白当归素通过调节TGF-β1/Smad3通路改善特发性肺纤维化的作用机制研究

为了研究白当归素(byakangelicin,BYAK)对转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的成纤维细胞激活和博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF),并初步探讨其作用机制.在细胞实验中,通过TGF-β1诱导肺成纤维细胞激活模型;在动物实验中,通过苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H&E)和羟脯氨酸含量检测评价肺纤维化程度;免疫印迹技术(western blot,WB)检测肺纤维化相关蛋白α-SMA(alpha-smooth muscle actin)、细胞外基质生成蛋白CoL1A1(collagen type I)、Smad3、p-Smad3的表达.结果表明:与正常组相比,TGF-β1组α-SMA蛋白升高,CoL1A1显著发生上调,博来霉素诱导的小鼠肺组织结构遭到破坏;与模型组相比,白当归素可以剂量依赖地抑制TGF-β1诱导的α-SMA和CoL1A1的蛋白表达,同时显著改善博来霉素诱导的小鼠肺纤维化进程;进一步研究发现,白当归素通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路,明显改善了博来霉素诱导的小鼠肺纤维化进程.白当归素可能是通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路抑制成纤维细胞活化和减少细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的生成,从而对特发性肺纤维化的预防和治疗具有潜在作用.

加味补阳还五汤对术后腹腔粘连TGF-β1/Smad3通路和腹膜间皮细胞上皮-间充质转化的影响

目的探讨加味补阳还五汤对术后腹腔粘连转化生长因子β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)/Smad3通路和腹膜间皮细胞的上皮-间充质转化的影响。方法将108只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、透明质酸钠组、加味补阳还五汤组。模型组、透明质酸钠组及加味补阳还五汤组进行术后腹腔粘连模型造模,透明质酸钠为阳性对照组,在手术造模后,一次性腹腔喷洒1%的透明质酸钠凝胶,0.5mL/kg。加味补阳还五汤组术后第2天开始灌胃,灌胃剂量为19.5g/(kg·d)。分别于术后7、14、28d分批将动物处死,每次每组处死9只大鼠。在损伤部位取材:应用免疫组织化学法观察粘连部位的纤维化通路相关蛋白TGF-β1、Smad3、Smad7的表达情况;以及其下游胶原沉积相关蛋白Ⅰ型胶原(CollagenⅠ,Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ,Col-Ⅲ)的表达情况和上皮-间充质转化(Epithelialmesenchy-maltransition,EMT)相关的蛋白E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smoothmuscleactin,α-SMA)的表达情况。结果①不同组别间,术后7、14、28d3个时间节点,TGF-β1/Smad3纤维化通路相关蛋白表达情况:与正常组比较,模型组TGF-β1蛋白表达增多(均为P<0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组TGF-β1蛋白表达减少(均为P<0.05)。与正常组比较,模型组Smad3蛋白表达增多(均为P<0.05);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组Smad3蛋白表达减少(P<0.05)。与正常组比较,模型组Smad7蛋白表达减少(均为P<0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组Smad7蛋白表达增多(均为P<0.05)。②胶原沉积情况:术后7、14、28d3个时间节点,Col-Ⅰ蛋白表达存在差异:与正常组比较,模型组Col-Ⅰ蛋白表达增多(均P<0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组Col-Ⅰ蛋白表达减少(均P<0.01)。与正常组比较,模型组Col-Ⅲ蛋白表达增多(均P<0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组Col-Ⅲ蛋白表达减少(均P<0.01)。③EMT相关指标表达情况:不同组别间,术后7、14、28d3个时间节点,E-Cadherin蛋白表达存在差异:与正常组比较,模型组E-Cadherin蛋白表达减少(均P<0.05);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组E-Cadherin蛋白表达增多(均P<0.05)。与正常组比较,模型组α-SMA蛋白表达增多(均P<0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组α-SMA蛋白表达减少(均P<0.05)。结论加味补阳还五汤防治术后腹腔的机制可能是通过抑制TGF-β1/Smad3通路相关蛋白TGF-β1、Smad3蛋白、促进Smad7蛋白的表达抑制纤维化;促进E-Cadherin蛋白、减少α-SMA蛋白表达,减轻腹膜间皮细胞的EMT,抑制Col-Ⅰ、Col-Ⅲ的表达减少细胞外基质的沉积,从而减轻腹膜粘连。

