猪传染性胃肠炎病毒TH-98株S基因的克隆与同源性比较

用猪睾丸 (Swine testicle,ST)细胞繁殖并扩增猪传染性胃肠炎病毒国内分离株 TH- 98,根据 Gen Bank中已发表的TGEV S基因 c DNA序列 ,利用 Oligo4.1程序软件设计并合成两对引物 ,进行逆转录聚合酶链式反应 (RT- PCR) ,扩增出2 .3kb和 2 .1kb两个片段 ,分别命名为 Sa与 Sb,先后插入到 p UC18质粒载体上的 Eco RI和 Pst I多克隆位点上 ,构建了重组质粒 p UC- S。根据 TGEV S基因位点和 p UC18的物理图谱 ,用相应的限制性内切酶进行酶切及套式 PCR方法进行鉴定、分析 ,证明克隆的 p UC- S为 TGEV S基因。同时对 p U C- S进行序列测定分析 ,并与来自美国、英国和日本的五个毒株进行核苷酸及编码氨基酸同源性比较 ,证明了

猪传染性胃肠炎病毒TH-98株在不同细胞增殖特性的研究

对猪传染性胃肠炎病毒TH - 98分离株进行了在ST ,PK15及IBRS2三种细胞增殖特性的研究 ,以及不同培养条件对其繁殖滴度的影响。结果表明 ,在静置培养条件下 ,用含 15 %FBS的生长液进行细胞传代 ,对ST ,PK15及IBRS2三种细胞生长以及接毒后对CPE判定都起到良好效果。但在旋转条件下培养细胞 ,用 10 %的FBS生长液即可使三种细胞生长良好 ,用ST细胞增殖病毒的滴度明显高于其他两种细胞。旋转培养条件下增殖病毒始终比静置培养繁殖病毒的滴度高 ,在维持液中加入胰酶未见有病毒滴度的明显提高。

猪传染性胃肠炎病毒TH-98株HP基因的克隆与序列分析

hp基因位于猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)基因组的3′端,该基因在病毒复制时表达编码一个78AA、9100的疏水蛋白。该蛋白可以与猪超免抗TGEV血清发生免疫沉淀反应。目前,对其功能的研究还不是十分清楚。但就其在细胞内的位置而言,hp蛋白可能对复制复合体膜的缔合以及病毒粒子的装配起重要作用。根据Genebank已发表的TGEVhp基因cDNA序列,利用Oligo4.1软件设计一对引物,进行RT-PCR扩增hp基因。将PCR产物用KpnI和XbaI酶切后克隆到载体pPROEXHTc的KpnI和XbaI多克隆位点上。然后对重组质粒进行相应的酶切鉴定和PCR鉴定。将重组子测序并且与其国外分离株进行同源性比较。结果表明,hp基因克隆成功是可信的。本研究为进一步研究TGEV的基因组及其非结构蛋白奠定了重要基础。

猪传染性胃肠炎病毒TH-98株M基因的克隆及序列分析

本研究首次扩增出 TGEV 国内分离株 TH-98 株 M 基因 (882 bp),将该片段克隆到 pMD 18-T载体上,经限制性内切酶鉴定 M 基因正确插入 pMD 18-T 载体上,命名为 pMD 18-T-THM。序列测定和分析表明,该片段的核苷酸序列与国外发表的猪传染性胃肠炎病毒 TO14 株、Purdue15 株、TFI 株、96-133 株M 基因同源性达到 98%以上,氨基酸序列同源性高达 97%以上,表明不同来源毒株 M 基因保守性较高。