金雀异黄素通过调控TGF-β1/Smad3信号通路对2型糖尿病大鼠心肌纤维化的影响

目的 探讨金雀异黄素减轻糖尿病大鼠心肌纤维化的作用及潜在机制。方法 通过高脂饮食结合腹腔注射链脲菌素(STZ)法建立大鼠2型糖尿病(T2DM)模型,并随机分为模型组、二甲双胍组(100 mg/kg)及金雀异黄素低、高剂量组(50、100 mg/kg),另设正常组给予常规饮食,每组10只。各给药组灌胃给药8周,检测体质量、心功能、心脏质量及心脏指数,血清CK-MB、AST及LDH活性,观察心肌纤维化程度,心肌组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad同源物3(Smad3)mRNA和蛋白表达,心肌组织Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)和Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)蛋白分布及表达。结果 与模型组比较,金雀异黄素各剂量组大鼠体质量、每搏输出量(SV)及射血分数(EF)升高(P<0.01),心脏指数、左心室收缩末期内径(LVIDs)、血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织胶原相对面积及CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织TGF-β1、Smad3 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),金雀异黄素高剂量组左心室舒张末期内径(LVIDd)降低(P<0.05)。结论 金雀异黄素可通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路,减轻2型糖尿病大鼠心肌纤维化作用,进而发挥保护心脏效应。

益气解毒方通过TGF-β1/SMAD3信号通路抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的研究益气解毒方对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并从转化生长因子β1(TGF-β1)/SMAD3信号通路探讨其对增殖、迁移和侵袭的作用机制。方法(1)将鼻咽癌细胞分为4组:溶剂对照组、益气解毒方0.5 mg·mL^(-1)组、益气解毒方1.0 mg·mL^(-1)组、5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-Fu)2μg·mL^(-1)组,采用实时无标记细胞功能分析仪(real time cellular analysis technology,RTCA)监测细胞增殖;创伤愈合实验检测细胞迁移;药物干预24 h后,侵袭小室法检测细胞侵袭;Western Blot法检测细胞β-catenin、E-cadherin、N-cadherin、TGF-β1、SMAD3蛋白的表达水平。(2)将鼻咽癌细胞分为5组:溶剂对照组、TGF-β110 ng·mL^(-1)组、TGF-β110 ng·mL^(-1)+益气解毒方1.0 mg·mL^(-1)组、益气解毒方1.0 mg·mL^(-1)组、LY320088210μmol·L-1组,采用实时无标记细胞功能分析仪监测细胞增殖;创伤愈合实验检测细胞迁移;药物干预24 h后,侵袭小室法检测细胞侵袭;Western Blot法检测细胞β-catenin、E-cadherin、N-cadherin、TGF-β1、SMAD3蛋白的表达水平。(3)随机将裸鼠分为模型组、益气解毒方组和5-Fu组。皮下部位注射细胞悬液制备鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,基本成瘤后,5-Fu组每2 d腹腔注射1次,其余组每天灌胃给药1次,连续3周。每隔3 d测量瘤体体积1次;Western Blot法检测各组组织中β-catenin、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平。结果与溶剂对照组比较,益气解毒方(0.5、1.0 mg·mL^(-1))组的细胞增殖曲线均下降,细胞迁移和侵袭能力均降低(P<0.05,P<0.01),且E-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.01),β-catenin、N-cadherin、TGF-β1、SMAD3蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,益气解毒方组的鼻咽癌移植瘤体积明显减小(P<0.05),且益气解毒方组移植瘤组织中的β-catenin和N-cadherin蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),E-cadherin蛋白表达明显上调(P<0.01)。加入TGF-β1信号通路激活剂和抑制剂后,与益气解毒方1.0 mg·mL^(-1)组比较,TGF-β110 ng·mL^(-1)+益气解毒方1.0 mg·mL^(-1)组的TGF-β1、SMAD3、β-catenin和N-cadherin蛋白表达水平均明显升高(P<0.05,P<0.01),且细胞增殖、迁移和侵袭的能力明显增强(P<0.01)。结论益气解毒方能够通过调控TGF-β1/SMAD3信号通路抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

