TGF-β诱导早期基因1对MG-63细胞成骨分化能力的调控作用及其机制

目的探讨TGF-β诱导早期基因1(TIEG1)在MG-63细胞成骨分化过程中的作用及可能机制。方法将表达抑制TIEG1基因的shRNA质粒用Lipofectamine2000转染到MG-63细胞中,筛选出稳定表达shRNA细胞株即MG-63/TIEG1 KD细胞。用实时定量PCR法和Western blotting法检测MG-63/TIEG1 KD细胞与正常MG-63(MG-63/WT)细胞TIEG1基因及蛋白表达,以验证TIEG1的敲减效果。用成骨分化培养液诱导MG-63/WT及MG-63/TIEG1 KD细胞分化4周,检测两种细胞碱性磷酸酶(ALP)分泌活性及形成的矿化结节,比较二者分化矿化能力的差异。之后将两种细胞用成骨分化培养液培养7 d后收集细胞,实时定量PCR法、Western blotting法检测成骨分化标志物Runx2及Wnt信号通路下游核心分子β-catenin表达;免疫荧光观察β-catenin蛋白表达情况及细胞定位。结果建立了稳定TIEG1敲减的细胞株MG-63/TIEG1 KD,其TIEG1 mRNA和蛋白表达量低于MG-63/WT细胞(P均<0.05)。诱导分化后,MG-63/TIEG1 KD的ALP分泌活性及矿化结节形成能力均低于MG-63/WT细胞(P均<0.05),其Runx2、β-catenin的mRNA及蛋白表达量均低于MG-63/WT细胞(P均<0.05)。结论TIEG1通过调节Wnt/β-catenin信号通路促进MG-63成骨分化及矿化形成能力。

鹿茸干预去卵巢骨质疏松症模型大鼠的实验评价

目的依据中医学“肾藏精生髓主骨”理论、骨的生长发育与肾精-脑髓-骨髓密切相关,研究鹿茸对去卵巢骨质疏松大鼠下丘脑-肾-骨的调节机制。方法采用去卵巢造模方法建立骨质疏松症大鼠模型,随机分为正常组、模型组、仙灵骨葆组、补佳乐组、鹿茸组;连续给药12周后;以双能X线骨密度分析仪进行骨密度(BMD)检测,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠股骨、肾、下丘脑组织转化生长因子β1(TGF-β1)、TGF-β1诱导早期应答基因1(TIEG1)活性。结果连续给药12周后,与正常对照组比较,模型组大鼠骨密度显著降低(P<0.05),与模型组比较,鹿茸可明显提高大鼠骨密度;与正常组比较,模型组大鼠骨、肾、下丘脑TGF-β1、TIEG1活性显著降低(P<0.05),与模型组比较,各给药组骨、肾、下丘脑组织中TGF-β1、TIEG1活性显著升高(P<0.05)。结论骨质疏松症病理机制之一是TGF-β1与TIEG1活性异常,鹿茸对下丘脑-肾-骨反馈机制具有明显的调控作用。