清郁和降汤抑制反流性食管炎大鼠5-HT释放及TGR5/TRPA1通路蛋白表达

【目的】探讨清郁和降汤对反流性食管炎(RE)大鼠的治疗作用及机制。【方法】将48只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,中药低、中、高剂量组及西药组,每组8只。除假手术组,其余5组大鼠采用前胃结扎联合外置幽门部分结扎术建立反流性食管炎模型。成功造模后,中药低、中、高剂量组分别对应给予清郁和降汤7.9、15.8、31.6 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,西药组给予泮托拉唑蒸馏水混悬液8.4 mg·kg^(-1)·d^(-1)、莫沙比利蒸馏水混悬液0.19 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,假手术组与模型组给予等体积蒸馏水灌胃。连续灌胃14 d后,将所有大鼠处死取材。采用苏木素-伊红(HE)染色法观察食管组织病理学改变,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清中5-羟色胺(5-HT)、色氨酸羟化酶1(TPH1)、P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)的含量,分别采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法、蛋白免疫印迹(Western Blot)法对应检测食管组织G蛋白偶联胆汁酸受体5(TGR5)、瞬时受体电位锚蛋白1(TRPA1)、瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)、磷脂酶C(PLC)、蛋白酶激活受体2(PAR2)mRNA或蛋白表达水平。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠可见食管黏膜出现较为明显的损伤及炎细胞浸润,血清中5-HT、TPH1、SP、CGRP含量显著增高(P<0.01),食管组织中TRG5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2 mRNA及蛋白表达水平显著增高(P<0.01);与模型组比较,中药低、中、高剂量组及西药组大鼠食管黏膜病理损伤得到明显改善,血清中5-HT、TPH1、SP、CGRP含量显著降低(P<0.01),食管组织中TRG5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。【结论】清郁和降汤可有效改善大鼠反流性食管炎,其机制可能与抑制TGR5/TRPA1通路,减少5-HT释放,进而降低食管敏感性有关。

TGR5受体在2型糖尿病中的研究进展

2型糖尿病(T2DM)是以高血糖状态、胰岛β细胞功能受损、胰岛素分泌不足以及胰岛素抵抗为主要特征的一种疾病。胆汁酸受体G蛋白偶联胆汁酸受体5(TGR5)在T2DM中起重要作用,可通过调节T2DM葡萄糖稳态、胰岛素分泌、胰岛素抵抗、肠道菌群等多种途径影响T2DM。现综述有关胆汁酸TGR5受体对T2DM的作用机制研究,并总结中医药通过胆汁酸TGR5受体影响T2DM的相关研究,意在为中医药治疗T2DM的新靶点提供理论依据。

齐墩果酸通过TGR5调节肥胖小鼠体内糖脂代谢的实验研究

目的:本研究通过建立肥胖小鼠的动物模型,探索天然植物药齐墩果酸OA是否通过褐色脂肪中高表达的TGR5受体调节能量代谢,消耗能量达到减肥效果及其作用的机制。方法:取8~10周龄野生型与TGR5^(-/-)两组小鼠分别给予普通或高脂饮食。8周后,高脂饮食小鼠随机分为两组,一组继续喂饲高脂饮食,另一组改以HFD+OA继续喂养8周。共喂养16周后进行糖耐量实验,并取肝脏脂肪组织做病理学观察,RT-PCR检测肝脏糖代谢相关基因的表达。喂养过程中监测小鼠体重。结果:TGR5激活可调节OA诱导的减肥效应,并增强肥胖小鼠胰岛素敏感性、降低血糖,减少肝脏组织脂质沉积,下调肝脏糖异生代谢酶相关基因的表达。结论:OA可明显减少后天性肥胖小鼠体内脂质堆积,减轻肥胖小鼠体重,调节糖代谢,其作用是通过激活胆汁酸膜受体TGR5实现的。

TGR5受体介导的信号转导通路的研究进展

GPCBAR1也称作TGR5受体,是GPCRs家族成员之一。TGR5受体在人类和动物体内广泛的表达,是一种位于细胞膜的模式识别受体,在抗炎免疫调节、能量代谢、葡萄糖代谢、抗癌等方面都具有十分重要的作用。配体一旦激活TGR5受体,介导一系列信号通路,从而发挥不同的生物学效应。本文就AKT信号通路、NF-κB信号通路、ERK信号通路、STAT3信号通路、cAMP信号通路、TGR5受体介导信号通路的研究方法与研究成果,以及TGR5受体介导信号转导通路研究与新药开发展开综述。

