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SIRT2在结肠癌微环境CD4^(+)T细胞向Th17细胞分化中的作用及对HIF-1α的影响
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作者 蒋斌 谢兴旺 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期2196-2200,2206,共6页
目的:探讨沉默信息调节因子2(SIRT2)过表达在结肠癌微环境CD4^(+)T细胞向Th17细胞分化中的作用及对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响。方法:小鼠结肠癌细胞CT26过表达SIRT2,构建稳定SIRT2过表达的CT26细胞株(CT26/SIRT2),qRT-PCR、Weste... 目的:探讨沉默信息调节因子2(SIRT2)过表达在结肠癌微环境CD4^(+)T细胞向Th17细胞分化中的作用及对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响。方法:小鼠结肠癌细胞CT26过表达SIRT2,构建稳定SIRT2过表达的CT26细胞株(CT26/SIRT2),qRT-PCR、Western blot检测SIRT2、HIF-1α水平;CCK-8验证SIRT2过表达对CT26细胞增殖能力的影响;24只健康C57BL/6小鼠随机分为CT26组、CT26/SIRT2组,分别接种CT26细胞、CT26/SIRT2细胞,28 d后处死小鼠,Ki67染色、TUNEL染色分别观察小鼠肿瘤组织细胞增殖与凋亡,并测定组织匀浆上清液中IL-17、IL-6水平;利用流式细胞术分离Th17细胞,qRT-PCR、Western blot检测Th17细胞中SIRT2、HIF-1α水平。结果:与CT26细胞相比,CT26/SIRT2细胞SIRT2 mRNA、蛋白水平升高,HIF-1αmRNA与蛋白水平降低(P<0.05);CT26、CT26/SIRT2细胞的增殖抑制率差异无统计学意义(P>0.05);与CT26小鼠相比,CT26/SIRT2小鼠剥离瘤体体积与重量、Ki67阳性表达,小鼠肿瘤组织Th17细胞比例、组织匀浆上清液中IL-17、IL-6水平、Th17细胞HIF-1αmRNA与蛋白水平均降低(P<0.05);肿瘤组织细胞凋亡率、Th17细胞SIRT2 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。结论:SIRT2可抑制结肠癌微环境CD4^(+)T细胞向Th17细胞分化,并下调HIF-1α表达。 展开更多
关键词 沉默信息调节因子2 缺氧诱导因子-1Α 结肠癌 th17细胞分化
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强直性脊柱炎患者H3K27me3表达水平及其调控Th17细胞分化的表观遗传机制
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作者 程明 贾龙 +3 位作者 薛志远 杨涛 周雪 赵冠兰 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期744-748,共5页
目的 探讨强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)中组蛋白H3K27me3甲基化及其调节酶JMJD3和EZH2在Th17细胞分化中的作用,以揭示其在AS发病机制中的潜在作用。通过分析H3K27me3的甲基化状态及其与Th17相关因子之间的相互作用,为AS的... 目的 探讨强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)中组蛋白H3K27me3甲基化及其调节酶JMJD3和EZH2在Th17细胞分化中的作用,以揭示其在AS发病机制中的潜在作用。通过分析H3K27me3的甲基化状态及其与Th17相关因子之间的相互作用,为AS的临床治疗提供新的策略和靶点。方法 采集84名AS的患者(活跃期、稳定期各42例)和84名健康志愿者(对照组)血液样本,ELISA检测Th17细胞及相关细胞因子(IL-21、IL-22和IL-17),RT-PCR分析Th分化关键信号通路RORc、JAK2、STAT3基因的表达,蛋白质印迹法检测RORc、JAK2/STAT3通路蛋白、H3K27me3及相关蛋白酶EZH2、JMJD3的表达。对活动期AS患者H3K27me3、EZH2、JMJD3与Th分化关键信号通路分子的关联性进行Pearson相关分析。结果 RORc、JAK2、STAT3 mRNA表达,活动期组>稳定期组,差异有统计学意义(P<0.05)。H3K27me3、EZH2的表达量,活动期组<稳定期组<对照组,差异有统计学意义(P<0.05);JMJD3、RORc、JAK2、pJAK2、STAT3、pSTAT3的表达量,活动期组>稳定期组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。活动期组Th17比例及其炎性因子的表达水平高于其他两组(P<0.05)。H3K27me3与RORc、JAK2、STAT3、IL-17负相关,JMJD3与JAK2、STAT3、IL-17正相关,而EZH2与JAK2、STAT3、IL-17负相关(P<0.05)。结论 AS中H3K27me3的低表达受到基因位点JMJD3和EZH2的影响,可以调节Th17细胞的分化,从而在AS的发病和进展中发挥作用。 展开更多
关键词 强直性脊柱炎 H3K27me3 th17细胞分化 表观遗传调控
