖通过TGF-β1/Smads通路对哮喘大鼠Th1/Th2免疫失衡的调节作用

目的:探讨黄芪多糖通过转化生长因子(TGF)-β1/Smads信号通路对哮喘大鼠辅助性T细胞(Th)l/Th2免疫失衡的调节作用。方法:选择雄性SD大鼠40只,分为对照组、模型组、黄芪多糖低、中、高剂量组,各8只。建立慢性哮喘大鼠模型,对照组和模型组大鼠尾静脉注射等体积0.9%氯化钠溶液,川芎嗪低、中、高剂量腹腔注射川芎嗪,各组均连续治疗14 d。干预后检测各组大鼠支气管黏膜受损面积和平滑肌厚度,收集各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),测定白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)水平变化,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织结构变化,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)对肺组织TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA和蛋白表达进行测定。结果:与对照组比较,模型组支气管黏膜受损面积、平滑肌厚度增加,与模型组比较,黄芪多糖各组均下降,且呈剂量依赖性(P<0.05)。与对照组比较,模型组BALF中IFN-γ水平降低,IL-4水平升高,与模型组比较,黄芪多糖各组BALF中IFN-γ水平均升高,IL-4水平均下降,且呈剂量依赖性(P<0.05)。模型组肺组织TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA和蛋白表达较对照组升高,黄芪多糖各组肺组织TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA和蛋白表达较模型组下降,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:黄芪多糖通过抑制TGF-β1/Smads信号激活阻止哮喘大鼠气道炎症,调节Th1/Th2比值失衡,改善大鼠肺组织病理损伤。

转化生长因子TGF-β1+869T/C基因多态性与子痫前期的相关性研究

目的探讨转化生长因子TGF-β1+869T/C基因多态性与子痫前期的相关性。方法采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(Polymerase Chain Reaction with Restrition Fragment Length Polymophism,PCR-RFLP)技术检测156例子痫前期患者(子痫前期组)和252例正常妊娠健康孕妇(对照组)外周血的TGF-β1+869T/C基因多态性,并对结果进行统计分析。结果 TGF-β1基因+869T/C位点存在CC、CT、TT三种基因型,子痫前期组CC基因型占33.33%,CT基因型占62.18%,TT基因型占4.49%;对照组CC基因型占13.10%,CT基因型占48.41%,TT基因型占38.49%。子痫前期组孕妇CC和CT基因型频率均明显高于对照组(p<0.01,p<0.01);而TT基因型频率则明显低于对照组(p<0.01)。子痫前期组+869T/C位点C等位基因频率(64.42%)明显高于对照组(37.30%),T等位基因频率(35.58%)明显低于对照组(62.7%)。结论 TGF-β1+869T/C基因多态性与子痫前期显著相关。

CD4^+CD25^+调节性T细胞特异标志物FOXP3在慢性乙型肝炎中的作用及其与TGF-β_1的相关性

目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞特异标志物FOXP3在慢性乙型肝炎(CHB)中的作用及其与TGF-β1的相关性。方法 120例CHB患者均进行肝脏活体组织穿刺检查,以炎症活动度分级进行分组。免疫组织化学染色法检测不同炎症活动度分级患者肝组织中FOXP3及TGF-β1的表达变化及定位特点。结果不同病理分级CHB肝组织中FOXP3与TGF-β1评分均高于正常对照组(G0组)(P均<0.05),随着炎症活动度的逐渐增加,FOXP3与TGF-β1评分逐渐增强,均与炎症活动度呈正相关(r=0.866,P<0.05;r=0.841,P<0.05)。肝组织中FOXP3表达与ALT、HBV DNA定量之间无相关性。结论肝脏炎症的存在是促进FOXP3分泌表达的必要条件。FOXP3可作为判断乙型肝炎的病情和预后的指标之一。FOXP3与TGF-β1/Smads信号传导可能在肝组织损伤及纤维化进展过程中共同发挥了作用。