G蛋白偶联胆汁酸受体TGR5在炎症及炎性疾病中的作用

G蛋白偶联胆汁酸受体TGR5是一种胆汁酸膜受体,表达于多种组织细胞中,研究结果表明胆汁酸通过激活TGR5信号通路,在调控能量代谢、炎性反应、细胞增殖与凋亡中具有作用。近年研究发现,TGR5介导的细胞信号可通过调控炎性反应影响炎性疾病的发生、发展,本文综述了TGR5在炎症及相关炎性疾病中的研究进展。

胆汁酸受体TGR5激动剂研究进展

临床上依然需要新型的2型糖尿病治疗药物。胆汁酸受体TGR5是新发现的糖尿病药物靶点,一般认为TGR5激动剂可在降血糖的同时改善肥胖。本文介绍了受体TGR5的概况、与TGR5相关的生理功能,以及作为候选药物的甾体类和非甾体类TGR5激动剂的研究状况。

RNA 干扰抑制大鼠肺泡巨噬细胞 NR8383 TGR5受体表达的研究

应用RNA干扰技术建立大鼠肺泡巨噬细胞NR8383TGR5基因阻断模型。采用阳离子脂质体法,将TGR5siRNA(Santa Cruz Biotechnology)转染到NR8383细胞中,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测NR8383细胞中TGR5mRNA和蛋白水平表达变化。结果显示,与对照组比,转染TGR5siRNA组可明显降低NR8383细胞TGR5mRNA和蛋白的表达(P<0.01)。RNA干扰技术能够特异性的高效阻断NR8383细胞中TGR5基因的表达,为深入探讨TGR5的生物学功能提供了可靠方法和新途径。

TGR、LGR5联合RRM1检测在非小细胞肺癌疾病进展中的评估作用

目的分析肿瘤生长速率(TGR)、富含亮氨酸的G蛋白偶联受体5(LGR5)和核苷酸还原酶M1(RRM1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及疾病进展中的评估作用。方法选取2015年1月至2018年1月于合肥市第二人民医院就诊的97例NSCLC患者,取所有患者术中新鲜肺癌组织(NSCLC组)及距离癌组织5 cm处癌旁组织(对照组),比较不同组织TGR值及LGR5、RRM1的表达情况。分析影响NSCLC患者预后生存的相关因素及TGR、LGR5、RRM1对患者预后生存的影响。结果NSCLC组LGR5阴性率及RRM1阳性率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。中低分化、Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结侵犯者TGR升高率、LGR5阴性率及RRM1阳性率高于高分化、Ⅰ+Ⅱ期及无淋巴结侵犯者,差异有统计学意义(P<0.05)。中低分化、Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结侵犯、TGR升高、LGR5阴性及RRM1阳性表达为影响NSCLC患者预后生存的独立危险因素(P<0.05)。TGR、LGR5、RRM1单项及联合检测AUC分别为0.820、0.715、0.821、0.905,各指标AUC以联合检测最大(P<0.05)。TGR降低、LGR5阳性组及RRM1阴性组平均生存时间长于TGR升高、LGR5阴性组、RRM1阳性组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TGR、LGR5、RRM1与NSCLC疾病进展、预后均有着密切关系,可作为预测患者预后生存的分子标志物和肿瘤治疗的潜在靶点。

一种靶向TGR5的胆汁酸类化合物的^(18)F标记与初步评价

G-蛋白偶联受体(TGR5)是一类位于细胞膜上的胆汁酸受体,与体内的糖代谢、能量代谢和胰高血糖素样多肽-1的分泌密切相关。相对于正常组织,TGR5在多种肿瘤组织中过量表达,并与患者的预后相关,是肿瘤诊断、治疗和预后评估的一个潜在靶点。因此,利用点击化学的方法简单高效的制备了一种靶向TGR5的18F-PET探针[18F]FEA-LCA。该探针具有较高的放射化学产率(66%~74%)、比活度(大于300PBq/mol)和放射化学纯度(大于99%)。[18F]FEA-LCA具有其母体化合物LCA相似的亲脂性,并具有良好的体外稳定性。本工作为进一步研究[18F]FEA-LCA作为TGR5过量表达的肿瘤的PET探针奠定了良好的基础。