基于TGF-β1/Smad3通路的仿生物电刺激联合补肾化瘀方治疗宫腔粘连的机制研究

本研究旨在探讨仿生物电刺激联合补肾化瘀方治疗宫腔粘连的机制,特别是基于TGF-β1/Smad3信号通路对子宫内膜纤维化的影响。方法 随机选取120例中、重度宫腔粘连患者,随机分为对照组、电刺激组、中药组、联合治疗组,通过比较治疗前后子宫内膜厚度、子宫动脉血流指数、3U-PDA参数,结合胶原染色和蛋白免疫印迹法检测子宫内膜组织胶原纤维沉积程度及TGF-β1、Smad3蛋白表达量的变化,评估疗效。结果 初步数据显示,经过治疗,患者的子宫内膜组织出现厚度增加,血管指数、血流指数改善,并且TGF-β1、Smad3蛋白表达量有所下降,提示治疗可能通过影响TGF-β1/Smad3通路抑制子宫内膜的纤维化。结论 仿生物电刺激联合补肾化瘀方能够有效治疗中重度宫腔粘连,其机制可能涉及对TGF-β1/Smad3通路的调节,这一发现为宫腔粘连的防治提供了新的策略和理论支持。

miR-590-5p靶向TGF-β1/Smad3通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭的研究

目的探讨miR-590-5p通过TGF-β1/Smad3通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭的作用。方法获取瘢痕疙瘩成纤维细胞进行培养采用随机数字表法分组,分为空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组、miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组,其中空白对照组不进行转染,空载体转染组转染空载体、miR-590-5p mimic组转染miR-590-5p mimic、miR-590-5p inhibitor组转染miR-590-5p inhibitor、miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组转染miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1。采用CCK-8试验检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell试验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测TGF-β1、Smad3蛋白表达。结果miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞培养24、48和72 h时细胞增殖活力明显低于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞凋亡率明显高于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞侵袭数明显低于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞TGF-β1、Smad3蛋白相对表达量明显低于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制miR-590-5p表达,可促进瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭以及抑制细胞凋亡,可能与通过TGF-β1/Smad3通路调控有关。

吡菲尼酮对UUO大鼠肾纤维化组织中TGF-β1/smad3通路表达的影响

目的:探讨吡菲尼酮对UUO大鼠肾组织中TGF-β1/smad3通路表达的影响及作用。方法:将72只Wistar雄性大鼠随机分为3组:sham组、UUO组以0.9%NaCl 2mL灌胃,治疗组给予吡菲尼酮500mg/kg溶解后灌胃,各组大鼠于术后第3,7,14天分别处死8只。结果:与Sham组相比,UUO模型组肾小管间质损伤和纤维化程度明显,TGF-β1及smad3明显表达增多;且随着梗阻时间延长,UUO模型组大鼠的TGF-β1及smad3表达逐渐增加。与模型组比较治疗组大鼠肾间质组织中TGF-β1及smad3的表达水平显著降低。结论:吡菲尼酮能够通过抑制TGF-β1/smad3信号通路产生延缓肾间质纤维化的作用,可能为肾间质纤维化的临床治疗提供新的论证。