胃癌组织中TGF-β_1和TβR_1基因的表达及意义的研究

目的 :观察转化生长因子β1 (TGF-β1 )及其受体 I(TβR1 )基因在人类胃癌组织中的表达及其与胃癌病理生物学行为的关系。方法 :应用抗 TGF-β1 和 TβR1 多克隆抗体对 10 7例胃癌组织中的 TGF-β1 和 97例胃癌组织中的 TβR1 基因表达蛋白进行了 S- P免疫组织化学方法检测。结果 :TGF-β1 在胃癌组织中的阳性表达 (75 % )明显高于癌旁组织 (2 4.4% )及正常组织 (2 9.2 % ) ,差异非常显著 (P <0 .0 1) ;TRβ1 在胃癌组织中阳性表达 (19.6 % )明显低于癌旁组织 (79.6 % )和正常组织 (75 .6 % ) ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :TGF-β1 和 TβR1 基因的异常表达与胃癌的发展及恶性程度有关。

TGF-β_1基因修饰树突状细胞对免疫排斥反应影响的研究

目的探讨术前输注TGF-β1基因修饰的供者树突状细胞(dendriticcell,DC)对大鼠肝移植免疫排斥的抑制作用及相关机制。方法TGF-β1重组腺病毒转染供者DC,静脉输注受体大鼠,1周后建立大鼠肝移植免疫排斥模型并鉴定表达,记录存活时间,凝胶电泳迁移率试验法检测脾T细胞、Kupffer细胞NF-кB活性及相关细胞因子TNF的表达,观察移植肝排斥病理改变。结果Ad-TGF-β1-DC输注组移植大鼠的T细胞、Kupffer细胞活性及TNF表达明显低于对照组,排斥病理改变明显减轻,存活时间延长,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论TGF-β1-DC能有效降低T细胞和Kupffer细胞活性,提高移植肝免疫耐受,延长存活时间。

基于Smads信号通路探讨止消通脉宁干预TGF-β_1诱导HK-2细胞转分化的研究

目的:探讨止消通脉宁含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化Smad信号通路的影响。方法:将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为6组:空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、中药含药血清低剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清中剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清高剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁含药血清)。药物干预24小时后,荧光定量PCR检测TβRI、TβRⅡ的mRNA表达,Western blot检测Smad 2、Smad 3的蛋白表达。结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,TβRI、TβRⅡ的mRNA表达和Smad 2、Smad 3的蛋白表达显著上升,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),经止消通脉宁含药血清干预后,其表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组相比差异有统计学意义(P<0.05)。而空白血清无此作用。结论:止消通脉宁能够调控TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化Smad信号通路,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用。

SLE患者血中调节性T细胞及TGF-β_1的表达

目的:检测系统性红斑狼疮(SLE)轻型与重型患者中调节性T细胞、TGF-β1和抗ds-DNA抗体的表达水平,并与正常健康人对比,分析它们之间的差异。方法:应用放射免疫分析和ELISA检测血清抗ds-DNA和TGF-β1的表达水平,采用流式细胞仪检测调节性T细胞的表达水平。结果:狼疮重型组中调节性T细胞显著低于狼疮轻型组和健康对照组(P<0.05);重型组抗ds-DNA抗体显著高于轻型组和健康对照组(P<0.05);重型与轻型的TGF-β1的表达水平差异无统计学意义,但重型组和轻型组的表达水平都比健康对照组明显降低。结论:调节性T细胞的表达数量可作为狼疮活动的指标,而血清TGF-β1的表达水平与其活动性无关。

应用TGF-β_1从rhG-CSF动员的外周血采集物中诱导产生CD4^+ CD25^+调节性T细胞

目的探讨在人重组的粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员的外周血单个核细胞中诱导产生CD4+CD25+调节性T细胞可行性及其表型和功能。方法收集本院外周血干细胞移植术供者rhG-CSF动员前外周血(PB组)和动员后的外周血采集物(G-PB组)各10例,用免疫磁珠法分选出CD4+CD25?T细胞,并用转化生长因子β1(TGF-β1)进行诱导,分别应用流式细胞术、RT-PCR和细胞增殖、抑制试验测定诱导后细胞的CD25、Foxp3表达和免疫抑制功能,比较2组之间CD4+CD25+T细胞转化率、抑制功能的差异。结果1)G-PB和PB来源的CD4+CD25?T细胞在抗-CD3 M cAb和TGF-β1作用下CD25+分子表达不同,分别为:(77.9±2.3)%和(65.7±4.2)%,差异有统计学意义(P<0.05);2)TGF-β1诱导产生的CD4+CD25+T细胞高表达Foxp3;3)PB、G-PB来源的TGF-β1诱导产生的CD4+CD25+T细胞具有免疫抑制功能,cpm值分别为:11 739±352和18 732±437(P<0.05)。结论G-CSF动员的外周血可作为CD4+CD25+调节性T细胞的重要来源。