TGR5多种配体抑制高脂饮食小鼠肥胖及高血糖的效果对比研究

目的:本研究通过建立肥胖小鼠动物模型,分析比较胆汁酸膜受体TGR5多种配体的减肥及降糖效果,以筛选出TGR5最佳配体。方法:选取6周龄C57BL/6野生型小鼠,随机分为2组,分别用NF、HF喂养10周后,NF组小鼠采用NF继续喂养10周;将HF组小鼠分为7组,分别用HF、HF+OA(H)、HF+OA(L)、HF+CDCA、HF+CA、HF+DCA、HA+LCA喂养10周。共喂养20周后进行糖耐量实验、测定血清胰岛素水平并取肝脏脂肪组织做病理学观察,RT-PCR法检测脂肪酸合成与脂肪代谢相关基因表达情况。喂养过程中每周监测小鼠体重。结果:TGR5多种配体可激活TGR5调节肥胖小鼠体内糖脂代谢,降低小鼠体重、提高小鼠糖耐量水平,激活脂肪酸合成及氧化相关基因的表达,其中以OA(H)、CDCA和CA作用较为显著。结论:OA(H)、CDCA和CA可有效降低体重、提高糖耐量水平、降低血清胰岛素水平、缓解肝脏脂质沉积及调节脂肪代谢相关基因的表达。

胆汁酸膜受体TGR5在小鼠骨髓来源的树突状细胞中的表达及其相关功能

目的通过TGR5天然激动剂石胆酸(LCA)刺激小鼠树突状细胞(DC),探讨TGR5受体在DC成熟活化及吞噬功能方面的作用。方法体外诱导小鼠骨髓细胞形成DC,LCA 30μmol/L预处理2 h后,用CFSE标记的胸腺凋亡细胞测试其吞噬功能;加入脂多糖(LPS)1μg/mL诱导其成熟,6 h后提取细胞总RNA,PCR法检测IL-12、TNF-α和IL-10等细胞因子;48 h后以流式细胞术检测细胞表面分子MHCⅡ、CD80、CD86表达水平。组间比较采用t检验。结果 (1)LCA可以上调DC表达TGR5,并增强DC吞噬凋亡细胞功能(P<0.05);(2)LCA可以降低LPS引起的DC表面MHCⅡ、CD80和CD86表达水平(均P<0.05),提示LCA可抑制DC成熟;(3)LCA可抑制LPS诱导的DC促炎性细胞因子IL-12、IL-6、TNF-αmRNA表达,而IL-10表达水平升高(均P<0.05)。结论 TGR5受体激动剂可抑制DC成熟并增强DC吞噬功能,发挥免疫调节作用。

FXR和TGR5在梗阻性黄疸大鼠肾脏中的表达变化

目的研究胆汁酸受体FXR、TGR5在梗阻性黄疸(obstru ction-jaundice,OJ)肾脏中的表达变化.方法通过结扎胆总管建立OJ模型,12只SD大鼠随机分成两组,胆总管结扎组(bile duct ligation,BDL)6只,和对照组(control group,CON)6只.建立模型两周后检测两组血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆汁酸(total bile acid,TBA)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)以及直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)的浓度变化;检测两组血清尿素氮(serum urea nitrogen,BUN),肌酐(creatinine,Cr),尿酸(uric acid,UA)的浓度变化,并收集两组大鼠尿液进行尿干化学分析.Western blot方法定量检测大鼠肾组织中FXR和TGR5蛋白表达水平,q RT-PCR检测FXR和TGR5的m RNA表达水平,HE染色检测SD大鼠肾脏病理改变.结果同CON组比较,BDL组大鼠肾脏FXR和TGR5蛋白表达量和m RNA表达量均降低,差异有统计学意义(P﹤0.05).HE染色显示,BDL组大鼠肾脏组织中,肾小球密度减少;肾小管局部上皮细胞脱落、消失;小管腔隙扩张,内含大量粉染无结构物质.结论梗阻性黄疸时,会引起大鼠肾脏的损害;胆汁酸受体FXR和TGR5在肾脏的蛋白和m RNA表达量均显著降低,可能同肾脏损伤有关.