硫辛酸联合踝泵运动治疗糖尿病足的疗效及TGF-β1/Smad3信号通路的调控作用

近年来,糖尿病患病人数呈现快速增加的趋势。糖尿病足是糖尿病患者的严重并发症之一,严重影响患者的生存质量[1]。研究显示,国内糖尿病足发病率呈逐年上升趋势,糖尿病门诊中糖尿病足占3.67%,而截肢率已高于1%[2]。硫辛酸是糖尿病临床治疗的一线用药。

血流限制抗阻训练通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路减轻2型糖尿病大鼠肾纤维化

目的:探究血流限制抗阻训练对2型糖尿病(T2DM)大鼠肾纤维化的影响及其通过抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad家族成员3(Smad3)信号通路减轻肾纤维化的潜在机制。方法:采用高脂饲料和链脲佐菌素(STZ)联合制备大鼠T2DM模型,造模成功后随机分为T2DM对照(CON,n=5)组、低负荷抗阻训练(LRT,n=5)组、高负荷抗阻训练(HRT,n=5)组、血流限制(BFR,n=5)组和血流限制抗阻训练(BFRT,n=5)组,进行为期8周的运动训练。记录各组大鼠肾脏指数、空腹血糖(FBG)、血清肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN)水平;通过HE和Masson染色观察肾脏形态学变化,并计算胶原容积分数(CVF);RT-qPCR检测肾脏组织中Klotho、TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达水平;Western blot检测肾脏组织中Klotho、TGF-β1、Smad3、磷酸化Smad3(p-Smad3)、α-SMA和结缔组织生长因子(CTGF)的蛋白水平。结果:对比其他各组,血流限制抗阻训练组大鼠FBG、SCr、BUN和肾脏CVF显著下降(P<0.05),Klotho表达水平显著上升(P<0.05),TGF-β1、p-Smad3、CTGF和α-SMA表达水平显著下降(P<0.05),Smad3表达水平无显著变化(P>0.05)。结论:血流限制抗阻训练可减轻T2DM大鼠肾纤维化程度,其机制可能与上调Klotho表达,阻断TGF-β1/Smad3信号通路,从而抑制细胞外基质的沉积有关。

化痰通腑方通过TGF-β1/Smad3信号通路对脓毒症肺损伤患者抗炎反应及预后的作用机制

目的:研究化痰通腑方通过TGF-β1/Smad3信号通路对脓毒症肺损伤患者抗炎反应及预后的作用机制。方法:本次前瞻性研究的研究对象为80例脓毒症肺损伤患者,研究时间为2019年3月至2022年12月,将研究对象按随机数字表法分为2组各40例。对照组采用基础治疗,研究组在对照组基础治疗上服用化痰通腑方。连续治疗5 d。比较2组疗效情况、入住重症监护室(ICU)时间、机械通气时间,以及根据1个月随访结果记录28 d病死率,比较2组治疗前后脓毒症症状评分、氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2))、肺泡动脉氧分压差[Pa(A-a)O_(2)],以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、转化生长因子-β1(TGF-β1)含量和Smad3蛋白表达水平。结果:治疗结束后,2组脓毒症症状评分(恶心呕吐评分除外)均低于治疗前(P<0.05),研究组脓毒症症状评分均低于对照组(P<0.05);研究组入住ICU时间和机械通气时间均低于对照组(P<0.05),为期1个月的随访结果显示,2组均无28 d病死病例;研究组治疗总有效率92.50%高于对照组75.00%(P<0.05);治疗结束后,2组PaO_(2)/FiO_(2)均高于治疗前(P<0.05),研究组PaO_(2)/FiO_(2)高于对照组(P<0.05);治疗结束后,2组Pa(A-a)O2均低于治疗前(P<0.05),研究组Pa(A-a)O_(2)低于对照组(P<0.05);治疗结束后,2组血清TNF-α、IL-6、IL-8含量均低于治疗前(P<0.05),研究组血清TNF-α、IL-6、IL-8含量均低于对照组(P<0.05);治疗结束后,2组血清TGF-β1含量和Smad3蛋白表达水平均低于治疗前(P<0.05),研究组血清TGF-β1含量和Smad3蛋白表达水平均低于对照组(P<0.05)。结论:化痰通腑方治疗脓毒症肺损伤疗效良好,可改善机体炎症水平和提高预后,其作用机制可能与抑制TGF-β1/Smad3信号通路的表达有关。