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IL-22诱导类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞分泌 IL-6促进 Th17细胞分化的研究 被引量:11
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作者 彭桉平 卢欣沂 +4 位作者 何敏 林海标 张成 刘瑞萍 庄俊华 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期541-545,共5页
目的:探讨白细胞介素-22(IL-22)刺激类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASF)产生白细胞介素-6(IL-6)的水平,及间接调控IL-17+CD4+T(Th17)细胞分化的能力。方法分离RASF 6例,建立体外培养体系,IL-22刺激RASF,qRT-PCR及ELISA检... 目的:探讨白细胞介素-22(IL-22)刺激类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASF)产生白细胞介素-6(IL-6)的水平,及间接调控IL-17+CD4+T(Th17)细胞分化的能力。方法分离RASF 6例,建立体外培养体系,IL-22刺激RASF,qRT-PCR及ELISA检测IL-6的表达;IL-22R1封闭抗体及抑制剂实验检测IL-6产生所涉及的特异性受体及其下游信号通路;建立RASF与健康志愿者CD4+T细胞共培养体系和Transwell 体系,流式细胞术检测体系中各组 Th17细胞比例。结果 IL-22刺激RASF呈时间和剂量依赖性产生IL-6(P<0.05),且IL-6产生依赖于IL-22R1及其下游的p38和JAK2通路(P<0.05);共培养体系和Transwell体系中发现IL-22预刺激RASF组较未刺激组Th17细胞比例增加,阻断IL-22R1或IL-6均能降低Th17细胞比例。结论 IL-22刺激RASF产生IL-6,进而促进Th17细胞分化,中和IL-22是RA治疗的有效策略。 展开更多
关键词 IL-22 th17细胞分化 IL-6 滑膜成纤维细胞 类风湿关节炎
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过表达miR-498通过下调STAT3抑制类风湿性关节炎患者Th17细胞分化 被引量:7
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作者 项海燕 潘峰 +5 位作者 鄢巨振 洪理泉 张腊红 刘玉华 冯晓 蔡成松 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期167-174,共8页
本文旨在探讨微小RNA-498(miR-498)影响类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中Th17细胞分化的作用机制。从50例RA患者和50例对照人群中分别收集外周血,分离PBMCs。... 本文旨在探讨微小RNA-498(miR-498)影响类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中Th17细胞分化的作用机制。从50例RA患者和50例对照人群中分别收集外周血,分离PBMCs。流式细胞术检测CD4^+IL-17^+T(Th17)细胞或者CD4^+FOXP3^+T(Treg)细胞比例,并分析Th17/Treg比值。Real-time PCR检测细胞中miR-498和STAT3基因表达,Western blot检测STAT3的蛋白表达,ELISA检测外周血血清或细胞上清中IL-17的浓度。荧光素酶报告基因实验验证miR-498靶向结合STAT3的3’非翻译(3’untranslated region,3’UTR)。miR-498 mimic或/和pc DNA-STAT3瞬时转染CD4^+T细胞,进一步考察miR-498影响Th17细胞分化的机制。结果显示,RA患者的PBMCs中,Th17细胞比例显著高于对照,且Th17/Treg比值也显著高于对照(P<0.05)。miR-498低表达而STAT3高表达于RA患者的PBMCs中,且RA患者血清中的IL-17浓度显著高于对照(P<0.05)。在转染野生型STAT3报告基因质粒的细胞中转染miR-498 mimic/inhibitor后,荧光酶活性、STAT3的基因和蛋白表达均明显改变(P<0.05),但是在转染突变型STAT3报告基因质粒的细胞中转染miR-498 mimic/inhibitor,上述指标没有显著变化(P>0.05)。此外,miR-498 mimic转染CD4^+T细胞后,显著降低Th17细胞比例,且细胞分泌IL-17的水平减少(P<0.05),而与pcDNA-STAT3共转CD4^+T细胞后,Th17细胞比例明显提高,细胞分泌IL-17的水平增加(P<0.05)。以上结果提示,在RA患者CD4^+T细胞中,过表达miR-498靶向下调STAT3,进而抑制Th17细胞分化。 展开更多
关键词 微小RNA-498 STAT3 th17细胞分化 类风湿性关节炎
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整合素aV亚基在类风湿性关节炎中的表达及其与Th17细胞分化的关系
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作者 高锦 项海燕 +2 位作者 鄢巨振 张腊红 潘峰 《中国卫生检验杂志》 CAS 2019年第7期772-774,共3页
