成年小鼠颈动脉体细胞的培养方法及低氧对其特性的影响

目的:建立体外分离培养小鼠颈动脉体细胞的方法。方法:摘取小鼠双侧颈总动脉分叉,采用机械剪切和混合酶消化颈动脉体(CB),培养24 h后固定细胞,通过免疫荧光染色鉴定细胞类型,并在低氧培养3 d后,观察TH阳性细胞数量的变化。结果:原代培养的CB细胞绝大部分为单细胞,有少数呈簇状生长的细胞群。所分离的原代CB细胞中,主要有TH+、GFAP+和Nestin+三种类型的细胞组成;低氧培养3 d后TH+细胞数量较常氧组明显增加。结论:从分离步骤和消化方式等方面优化小鼠CB细胞的原代培养方法,而低氧可以增加CB细胞中TH+细胞的数量,可能与促进CB细胞中神经干细胞样细胞的增殖有关。

鱼藤酮诱导制备SD大鼠帕金森病模型的可行性

目的采用长期低剂量皮下注射鱼藤酮的方法制备SD大鼠帕金森病模型。方法将36只SD大鼠随机分为实验组24只和对照组12只,实验组给予l.5 mg/(kg·d)鱼藤酮皮下注射,对照组注射等体积葵花油,连续30 d,每周停药1 d。给药结束后进行行为学测试,并断头取脑,采用免疫组化SP法检测中脑黑质多巴胺能神经元数目。结果对照组行为学改变不明显,其黑质多巴胺能神经元数目较多;实验组出现明显的行为学改变,其黑质多巴胺能神经元数目减少,符合PD的诊断标准。结论颈背部皮下注射鱼藤酮可成功制备SD大鼠帕金森病模型。

不同时程吗啡依赖对大鼠中脑腹侧被盖区多巴胺能神经元的影响

目的:观察不同时程吗啡依赖对大鼠中脑腹侧被盖区(ventral tegmental area,VTA)多巴胺能神经元的影响。方法:建立吗啡慢性依赖大鼠模型,石蜡包埋组织连续切片,免疫组织化学染色观察多巴胺能神经元特异性标记物酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表达变化。结果:TH免疫组化结果显示随着吗啡依赖时间的延长VTA区内TH阳性细胞逐渐减少,吗啡依赖6周组阳性细胞减少明显。结论:较长时程吗啡依赖大鼠VTA多巴胺能神经元损伤明显。

不同时程吗啡依赖对大鼠中脑黑质多巴胺神经细胞的影响

目的观察不同时程吗啡依赖对大鼠中脑黑质(Substantia nigra,SN)多巴胺能神经细胞的影响。方法按逐日递增原则背部皮下注射盐酸吗啡,建立吗啡依赖大鼠模型,取脑组织经10%福尔马林液固定后石蜡包埋,组织连续切片,免疫组织化学和免疫荧光染色,观察多巴胺能神经细胞特异性标记物酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)蛋白表达变化;Fluoro-Jade B染色观察吗啡依赖不同时程黑质多巴胺能神经细胞变性坏死情况。结果 TH免疫组化结果显示随着吗啡依赖时间的延长黑质阳性细胞逐渐减少,吗啡依赖6周组阳性细胞减少明显。Fluoro-Jade B染色结果证实多巴胺能神经细胞发生了变性坏死。结论较长时程吗啡依赖大鼠黑质多巴胺能神经细胞损伤明显。