人参再造丸联合美多巴对帕金森病模型大鼠黑质纹状体TH阳性神经元的影响

目的 :观察人参再造丸联合美多巴对帕金森病模型大鼠黑质纹状体TH阳性神经元的影响。方法 :PD鼠 80只 ,随机分为 4组 :对照组、美多巴组、人参再造丸组、人参再造丸联合美多巴组。于喂养 4个月后取黑质纹状体组织免疫组化染色 ,检测TH阳性神经元的分布、密度。结果 :美多巴组黑质TH阳性神经细胞及纹状体TH阳性终末较生理盐水组明显减少 ,而人参再造丸组略有增多达5 %～ 8% ,联合组增多较显著达 2 0 %～ 2 5 %。结论 :人参再造丸对PD大鼠黑质纹状体毒性作用较轻 ,人参再造丸联合美多巴可改善TH阳性神经元的病理改变。

抗帕颗粒对帕金森病模型大鼠黑质纹状体TH阳性神经元的影响

目的 :观察抗帕颗粒对帕金森病模型大鼠黑质纹状体TH阳性神经元的影响。方法 :帕金森病(PD)大鼠 80只 ,随机分为 4组 :对照组、美多巴组、抗帕颗粒组、抗帕颗粒联合美多巴组。于喂养 4个月后取黑质纹状体组织免疫组化染色 ,检测TH阳性神经元的分布、密度。结果 :美多巴组黑质TH阳性神经细胞及纹状体TH阳性终末较生理盐水组明显减少 ,而抗帕颗粒组增多 2 0 %～ 3 0 % ,联合组增多最显著达 40 %～5 0 %。结论 :抗帕颗粒可改善PD大鼠黑质纹状体TH阳性神经元的病理改变 ,抗帕颗粒联合美多巴治疗效果明显。

过敏原对过敏性鼻炎患者外周血CD4^(+)Th1 IL-18、IL-18BPa和IL-18Rα表达的影响

目的探讨过敏原对健康人(healthy control,HC)和过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)患者外周血CD4^(+)Th1细胞表达IL-18、IL-18BPa和IL-18Rα蛋白水平及mRNA水平的影响。方法收集皮肤点刺试验阴性的鼻炎(AR^(-))、皮肤点刺试验阳性的鼻炎(AR^(+))患者和HC的外周血标本。流式细胞术检测过敏原对CD4^(+)Th1细胞表达IL-18、IL-18BPa和IL-18Rα蛋白水平的影响;qPCR检测过敏原对CD4^(+)T细胞表达IL-18、IL-18BPa和IL-18RαmRNA水平的影响。结果与HC相比,AR^(-)和AR^(+)患者外周血Th1细胞中IL-18蛋白的表达增加,IL-18BPa蛋白的表达减少;AR^(+)患者外周血Th1细胞中IL-18Rα蛋白的表达增加;过敏原可增强HC Th1细胞IL-18Rα蛋白的表达,并诱导AR^(+)患者和HC CD4^(+)T细胞IL-18、IL-18BPa和IL-18RαmRNA的表达。结论过敏原极可能通过促进外周血CD4^(+)Th1细胞表达IL-18和IL-18Rα进而参与AR发病。

电针帕金森模型大鼠对黑质TH含量的影响

目的 :观察电针对帕金森病大鼠黑质TH含量的影响。方法 :将 6 OHDA注入黑质造成单侧黑质损毁的帕金森病大鼠模型 ,并用免疫组织化学法检测正常组、假手术组、模型组、电针组黑质TH阳性神经元数目。结果 :帕金森病大鼠损毁侧SNC、SNL的TH阳性神经元数目显著低于正常组 (P <0 .0 1 )及未损毁侧 (P <0 .0 1 ) ,电针可有效地增高帕金森大鼠损毁侧SNC、SNL的TH阳性神经元数目 (P <0 .0 1 ,P <0 .0 5)。结论 :帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元合成多巴胺的功能低下 。