基于TGF-β1/SMAD3信号通路探讨肺维康颗粒对肺纤维化大鼠的影响

目的探讨肺维康颗粒对肺纤维化(PF)大鼠的影响及作用机制。方法将36只SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、吡非尼酮组和肺维康颗粒高、中、低剂量组,每组6只。除空白组外,余均用博来霉素气管内给药法造模。造模成功后,根据组别给予对应药物灌胃28 d,处死、取样。观察各组肺组织病理学改变,白细胞介素(IL)-6、转化生长因子(TGF)-β1含量和TGF-β1、SMAD3、Fibronectin蛋白表达。结果相较空白组,模型组染色可见更多结构损伤与胶原沉积,而吡非尼酮组与肺维康颗粒各组情况较模型组减轻。模型组IL-6、TGF-β1含量及TGF-β1、SMAD3、Fibronectin蛋白表达较空白组明显上调,吡非尼酮组与肺维康颗粒各组的上述指标则均较模型组降低,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论肺维康颗粒可减少PF大鼠炎症因子释放、延缓疾病进展,其作用机制可能与调控TGF-β1/SMAD3信号通路相关。

β2肾上腺素受体通过TGF-β1/Smad3信号通路调控创面愈合中的纤维增生

目的探讨β2肾上腺素受体(β2 adrenergic receptor,ADRB2)在创面愈合过程中对纤维增生的调控机制。方法将12只小鼠背部皮肤随机注射非特异性敲减ADRB2基因的腺相关病毒(AAV-ADRB2组,n=6)和对照病毒(AAV-NC组,n=6)21 d后,在背部建立全层皮肤缺损创面愈合模型。记录术后第1、3、5、7天创面愈合率;采用H-E染色、Masson染色和免疫组化染色观察创面组织结构、纤维化程度及α-平滑肌肌动蛋白表达;定量PCR检测ADRB2、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)mRNA水平;Western印迹法检测胶原纤维1A1、胶原纤维3A1、TGF-β1、Smad3蛋白表达水平。结果术后第5、7天,AAV-ADRB2组创面愈合率显著下降(P<0.05),伴随表皮增厚、炎症细胞增多、纤维细胞减少、胶原沉积降低;α-SMA水平显著下降(P<0.05);COL1A1/COL3A1比例减少(P<0.05);ADRB2 mRNA水平显著降低(P<0.01),MMP-1和MMP-8 mRNA水平升高(P<0.01);TGF-β1/Smad3蛋白水平显著下降(P<0.05)。结论ADRB2敲减通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路,减少创面纤维化反应和结缔组织含量,提高MMP mRNA水平,降低Ⅰ型/Ⅲ型胶原比例。

人胎盘间充质干细胞调控TGF-β1/Smad3信号通路抑制肺纤维化的发生

背景:研究表明人胎盘间充质干细胞能有效抑制肺纤维化的发展,但其发挥作用的具体机制目前并不清楚。目的:探究人胎盘间充质干细胞对二氧化硅诱导人胚肺成纤维细胞发生肺纤维化的治疗作用及相关机制。方法:CCK-8法检测不同质量浓度二氧化硅干预不同时间对MRC-5细胞增殖活力的影响,结合免疫荧光染色法筛选出最佳的二氧化硅刺激质量浓度与时间用于后续实验。将MRC-5细胞分为空白组、二氧化硅组、二氧化硅+人胎盘间充质干细胞组,空白组细胞不予任何处理,二氧化硅组MRC-5细胞给予100μg/mL二氧化硅刺激48 h,二氧化硅+人胎盘间充质干细胞组MRC-5细胞先给予100μg/mL二氧化硅刺激48 h后再与人胎盘间充质干细胞共培养24 h。免疫荧光染色检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白、胶原蛋白Ⅰ型蛋白的表达;Western blot检测各组细胞肺纤维化相关蛋白和TGF-β1/Smad 3信号通路相关蛋白表达。结果与结论:①CCK-8结果显示,100μg/mL二氧化硅刺激MRC-5细胞48 h为最佳质量浓度与时间;②免疫荧光染色结果显示,与二氧化硅组相比,二氧化硅+人胎盘间充质干细胞组α-平滑肌肌动蛋白、胶原蛋白Ⅰ型蛋白表达明显降低;③Western blot结果显示,与二氧化硅组相比,二氧化硅+人胎盘间充质干细胞组α-平滑肌肌动蛋白、胶原蛋白Ⅰ型、N-钙黏蛋白、粘连蛋白、转化生长因子β1、p-Smad3、Smad3的蛋白表达均降低,E-钙黏蛋白表达升高,差异均有显著性意义(P<0.05);④结果说明,人胎盘间充质干细胞能够对二氧化硅诱导的肺纤维化有显著的治疗作用;人胎盘间充质干细胞可以通过调控TGF-β1/Smad3信号通路抑制肺纤维化的发生。