高糖刺激的巨噬细胞源外泌体对小鼠肾组织中TGF-β1/Smad3通路的影响作用

目的探讨高糖刺激的巨噬细胞源外泌体对C57小鼠肾组织中TGF-β1/Smad3通路的影响作用。方法动物分组为NG-Exo组(正常糖刺激的巨噬细胞外泌体组),MC-Exo组(甘露醇刺激的巨噬细胞外泌体组),HG-Exo组(高糖刺激的巨噬细胞外泌体组)。将不同糖刺激下巨噬细胞分泌的外泌体通过尾静脉注射到雄性SPF级C57BL/6小鼠体内,并于8周后收集尿液及肾脏标本,通过尿白蛋白试剂盒检测尿蛋白排泄率,HE染色和PAS染色观察肾小球系膜细胞增生和基质扩张程度,并计算系膜扩张指数。免疫组化检测小鼠肾脏内巨噬细胞CD68浸润及细胞外基质Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)与纤连蛋白(FN)的表达,Western blot检测肾组织中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和细胞外基质α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Col-Ⅳ、FN以及TGF-β1/Smad3通路蛋白表达变化。结果 HE染色和PAS染色显示HG-Exo组小鼠肾组织系膜增殖程度增高,系膜扩张评分明显高于NG-Exo组和MC-Exo组;免疫组化显示HG-Exo组小鼠肾组织中巨噬细胞CD68及细胞外基质Col-Ⅳ与FN表达高于NG-Exo组和MC-Exo组。Western blot显示HG-Exo组小鼠肾组织中炎性因子TNF-α、pro-IL-1β、IL-1β与细胞外基质α-SMA、Col-Ⅳ、FN表达均高于NG-Exo组和MC-Exo组;且TGF-β1/Smad3通路相关蛋白表达增加。结论高糖刺激的巨噬细胞源外泌体可以引起小鼠肾组织中炎症及系膜细胞和基质的增加,其机制可能与TGF-β1/Smad3信号通路激活有关。

糖肾方抑制TGF-β1/Smad3通路促进小鼠肾小管上皮细胞胆固醇流出

目的:利用高糖诱导的小鼠肾小管上皮细胞(mouse tubular epithelial cells,mTECs)观察中药糖肾方颗粒及Smad3抑制剂SIS3对于TGF-β1/Smad3通路及细胞胆固醇流出通路的影响。方法:25 mmol/L高糖诱导mTECs细胞后,分别给予糖肾方及Smad3抑制剂SIS3干预,利用ELISA试剂盒检测细胞中脂质含量,利用Western blot和Real-time PCR检测细胞中TGF-β1/Smad3通路及过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator 1α,PGC-1α)、肝脏X受体(liver X receptor,LXR)、ATP-结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、ATP-结合盒转运蛋白G1(ABCG1)的表达。结果:糖肾方可以降低高糖诱导mTECs细胞中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酸酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)含量,上调高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)含量(P<0.05);糖肾方及Smad3抑制剂SIS3可下调高糖诱导mTECs细胞中TGF-β1、Smad3、CollagenⅠ和Fibronectin的表达,上调PGC-1α、LXR、ABCA1、ABCG1的表达(P<0.05)。结论:糖肾方可通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路促进细胞胆固醇流出,减轻肾损害。

基于TGF-β1/Smad3通路和AGEs/RAGE分子研究丹蛭降糖胶囊干预糖尿病大鼠心肌纤维化的作用

目的从转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad3信号通路和晚期糖基化终末产物(AGEs)/AGEs受体(RAGE)分子水平研究丹蛭降糖胶囊干预糖尿病大鼠心肌纤维化的作用及其机制。方法采用高糖高脂饮食联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)方法建立2型糖尿病大鼠模型,饲养6周后将造模成功30只大鼠随机分为二甲双胍组、丹蛭降糖组、模型组各10只,另取10只健康大鼠作为空白组。二甲双胍组给予二甲双胍150 mg/kg灌胃,丹蛭降糖组给予丹蛭降糖胶囊540 mg/kg灌胃,模型组和空白组给予等容量蒸馏水灌胃。连续灌胃8周后,麻醉状态下取材。采用HE染色法观察心肌组织病理学变化;用ELISA法检测左心室AGEs、结缔组织生长因子(CTGF)和RAGE的表达水平;Western blot法和实时荧光定量PCR法检测心肌组织中TGF-β1及其信号蛋白Smad3蛋白和基因表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠光镜下心肌纤维走行较为紊乱,部分溶解、断裂,胞核位置不一,细胞间界限不清,间质出现纤维细胞增生。与模型组比较,二甲双胍组和丹蛭降糖组光镜下心肌细胞的病变明显减轻,左心室AGEs、RAGE、CTGF表达水平及TGF-β1、Smad3、p-Smad3蛋白和基因表达水平均明显降低(P均<0.05),且丹蛭降糖组各指标水平均明显低于二甲双胍组(P均<0.05)。结论丹蛭降糖胶囊可能通过抑制心肌TGF-β1/Smad3信号通路和AGEs/RAGE分子表达,延缓糖尿病大鼠心肌纤维化,发挥心肌保护作用。

