卵巢上皮性癌TGFBI基因启动子甲基化与CyclinD1蛋白表达的关系

目的:研究TGFBI基因启动子甲基化与CyclinD1蛋白表达在卵巢上皮性癌组织中关系,探讨TGFBI基因启动子甲基化在卵巢上皮性癌形成过程中的影响及意义。方法:用甲基化PCR的方法对20例正常卵巢上皮性组织(A组),20例良性卵巢上皮性肿瘤组织(B组),30例卵巢上皮性癌组织(C组)中TGFBI基因启动子甲基化进行检测,用免疫组化SP方法检测上述标本中CyclinD1蛋白的表达的情况。结果:1)C组TCFBI基因启动子甲基化频率高于B组及A组(P<0.05);2)CyclinD1蛋白在卵巢上皮组织中的表达为:C组>B组>A组,各组之间差异均有统计学意义(P<0.0167);3)卵巢上皮性癌组织中CyclinD1蛋白表达增高与TCFBI基因启动子发生甲基化有关(r=0.505,P<0.05)。结论:TGFBI基因DNA启动子发生甲基化可能上调CyclinD1蛋白的表达,刺激细胞异常增殖。该机制可能参与卵巢上皮性癌的发生发展。

格子状角膜营养不良一家系的TGFBI基因突变研究

目的对我国鄂西北地区一格子状角膜营养不良家系进行研究,探讨这一格子状角膜营养不良类型与TGFBI基因突变的关系。方法选取该家系共18例,包括第三代患者及配偶13例,第四代患者2例及无临床症状者3例。收集该家系所有研究对象外周血,提取基因组DNA,PCR扩增TGFBI基因4、11、12、14号外显子片段并进行直接测序,证实其突变位点。以家系内无近亲关系配偶5人和1名健康者为阴性对照。结果该家系基本符合常染色体显性遗传模式的特征,为LCD I/IIIA型。TGFBI基因编码区进行基因直接测序,发现10例患者和2例无症状者携带者共同突变点为H626R。结论该家系为格子状角膜营养不良LCD I/IIIA型家系,该家系角膜混浊的直接原因是TGFBI基因H626R突变。

上皮基底膜角膜营养不良家系的TGFBI基因突变1例研究

目的:检测1例中国上皮基底膜角膜营养不良家系TGFBI基因突变类型。方法:经过详细的病史采集及临床检查后,提取先证者及其家系内其他2例患者和4例有血缘关系的正常家系成员的静脉血白细胞DNA,应用PCR直接测序法对TGFBI的17个外显子进行候选基因的突变检测。结果:在该家系患者的TGFBI基因4号外显子发现了c.417C>T,导致了杂合突变R124C。家系中正常成员及对照组均未检测到该突变。结论:本研究首次报道了TGFBI基因的R124C杂合突变导致了上皮基底膜角膜营养不良,拓宽了角膜营养不良的基因型与表现型关系,为进一步的分子遗传学研究奠定了基础。

颗粒状角膜营养不良Ⅱ型家系的TGFBI基因筛查

目的对颗粒状角膜营养不良II型(GCD2)的家系进行TGFBI基因筛查,寻找患病原因。方法对GCD2家系患者TGFBI基因的所有外显子进行突变检测,以GCD2家系中的健康成员和100例无亲缘关系的正常志愿者DNA样本作为对照。结果GCD2家系所有患者TGFBI基因4号外显子的第370位碱基发生纯合或杂合的G>A突变,导致TGFBI基因编码的蛋白质的第124位氨基酸R变为H。结论错义纯合和杂合R124H突变是导致GCD2家系角膜营养不良不同临床表型的主要病因。