GNMT通过TGF-β1/Smad3信号通路抑制宫腔粘连纤维化及其机制研究

目的探究甘氨酸N-甲基转移酶(glycine N-methyl transferase,GNMT)对宫腔粘连(intrauterine adhesion,IUA)纤维化的影响及其相关机制。方法体内实验:采用36只SPF级健康雌性SD大鼠(周龄为6~8周,体质量180~220 g)。分别构建SD大鼠IUA模型及GNMT过表达大鼠IUA模型,利用RT-qPCR、免疫荧光检测正常子宫与模型组子宫GNMT表达水平;进一步利用RT-qPCR及Western blot检测各组子宫纤维化相关分子mRNA和蛋白水平以及TGF-β1/Smad3信号通路激活情况;HE染色观察各组子宫内膜腺体数量;Masson染色分析各组子宫内膜纤维化程度。体外实验:利用TGF-β1构建人子宫内膜间质细胞(transformed human endometrial stromal cells,THESCs)纤维化表型模型,使用TGF-β1处理稳定转染过表达GNMT慢病毒的THESCs,RT-qPCR及Western blot检测纤维化表型相关分子mRNA和蛋白的表达情况;Western blot检测TGF-β1/Smad3信号通路相关蛋白表达;通过TGF-β1/Smad信号通路激活剂(SRI-011381)激活TGF-β1/Smad3信号通路,Western blot检测TGF-β1/Smad3信号通路及纤维化表型关键分子蛋白表达情况。结果体内实验:与对照组比较,IUA大鼠GNMT mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05)。过表达GNMT可降低IUA大鼠子宫组织纤维化相关分子CollagenⅠ、CollagenⅢ、FN mRNA及蛋白水平(P<0.05),并降低TGF-β1及其下游的Smad3蛋白磷酸化水平(P<0.05);HE和Masson染色显示过表达GNMT可增加IUA大鼠子宫内膜腺体数量并减轻纤维化程度(P<0.05)。体外实验:过表达GNMT可降低THESCs纤维化表型相关分子CollagenⅠ、CollagenⅢ和FN的mRNA和蛋白水平(P<0.05),并降低TGF-β1下游的Smad3蛋白磷酸化水平(P<0.05);TGF-β1/Smad3信号通路激活后,LV-GNMT+SRI-011381组中TGF-β1/Smad3信号通路及下游的纤维化表型相关分子CollagenⅢ、FN的蛋白水平均明显降低。结论过表达GNMT通过调控TGF-β1/Smad3信号通路抑制子宫内膜纤维化,进而达到治疗IUA的作用。

痰瘀同治法对糖尿病大鼠肾脏TGF-β1/Smad3信号通路的影响

目的观察痰瘀同治法通过调节TGF-β1/Smad3信号通路对糖尿病大鼠肾脏病变的影响。方法选取SD大鼠随机分为:空白组(NC)、模型组(MC)、痰瘀同治组(RPDBS)、化痰组(RP)、化瘀组(DBS),予以单次注射链脲佐菌素溶液制备糖尿病模型,喂养4周后,RPDBS组、RP组和DBS组分别予以相应的药物干预8周,麻醉状态下取材。采用HE染色法观察肾脏组织病理学变化;Western blot法和实时荧光定量PCR法检测肾脏组织转化生长因子-β1(TGF-β1)及其信号蛋白Smad3蛋白和基因表达水平。结果与MC组比较,光镜下各治疗组肾小球和肾小管结构和排列改善明显;各治疗组TGF-β1、Smad3和p-Smad3蛋白和基因表达水平均明显下调(P<0.05);其中RPDBS组TGF-β1、Smad3和p-Smad3蛋白和基因表达水平较RP组和DBS组下调更明显(P<0.05)。结论痰瘀同治可能通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路激活,延缓糖尿病肾病纤维化,发挥肾脏保护作用。