目的研究类风湿性关节炎(RA)患者整合素aV亚基的表达,分析其与辅助性T细胞17(Th17)分化的关系。方法选取30例类风湿性关节炎患者(RA组)、20名健康体检者作为对照组,运用流式细胞术(FCM)检测外周血PBMCs中Th17细胞和调节性T细胞比例以及P... 目的研究类风湿性关节炎(RA)患者整合素aV亚基的表达,分析其与辅助性T细胞17(Th17)分化的关系。方法选取30例类风湿性关节炎患者(RA组)、20名健康体检者作为对照组,运用流式细胞术(FCM)检测外周血PBMCs中Th17细胞和调节性T细胞比例以及PBMCs和树突状细胞DCs中表达整合素aV亚基的CD11c^+αν^+DC比例。结果与对照组相比,RA组Th17/Treg细胞比值显著升高(P<0.05);RA患者外周血及DCs中CD11c^+αν^+DC细胞在CD11c^+DC中占比均高于对照组(P<0.05);Spearman相关性分析发现RA患者中树突状细胞整合素aV亚基的表达与Th17/Treg细胞比值呈正相关(r=0.478,P<0.05)。结论整合素aV亚基可能参与类风湿性关节炎患者Th17细胞分化的调控。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 整合素aV th17细胞分化
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中医药干预类风湿关节炎Th17/Treg平衡的研究进展 被引量:4
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作者 李平顺 周孟茹 +1 位作者 王钢 朱琴 《中国医药导刊》 2019年第7期421-425,共5页
类风湿关节炎(RA)是一种以慢性滑膜炎为特征的自身免疫性疾病,目前发病机制尚不明确。随着对RA研究的深入,学者发现调节性T细胞(Treg)和辅助性T细胞(Th,主要是Th17细胞)免疫调节异常是其发病机制研究的热点,Th17细胞主要分泌IL-17,介导... 类风湿关节炎(RA)是一种以慢性滑膜炎为特征的自身免疫性疾病,目前发病机制尚不明确。随着对RA研究的深入,学者发现调节性T细胞(Treg)和辅助性T细胞(Th,主要是Th17细胞)免疫调节异常是其发病机制研究的热点,Th17细胞主要分泌IL-17,介导炎症反应过程,是RA发病机制中的主要效应细胞;Treg细胞作为具有独特调节作用的免疫抑制细胞,主要通过分泌TGF-β、IL-10等发挥作用。两种细胞的分化发育相互制约,Th17细胞的增多,Treg细胞的减少,可导致Th17/Treg平衡失调,而出现滑膜炎症、关节破坏、骨侵蚀等,加剧RA的发生、发展。近年来,中医药针对Th17/Treg失衡的治疗发现,阻止Th17对RA的致病作用,提高Treg细胞对RA的保护作用,调节Th17/Treg的平衡成为治疗RA的新途径。本文拟就Th17、Treg细胞分化、平衡关系以及中医药对Th17/Treg失衡的干预进行综述,以期为RA的机制研究和临床防治提供新思路。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 th17/Treg细胞分化 th17/Treg平衡 中医药
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构建反转录病毒小向导RNA表达载体用于小鼠T细胞基因功能研究 被引量:1
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作者 赵艳娜 邱荣 +1 位作者 沈南 唐元家 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1585-1590,共6页
目的·构建反转录病毒小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)表达载体,用于小鼠T细胞分化调控及其基因功能的研究。方法·表达短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的反转录病毒载体(MSCV-LTR-miR30-PIG,LMP)经过Xho1和Sal1双酶切后... 目的·构建反转录病毒小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)表达载体,用于小鼠T细胞分化调控及其基因功能的研究。方法·表达短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的反转录病毒载体(MSCV-LTR-miR30-PIG,LMP)经过Xho1和Sal1双酶切后,回收得到反转录病毒载体骨架。以慢病毒sgRNA表达载体为模版,通过PCR扩增获得U6-sgRNA-PGK-Puro-BFP片段。利用同源重组将U6-sgRNA-PGK-Puro-BFP片段组装进反转录病毒载体骨架。为了验证系统的有效性,设计靶向Il17a、Rorc和Irf4的sgRNA序列并进行克隆。分离Cas9转基因小鼠CD4 T细胞分别进行sgRNA反转录病毒感染,诱导其向Th17细胞分化。细胞因子染色,流式检测Il17a阳性细胞比例。2组独立样本数据比较采用非配对t检验。结果·①成功构建反转录病毒sgRNA载体。②利用反转录病毒载体向小鼠CD4 T细胞递送sgRNA并实现Il17a基因敲除。③Rorc-sgRNA和Irf4-sgRNA阳性群体中,Il17a阳性群体比率显著降低(P<0.05)。结论·利用sgRNA反转录病毒载体成功向目的细胞递送sgRNA并实现基因敲除。Rorc和Irf4基因敲除结果提示该系统可用于小鼠T细胞基因功能研究。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 Cas9转基因小鼠 反转录病毒载体 th17细胞分化