TGR7 mRNA在肺癌石蜡组织中的表达及临床意义

目的:探讨福尔马林固定石蜡包埋的非小细胞肺癌(Non-small-cell lung cancer,NSCLC)中Mas相关的G蛋白偶联受体TGR7的表达及其临床意义。方法:提取125例NSCLC及其对应癌旁肺组织的mRNA,使用实时荧光定量RT-qPCR检测TGR7的表达,分析其与临床各病理参数的关系。结果:TGR7 mRNA在NSCLC组织中的表达(1.068 2±0.609 6)明显高于癌旁肺组织(0.399 4±0.283 8),P<0.001。TGR7 mRNA表达在淋巴结转移组(1.201 0±0.633 4)明显高于非淋巴结转移组(0.904 5±0.540 6),P=0.006,在肿瘤直径≥3cm组(1.193 5±0.589 5)明显高于肿瘤直径<3cm组(0.932 3±0.606 6),P=0.016,在TNM临床Ⅲ、Ⅳ期(1.176 2±0.632 9)明显高于Ⅰ、Ⅱ期(0.926 1±0.551 5),P=0.022。结论:TGR7mRNA的高表达与NSCLC发生与进展密切相关,可望作为NSCLC的促癌基因及成为NSCLC诊断、预后和靶向治疗的指标。

苦豆子总碱对溃疡性结肠炎小鼠结肠及肝组织中FXR、TGR5、CYP7A1蛋白表达的影响

基于法尼醇X受体和G蛋白偶联胆汁酸受体5(farnesoid X receptor/G protein-coupled bile acid receptor 5,FXR/TGR5)通路探讨苦豆子总碱对小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型的治疗作用及其作用机制。将60只健康雄性BALB/c小鼠分空白对照组(Con)、葡聚糖硫酸钠模型组(DSS)、柳氮磺胺嘧啶阳性对照组(SASP)和苦豆子总碱治疗组(TASA)。给予BALB/c小鼠3.5%DSS饮水使其连续自由饮用7天以建立小鼠急性UC模型,造模的同时每天灌胃苦豆子总碱(75 mg/kg)进行治疗,并以柳氮磺胺嘧啶(450 mg/kg)为阳性对照药物。试验期间对各组小鼠临床症状进行疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分。第8天观察结肠HE染色病理切片,糖原PAS染色以及阿利新蓝染色观察结肠组织杯状细胞。酶联免疫吸附法(ELISA)检测结肠组织匀浆上清液IL-10、IL-23、IL-1β及IL-17的表达。蛋白质免疫印迹(Western blot)检测小鼠结肠和肝组织FXR、TGR5、CYP7A1的表达。结果显示,经苦豆子总碱治疗后,小鼠疾病活动指数、结肠组织病理学损伤及结肠长度明显改善(P<0.01),结肠组织杯状细胞数量显著增加(P<0.01),细胞因子IL-10显著升高(P<0.01);IL-23、IL-17、IL-1β显著降低(P<0.01),血清胆汁酸含量显著升高(P<0.01),结肠和肝脏组织FXR、TGR5、CYP7A1均不同程度上调。结果表明苦豆子总碱对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎有一定的治疗作用,其主要通过抑制相关炎症因子来抑制结肠炎症的发展,以及上调FXR/TGR5信号通路的相关蛋白的表达发挥其治疗作用。

胆汁酸膜受体TGR5对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞FN、TGF-β1的调控作用

目的探究G蛋白偶联受体TGR5在大鼠肾小球系膜细胞中的表达以及高糖条件下对纤维连接蛋白(fibronectin,FN)以及转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)蛋白水平的影响,探索其在糖尿病肾病中可能发挥的作用。方法高糖(30 mmol·L-1glucose,HG)条件下,用特异性激动剂INT-777激活TGR5,或者对TGR5进行过表达、干扰处理,通过Western blot来检测大鼠肾小球系膜细胞中TGR5的表达情况以及FN、TGF-β1蛋白水平的变化。结果在大鼠肾小球系膜细胞中存在TGR5的表达;与对照组相比,激活TGR5后,由高糖引起的FN、TGF-β1蛋白水平的上升受到抑制(P<0.01,P<0.05);另一方面,干扰TGR5后,FN、TGF-β1的蛋白水平与对照组相比异常升高,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论在大鼠肾小球系膜细胞中,TGR5可以抑制由高糖引起的FN、TGF-β1蛋白水平的升高,在糖尿病肾病的发生发展中可能发挥保护作用。