青黛对炎症性肠病TGF-β1/Smad3信号通路相关分子表达的临床研究

目的:探讨青黛对炎症性肠病转化生长因子β1/信号传导蛋白3(TGF-β1/Smad 3)信号通路相关分子表达的临床效果。方法:选取2021年1月—2023年1月在景德镇市第二人民医院被确诊为溃疡性结肠炎或克罗恩病的患者共80例,根据随机抽签方式对其进行分组,包括观察组和对照组,两组各40例,对照组采取常规治疗,观察组则在此基础上采取青黛口服治疗,连续治疗2个月。比较两组临床疗效、TGF-β1/Smad 3表达、免疫功能及不良反应。结果:观察组治疗总有效率为90.00%,明显高于对照组的60.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组TGF-β1/Smad 3表达差异无统计学意义(P>0.05);治疗后两组TGF-β1/Smad 3 protein及mRNA表达均高于治疗前,且观察组均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组CD3^(+)、CD4^(+)水平均高于治疗前,CD8^(+)水平均低于治疗前,且观察组CD3^(+)、CD4^(+)水平均高于对照组,CD8^(+)水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组和对照组治疗不良反应总发生率分别为10.00%、20.00%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:青黛可通过修复炎症性肠病患者TGF-β1/Smad 3信号通路,改善临床疗效,具有较高临床价值。

水飞蓟宾对硫代乙酰胺诱导的肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad3信号通路的调节作用

目的探讨水飞蓟宾对硫代乙酰胺(TAA)诱导的肝纤维化大鼠肝组织的保护作用及对TGF-β1/Smad3信号通路的调节作用。方法45只大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组及水飞蓟宾组,每组15只。除对照组外,其余大鼠使用硫代乙酰胺建立肝纤维化大鼠模型,水飞蓟宾组大鼠按照75.6 mg/kg的剂量给予水飞蓟宾灌胃,对照组及模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃,1次/d,给药6周。全自动生化分析仪检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)及Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)水平,苏木精-伊红(HE)染色法检测各组大鼠肝组织病理学变化,免疫印迹(Western blot)检测大鼠肝组织TGF-β1、Smad3水平。结果与对照组比较,模型组肝纤维化大鼠血清ALT、AST、ALP、GGT、HA、LN、PCⅢ、ColⅣ水平及肝组织TGF-β1、Smad3水平显著升高(均P<0.05),肝组织发生明显病理学变化;与模型组比较,水飞蓟宾组大鼠血清ALT、AST、ALP、GGT、HA、LN、PCⅢ、ColⅣ水平及肝组织TGF-β1、Smad3水平显著降低(均P<0.05),肝组织病理学明显改善。结论水飞蓟宾能够明显改善硫代乙酰胺诱导的肝纤维化大鼠肝功能,抑制肝纤维化因子水平,改善大鼠肝组织病理学进展,其机制可能与调节TGF-β1/Smad3信号通路有关。