EL-7013促进Sirt1调控TGF-β1/Smad3通路抑制肺纤维化

目的:对比EL-7013和吡非尼酮(pirfenidone,PFD)的抗纤维化作用及可能机制。方法:向C57BL/6小鼠气管内滴注3 mg/kg博来霉素(bleomycin,BLM)构建肺纤维化动物模型重组人TGF-β1(10 ng/mL)诱导人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblasts,HLF-1)建立肺纤维化细胞模型,分别用EL-7013和PFD干预处理,机制探讨实验用EX-527抑制Sirt1表达及活性。HE、Masson染色评估肺组织病理变化,Western blot检测肺组织中COL1A1、COL3A1、α-SMA等纤维化指标和TGF-β1、Phospho-Smad1/Smad1、Phospho-Smad3/Smad3等通路指标表达,碱水法检测肺组织羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量。CCK-8检测细胞增殖活性,免疫荧光染色、Western blot、RT-qPCR检测细胞模型中纤维化及TGF-β1/Smad通路相关指标的蛋白和mRNA表达水平。结果:EL-7013明显减轻BLM诱导的肺组织结构破坏、胶原沉积,减轻TGF-β1及Phospho-Smad3蛋白表达(tBLM-300mg/kgEL-7013=11.149,P=0.008;tBLM-300mg/kgEL-7013=16.171,P=0.004)同时明显减轻TGF-β1诱导的细胞增殖(t=6.357,P=0.024),减少COL1A1、COL3A1、α-SMA、TGF-β1、Phospho-Smat3蛋白累积(t=66.136,P=0.000;t=13.726,P=0.005;t=10.230,P=0.009;t=9.263,P=0.011;t=14.809,P=0.005)。EL-7013可改善TGF-β1刺激导致的Sirt1表达及活性下降,特异性抑制Sirt1削弱了EL-7013的抗纤维化作用及对Phospho-Smad3的抑制作用(t=-6.009,P=0.027)。结论:EL-7013通过促进Sirt1从而调控TGF-β1/Smad3信号通路来抑制肺纤维化,为肺纤维的机制、新药研究提供新思路。

上调miR-200c通过抑制TGF-β1/Smad3通路减轻单侧输尿管梗阻小鼠肾纤维化

目的观察mi R-200c在单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)小鼠肾组织中的表达变化及其对UUO小鼠肾间质纤维化和TGF-β1/Smad3通路的影响。方法 45只C57BL/6J小鼠,随机数字表法分为假UUO组、UUO组、UUO+agomi R-200c组,每组15只。假UUO组仅游离左侧输尿管但不结扎;UUO组和UUO+agomi R-200c组通过结扎左侧输尿管建立的肾纤维化模型,手术后第1、7、14d两组小鼠分别给予生理盐水和agomir-200c尾静脉注射。第21d后处死全部小鼠,取血测定血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)。取小鼠梗阻侧肾脏组织,HE染色和Masson染色评价肾小管间质损伤和肾间质纤维化损伤程度,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测肾组织mi R-200c的表达,Western blotting检测肾组织TGF-β1、Smad3及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达。结果与假UUO组比较,UUO组小鼠肾组织mi R-200c的表达水平明显降低,血清Scr、BUN水平明显升高,肾小管间质损伤病理评分升高,肾胶原容积分数(c VF)增加,肾组织中TGF-β1、Smad3及α-SMA水平明显升高。与UUO组比较,UUO+agomi R-200c组小鼠肾组织mi R-200c的表达明显增高,血清Scr、BUN水平明显降低,肾小管间质损伤病理评分下降,肾胶原容积分数减少,肾组织中TGF-β1、Smad3及α-SMA水平明显降低。结论上调mi R-200c能够通过抑制TGF-β1/Smad3通路减轻UUO小鼠肾间质纤维化。

