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极端嗜热菌Thermus thermophilus HB8中天冬氨酸转氨酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质研究 被引量:3
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作者 周华 洪媛 +1 位作者 严明 许琳 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期278-283,共6页
为获得具有热稳定性的天冬氨酸转氨酶,从极端嗜热细菌Thermus thermophilus HB8中克隆得到天冬氨酸转氨酶基因aspC,并在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中进行表达,发现在Rosetta(DE3)中具有较高的表达量。重组酶的最适反应pH是7.0,37... 为获得具有热稳定性的天冬氨酸转氨酶,从极端嗜热细菌Thermus thermophilus HB8中克隆得到天冬氨酸转氨酶基因aspC,并在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中进行表达,发现在Rosetta(DE3)中具有较高的表达量。重组酶的最适反应pH是7.0,37℃下在pH8~10的缓冲液中保温1h酶活几乎不改变。重组酶反应的最适温度为75℃,酶活稳定的温度范围为25~55℃。重组酶在65℃时半衰期为3.5h,75℃时为2.5h。重组酶的KmKG为7.559mmol/L,VmaxKG为0.086mmol/(L·min),KmAsp为2.031mmol/L,VmaxAsp为0·024mmol/(L·min)。Ca2+、Fe3+、Mn2+等金属离子对酶活性有微弱抑制作用。 展开更多
关键词 天冬氨酸转氨酶 thermus THERMOPHILUS HB8 表达 纯化 酶学性质
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Thermus thermophilus HB8葡萄糖异构酶在大肠杆菌中表达 被引量:1
2
作者 丁莉 许伟 +1 位作者 严明 许琳 《生物加工过程》 CAS CSCD 2006年第2期42-45,共4页
为了增加高热稳定性的葡萄糖异构酶的得率,采用PCR技术扩增得到Thermus thermophilusHB8葡萄糖异构酶基因xylA,连接到表达载体pET-22b(+)上,获得重组质粒pET-22b(+)-xylA。将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导后,通过半... 为了增加高热稳定性的葡萄糖异构酶的得率,采用PCR技术扩增得到Thermus thermophilusHB8葡萄糖异构酶基因xylA,连接到表达载体pET-22b(+)上,获得重组质粒pET-22b(+)-xylA。将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导后,通过半胱氨酸-咔唑法测葡萄糖异构酶酶活。重组菌经诱导培养,SDS-PAGE电泳结果显示出明显的分子量约为44 kD特异性蛋白质条带,比酶活约为18.562 U/mg,比野生型菌株提高了2倍。 展开更多
关键词 thermus THERMOPHILUS xylA基因 葡萄糖异构酶 克隆 表达
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极端嗜热菌Thermus thermophilus HB27中天冬氨酸激酶在大肠杆菌中表达、纯化及酶学性质研究 被引量:2
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作者 李敬坡 韩宏岩 +3 位作者 夏勇 孟凡国 蔡平 许维岸 《山东农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2009年第4期479-483,488,共6页
为获得具有热稳定性的天冬氨酸激酶,从极端嗜热菌Thermus therm ophilus HB27基因组中扩增出天冬氨酸激酶(AK)基因,构建重组质粒,并在Escherichia coliBL21(DE3)中进行表达,得到了较高的表达量。经热处理纯化后测定重组天冬氨酸激酶(tAK... 为获得具有热稳定性的天冬氨酸激酶,从极端嗜热菌Thermus therm ophilus HB27基因组中扩增出天冬氨酸激酶(AK)基因,构建重组质粒,并在Escherichia coliBL21(DE3)中进行表达,得到了较高的表达量。经热处理纯化后测定重组天冬氨酸激酶(tAK)的最适pH为7.5,最适反应温度为80℃,80℃半衰期是18 h。酶动力学分析表明tAK的KmATP为0.23 mmol/L,Vm axATP为840.34 nmol/(L.m in),KmAsp为0.95 mmol/L,Vm axAsp为190.76 nmol/(L.m in)。赖氨酸和甲硫氨酸对tAK活性没有抑制作用,当苏氨酸浓度大于0.5 mmol/L时,对tAK活性有明显抑制作用,并且抑制作用与苏氨酸呈现浓度依赖性。 展开更多
关键词 天冬氨酸激酶 thermus THERMOPHILUS HB27 表达 纯化 酶学性质
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极端嗜热菌Thermus thermophilus HB27中腺苷酸激酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质研究 被引量:1