胆汁酸受体FXR和TGR5在溃疡性结肠炎中的表达

背景:发达国家溃疡性结肠炎(UC)的发病率高于发展中国家,可能与西化的生活方式有关,特别是高动物蛋白和低复杂碳水化合物的饮食习惯。随着高脂肪、高肉类摄入的增加,肝脏合成和分泌的胆汁酸相应增加,可能对UC的发生产生影响。目的:观察法尼醇X受体(FXR)、G蛋白偶联胆汁酸受体5(TGR5)在UC中的表达。方法:选取2013年1月—2016年6月南京医科大学附属江宁医院30例活动期UC患者,以30名健康者作为对照。采用免疫组化法检测结肠黏膜中FXR和TGR5表达。结果:与对照组相比,UC组FXR表达显著降低(4.63±2.07对6.91±2.62,P=0.00),TGR5表达无明显差异(6.70±2.90对6.11±2.44,P=0.40)。右半结肠炎患者的FXR表达显著高于左半结肠炎患者(P<0.05)。结论:UC患者结肠黏膜FXR表达明显减少,在UC发病中可能起一定的作用,而TGR5在UC发病中可能无明显作用。

胆汁酸膜受体TGR5真核表达载体的构建及在细胞中的表达

试验旨在构建胆汁酸膜受体TGR5真核表达载体,转染293T细胞并在其中表达。用RT-PCR技术从胎盘组织中得到TGR5基因,克隆至真核表达载体pCMV-EGFP中。双酶切和测序鉴定正确后,将pCMV-EGFP-TGR5瞬时转染293T细胞,并采用实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测TGR5的表达。结果显示,本试验构建了TGR5真核表达载体pCMV-EGFP-TGR5;转染293T细胞后,荧光显微镜观察到绿色荧光表达;实时荧光定量PCR检测TGR5表达量显著增加;Western blotting结果显示有目的蛋白表达。结果表明,真核表达载体pCMV-EGFP-TGR5构建成功,转染293T细胞后在基因、蛋白水平上均表达TGR5受体。

胆汁酸代谢-TGR5轴调控腹泻型肠易激综合征的作用机制及中医药相关研究进展

腹泻型肠易激综合征(Diarrhea-predominant IBS,IBS-D)是一种功能性肠病,其发病机制尚未完全阐明,目前亦缺乏确切有效的治愈方法。近年来大量研究显示,胆汁酸代谢失常可激活G蛋白偶联胆汁酸受体5(G-protein-coupled bile acid receptor 5,TGR5)信号通路的活性,诱导肠嗜铬细胞、肠L细胞、肠巨噬细胞等异常分泌5-羟色胺、降钙素基因相关肽、胰高血糖素样肽-1及炎症因子等,从而导致肠道动力异常、内脏敏感性增加以及肠黏膜低级别炎症等,最终引发IBS-D,因此,胆汁酸代谢-TGR5轴在IBS-D的发生发展中起着重要的调节作用。本文从胆汁酸代谢-TGR5轴入手,总结近年来国内外文献,旨在阐明其调控IBS-D的作用及其机制,并与中医药论治相结合,为IBS-D的治疗提供新的思路。

TGR-2050型验潮仪在珠江口潮汐测量中的应用分析

使用压力式TGR-2050型验潮仪,在珠江口等河道入海口测量潮汐时,误差比较大;针对珠江口潮汐的特点,分析和研究了大气压扰动、潮流、海水密度、压力感应零点漂移等因素对潮汐测量带来的误差,有针对性地提出解决方案,并通过实验证明了方案的可行性。

激活TGR5通过CaN/NFAT3途径减轻高糖诱导的心肌细胞肥大

目的:观察激活G蛋白偶联胆汁酸受体1(GPBAR1,又称TGR5)对高糖诱导的小鼠心肌肥大的影响,并探讨钙调神经磷酸酶(CaN)/活化T细胞核因子3(NFAT3)信号途径在其中的作用。方法:原代培养小鼠心肌细胞,采用图像分析系统测定细胞表面积,BCA法测定细胞蛋白含量,通过RT-PCR及Western blot方法检测TGR5、CaN及NFAT3的mRNA及蛋白表达变化。结果:成功培养小鼠心肌细胞。高糖明显诱导心肌细胞表面积及细胞蛋白含量的增加(P<0.05)同时CaN及NFAT3的表达也增加(P<0.05)。激活TGR5或给予CaN抑制剂环孢素A均能抑制高糖引起的心肌细胞肥大及NFAT3表达增加(P<0.05)。给予TGR5干扰慢病毒可阻断TGR5对心肌细胞肥大的上述改善作用(P<0.05)。结论:激活TGR5能减轻高糖诱导的心肌细胞肥大,其机制可能与抑制CaN/NFAT3信号通路有关。