基于TGF-β_(1)/Smads信号通路探讨大蒜素对2型糖尿病大鼠肾纤维化的影响

目的:探讨大蒜素对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠肾纤维化和TGF-β_(1)/Smads信号通路的影响以及大蒜素对T2DM所致肾纤维化的作用机制。方法:将50只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和大蒜素低剂量组(5 mg/kg)、大蒜素中剂量组(10 mg/kg)、大蒜素高剂量组(20 mg/kg),每组10只。正常对照组大鼠常规饲养,其余各组采用高糖高脂饲料喂养加腹腔注射链尿佐菌素的方法复制T2DM大鼠模型。造模完成后,大蒜素各剂量组大鼠腹腔注射相应剂量大蒜素溶液,正常对照组及模型组腹腔注射等剂量生理盐水,每天1次,共4周。干预4周后,测定各组大鼠空腹血糖水平,称量体质量;生化分析法测定24h尿蛋白(24 hour urine protein,24h UP)、血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血清肌酐(serum creatinine,SCr)表达水平;苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)进行肾组织病理学检查;Masson染色进行肾组织纤维化检查并计算胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF);免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法检测肾组织中转化生长因子β_(1)(transforming growth factor-β_(1),TGF-β_(1))、磷酸化Smad2(phospho-Smad2,p-Smad2)、p-Smad3蛋白表达以及Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,ColⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(collagenⅢ,ColⅢ)表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠肾小球增大、系膜基质增厚、肾小管上皮细胞空泡变性、炎性细胞浸润,大鼠空腹血糖、24h UP、BUN、SCr、CVF、TGF-β_(1)、p-Smad2、p-Smad3、Col I、ColⅢ均升高,体质量下降;与模型组比较,大蒜素中、高剂量组大鼠空腹血糖水平降低、体质量升高(P<0.05),24h UP和血清BUN、SCr水平降低(P<0.01),病理学改变改善;与模型组比较,大蒜素低、中、高剂量组大鼠肾组织纤维化改善,肾组织CVF降低(P<0.01);与模型组比较,大蒜素中、高剂量组大鼠肾组织TGF-β_(1)、p-Smad2、p-Smad3、Col I、ColⅢ蛋白表达下调(P<0.01)。结论:大蒜素对T2DM大鼠肾纤维化具有抑制作用,其机制可能与大蒜素调控TGF-β_(1)/Smads信号通路进而抑制细胞外基质生成有关。

乳腺癌p21^(WAF1)表达与bcl-2、EGFR、p53和TGF-β_1的关系

探讨了 p2 1WAF1在原发性乳腺癌中的表达及其与bcl 2、EGFR、p53和TGF β1的关系。采用免疫组化S P法检测了 152例乳腺癌组织 p2 1WAF1、bcl 2、EGFR、p53和TGF β1蛋白的表达水平。结果表明 p2 1WAF1表达与EGFR(x2 =5.2 2 1,p <0 .0 5,γ =0 .19)和TGF β1(x2 =4 .354,p <0 .0 5,γ =0 .17)表达呈正相关 ,与bcl 2呈负相关 (x2 =16.4 75,p <0 .0 1,γ =- 0 .33) ,与 p53无相关(x2 =3.114,p >0 .0 5)。由此推断bcl 2、EGFR和TGF β1可能与 p2

益气固表丸含药血清对炎症肺上皮细胞TGF-β_(2)-Smad信号通路的影响

目的:通过采用益气固表含药血清对慢性阻塞性肺疾病(COPD)炎症细胞模型进行干预,以转化生长因子-β_(2)(TGF-β_(2))-Sma和Mad相关(Smad)信号通路及相关炎症介质为切入点,揭示益气固表丸调节体内炎症水平的可能作用机制。方法:以卷烟烟雾提取物(CSE)和脂多糖(LPS)为刺激因子,以肺上皮细胞A549为载体,建立COPD炎症细胞模型。用益气固表丸对大鼠进行灌胃,2次/d,间隔12 h,给药7 d后采血,制备含药血清。用益气固表丸高、中、低剂量含药血清进行培养干预,运用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光单标等检测干预前后CD4、CD8、白细胞介素-6(IL-6)、IL-17、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症介质和TGF-β_(2)-Smad信号通路重要分子变化。结果:各给药组CD4显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);各给药组CD8、IL-6、IL-17、TNF-α、TGF-β_(2)、Smad2、Smad3表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:益气固表丸含药血清对炎症肺上皮细胞的抑制作用可能与调控TGF-β_(2)-Smad信号通路有关。