基于TGF-β1/Smad3信号通路观察rb-bFGF在糖尿病大鼠烧伤创面愈合中的作用机制

目的基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨重组牛碱性成纤维细胞生长因子(rb-bFGF)在糖尿病(DM)烧伤创面愈合中的作用机制。方法2018年年3月—9月于成都医学院第一附属医院科研实验中心进行实验,SD大鼠100只随机数字表法分为对照组、模型组、TGF-β1组、实验组,各25只,除对照组外其余大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病模型,建模后第10天采用直径为2.5 cm的圆形烫伤仪探头烫伤所有大鼠皮肤。伤后对照组、模型组不进行药物干预;TGF-β1组烫伤创面下注射5 ng/ml TGF-β10.5 ml;实验组涂抹rb-bFGF。观察各组伤后体征和愈合情况,并在28天后处死动物;分别采用HE染色、电镜、免疫荧光、Western-blot法观察和检测创面组织的形态变化、超微结构、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1、Smad3蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠创面愈合率、α-SMA、TGF-β1和Smad3蛋白的表达明显降低(t/P=19.697/0.000、8.643/0.000、4.632/0.002、9.493/0.002);与模型组比较,TGF-β1组、实验组大鼠创面愈合率、α-SMA、TGF-β1和Smad3蛋白表达升高(F/P=12.397/0.000、15.392/0.000、16.283/0.000、28.832/0.000),TGF-β1组、实验组比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色及电镜结果表明,与对照组比较,模型组大鼠炎性细胞明显增多,未见毛细血管新生;与模型组比较,TGF-β1组、实验组均出现成纤维细胞致密分布,新生毛细血管少量出现。结论rb-bFGF具有促进糖尿病烧伤创面愈合的作用,其机制可能是rb-bFGF激活TGF-β1/Smad3信号通路,致使其下游基因蛋白表达提高。

全反式维甲酸对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏TGF-β1/Smad3信号通路的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏组织TGF-β1/Smad3信号通路的影响。方法:雄性Wistar大鼠72只随机分成3组:假手术组、UUO组、ATRA干预组,每组均为24只。UUO组和ATRA组大鼠腹腔注射麻醉后,行左侧输尿管结扎术。在同样的条件下,假手术组只探及肾包膜。ATRA组自手术前一天起,每天给予ATRA(15mg/kg)溶液灌胃一次直至处死当天,假手术组和UUO组大鼠在相同条件下给予等容量生理盐水灌胃,各组大鼠于术后第21天处死,取其左侧肾脏。肾脏组织HE及Masson染色观察病理改变,计算肾间质纤维化(RIF)指数。免疫印迹(Western blot)和实时荧光定量逆转录—聚合酶链反应法(RT-PCR)检测肾脏组织Smad3的蛋白及其mRNA表达。免疫组织化学法检测肾脏组织TGF-β1、Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)和纤维连接蛋白(FN)的蛋白表达。结果:与UUO组比较,ATRA组大鼠肾脏组织RIF指数、TGF-β1、Col-Ⅳ和FN蛋白表达均明显降低(P<0.05),而肾脏组织Smad3的蛋白及其mRNA表达无明显差异(P>0.05)。结论:ATRA可能通过下调UUO大鼠肾脏组织TGF-β1的表达,从而减少ECM积聚而起到减轻RIF的作用;但ATRA对TGF-β1/Smad3信号通路的下游蛋白Smad3的表达无明显影响。

AACO方调控TGF-β1/Smad3信号通路保护慢性心力衰竭小鼠心肌纤维化的作用机制研究

目的基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨AACO方防治慢性心力衰竭(CHF)心肌纤维化的可能作用机制。方法将40只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、AACO方组和卡维地洛组,每组10只。采用主动脉弓缩窄术建立CHF小鼠模型,分别予相应药物灌胃,假手术组和模型组予等量双蒸水灌胃,连续8周。超声心动图检测小鼠心脏功能;HE染色观察心脏病理变化;Masson染色和苦味酸天狼猩红染色检测心脏组织胶原容积分数(CVF)和纤维化程度;免疫荧光染色检测心脏组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达;RT-qPCR检测心尖组织ColⅠ、ColⅢmRNA表达;Western blot检测心尖组织α-SMA、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、p-Smad3蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组小鼠左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(FS)显著减少,左室舒张末期内径(LVIDd)显著增加(P<0.01),心肌细胞排列紊乱,心肌间质疏松,心脏组织CVF、纤维化面积比显著增加(P<0.01),心尖组织ColⅠ、ColⅢmRNA及TGF-β1、p-Smad3、α-SMA、ColⅠ蛋白表达均显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,AACO方组小鼠LVEF、FS显著增加,LVIDd显著减少(P<0.01),心肌细胞排列较为规则,心脏组织CVF、纤维化面积比显著减少(P<0.05,P<0.01),心尖组织ColⅠ、ColⅢmRNA及TGF-β1、p-Smad3、α-SMA、ColⅠ蛋白表达均显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论AACO方可显著抑制CHF模型小鼠心肌纤维化,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad3信号通路有关。