海南省角膜营养不良患者TGFBI基因型-表型关系的研究

目的研究海南省角膜营养不良患者TGFBI基因突变的特点及基因型-表型的关系。方法收集海南省各地市医院门诊及眼科收治的不同类型的角膜营养不良患者36例为研究组,另选择同期于医院门诊就诊的40例排除角膜营养不良的健康者为对照组,分布予以两组对象眼科临床检查和TGFBI基因突变分析。统计两组对象TGFBI基因突变发生率,归纳研究组患者TGFBI基因突变形式、突变位点,并分析TGFBI基因型-表型的关系。结果研究组患者TGFBI基因突变发生率为100%,对照组健康者为0,两组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。研究组36例患者检测出的TGFBI基因突变类型共9种,包括临床已报道的8种常规突变形式和新发现的突变形式:c.1694T>A(p.L565H),其中c.371G>A(p.R124H)突变形式的发生率最高,为66.67%(24/36),显著高于其他突变形式(P<0.05)。TGFBI基因第4号外显子突变频率最高,为80.56%(29/36),显著高于其他位点(P<0.05)。研究组患者各TGFBI基因表型对应不同的基因突变形式,ACD表型分布率最高,为66.67%(24/36);新发现的TGFBI基因突变形式的表现为LCD。结论c.1694T>A(p.L565H)为海南省角膜营养不良患者新发TGFBI基因突变形式,c.371G>A(p.R124H)为主要突变形式,第4号外显子突变频率最高,TGFBI基因表型存在异质性。

一个非典型Reis-Bückler角膜营养不良家系的TGFBI基因突变研究

目的通过基因突变分析，确定一个非典型Reis-Biickler角膜营养不良家系突变基因型和表现型之间的关系。方法采集家系中的4例患者及2名健康成员和100名正常对照的外周血10mL，提取白细胞DNA，应用聚合酶链反应分别扩增TGFBI基因的第4、11、12、14外显子，并对扩增产物进行直接测序分析。结果发现TGFBI基因第623密码子第2个碱基呈杂合性点突变G-A，导致甘氨酸突变为天冬氨酸（P．G623D），家系中健康成员和正常对照均未检测到此突变存在。结论这一由TGFBI基因G623D突变引起的角膜营养不良为非典型的ReisBiickler角膜营养不良，这在我国属首次报告。

角膜营养不良家系的TGFBI基因突变研究

目的确定中国角膜营养不良患者所存在的TGFBI基因突变类型。方法对3个角膜基质营养不良家系和1个Thiel Behnke角膜营养不良家系进行分析,其中1个家系成员是蒙古族人,另3个家系则是汉族人。利用合成的TGFBI基因13个外显子的特异性引物,应用聚合酶链反应进行扩增,并直接测序分析。结果1个颗粒状角膜营养不良家系患者中检测到R555W突变;1个Thiel Behnke角膜营养不良家系患者为R555Q突变;另外2个Avellino角膜营养不良家系患者中发现R124H突变,这3种突变均为杂合子。结论研究表明R555和R124密码子在中国人常染色体显性遗传性角膜营养不良的发病机理中起重要作用。Thiel Behnke角膜营养不良患者为R555Q突变,在我国属首次报告。

角膜营养不良患者TGFBI基因突变特点及基因型-表型关系

目的分析TGFBI基因相关角膜营养不良患者的基因突变特点及基因型-表型关系。方法系列病例研究。应用聚合酶链式反应（PCR）技术对63例角膜营养不良患者基因组DNA进行TGFBI基因扩增并直接测序，所有患者进行详细的眼科检查，包括最佳矫正视力（BCVA）、眼前节检查，部分患者行角膜激光共聚焦显微镜（HRT）检查。结果63例患者中有48例检测到9种TGFBI基因杂合错义突变，包括8种已报道过的致病突变[c．371G〉A（p．R124H）、c．370C〉T（p．R124C）、c．371G〉T（p．R124L）、c．1663C〉T（p．R555W）、c．1664G〉A（p．R555Q）、C．1514T〉A（p．V505D）、c．1859C〉A（p．A620D）、C．1877A〉G（p．H626R）]和1种新突变[c．1694T〉A（p．L565H）]，突变主要分布于第4号外显子，突变频次为37次，其中携带c．371G〉A（p．R124H）突变的Avellino角膜营养不良患者所占比例最大（28／48）。48例阳性患者平均发病年龄为（31．3±16．8）岁，裂隙灯显微镜检查患者双眼可见角膜上皮至基质层均混浊，不同突变导致患者角膜沉积物形态各异。结论本研究新发现的c．1694T〉A（P．L565H）突变，拓展了角膜营养不良TGFBI基因突变谱。并再次证实371G〉A（p．R124H）是亚洲TGFBI基因突变相关角膜营养不良最常见的突变形式。角膜营养不良患者存在表型异质性，角膜沉积物特征与其携带的基因突变明显相关，以分子遗传学为基础的角膜营养不良分类方法可以提高临床诊断的准确性。