肺ECM水凝胶抑制TGF-β1/Smad3通路减轻大鼠放射性肺纤维化

目的探索肺ECM水凝胶是否抑制TGF-β1/smad3通路,减轻放射性肺纤维化。方法20 Gy照射制备大鼠放射性肺纤维化模型,将27只大鼠随机分为3组(n=9):Control组、IR+NS组、IR+ECM组;Control组无处理,其余两组造模,在造模后0.5h,IR+NS组气管内注射0.9%氯化钠500μl,IR+ECM组注射等量肺ECM水凝胶,第16周取材,Elisa法测血清TNF-α、IL-6、TGF-β1,左肺固定后做病理染色(HE、Masson),右肺深低温保存做western blot、羟脯氨酸检测。结果与IR+NS组比,IR+ECM组大鼠血清TNF-α、IL-6、TGF-β1水平下降(P<0.05),肺系数降低(P<0.05),HE及Masson染色显示肺泡炎及纤维化程度改善,肺组织羟脯氨酸含量下降(P<0.05),TGF-β1、Smad3、p-Smad3、α-SMA蛋白表达下降(P<0.05)。结论肺ECM水凝胶能减轻大鼠放射性肺纤维化,可能是通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路实现的。

当归补血汤通过miR-27a/TGF-β1/Smad3通路抑制HK-2细胞纤维化作用及机制研究

目的 探讨当归补血汤通过miR-27a调控HK-2细胞纤维化的机制。方法 HK-2细胞分为对照组、高糖组、高糖+空白血清组、高糖+当归补血汤含药血清组。采用MTT法检测各组细胞增殖情况;采用Western blot法检测纤维化相关因子波形蛋白(Vimentin)、Ⅳ型胶原(COLⅣ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、p-Smad3/Smad3和转化生长因子(TGF)-β1蛋白的表达情况;qPCR法检测miR-27a及纤维化相关因子mRNA的表达情况;通过转染miR-27a抑制剂及Smad3-siRNA并向培养基中加入TGF-β1,观察miR-27a的表达和纤维化相关蛋白表达的情况。结果 MTT结果显示,与对照组相比,高糖组细胞增殖率明显降低(P<0.05,P<0.001),当归补血汤含药血清作用24、48 h后细胞增殖率明显提高(P<0.05,P<0.001)。Western blot结果显示,当归补血汤含药血清明显抑制高糖诱导的HK-2细胞纤维化相关蛋白COLⅣ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3/Smad3的表达(P<0.05,P<0.01)。qPCR结果显示,当归补血汤含药血清明显抑制高糖诱导的HK-2细胞COLⅣ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1 mRNA和miR-27a的表达(P<0.05,P<0.01)。TGF-β1处理细胞后,细胞纤维化加重,miR-27a的表达升高(P<0.05,P<0.01),当归补血汤含药血清可明显降低TGF-β1诱导的纤维化细胞中miR-27a的表达升高(P<0.001)。转染miR-27a抑制剂及Smad3-siRNA可明显降低TGF-β1诱导的细胞纤维化蛋白COLⅣ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3/Smad3表达的升高(P<0.05,P<0.01)。结论 当归补血汤含药血清可促进HK-2细胞增殖,并通过miR-27a/TGF-β1/Smad3信号通路调控HK-2细胞纤维化。