温阳消癥方调控LncRNA MEG3对TGF-β_(1)诱导的肾小管上皮细胞纤维化因子的影响

目的:探讨温阳消癥方对TGF-β_(1)诱导的人近端肾小管上皮细胞LncRNA MEG3的调控作用及对纤维化因子的影响。方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK-2),分为对照组、TGF-β_(1)组、TGF-β_(1)+3.5 mg/ml温阳消癥组、TGF-β_(1)+14 mg/ml温阳消癥组,MTT法检测细胞增殖,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)及结缔组织生长因子(CTGF)mRNA及长链非编码RNA母系表达基因3(LncRNA MEG3)表达,蛋白质印迹法检测α-SMA、FN、CTGF蛋白表达。结果:3.5、7、14 mg/ml温阳消癥不影响细胞增殖,35 mg/ml组细胞增殖明显降低(P<0.01);与对照组比较,TGF-β_(1)组中α-SMA、FN、CTGF mRNA、LncRNA MEG3及FN、CTGF蛋白表达显著升高(P<0.01),α-SMA蛋白表达升高(P<0.05);与TGF-β_(1)组比较,两个温阳消癥方治疗组α-SMA、FN、CTGF mRNA、LncRNA MEG3、FN蛋白表达,及TGF-β_(1)+14 mg/ml温阳消癥组α-SMA、CTGF蛋白表达均显著降低(P<0.01),TGF-β_(1)+3.5 mg/ml温阳消癥组α-SMA、CTGF蛋白表达降低(P<0.05);与TGF-β_(1)+3.5 mg/ml温阳消癥组相比,TGF-β_(1)+14 mg/ml温阳消癥组α-SMA、CTGF mRNA及CTGF蛋白表达均显著降低(P<0.01),FN mRNA及LncRNA MEG3表达降低(P<0.05)。结论:温阳消癥方可下调LncRNA MEG3的表达,抑制TGF-β_(1)诱导的HK-2细胞纤维化,其抑制纤维化的作用可能和调控LncRNA MEG3的表达有关。

TGF-β_(2)对小梁网细胞上皮-间质转化的影响及其分子机制研究

目的探讨转化生长因子β_(2)(TGF-β_(2))高表达对小梁网细胞上皮-间质转化(EMT)的影响及作用机制。方法取小梁网细胞系分为对照组和TGF-β_(2)诱导组,分别用DMEM培养液和含不同浓度TGF-β_(2)的DMEM培养液培养,RT-qPCR和Westernblot检测EMT相关指标(α-SMA、VIM、snail)以及TGF-β/Smad信号通路相关因子Smad3、p-Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达水平;划痕实验检测TGF-β_(2)诱导后HTM细胞迁移能力。结果经TGF-β_(2)诱导后,上皮细胞标志物E-cadherinmRNA和蛋白表达水平明显降低,间质细胞标志物(α-SMA、VIM、snail)mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。经TGF-β_(2)诱导后,TGF-β/Smad信号通路相关因子p-Smad3蛋白表达水平显著升高,Smad7的mRNA显著升高,但Smad7蛋白表达水平无显著变化。划痕实验检测结果显示,TGF-β_(2)诱导后HTM细胞迁移能力显著增强。结论TGF-β_(2)可诱导HTM细胞系发生EMT改变,增强细胞迁移能力,其机制可能与激活TGF-β/Smad信号通路有关。

慢性乙型肝炎患者滤泡辅助性T细胞相关表达分子与自身抗体的表达分析

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血滤泡辅助性T细胞(Tfh)相关表达分子CXCR5、CXCL13、IL-21和TGF-β_(2)的表达水平,观察自身抗体出现的频率,分析其关联性。方法选取2018年10月~2019年3月广州中医药大学第一附属医院收治的CHB患者50例,再选取同期健康体检人员30例作为对照组,采用ELISA法检测两组受试者外周血中CXCR5、CXCL13、IL-21和TGF-β_(2)的表达水平,间接免疫荧光法检测ANA、LKM抗体、LC1抗体、ASMA和AMA等自身抗体的效价,ANA同时区分核型。结果CHB患者组CXCR5、CXCL13、IL-21和TGF-β_(2)表达明显高于健康对照组(P<0.01),自身抗体阳性率也明显高于健康对照组(P<0.05),ANA阳性荧光核型表现为核颗粒型7例,胞质颗粒型1例,胞质纤维型1例和1例混合核型(核仁型和核颗粒型),ASMA阳性率为6%,未检出AMA抗体、LC1抗体和LKM抗体。CHB患者自身抗体阳性组的CXCL13、CXCR5、TGF-β_(2)和IL-21表达与阴性组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论Tfh细胞相关表达分子CXCL13、CXCR5、TGF-β_(2)和IL-21在CHB患者中高表达,CHB患者体内存在明显自身免疫紊乱现象,但CHB患者体内自身抗体的出现与CXCL13、CXCR5、TGF-β_(2)和IL-21的关联性并不强,有待于更深入研究。