三个角膜营养不良家系的TGFBI基因突变

目的 筛查3个角膜营养不良家系患者TGFBI基因突变。方法 采集患者外周静脉血，提取基因组DNA，采用直接测序对TGFBI基因全部17个外显子以及外显子内含子拼接部进行序列分析。结果 3个家系中两个家系表型为格子样角膜营养不良1型（lattice corneal dystrophy type Ⅰ，LCDI）和格子样角膜营养不良3A型（1attice corneal dystrophy type ⅢA，LCDⅢA），另外1个家系为Avellino角膜营养不良（avellino corneal dystrophy，ACD）。在两个LCD家系中分别检出编码子R124C和H626R突变，而在ACD家系中检出R124H突变。结论 TGFBI基因是引起角膜营养不良的致病基因。R124和H626是角膜营养不良的突变热点。

一个Reis-Bticklers角膜营养不良家系的TGFBI基因突变分析

目的分析一个Reis—BUcklers角膜营养不良家系的临床特征及其TGFBI基因突变类型。方法收集该家系4代53名成员（其中患者9例）外周血，提取基因组DNA，应用聚合酶链反应和DNA直接测序技术，对TGFBI基因全部17个外显子及外显子内含子拼接部，进行基因变异的检测及分析。并对所有家系成员进行详细的临床检查。结果家系中所有患者成员TGFBI基因第4外显子存在R124L杂合性突变，正常成员未发现此突变，突变与疾病表型共分离。该家系呈现常染色体显性遗传，结合患者的临床特征，确诊为典型的地图型Reis—Bticklers角膜营养不良。结论该Reis—Bticklers角膜营养不良家系存在TGFBI突变，为R124L杂合性突变。基因分析为疾病明确诊断提供了可靠依据。

格子状角膜营养不良一家系TGFBI基因的突变研究

目的研究一个格子状角膜营养不良家系的临床特征及TGFBI基因的突变类型。方法收集该家系4代35名成员（其中患者11例）的外周血样，提取基因组DNA，应用PCR和DNA直接测序技术，对TGFBI基因17个外显子及外显子内含子拼接部进行基因变异的检测；用生物信息学软件分析基因变异对蛋白质结构和功能的影响。并对家系成员进行详细的临床检查。结果家系中所有患者TGFBI基因第4外显子存在P．R124C杂合性变异，正常成员未发现此变异，生物信息学分析P．R124C变异为已报道的TGFBI基因突变类型，该突变对蛋白质结构和功能为致病性。该家系中P．R124C突变与疾病表型共分离，呈常染色体显性遗传，结合患者的临床特征，确诊为典型格子状I型角膜营养不良。结论该格子状I型角膜营养不良家系存在TGFBI突变，为致病性P．R124C杂合性突变。基因分析为疾病明确诊断提供了可靠的依据。

中国人圆锥角膜患者的TGFBI基因编码区点突变及多态性的检测和分析

目的 检测中国人圆锥角膜患者TGFBI基因编码区点突变及单核苷酸多态性特点,探讨TGFBI基因与圆锥角膜的关系.方法 应用聚合酶链反应-单链构象多态性和DNA直接测序技术,对30例圆锥角膜患者、30名正常对照外周血TGFBI基因编码区的17个外显子,进行了点突变和单核苷酸多态性的检测和分析.结果 共发现2种TGFBI基因碱基变异,位于第12外显子,均为杂合性.1例圆锥角膜患者在TGFBI基因密码子535位点发生GGA→TGA置换,引起甘氨酸突变为终止密码（G535X）,在对照组中未检出此突变;2例圆锥角膜患者和1名健康对照者在TGFBI基因密码子540位点发生TTT→TTC置换,不引起编码的苯丙氨酸改变（F540F）,系TGFBI基因的多态性改变.结论 中国圆锥角膜人群存在着TGFBI基因变异,提示TGFBI基因在圆锥角膜的发病中可能起一定的作用.