抗坏血酸对IL-1β体外诱导中脑神经干细胞分化为酪氨酸羟化酶阳性神经元作用的实验研究

目的体外观察抗坏血酸(ascroidacid,AA)对IL-1β诱导神经干细胞向酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxy-lase,TH)阳性神经元分化的作用,为帕金森病的细胞移植治疗提供实验资料。方法体外培养中脑神经干细胞并传代分组,在有血清条件下分别予以IL-1β及AA+IL-1β诱导分化,TH免疫细胞化学鉴定分化结果并细胞计数阳性比例。结果有血清条件下IL-1β、AA+IL-1β诱导中脑神经干细胞分化为TH阳性神经元比例约为12·6%和14·3%,明显高于对照组(约2·6%,P<0·01);两实验组间相对无统计学差异(P>0·05);联合诱导组TH阳性神经元细胞形态更成熟。结论IL-1β可以明显促进中脑神经干细胞分化为TH阳性神经元,AA能够加强IL-1β诱导的TH阳性细胞的表型成熟,但在我们的实验条件下二者联合未能增加TH阳性细胞诱导率。

鱼藤酮诱导制备SD大鼠帕金森病模型的可行性

目的采用长期低剂量皮下注射鱼藤酮的方法制备SD大鼠帕金森病模型。方法将36只SD大鼠随机分为实验组24只和对照组12只,实验组给予l.5 mg/(kg·d)鱼藤酮皮下注射,对照组注射等体积葵花油,连续30 d,每周停药1 d。给药结束后进行行为学测试,并断头取脑,采用免疫组化SP法检测中脑黑质多巴胺能神经元数目。结果对照组行为学改变不明显,其黑质多巴胺能神经元数目较多;实验组出现明显的行为学改变,其黑质多巴胺能神经元数目减少,符合PD的诊断标准。结论颈背部皮下注射鱼藤酮可成功制备SD大鼠帕金森病模型。

神经干细胞定向诱导分化条件研究

通过模拟体内分化诱导条件,在体外对神经干细胞(NSCs)进行定向诱导。结果表明,由添加2%B27+100pg.mL-1IL-1+0.05g.L-1Vc+5u.mL-1EPO的DMEM/F12的诱导液A和1份含2%B27的DMEM/F12+1份纹状体提取液混合组成的诱导液B均可以将中脑和大脑皮质的NSCs诱导分化为多巴胺能神经元,TH阳性细胞表达率随诱导时间的增加而提高,中脑来源的NSCs的TH阳性细胞诱导率极显著地高于大脑皮质来源的NSCs,诱导液A的诱导效果优于诱导液B。

雌激素对去卵巢大鼠中脑黑质多巴胺神经元的保护作用

目的:观察不同剂量雌激素对去卵巢大鼠中脑黑 质多巴胺能神经元的作用,探讨雌激素的量对帕金森病防治 效果的差异.方法:对成年雌性大鼠行卵巢切除术并分组,给 予不同剂量的雌激素,分别测量各组大鼠血液的雌激素水平; 并应用立体定向技术注射6 羟基多巴胺(6 OHDA)于大鼠中 脑黑质,30d后对中脑进行切片,采用免疫组织化学的方法对 黑质TH阳性神经元进行标记、记数.结果:在给予不同剂量 雌激素的去卵巢大鼠各组间,达到生理剂量雌激素的大鼠中 脑黑质TH阳性神经元数目均没有显著差别;而在生理剂量 以下的大鼠组与其他各组比较,中脑黑质TH阳性神经元数 目明显减少(减少-87±6,P<0.01).结论:雌激素对雌性 大鼠中脑黑质多巴胺能神经元具有保护作用,达到生理剂量 后没有明显的差异;低于生理剂量则保护作用减弱.