白藜芦醇抑制TGF-β1/Smad3信号通路对人肺上皮细胞A549 EMT调控的影响及机制

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对TGF-β1诱导的人肺上皮细胞(A549细胞株)上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的抑制作用及其机制。方法本实验设立对照组、转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)组(TGF-β1组)、TGF-β1+Res组(TGF-β1+Res组)。甲基偶氮唑盐比色法(MTT)确定白藜芦醇的干预浓度;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定不同组细胞蛋白的表达变化;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测钙黏蛋白E(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)mRNA的表达。结果 TGF-β1刺激后,与对照组相比,A549细胞的增殖能力明显增强;总的Smad3蛋白(t-Smad3)表达无变化,但磷酸化的Smad3蛋白(p-Smad3)表达增多;上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达减少(P<0.05),间质细胞标志蛋白α-SMA表达明显增多(P<0.05);白藜芦醇干预后,t-Smad3蛋白表达几乎无变化,p-Smad3蛋白表达减少;E-cadherin蛋白表达增加(P<0.05),α-SMA蛋白表达减少(P<0.05);RT-qPCR的检测结果与Western blot结果一致。结论白藜芦醇通过阻断TGF-β1/Smad3信号通路转导,抑制了TGF-β1诱导的人肺上皮细胞A549的增殖及上皮间质转化。

电针干预经TGF-β1/Smad3信号通路对失神经肌萎缩大鼠肌卫星细胞分化的影响

目的:观察电针干预对失神经肌萎缩大鼠腓肠肌中转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad3信号通路以及与肌卫星细胞分化密切相关的成肌分化抗原(Myod1)、组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)、微小RNA206(Mir-206)表达的影响,探讨电针延缓失神经肌萎缩发展的可能机制。方法:将24只雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=8)、模型组(n=8)和电针组(n=8)。通过横断坐骨神经制备大鼠右后肢失神经肌萎缩模型。造模后对电针组大鼠术侧足三里、环跳穴进行电针干预,每次10 min,每日1次,每周6次,连续4周;假手术组和模型组大鼠不予电针干预。电针干预结束后计算各组大鼠的腓肠肌湿重比、HE染色测定腓肠肌纤维横截面积,实时荧光定量PCR法检测各组大鼠腓肠肌中肌卫星细胞分化相关因子mRNA的相对表达量。结果:4周后,模型组大鼠腓肠肌湿重比、肌纤维横截面积以及术侧腓肠肌中Smad7 mRNA相对表达量均低于假手术组和电针组,差异有统计学意义(P<0.05);模型组术侧腓肠肌中HDAC4、TGF-β1、转化生长因子β受体1(TGF-βr1)、TGF-βr2、Smad3 mRNA相对表达量均高于假手术组和电针组,差异有统计学意义(P<0.05);模型组术侧腓肠肌中Myod1、Mir-206 mRNA相对表达量高于假手术组,但低于电针组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:电针干预可能通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路,下调HDAC4mRNA的表达,并上调Myod1、Mir-206 mRNA的表达促进肌卫星细胞的分化,从而延缓大鼠腓肠肌失神经肌萎缩的发展。

基于TGF-β1/Smad3信号通路观察促血小板生成素对阿霉素致心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨促血小板生成素(TPO)对阿霉素致心力衰竭(CHF)大鼠抗心肌细胞凋亡的作用以及其对TGF-β1/Smad3信号的调控机制。方法将大鼠随机分为对照组、模型组、治疗组、抑制剂组;模型组、治疗组、抑制剂组采用腹腔注射阿霉素构建心衰模型,治疗组每日腹腔注射5μg/kg TPO;抑制剂组每日腹腔注射1. 2 mg/kg SB431542、TUNEL染色、免疫荧光、Western blot检测大鼠心肌细胞的凋亡、Caspase-3、TGF-β1及p-Smad3的表达水平。结果与对照组相比,模型组心肌细胞凋亡率、TGF-β1、p-Smad3、Caspase-3的表达明显升高,与模型组相比,治疗组、抑制剂组心肌细胞凋亡率、TGF-β1、p-Smad3、Caspase-3的表达明显降低,差异均具有统计学意义(P<0. 05)。结论 TPO能够降低由阿霉素导致CHF大鼠的心肌细胞凋亡率,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad3信号有关。