一个角膜营养不良家系TGFBI基因的突变分析

目的分析1个先天性角膜营养不良家系的致病基因突变，探讨其分子发病原因。方法通过对2例患者DNA样本进行全外显子测序，筛选2例患者共有的突变位点，进而确定该角膜营养不良家系的候选致病基因。通过Sanger测序对13名家系成员候选突变位点进行表型共分离验证。结果Sanger测序结果显示家系8例患者均检测到TGFBI基因c．1877A〉C（p．His626Pro）杂合突变，5名正常家系成员和100名正常对照均未检测到该突变，TGFBI基因c．1877A〉C突变与该家系患者完全共分离。SIFT、PolyPhen-2和Muration Taster软件评估c．1877A〉C错义突变位点分别是“有害”、“很可能损伤”和“致病”。结论TGFBI基因c．1877A〉C突变为该先天性角膜营养不良家系的致病原因。

中国角膜营养不良四个家系的TGFBI基因突变谱分析

目的 分析Reis-Bucklers角膜营养不良（RBCD）、Avellino角膜营养不良（ACD）、格子状角膜营养不良Ⅰ型（LCD Ⅰ）和格子状角膜营养不良Ⅰ/ⅢA型（LCD Ⅰ/ⅢA）4个中国家系转化生长因子β诱导（TGFBI）基因的突变情况,进一步探讨角膜营养不良表型和基因型之间的关系.方法 2010年2月至2012年10月期间采集4个家系中共22例患者、22名表型正常成员和100名健康对照的外周血.提取基因组DNA,合成TGFBI基因所有外显子的特异性引物,应用聚合酶链反应（PCR）进行扩增,并对PCR产物进行直接测序分析.结果 RBCD家系14例患者TGFBI基因第4外显子均显示c.371G ＞T （R124L）杂合突变,家系中表型正常成员未检测到此突变;ACD家系中1例患者TGFBI基因第4外显子显示c.371G＞A（R124H）杂合突变,家系表型正常成员的遗传学资料缺如;LCD Ⅰ家系3例患者TGFBI基因第4外显子均显示c.370C＞ T（R124C）杂合突变,家系表型正常成员未检测到此突变;LCD Ⅰ/ⅢA型家系中4例患者TGFBI基因第14外显子均显示c.1877A＞G （H626R）杂合突变,家系表型正常成员的遗传学资料缺如.100名健康对照未发现TGFBI基因突变.结论 TGFBI角膜营养不良表型和基因型之间存在高度相关性,R124是TGFBI基因的突变热点.

长白猪不同时期和不同组织中TGFBI基因的表达研究

为了研究转化生长因子-β诱导基因(TGFBI)在长白猪不同发育阶段和组织中的表达情况,试验采用RT-PCR方法对试验猪进行检测。结果表明:在生长发育的胚胎期55天(e55),出生后10天(d10)TGFBI均有高表达,并且随着出生后时间的延长表达量越来越低,在不同组织中的表达也不同,在脾脏和肝脏组织中有高表达,而在肌肉和心脏中有低表达。

TGFBI基因相关的Thiel-Behnke角膜营养不良家系的建立者效应分析

目的 对2个Thiel-Behnke角膜营养不良的家系进行基因诊断和建立者效应分析.方法 提取家系A中15名成员（13例患者,2名健康成员）、家系B中14例成员（6例患者,8名健康成员）以及20名健康自愿者的基因组DNA,通过DNA测序检测转化生长因子β诱导基因（transforming growth factor beta induced,TGFBI/BIGH3）的突变,并对2个家系成员进行单倍型分析.结果 所有患者TGFBI基因的第12外显子发生R555Q突变,2个家系成员具有部分相同的单倍型.结论 基因检测有助于Thiel-Behnke角膜营养不良的确诊.2个患病家系可能来自于同一祖先.