“抗帕颗粒”对帕金森病模型鼠的神经保护作用

目的探讨"抗帕颗粒"对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)帕金森病(PD)模型小鼠黑质纹状体区TH阳性神经元及多巴胺(DA)的影响。方法 90只健康雄性C57BL/6小鼠,鼠龄8~12w,随机分为3组:正常对照组30只、PD模型对照组30只、PD模型干预组30只;MPTP腹腔注射(40mg·kg^(-1)·d^(-1)×7)制备小鼠PD模型;正常对照组及PD模型对照组予生理盐水1m L·d^(-1)灌胃,PD模型干预组给予"抗帕颗粒"40mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,连续喂养4个月。比较分析各组4月时黑质纹状体区TH阳性神经元及DA情况。结果 1正常对照组30只(30/30只)最终均存活,PD模型对照组4个月时存活27只(27/30只),PD模型干预组4个月时存活28只(28/30只);2PD模型对照组、PD模型干预组小鼠每次注射MPTP后,先有短暂兴奋(持续7.61±2.17min),表现为四处窜跳;随即出现全身中重度震颤,皮毛及尾巴时有竖立,活动减少,持续24.23±3.89min后震颤消失;随后出现活动减少;3经Imagepro^Plus 5.1系统分析,正常对照组TH阳性细胞面积为64145μm^2,高倍镜下可见大量胞质为褐色颗粒的TH阳性细胞;PD模型对照组TH阳性细胞染色面积为40012μm^2,高倍镜下见TH细胞数量明显减少;PD模型干预组TH阳性细胞染色面积为60952μm^2,高倍镜下见TH阳性细胞数量较PD模型对照组增加;4正常对照组DA含量为2.18±0.31μg·m L^(-1),与PD模型对照组1.57±0.22μg·m L^(-1)比较,P<0.01;正常对照组与PD模型干预组2.04±0.18μg·m L^(-1)比较。P<0.05;PD模型对照组与PD模型干预组比较,P<0.01。结论 "抗帕颗粒"可使PD小鼠黑质纹状体中多巴胺能神经元一定程度地减少丢失,并改善DA含量的下降,对多巴胺能神经元的数量、形态及功能具有一定的保护作用,有望改善PD治疗现状并在临床进一步推广应用。

雌激素对去卵巢大鼠中脑黑质多巴胺能神经元的保护作用

目的观察雌激素对去卵巢大鼠中脑黑质多巴胺能神经元的作用,探讨雌激素防治帕金森病的可能性。方法成年雌性大鼠行卵巢切除术、随机分为雌激素组(Ⅰ组)和对照组(Ⅱ组),应用立体定向技术注射六羟基多巴胺(6OHDA)于大鼠中脑黑质,采用免疫组织化学的方法对黑质多巴胺能神经元酪氨酸羟化酶(TH)进行标记并记数阳性细胞。同时,对大鼠进行行为学观测。结果在没有给予雌激素的去卵巢大鼠组,阿朴吗啡(APO)诱导的旋转次数与对照组相比有显著增加(P<0.05)、大鼠中脑黑质TH阳性神经元数目与对照组比较也有显著减少(P<0.01)。结论雌激素对雌性大鼠中脑黑质多巴胺能神经元具有保护作用。

雌激素对帕金森病大鼠中脑黑质多巴胺能神经元保护作用的研究

目的 :观察雌激素对去卵巢大鼠中脑黑质多巴胺能神经元的作用 ,探讨雌激素对帕金森病防治的可能性。方法 :对成年雌性大鼠行卵巢切除术 ,应用立体定向技术注射 6 羟基多巴胺 (6 OHDA)于大鼠中脑黑质 ,采用免疫组织化学的方法对黑质TH(酪氨酸羟化酶 )阳性神经元进行标记、计数 ;同时 ,对大鼠的行为学进行观测。结果 :在没有给予雌激素的去卵巢大鼠组 ,阿朴吗啡 (APO)诱导的旋转次数与其他对照组相比有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,大鼠中脑黑质TH阳性神经元的数目与其他对照组比较也有显著性差异 (P <0 0 5 )。结论 :雌激素对雌性大鼠中脑黑质多巴胺能神经元具有保护作用 ,除了经过雌激素受体途径以外 ,还有其他的作用机制。

成年小鼠颈动脉体细胞的培养方法及低氧对其特性的影响

目的:建立体外分离培养小鼠颈动脉体细胞的方法。方法:摘取小鼠双侧颈总动脉分叉,采用机械剪切和混合酶消化颈动脉体(CB),培养24 h后固定细胞,通过免疫荧光染色鉴定细胞类型,并在低氧培养3 d后,观察TH阳性细胞数量的变化。结果:原代培养的CB细胞绝大部分为单细胞,有少数呈簇状生长的细胞群。所分离的原代CB细胞中,主要有TH+、GFAP+和Nestin+三种类型的细胞组成;低氧培养3 d后TH+细胞数量较常氧组明显增加。结论:从分离步骤和消化方式等方面优化小鼠CB细胞的原代培养方法,而低氧可以增加CB细胞中TH+细胞的数量,可能与促进CB细胞中神经干细胞样细胞的增殖有关。

不同时程吗啡依赖对大鼠中脑腹侧被盖区多巴胺能神经元的影响

目的:观察不同时程吗啡依赖对大鼠中脑腹侧被盖区(ventral tegmental area,VTA)多巴胺能神经元的影响。方法:建立吗啡慢性依赖大鼠模型,石蜡包埋组织连续切片,免疫组织化学染色观察多巴胺能神经元特异性标记物酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表达变化。结果:TH免疫组化结果显示随着吗啡依赖时间的延长VTA区内TH阳性细胞逐渐减少,吗啡依赖6周组阳性细胞减少明显。结论:较长时程吗啡依赖大鼠VTA多巴胺能神经元损伤明显。