速效平喘合剂对脂多糖诱导的支气管上皮细胞炎症反应和TGF-β1/Smad3通路的影响

目的探讨速效平喘合剂对脂多糖刺激支气管上皮细胞NCI-H292炎症反应和TGF-β1/Smad3通路的影响。方法采用脂多糖刺激NCI-H292细胞建立炎症模型,将细胞随机分为空白组、模型组、阳性组以及速效平喘合剂低、中、高剂量组;采用MTT法检测细胞活力和增殖率,ELISA法检测细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-8(IL-8)、转化生长因子β1(TGF-β1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫组化染色法检测细胞因子TGF-β1、Smad泛素调节因子(Smurf2)、Smad3的表达情况。结果与空白组相比,模型组细胞活力下降,细胞因子IL-1β、IL-8、TGF-β1、TNF-α的分泌量和TGF-β1、Smad3的蛋白表达量均显著升高,Smurf2蛋白表达显著降低。与模型组比较,阳性组、速效平喘合剂低、中、高剂量组可显著逆转上述指标,其中后3组数据指标呈药物浓度依赖性的特点。结论速效平喘合剂能显著促进气道上皮细胞活力和增殖,其可能通过调控TGF-β1/Smad3信号转导通路,抑制炎症反应水平,发挥其对脂多糖诱导NCI-H292细胞损伤的保护作用。

姜黄素对环孢素A诱导激活的大鼠牙龈成纤维细胞TGF-β1/Smad3通路的抑制作用

目的:体外实验研究姜黄素(curcumin,Cur)对环孢素A(cyclosporine A,CsA)作用大鼠牙龈成纤维细胞TGF-β1/Smad3通路的影响,为进一步探讨Cur抑制CsA所致药物性牙龈增生的发生机制提供理论依据。方法:使用CCK-8法观察0、5、10、20、30μmol/L Cur对大鼠牙龈成纤维细胞增殖的影响,20μmol/L Cur+200 ng/mL CsA共同作用对大鼠牙龈成纤维细胞增殖的影响。实时荧光定量PCR检测20μmol/L Cur+200 ng/mL CsA共同作用下,牙龈成纤维细胞中转化生长因子TGF-β1、Smad3、平滑肌肌动蛋白α-SMA和I型胶原蛋白COL-I的mRNA表达变化;蛋白免疫印迹实验检测TGF-β1、Smad3、p-Smad3、α-SMA和COL-I的蛋白表达变化。细胞划痕实验观察20μmol/L Cur+200 ng/mL CsA对牙龈成纤维细胞迁移能力的影响。采用SPSS 23.0软件包对数据进行统计学分析。结果:大鼠牙龈成纤维细胞在20μmol/L Cur+200 ng/mL CsA共同作用下,细胞增殖和迁移能力明显降低;20μmol/L Cur显著下调了牙龈成纤维细胞中TGF-β1、α-SMA和COL-I的m RNA表达,蛋白免疫印迹实验提示,TGF-β1、p-Smad3、α-SMA和COL-I的表达同样显著下调。结论:Cur可能通过抑制CsA激活的牙龈成纤维细胞TGF-β1/Smad3信号通路,从而降低牙龈成纤维细胞增殖、迁移、平滑肌肌动蛋白和胶原分泌,改善牙龈增生。

atRA对大鼠结肠炎中TGF-β1/Smad3通路的作用研究

目的探讨全反式维甲酸(atRA)对TNBS诱导的大鼠结肠炎模型中的TGF-β1/Smad3信号通路的影响。方法大鼠随机分为5组,分别为对照组(C组),造模组(TNBS组),atRA灌胃组(A组),美沙拉嗪组(M组),美沙拉嗪+atRA组(MA组);使用TNBS/乙醇灌肠液诱导结肠炎;之后对照组、造模组予以生理盐水灌胃,其余各组分别予以相应药物灌胃,记录大鼠的疾病活动指数(DAI)、组织学评分(TDI)。QT-PCR检测结肠组织中TGF-β1 mRNA、Smad7 mRNA的水平,免疫组化测定结肠组织中Smad7蛋白及磷酸化Smad3(p Smad3)水平。ELISA法检测血清中IL-17、TNF-α水平。结果与TNBS组比较,各治疗组的DAI、TDI评分较TNBS组下降,差异有统计学意义(P<0.05),MA组下降最明显(P<0.05)。C组TGF-β1 mRNA水平降低最明显,TNBS组升高,各治疗组升高更明显,与TNBS组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,与TNBS组比较,各组Smad7 mRNA水平均下降(P<0.05);TNBS组Smad7蛋白水平最高,治疗后各组Smad7蛋白水平均明显降低(P<0.05),但A组与M组比较差异无统计学意义(P=0.586),MA组较A组或M组下降更明显(P<0.05)。TNBS组p Smad3水平明显下调,而各治疗组均升高,与TNBS组比较差异有统计学意义(P<0.01),其中MA组升高最明显(P<0.05)。各治疗组IL-17、TNF-α水平较TNBS组均明显降低,MA组降低最明显(P<0.05)。结论炎症性肠病中存在着TGF-β1/Smad3通路受损,导致过度的免疫炎症反应。atRA可通过下调Smad7蛋白表达,增加p Smad3水平,修复该通路,恢复TGF-β1的效应,缓解症状。