TGFBI(βIGH3)基因及其相关的角膜营养不良

对于眼部疾病而言,角膜营养不良是引起眼部疾病的重要原因。基于角膜营养不良的特殊性,以及角膜营养不良对眼球造成的不良影响,只有认真研究角膜不良的成因及影响,并重点研究TGFBI(βIGH3)基因,才能从根本上解决角膜营养不良的问题,实现对角膜的优化,改善角膜的弹性及功能。为此,该研究应立足角膜研究实际,重点研究TGFBI(βIGH3)基因及其相关的角膜营养不良问题,通过实验研究的方式总结研究成果,保证角膜营养不良的问题得到缓解和改善。

Avellino型角膜营养不良一家系基因研究

目的对Avellino角膜营养不良一家系进行分子遗传学分析及分类,了解其转化生长因子β诱导(TGFBI)基因突变的类型。方法收集1个Avellino角膜营养不良家系中的4例患者,2例表型正常成员和100例正常对照者的外周血5 ml,提取DNA后利用TGFBI基因所有17个外显子的特异性引物,进行聚合酶链反应(PCR)扩增,并对PCR产物行DNA测序分析。结果该家系4例患者的TGFBI基因第4号外显子存在CGC>CAC(R124H)杂合突变,而家系表现正常成员无此基因位点突变。同时4例患病家庭成员存在同义单核苷酸多态性(SNP):第11外显子杂合性的CTC>CTT(L472L),第12外显子杂合性的TTT>TTC(F540F)结论 Avellino角膜营养不良家系存在TGFBI基因突变,为R124H杂合突变类型。

两例颗粒角膜营养不良患者临床特征及基因突变分析

目的分析两例颗粒状角膜营养不良(GCD)中年女性患者的临床特征及利用高通量测序结合PCR测序鉴定其基因突变位点。方法结合两名患者典型临床表现及眼前段照相结果对临床特征进行分析,并对其外周血进行目标序列捕获高通量测序技术结合PCR测序鉴定基因突变位点。结果两名患者临床表现为反复发生的角膜刺激症状伴视力下降,眼前段照相显示角膜基质层颗粒状或雪花状混浊,患者外周血基因测序发现TGFBI基因上分别存在c.1663C>T:p.R555W及c.371G>A:p.R124杂合位点突变。结论两名颗粒状角膜营养不良患者均表现为角膜刺激症状,该疾病分别由TGFBI基因的c.1663C>T:p.R555W及c.371G>A:p.R124位点杂合突变导致,基因检测分别诊断为GCD1型及GCD2型。

结肠癌实质细胞长标签基因表达系列分析文库的建立及应用

目的:应用长标签基因表达系列分析(long serialan alysis of gene expression,LongSAGE)技术定量分析结肠癌实质细胞转录组,并筛选肿瘤相关基因。方法:应用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)、RNA提取和线性扩增方法得到结肠癌实质细胞及其相应正常结肠上皮细胞的反义RNA(antisense RNA,aRNA)样品,构建LongSAGE文库;然后应用SAGE2000软件对所得序列文本进行分析,筛选肿瘤相关基因;最后采用RT-PCR方法验证该差异表达基因。结果:结肠癌细胞LongSAGE文库标签体总数为50542个,识别出基因总数为16497个。正常结肠细胞LongSAGE文库标签体总数为50124个,识别出基因总数为16417个。LongSAGE文库筛选出结肠癌差异表达基因705个(P<0.05)。转化生长因子β诱导基因(transforming growth factor β-induced gene,TGFBI)为LongSAGE文库筛选出的结肠癌相关基因,RT-PCR检测验证了其在结肠癌组织标本中表达上调。结论:LCM-LongSAGE是对结肠癌实质细胞进行定量转录组研究的可行流程。