胎鼠中脑多巴胺细胞混合培养方法探索

目的探索一种新的胚胎大鼠腹侧中脑黑质细胞的混合培养方法,以获得具有高比例多巴胺神经元的原代细胞体系,有利于在体外条件下进行帕金森病(Parkinson's disease,PD)的发病机制和防治的研究。方法分离E15(EmbryonicDay 15)SD胎鼠中脑黑质区域组织,分散为单细胞后,分别用DMEM/F12+10%FBS含血清培养基和Neurobasal+N1无血清培养基设置不同组别进行培养,通过免疫组织化学方法检测在不同培养条件下细胞的生长状态及多巴胺能神经元的比例。结果 DMEM/F12+10%FBS与Neurobasal+N1先后一周交替换液的的培养体系中获得的TH阳性神经元占神经元的比例可达31%左右,明显高于单独使用DMEM/F12+10%FBS培养组(约10%)。结论 DMEM/F12+10%FBS与Neurobasal+N1先后一周交替换液是一种黑质神经元和胶质细胞混合培养并能获得高比例多巴胺神经元的有效培养方法。

大鼠Shh-N融合蛋白的表达、纯化及功能研究

为了获得重组SonichedgehogN端蛋白 (Shh N)并研究其功能 ,应用PCR技术扩增Shh NcDNA ,然后克隆至原核表达质粒中 ,转化E .coli后获得表达菌株 ,经 1mmol/LIPTG诱导高效表达出带有His tag的融合蛋白 ,其中大部分为可溶性蛋白 ,少量为包涵体 .用His tag特异性结合树脂纯化可溶性融合蛋白 ,经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一区带 ,凝胶自动扫描分析表明 ,Shh N的纯度达 85%以上 .纯化后的Shh N在成纤维生长因子 8(FGF8)的协同作用下 ,能诱导神经前体细胞 (NPC)向酪氨酸羟化酶阳性神经元 (TH+ )发育 .在此基础上可以诱导不同类型的人类干细胞定向分化为多巴胺 (DA)神经元 ,从而为临床治疗帕金森病 (PD)

脑瘫仔兔黑质纹状体系神经元数量及超微结构研究

目的观察高胆红素血症致脑瘫动物模型黑质纹状体系多巴胺能神经元数量及超微结构的变化,为深入研究手足徐动型脑瘫的神经病理学机制奠定基础,也为临床用药和早期康复提供依据。方法生后2～5日龄仔兔30只,随机分为对照组10只和模型组20只。模型组给予腹腔分次注射胆红素,总量为300mg/kg体重;对照组给予腹腔注射同等剂量的生理盐水。注射后2组仔兔均母乳喂养至45d。将鉴定为脑瘫模型的仔兔和对照组仔兔均处死,TH染色进行神经元定量分析及超微结构观察。结果①模型组黑质及纹状体神经元超微结构较对照组有明显改变;②模型组黑质及纹状体TH阳性神经元数明显少于对照组(P<0.01)。结论脑瘫仔兔黑质及纹状体超微结构明显改变,黑质纹状体系多巴胺能神经元损伤,神经元数量减少。

不同时程吗啡依赖对大鼠中脑黑质多巴胺神经细胞的影响

目的观察不同时程吗啡依赖对大鼠中脑黑质(Substantia nigra,SN)多巴胺能神经细胞的影响。方法按逐日递增原则背部皮下注射盐酸吗啡,建立吗啡依赖大鼠模型,取脑组织经10%福尔马林液固定后石蜡包埋,组织连续切片,免疫组织化学和免疫荧光染色,观察多巴胺能神经细胞特异性标记物酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)蛋白表达变化;Fluoro-Jade B染色观察吗啡依赖不同时程黑质多巴胺能神经细胞变性坏死情况。结果 TH免疫组化结果显示随着吗啡依赖时间的延长黑质阳性细胞逐渐减少,吗啡依赖6周组阳性细胞减少明显。Fluoro-Jade B染色结果证实多巴胺能神经细胞发生了变性坏死。结论较长时程吗啡依赖大鼠黑质多巴胺能神经细胞损伤明显。