清郁和降汤抑制反流性食管炎大鼠5-HT释放及TGR5/TRPA1通路蛋白表达

【目的】探讨清郁和降汤对反流性食管炎(RE)大鼠的治疗作用及机制。【方法】将48只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,中药低、中、高剂量组及西药组,每组8只。除假手术组,其余5组大鼠采用前胃结扎联合外置幽门部分结扎术建立反流性食管炎模型。成功造模后,中药低、中、高剂量组分别对应给予清郁和降汤7.9、15.8、31.6 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,西药组给予泮托拉唑蒸馏水混悬液8.4 mg·kg^(-1)·d^(-1)、莫沙比利蒸馏水混悬液0.19 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,假手术组与模型组给予等体积蒸馏水灌胃。连续灌胃14 d后,将所有大鼠处死取材。采用苏木素-伊红(HE)染色法观察食管组织病理学改变,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清中5-羟色胺(5-HT)、色氨酸羟化酶1(TPH1)、P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)的含量,分别采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法、蛋白免疫印迹(Western Blot)法对应检测食管组织G蛋白偶联胆汁酸受体5(TGR5)、瞬时受体电位锚蛋白1(TRPA1)、瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)、磷脂酶C(PLC)、蛋白酶激活受体2(PAR2)mRNA或蛋白表达水平。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠可见食管黏膜出现较为明显的损伤及炎细胞浸润,血清中5-HT、TPH1、SP、CGRP含量显著增高(P<0.01),食管组织中TRG5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2 mRNA及蛋白表达水平显著增高(P<0.01);与模型组比较,中药低、中、高剂量组及西药组大鼠食管黏膜病理损伤得到明显改善,血清中5-HT、TPH1、SP、CGRP含量显著降低(P<0.01),食管组织中TRG5、TRPA1、TRPV1、PLC、PAR2 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。【结论】清郁和降汤可有效改善大鼠反流性食管炎,其机制可能与抑制TGR5/TRPA1通路,减少5-HT释放,进而降低食管敏感性有关。

枯草芽孢杆菌通过TGR5/TRPA1信号通路调节慢性传输型便秘小鼠的肠蠕动

目的探究枯草芽孢杆菌对慢性传输型便秘(slow transit constipation,STC)小鼠5-HT释放及TGR5/TRPA1信号通路的影响,以明确其对STC的治疗作用及机制。方法24只♂C57BL/6小鼠分为对照组、模型组、枯草芽孢杆菌治疗组和INT-777组。复方地芬诺酯用于构建STC小鼠模型,枯草芽孢杆菌治疗组和INT-777组于复方地芬诺酯灌胃1 h后分别灌胃枯草芽孢杆菌悬液和INT-777,连续14 d。实验期间统计小鼠24 h排便量、粪便含水量和肠道推进率;HE染色观察结肠病变程度;ELISA和免疫荧光检测结肠5-HT的表达;Western blotting检测结肠TGR5/TRPA1通路蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组小鼠24 h排便量、粪便含水量和肠道推进率均显著降低(P<0.01或P<0.001),表现出肠蠕动障碍和结肠病理损伤;枯草芽孢杆菌和INT-777显著改善了肠蠕动障碍和结肠病理损伤。另外,模型组小鼠5-HT的释放和TGR5/TRPA1通路被抑制,而枯草芽孢杆菌和INT-777显著增加了STC小鼠结肠组织中5-HT的表达(P<0.05或P<0.001),激活了TGR5/TRPA1通路。结论枯草芽孢杆菌可能通过上调TGR5/TRPA1通路并促进肠嗜铬细胞释放5-HT调节STC小鼠肠蠕动,对STC发挥较好的治疗作用。