辐照对MC3T3-E1细胞TGF-β_1和Smads基因及蛋白表达的影响

目的:探讨放射线对成骨细胞系MC3T3-E1细胞增殖及TGF-β1和Smad3/P-Smad3表达的影响。方法:以小鼠胚胎成骨细胞系MC3T3-E1为研究对象,4MV直线加速器为放射源,给予单一剂量8Gy照射。照射后以CCK-8检测成骨细胞增殖情况,通过荧光定量PCR和Western免疫印迹分别检测TGF-β1、Smad3基因和蛋白的表达,并分别用2-ΔΔct法及光密度分析法分析基因及蛋白的表达水平。采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:单次8Gy剂量照射的细胞组与对照组相比,生长速度明显减慢;Smad3及TGF-β1基因在照射后0.5 h,1 h组与对照组无显著差异(P>0.05),照射后1.5 h组Smad3及TGF-β1基因表达量与对照组存在显著差异(P<0.05);P-Smad3、TGF-β1蛋白表达在第1天明显上调;第3天、第5天照射组与对照组差异逐渐减小。8Gy照射后第1天,P-Smad3蛋白表达量最高,TGF-β1蛋白表达量第3天最高。结论:8Gy照射剂量可抑制MC3T3-E1细胞增殖,短时间内上调TGF-β1和Smad3/P-Smad3在基因及蛋白水平的表达。

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎T细胞亚群及血清HA、TGF-β_1的变化

目的探讨拉米夫定治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎(轻度)后患者T细胞亚群及血清HA、TGF-β1的变化。方法42例HBeAg阳性慢性乙型肝炎(轻度)患者除一般护肝治疗外,加用拉米夫定100mg,每日一次。疗程6个月。服药前及6个月后检查肝功能,HBVDNA、T细胞亚群及血清HA、TGF-β1。结果与治疗前比较,应用拉米夫定治疗6个月后,患者血清HBVDNA滴度明显下降,CD4+上升,CD4+/CD8+上升,NK细胞上升,血清HA、TGF-β1下降。结论拉米夫定治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎(轻度),抑制了HBV的复制,调节了患者的细胞免疫功能,减轻了肝脏的炎症反应及纤维化,有利于病毒的清除。

TGF-β_1、TβRII在子宫内膜样腺癌中的表达及其意义

目的通过检测TGF-β1、TβR II在子宫内膜组织和子宫内膜样腺癌中的表达,分析其与临床病理因素的关系,进一步探讨子宫内膜样腺癌的发生、发展的分子生物学机制及其能否作为预测子宫内膜样腺癌浸润、转移潜能和预后的分子生物学指标。方法采用免疫组化SP法对32例子宫内膜样腺癌、10例正常子宫内膜组织、10例单纯性增生内膜组织、10例复杂性增生内膜组织及10例非典型增生内膜组织共计72例石蜡组织进行TGF-β1、TβR II蛋白表达的检测。结果TGF-β1在子宫内膜样腺癌中的表达显著高于正常子宫内膜组(P(0.01)。TGF-β1表达强度与子宫内膜样腺癌的临床分期(P(0.01)、肌层浸润深度(P(0.01)及淋巴结转移(P(0.05)间的差别具有统计学意义。TβR II在子宫内膜样腺癌中的表达显著低于正常子宫内膜组(P(0.05)。TβR II表达强度与子宫内膜样腺癌的临床分期(P(0.05)、肌层浸润深度(P(0.05)及淋巴结转移(P(0.05)间的差别具有统计学意义。结论TGF-β1在正常子宫内膜向内膜癌转变过程中发挥着重要作用。TGF-β1表达强度与子宫内膜样腺癌的临床分期、肌层浸润深度及淋巴结转移有关。TGF-β1促进子宫内膜样腺癌的发生、发展可能与TβR II突变有关。