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作者 谭志文 刘俊 +2 位作者 张学芳 孟凡国 张耀洲 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期1-6,共6页
目的克隆Thermus thermophilus HB27隆腺苷酸激酶基因并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达并获得了比较高的表达量并对其酶学性质进行分析。方法利用PCR技术从Thermus thermophilus HB27基因组中扩增得到腺苷酸激酶的基因片段,将其克隆到pE... 目的克隆Thermus thermophilus HB27隆腺苷酸激酶基因并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达并获得了比较高的表达量并对其酶学性质进行分析。方法利用PCR技术从Thermus thermophilus HB27基因组中扩增得到腺苷酸激酶的基因片段,将其克隆到pET-28a表达载体上,以PCR\酶切和测序进行鉴定。利用光谱分析测定该重组酶的相关酶学性质。结果成功克隆和高效表达了腺苷酸激酶;重组酶的最适pH是8.5,最适温度是90℃。重组酶对底物ADP的米氏常数Km是68.6μmol/L,VmaxADP为0.294mmol/(L-1·min-1)。将该重组酶在70、80、90、100℃下分别作用7h后,发现仍具有酶活性,显示出高的温度耐受性。腺苷酸激酶的特异性抑制剂AP5A浓度为2.0mmol/L能够抑制重组腺苷酸激酶70%的酶活性,AP5A对重组腺苷酸激酶的抑制类型为竞争性抑制,其抑制常数为46.39μmol/L。结论成功克隆、表达重组腺苷酸激酶,为腺苷酸激酶的进一步应用奠定了基础。 展开更多
关键词 腺苷酸激酶 thermus THERMOPHILUS HB27 酶学性质
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重组Thermus thermophilus DNA聚合酶表达纯化及其在RT-PCR中的应用 被引量:2
5
作者 王峤 相世和 +2 位作者 母凯萍 母敬郁 王恩思 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期362-364,共3页
目的研究重组ThermusthermophilusDNA聚合酶的表达、纯化和应用。方法提取Thermusthermophilushb8基因组DNA作为模板,PCR扩增TthDNA聚合酶基因后,克隆至pET28a表达载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,用His-BindQuickCartridg... 目的研究重组ThermusthermophilusDNA聚合酶的表达、纯化和应用。方法提取Thermusthermophilushb8基因组DNA作为模板,PCR扩增TthDNA聚合酶基因后,克隆至pET28a表达载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,用His-BindQuickCartridge300纯化重组TthDNA聚合酶His-tag融合蛋白。提取Thermomonosporafusca总RNA,用一管法RT-PCR扩增E2cd基因,检测重组TthDNA聚合酶RT-PCR活性。结果大肠杆菌表达TthDNA聚合酶,分离出的电泳纯重组TthDNA聚合酶His-tag融合蛋白相对分子质量为94000,表达产量为200000U/L。一管法RT-PCR可扩增出850bp长度的E2cd基因。结论重组TthDNA聚合酶已成功地表达和纯化,并用于RT-PCR。 展开更多
关键词 thermus THERMOPHILUS DNA聚合酶 RT—PCR
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嗜热菌Thermus thermophilus HB8铁硫簇合成途径中IscA和IscU蛋白的表达、纯化和功能研究
6
作者 吴琦 谭菲 刘晓晴 《首都师范大学学报(自然科学版)》 2014年第2期49-56,共8页
Fe-S簇可参与电子传递和基因调节等过程.实验以嗜热菌Thermus thermophilus HB8基因组为模板,通过PCR扩增获得Fe-S簇ISC系统生物合成途径中的IscA和IscU基因,并克隆连接到表达载体pET-28a(+)上.重组质粒转化E.coli Rosetta(DE3)进行表达... Fe-S簇可参与电子传递和基因调节等过程.实验以嗜热菌Thermus thermophilus HB8基因组为模板,通过PCR扩增获得Fe-S簇ISC系统生物合成途径中的IscA和IscU基因,并克隆连接到表达载体pET-28a(+)上.重组质粒转化E.coli Rosetta(DE3)进行表达,用亲和层析纯化得到浓度和纯度都较高的IscA和IscU蛋白.SDS-PAGE分析,证实其分子量大小分别为13.7KD和14.8KD.实验确定IscA是单聚体,IscA上能形成铁硫簇,IscU上不能形成铁硫簇.在厌氧条件下,RNA的量能提高1.5倍,但是IscA和IscU的表达量都会降低,说明厌氧对这两个基因有损伤. 展开更多
关键词 嗜热菌thermus THERMOPHILUS HB8 克隆 体外重组.