游泳运动通过TGF-β1/Smad3通路改善自发性高血压大鼠心肌间质纤维化研究

目的:观察游泳运动对自发性高血压大鼠心肌间质形态学及TGF-β1/Smad3信号通路的影响。方法:选取8只SPF级雄性WKY大鼠为正常对照组(C组); 20只SPF级自发性高血压大鼠随机分为模型组(H组)和SHR+运动组(EH组),每组均10只,各组大鼠给予普通饲料喂养。运动组大鼠进行为期12周不负重游泳训练,每周训练6天,休息1天。第1周为适应性训练,从第2周开始维持60 min/d的运动时间至12周结束。干预周期结束后检测检测各组大鼠CVF%、col I和col III; QRT-PCR检测心肌Smad3,放免法检测Ang II,Western-blot法检测NOX2、TGF-β1、HSP90蛋白表达。结果:(1) C组比较,H组大鼠心肌CVF%、col I、col III、血浆Ang II、心肌Ang II、心肌NOX2、TGF-β1、Smad3mRNA、HSP90表达显著性增加(P <0. 05或P <0. 01);与H组比较,EH组大鼠除了心肌HSP90蛋白表达显著性增加外(P <0. 05),其余指标均显著性降低(P <0. 05或P <0. 01)。结论:游泳运动能较好降低SHR大鼠心肌col I和col III蛋白表达水平,改善心肌间质纤维化,主要通过降低Ang II介导NOX2表达,抑制下游TGF-β1/Smad3通路激活,其中HSP90作为其上游因子,在其中可能起着重要的调节作用。

维生素D治疗小鼠狼疮性肾炎的机制:基于上调miR145的表达进而抑制TGF-β1/Smad3通路

目的研究1,25(OH)_(2)D_(3)是否通过上调miR145从而抑制TGF-β1/Smad3通路,探讨其在狼疮性肾炎中的可能治疗机制。方法共42只8周龄雌性ApoE^(-/-)小鼠,分为7组,每组6只。空白对照组1、2每天予腹腔注射0.5 mL无菌0.9%生理盐水至实验结束;空白模型组1、2予腹腔注射降植烷0.5 mL/只1次后高脂饲料喂养3个月建立狼疮性肾炎小鼠模型;1,25(OH)_(2)D_(3)治疗组、miR145过表达组、miR145空载体组在空白模型组的基础上,分别予灌胃维生素D、载入miR145空载腺病毒、载入miR145过表达腺病毒。CBB法检测各组小鼠第8周尿蛋白含量,ELISA法分别检测各组小鼠外周血ANA抗体、抗dsDNA抗体,评估小鼠模型建立情况。通过RT-qPCR检测各组小鼠外周血PBMCs中miR145表达,观察1,25(OH)_(2)D_(3)处理后miR145表达情况。通过Western blot检测各组小鼠外周血PBMCs及肾脏中TGF-β1、Smad3、p-smad3表达,观察上调1,25(OH)_(2)D_(3)、miR145过表达对TGF-β1/Smad3通路的影响。对空白对照组1、空白模型组1、miR145过表达组、miR145空载体组小鼠肾脏进行病理检测,比较miR145过表达后肾脏病理变化。结果miR145对小鼠狼疮性肾炎的作用实验组:miR145过表达组中小鼠肾脏损害减轻;外周血PBMCs中miR145表达水平显著高于miR145空载体组(P<0.01),TGF-β1、Smad3、p-smad3表达均显著低于miR145空载体组(均P<0.01),肾脏中TGF-β1、Smad3、p-smad3表达均显著低于miR145空载体组(均P<0.01)。1,25(OH)_(2)D_(3)对小鼠狼疮性肾炎的治疗作用实验组:第24周,1,25(OH)_(2)D_(3)治疗组尿蛋白量明显低于空白模型组(P<0.01);1,25(OH)_(2)D_(3)治疗组小鼠血清1,25(OH)_(2)D_(3)浓度明显高于空白模型组(P<0.01),外周血PBMCs中miR145表达水平显著高于空白模型组(P<0.01),而TGF-β1、Smad3、p-smad3表达明显低于空白模型组(均P<0.01)。结论1,25(OH)_(2)D_(3)通过上调miR145表达,从而负性调节TGF-β1/Smad3通路,减轻小鼠狼疮性肾炎肾脏损害。miR145可能是治疗狼疮性肾炎的新靶点。