可溶性TGF-β_1Ⅱ型受体逆转录病毒表达载体的构建

目的:构建表达人TGF—β1Ⅱ型受体细胞外结合区和人IgG1 Fc的融合蛋白逆转录病毒载体,为进一步肝纤维化的基因治疗奠定实验基础. 方法:以RT—PCR方法扩增目的基因TβRⅡ-IgG1 Fc,扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEM—T—Easy,挑取阳性克隆酶切鉴定后测序;利用重组DNA 技术,将TβRⅡ-IgG1 Fc基因亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,测定病毒滴度. 结果:经测序、限制性酶切分析及PCR方法鉴定,载体插入基因序列、大小、位置均正确,并用PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的感染性重组病毒产生细胞系. 结论:成功构建了重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN, 可望为肝纤维化的基因治疗提供有效途径.

广州汉族葡萄膜炎患者TGF-β1+869T/C基因多态性

目的探讨转化生长因子(TGF)-β1+869T/C基因多态性与葡萄膜炎病的关系。方法运用多聚酶链反应技术检测广州汉族75例葡萄膜炎及140例正常人TGF-β1+869T/C基因多态性的分布。结果葡萄膜炎组TGF-β1+869T/C基因多态性基因型频率(%)分别为38.67、48.00、13.00,T、C基因频率分别为0.6267和0.3733,而对照组TGF-β1+869T/C基因型频率(%)分别为38.57、48.57、12.86,对照组TGF-β1+869C,T、C基因频率分别为0.6286和0.3714;TGF-β1+869T/C基因多态性各种基因型频率在患者组与正常对照组之间的差异无统计学意义(χ2=0.16,P>0.05)。结论 TGFβ1-509C/T基因多态性与葡萄膜炎无明显相关。

TGF-β_1在ConA激活的CD4^+T细胞抑制NK细胞杀伤毒性中的影响

目的初步探讨ConA激活的CD4+T细胞对NK细胞杀伤毒性的影响及TGF-β1分子在其中的作用。方法磁珠分选纯化BALB/c小鼠脾脏CD4+T细胞与NK细胞,体外用ConA激活CD4+T细胞,将激活的CD4+T细胞与NK细胞共培养,并加入TGF-β1抗体,共培养24、48、72h和96h后,用51Cr标记的YAC-1检测NK细胞的杀伤毒性。结果ConA激活的CD4+T细胞能够在所测的4个时相点显著抑制NK细胞的杀伤毒性,抑制率分别为25.00%、31.60%、34.70%和46.50%;在此共培养体系中加入TGF-β1抗体后,抑制率分别增加到63.80%、59.43%、60.70%和90.90%。结论ConA激活的CD4+T细胞能够显著抑制NK细胞的杀伤毒性,并且这种抑制作用随着TGF-β1抗体的加入而增强,表明TGF-β1分子影响了ConA激活的CD4+T细胞对NK细胞杀伤毒性的抑制。

体外抗原激活的CD4^+T淋巴细胞以TGF-β_1非依赖的途径抑制NK细胞的杀伤功能

目的初步探讨体外抗原激活的CD4+T淋巴细胞对NK细胞杀伤毒性的影响及其机制。方法免疫磁珠方法获得BALB/c小鼠CD4+T淋巴细胞和NK细胞,异种皮肤抗原刺激CD4+T淋巴细胞后,与NK细胞共培养,并加入TGF-β1抗体后,分别应用51Cr标记的YAC-1检测24、48、72、96h NK细胞的杀伤毒性。结果异种皮肤抗原激活的CD4+T淋巴细胞能够持续抑制NK细胞杀伤毒性,在检测的时相点内,其抑制率分别为:39%、37.5%、26.3%和15.9%,加入TGF-β1抗体后,抑制率无明显变化。结论体外用抗原激活的的CD4+T淋巴细胞能够持续显著抑制NK细胞杀伤毒性,而且这种作用是TGF-β1非依赖的。