紫草素调节TGF-β1/Smad3信号通路抑制EMT诱导膀胱癌转移的机制研究

目的分析紫草素调节转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad3信号通路抑制上皮间质转化(EMT)诱导膀胱癌转移机制。方法选择对数生长期BIU-87细胞,分别使用浓度为0、0.5、1.0、2.0 mg/mL紫草素干预;检测细胞活力、细胞形态学、细胞迁移及侵袭能力;检测细胞TGF-β、Smad3、p-Smad3、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白水平。结果随着紫草素给药浓度(0、0.5、1.0、2.0 mg/mL)干预后,24、48 h时各组细胞活力存明显差异,随浓度升高细胞活力越低,差异有统计学意义(P<0.05)。随着干预药物浓度(0、0.5、1.0、2.0 mg/mL)增加,BIU-87细胞密度呈明显降低效应,且细胞生长的抑制作用呈明显的剂量依赖性。随着紫草素给药浓度(0、0.5、1.0、2.0 mg/mL)增加,BIU-87细胞迁移率及细胞侵袭率均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。随着紫草素给药浓度(0、0.5、1.0、2.0 mg/mL)增加,BIU-87细胞中N-cadherin、Vimentin、TGF-β、p-Smad3水平均明显降低,E-cadherin水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论紫草素可有效抑制BIU-87细胞的增殖、迁徙和侵袭活性,通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路活化抑制EMT的发生,其可能是紫草素起到治疗膀胱癌的作用机制。

基于TGF-β1/SMAD3信号通路探讨“易层”贴敷对膝骨关节炎模型大鼠滑膜纤维化的干预机制

目的:观察“易层”贴敷对膝骨关节炎(KOA)模型大鼠滑膜纤维化的干预作用及其对转化生长因子β1(TGF-β1)/细胞信号转导分子3(SMAD3)信号通路的影响,探索其对KOA的治疗机制。方法:将27只大鼠随机分为空白组、模型组和易层组,每组9只,模型组和易层组大鼠双膝采用前交叉韧带横断术(ACLT)制作KOA模型。造模成功后第14天开始,易层组采用“易层”贴敷疗法,即先后予复方三黄油膏、三色散敷药敷膝关节,每日贴敷8 h,连续贴敷28 d;模型组造模成功后不做干预。于易层组干预完成后,同期处死各组大鼠,取膝关节滑膜组织,备测。取每组3只大鼠的膝关节滑膜组织,固定、包埋、切片,分别行苏木精-伊红(HE)染色和天狼星红染色观察纤维化情况。免疫组化法观察每组3只大鼠膝关节滑膜组织TGF-β1、SMAD3、磷酸化-SMAD3(p-SMAD3)等TGF-β1/SMAD3信号通路相关指标表达。蛋白免疫印迹(Western blot)法和实时荧光定量PCR(q PCR)法分别检测每组3只大鼠膝关节滑膜组织Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、肌动蛋白α(α-SMA)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP1)、TGF-β1、SMAD3、高迁移率族蛋白1(HMGB1)的相对蛋白和基因表达量。结果:HE染色和天狼星红染色后病理图片显示,与空白组比较,模型组大鼠膝关节滑膜组织纤维化程度和炎性细胞浸润程度明显加重,易层组较模型组滑膜组织纤维化程度、炎性细胞浸润程度减轻。免疫组化法结果显示,与空白组比较,模型组大鼠膝关节滑膜组织TGF-β1、SMAD3、p-SMAD3表达明显增多,阳性着色(褐色)密集;易层组大鼠膝关节滑膜组织上述指标表达明显降低,阳性着色稀疏。Western blot法和q PCR法检测结果显示,模型组大鼠膝关节滑膜组织中TGF-β1/SMAD3信号通路的关键指标HMGB1、TGF-β1、SMAD3蛋白和基因相对表达明显高于空白组(P<0.05),易层组上述指标的表达则显著低于模型组(P<0.05);模型组大鼠膝关节滑膜组织中促纤维化相关因子TIMP1、Collagen I、α-SMA蛋白和基因相对表达明显高于空白组(P<0.05),易层组上述指标表达显著低于模型组(P<0.05)。结论:“易层”贴敷可能通过抑制TGF-β1/SMAD3信号通路活化从而改善滑膜纤维化,延缓KOA进展。