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滇西二高温温泉中Thermus高温菌的16S rRNA 被引量:4
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作者 郭春雷 王涛 +5 位作者 祝伟 柴丽红 张东华 崔晓龙 徐丽华 彭谦 《云南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2003年第5期458-462,共5页
通过对滇西二温泉纯培养和免培养法获得的Thermus菌株序列进行16SrDNA系统发育及16SrRNA二级结构比较,发现二温泉中至少存在Thermus属的2个潜在新种,它们在系统发育树上形成1个独立的地理簇群分支,它们的16SrRNAhelix10二级结构也与其... 通过对滇西二温泉纯培养和免培养法获得的Thermus菌株序列进行16SrDNA系统发育及16SrRNA二级结构比较,发现二温泉中至少存在Thermus属的2个潜在新种,它们在系统发育树上形成1个独立的地理簇群分支,它们的16SrRNAhelix10二级结构也与其它地区的Thermus属菌株不同,形成明显的地域进化特征. 展开更多
关键词 滇西地区 高温温泉 thermus菌株 高温菌 16SrRNA 序列分析 系统发育 二级结构 地域进化特征
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菌株Thermus sp.TibetanG7对铯的吸附:热泉铯硅华形成过程中生物成矿作用的征兆 被引量:2
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作者 王海雷 郑绵平 黄晓星 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第17期2043-2048,共6页
从西藏温泉中分离出了一株菌株Thermus sp.TibetanG7,检验了它对铯的吸附能力.同时模拟了热泉中的环境条件,检测了钠、钾离子和不同的钾离子培养条件对吸附的影响,以探讨菌株Thermus sp.TibetanG7在铯硅华形成过程可能起的作用.结果显示... 从西藏温泉中分离出了一株菌株Thermus sp.TibetanG7,检验了它对铯的吸附能力.同时模拟了热泉中的环境条件,检测了钠、钾离子和不同的钾离子培养条件对吸附的影响,以探讨菌株Thermus sp.TibetanG7在铯硅华形成过程可能起的作用.结果显示:尽管钠和钾离子都对菌株吸附铯有一定的影响,但是菌株仍然显示了一定的吸附铯的能力,在钠和钾抑制试验中的单位吸附量分别达到了53.49和40.41μmol铯/克干重菌体.菌株能较快的吸附铯,在5min时间内完成了总吸附量的40%~50%.同时还发现,钾离子缺失体系培养的菌体能吸附更多的铯.菌株Thermus sp.TibetanG7在热泉中对铯的聚集起了重要的作用.最后探讨了菌株在铯硅华形成过程中的作用,提出了铯硅华成矿的物理化学和生物成矿模式. 展开更多
关键词 铯硅华 thermus sp.TibetanG7 吸附 成矿模式
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The effects of K^+ growth conditions on the accumulation of cesium by the bacterium Thermus sp. TibetanG6 被引量:3
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作者 WANG Hailei1,2,3, KONG Fanjing1,2,3 & ZHENG Mianping1,2,3 1. R&D Center for Saline Lake and Epithermal Deposits, Chinese Academy of Geological Sciences, Beijing 100037, China 2. Key Open Laboratory of Saline Lake Resources and Environment, Chinese Academy of Geological Sciences, Beijing 100037, China 3. Institute of Mineral Resources, Chinese Academy of Geological Sciences, Beijing 100037, China 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2006年第2期123-129,共7页
The accumulation of cesium by the bacterium Thermus sp. TibetanG6 was examined under different K+ growth conditions. The effects of external pH and Na+ on the accumulation of ce-sium were also studied, and the mechani... The accumulation of cesium by the bacterium Thermus sp. TibetanG6 was examined under different K+ growth conditions. The effects of external pH and Na+ on the accumulation of ce-sium were also studied, and the mechanism involved was discussed. K+ regimes played an important role in the accumulation of cesium by the strain TibetanG6. The quantity of cesium accumulated (24 h) was much higher in K+-deficient regime than that in K+-sufficient regime. The pH and Na+ had different effects on the accumulation of cesium in the two K+ regimes. IR spectra analyses indicated that the biosorption is a process of homeostasis with cesium initially accumulated on the cell wall. 展开更多
关键词 thermus sp. TibetanG6 cesium bioaccumulation K+-growth condition pH sodium IR spectroscopy.