TGF-β_1对γδT细胞TLR-4受体及IL-2、IFN-γ水平的影响

目的探讨转化生长因子β_1(TGF-β_1)对γδT淋巴细胞Toll样受体4(TLR-4)蛋白表达的影响,及TGF-β_1对γδT淋巴细胞分泌淋巴因子白细胞介素2(IL-2)、干扰素γ(IFN-γ)的影响。方法从健康志愿者外周血中分离纯化γδT淋巴细胞,并用外源性TGF-β_1、脂多糖(LPS)刺激γδT淋巴细胞,分为4组培养:空白对照组、LPS组、LPS+TGF-β_1组、TGF-β_1组。培养12 d后采用酶联免疫吸附法检测淋巴因子IFN-γ、IL-2的表达,Western blot检测TLR-4蛋白的表达,PCR检测TLR-4基因的转录。结果与空白对照组相比,LPS组、LPS+TGF-β_1组TLR-4蛋白的转录及表达水平升高(P<0.05),淋巴因子IL-12和IFN-γ的表达增加;TGF-β_1组TLR-4蛋白的表达、转录及IL-2的表达降低(P<0.05)。与LPS组相比,LPS+TGF-β_1组TLR-4蛋白的转录及表达、淋巴因子IL-12和IFN-γ的表达降低(P<0.05)。结论TGF-β_1能抑制γδT淋巴细胞TLR-4蛋白的表达,降低γδT淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-2淋巴因子的水平。

TGF-β1+869T/C基因多态性与儿童哮喘相关性的探讨

目的探讨转化生长因子TGF-β1+869T/C基因多态性与儿童哮喘的关系。方法运用多聚酶链反应技术检测100例儿童哮喘及100例正常儿童转化生长因子TGF-β1+869T/C基因多态性。结果儿童哮喘组转化生长因子TGF-β1+869 C/C、T/C、T/T表型频率分别为:0.230 0、0.480 0、0.290 0,对照组分别为0.220 0、0.470 0、0.310 0;儿童哮喘组TGF-β1+869C、TGF-β1+869 T基因频率分别为:0.470 0、0.530 0,对照组分别为:0.455 0、0.545 0;TGF-β1+869T/C各种基因型频率在儿童哮喘组与正常对照组之间差异无统计学意义(p>0.05)。结论 TGF-β1+869T/C基因多态性与儿童哮喘无明显相关。

Smad4蛋白和TGF-β_1及TβRⅡ在胆管癌中表达的研究

目的 探讨胆管癌组织中Smad4蛋白和TGF β1 及TβRII表达的相互关系及其在胆管癌发生发展中的可能作用机制。方法 应用免疫组化SABC法检测 49例胆管癌及 8例正常胆管组织中Smad4蛋白和TGF β1 及TβRII的表达。结果 49例胆管癌组织Smad4蛋白 ,TGF β1 和TβRII蛋白阳性率分别为 40 .82 % ( 2 0 /4 9) ,71.43 % ( 3 5 /4 9)和 3 6.73 % ( 18/4 9) ;而正常胆管组织阳性率分别为87.5 0 % ( 7/8) ,12 .5 0 % ( 1/8)和 10 0 % ( 8/8)。III～IV期胆管癌的TGF β1 阳性率明显高于I～II期 ;有转移者高于无转移者。I～II期患者TβRII阳性率则明显高于III～IV期 ( P <0 .0 5 )。TGF β1 及其II型受体的共同表达与胆管癌临床病理分期有关 ( P <0 .0 5 )。中下段胆管癌Smad4蛋白表达明显降低 (P <0 .0 5 )。结论 TGF β1 过度表达可能加速了胆管癌的进程 ;Smad4蛋白表达与胆管癌发生的部位有关。

T3对小鼠糖尿病肾组织中TGF-β_1表达的影响

目的观察T3对小鼠糖尿病肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响,探讨T3影响糖尿病肾组织纤维化的作用机制。方法 36只小鼠随机挑选12只为正常对照组(C),余24只以注射链尿佐菌素(STZ)方式复制糖尿病小鼠模型,分为糖尿病组(DM)和T3组(T3)。动物饲养6个月后取材肾组织,应用免疫组化技术、体视学方法(检测体密度)和Western blot技术观察各组肾组织中TGF-β1的表达。结果与对照组相比,糖尿病组小鼠TGF-β1的表达范围明显增加,T3组TGF-β1的表达范围明显低于糖尿病组。结论 T3通过降低TGF-β1影响糖尿病肾组织纤维化范围大小和进程。