金雀异黄素通过调控TGF-β1/Smad3信号通路对2型糖尿病大鼠心肌纤维化的影响

目的 探讨金雀异黄素减轻糖尿病大鼠心肌纤维化的作用及潜在机制。方法 通过高脂饮食结合腹腔注射链脲菌素(STZ)法建立大鼠2型糖尿病(T2DM)模型,并随机分为模型组、二甲双胍组(100 mg/kg)及金雀异黄素低、高剂量组(50、100 mg/kg),另设正常组给予常规饮食,每组10只。各给药组灌胃给药8周,检测体质量、心功能、心脏质量及心脏指数,血清CK-MB、AST及LDH活性,观察心肌纤维化程度,心肌组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad同源物3(Smad3)mRNA和蛋白表达,心肌组织Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)和Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)蛋白分布及表达。结果 与模型组比较,金雀异黄素各剂量组大鼠体质量、每搏输出量(SV)及射血分数(EF)升高(P<0.01),心脏指数、左心室收缩末期内径(LVIDs)、血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织胶原相对面积及CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织TGF-β1、Smad3 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),金雀异黄素高剂量组左心室舒张末期内径(LVIDd)降低(P<0.05)。结论 金雀异黄素可通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路,减轻2型糖尿病大鼠心肌纤维化作用,进而发挥保护心脏效应。

METTL3调控miR-126介导TGF-β/Smad信号通路影响糖尿病肾病的机制研究

目的:建立糖尿病肾病(Diabetes Kidney Disease,DKD)大鼠模型,探讨METTL3调控糖尿病肾病的作用机制。方法:将SD大鼠适应性喂养7d后,按照随机数字法分为4组,正常对照组(Control组)、糖尿病肾病模型组(DKD组)、糖尿病肾病模型+METTL3干扰对照组(DKD+NC组)和糖尿病肾病模型+METTL3干扰组(DKD+siMETTL3组),每组8只。造模结束后收集大鼠血液标本及肾脏组织,采用全自动生化分析仪分析空腹血糖(Fasting blood glucose,FBG)、尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、24h尿蛋白(Uridine triphosphate,UTP)的表达水平,RT-qPCR法检测miR-126的基因表达,ELISA检测TGF-β1的表达,Western blotting检测METTL3、smad2、smad3、smad7的蛋白水平。结果:与Control组相比,DKD组的FBG、BUN、UTP、TGF-β1、METTL3、smad2、smad3显著升高(P<0.05),体质量、miR-126、smad7显著降低(P<0.05);与DKD组比较,DKD+siMETTL3组的FBG、BUN、UTP、TGF-β1、METTL3、smad2、smad3显著降低(P<0.05),体质量、miR-126、smad7显著升高(P<0.05)。结论:METTL3可以通过调控miR-126及TGF-β/smad通路,介导DKD的进展。

硫辛酸联合踝泵运动治疗糖尿病足的疗效及TGF-β1/Smad3信号通路的调控作用

近年来,糖尿病患病人数呈现快速增加的趋势。糖尿病足是糖尿病患者的严重并发症之一,严重影响患者的生存质量[1]。研究显示,国内糖尿病足发病率呈逐年上升趋势,糖尿病门诊中糖尿病足占3.67%,而截肢率已高于1%[2]。硫辛酸是糖尿病临床治疗的一线用药。