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Network Biological Modeling:A Novel Approach to Interpret the Traditional Chinese Medicine Theory of Exterior-Interior Correlation Between the Lung and Large Intestine 被引量:2
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作者 CHEN Wen-Lu HONG Jia-Na +5 位作者 ZHANG Xin-Ning EMMANUEL Ibarra-Estrada WAN Li-Sheng LI Sha-Sha YAN Shi-Kai XIAO Xue 《Digital Chinese Medicine》 2020年第4期249-259,共11页
Objective To study the common pathogenesis of pneumonia and colitis using modern biological network analysis tools,and to explore the theory that the lung and large intestine are exteriorly and interiorly related.Meth... Objective To study the common pathogenesis of pneumonia and colitis using modern biological network analysis tools,and to explore the theory that the lung and large intestine are exteriorly and interiorly related.Methods The relevant target genes(hereinafter,“targets”)of pneumonia and colitis were separately queried on the GeneCards database.The main targets of the two diseases were then screened out according to their correlation scores and intersected to obtain those common to the two diseases.Metascape was used to analyze the main and common targets identified,and the Database for Annotation,Visualization and Integrated Discovery(DAVID)was used to enrich and analyze the common targets.Cytoscape 3.7.2 software was used to build the network diagram.Results In total,54 targets,such as TNF,IL-10,IL-6,IL-2,IL-4,TLR4,TLR2,CXCL8,IL-17A and IFNG,etc.,are common to pneumonia and colitis,which are mainly enriched in these processes such as cytokine–cytokine receptor interaction,the Tcell receptor signaling pathway,the Toll-like receptor signaling pathway and the Jak-STAT signaling pathway.The Metascape modular analysis identified 11 modules for pneumonia,six modules for colitis,and two modules for the common targets.Conclusions Pneumonia and colitis have the same pathogenic targets and mechanisms of action and finally interact with each other through inflammatory reactions and immune responses.This provides a probable molecular mechanism that explains the theory that the lung and large intestine are exteriorly and interiorly related. 展开更多
关键词 theory of the exterior-interior relationship between the lung and large intestine PNEUMONIA COLITIS Network pharmacology th17 cell differentiation Inflammatory reactions Immune responses
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