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High-efficiency genome editing of an extreme thermophile Thermus thermophilus using endogenous type I and type III CRISPR-Cas systems 被引量:1
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作者 Jinting Wang Junwei Wei +1 位作者 Haijuan Li Yingjun Li 《mLife》 2022年第4期412-427,共16页
Thermus thermophilus is an attractive species in the bioindustry due to its valuable natural products,abundant thermophilic enzymes,and promising fermentation capacities.However,efficient and versatile genome editing ... Thermus thermophilus is an attractive species in the bioindustry due to its valuable natural products,abundant thermophilic enzymes,and promising fermentation capacities.However,efficient and versatile genome editing tools are not available for this species.In this study,we developed an efficient genome editing tool for T.thermophilus HB27 based on its endogenous type IB,I-C,and III-A/B CRISPR-Cas systems.First,we systematically characterized the DNA interference capabilities of the different types of the native CRISPR-Cas systems in T.thermophilus HB27.We found that genomic manipulations such as gene deletion,mutation,and in situ tagging could be easily implemented by a series of genome-editing plasmids carrying an artificial self-targeting mini-CRISPR and a donor DNA responsible for the recombinant recovery.We also compared the genome editing efficiency of different CRISPR-Cas systems and the editing plasmids with donor DNAs of different lengths.Additionally,we developed a reporter gene system for T.thermophilus based on a heat-stableβ-galactosidase gene TTP0042,and constructed an engineered strain with a high production capacity of superoxide dismutases by genome modification. 展开更多
关键词 endogenous CRISPR-Cas system genome editing reporter gene SOD production thermus thermophilus
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Comparative genomic analysis of Thermus provides insights into the evolutionary history of an incomplete denitrification pathway 被引量:2
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作者 Jian-Yu Jiao Zheng-Han Lian +9 位作者 Meng-Meng Li Nimaichand Salam En-Min Zhou Lan Liu Hong Ming Guoxing Nie Wensheng Shu Guoping Zhao Brian P.Hedlund Wen-Jun Li 《mLife》 2022年第2期198-209,共12页
Biological denitrification is a crucial process in the nitrogen biogeochemical cycle,and Thermus has been reported to be a significant heterotrophic denitrifier in terrestrial geothermal environments.However,neither t... Biological denitrification is a crucial process in the nitrogen biogeochemical cycle,and Thermus has been reported to be a significant heterotrophic denitrifier in terrestrial geothermal environments.However,neither the denitrification potential nor the evolutionary history of denitrification genes in the genus Thermus or phylum Deinococcota is well understood.Here,we performed a comparative analysis of 23 Thermus genomes and identified denitrification genes in 15 Thermus strains.We confirmed that Thermus harbors an incomplete denitrification pathway as none of the strains contain the nosZ gene.Ancestral character state reconstructions and phylogenetic analyses showed that narG,nirS,and norB genes were acquired by the last common ancestor of Thermales and were inherited vertically.In contrast,nirK of Thermales was acquired via two distinct horizontal gene transfers from Proteobacteria to the genus Caldithermus and from an unknown donor to the common ancestor of all known Thermus species except Thermus filiformis.This study expands our understanding of the genomic potential for incomplete denitrification in Thermus,revealing a largely vertical evolutionary history of the denitrification pathway in the Thermaceae,and supporting the important role for Thermus as an important heterotrophic denitrifier in geothermal environments. 展开更多
关键词 comparative genomics DENITRIFICATION evolutionary history thermus
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耐高温葡萄糖异构酶重组菌发酵与转化条件研究 被引量:2
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作者 贾东旭 周霖 +6 位作者 王腾 於淳安 廖承军 陈德水 王红艳 廖小颖 金利群 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期13-19,共7页
耐高温的葡萄糖异构酶(glucose isomerase,GI)在高温下可将D-葡萄糖异构化为D-果糖,获得的高果糖浆可作为甜味剂应用于食品诸多领域。对Thermus oshimai GI重组菌发酵产酶条件和全细胞转化D-葡萄糖生成D-果糖工艺进行研究。确定诱导温... 耐高温的葡萄糖异构酶(glucose isomerase,GI)在高温下可将D-葡萄糖异构化为D-果糖,获得的高果糖浆可作为甜味剂应用于食品诸多领域。对Thermus oshimai GI重组菌发酵产酶条件和全细胞转化D-葡萄糖生成D-果糖工艺进行研究。确定诱导温度28℃,诱导剂终浓度0.1 mmol/L,发酵培养基添加5 mmol/L Mn^(2+)的最优产酶发酵条件;将最优转化体系放大,包括20 g/L湿菌体、10 mmol/L Mn^(2+)和200 g/L底物,于95℃和pH 7.5条件下生物转化4 h,D-果糖得率高达57.34%。该工艺具备一步法生产F55型高果糖浆的可能性,可简化后续浓缩分离等步骤,为进一步使用食品安全的表达系统生产F55型高果糖浆提供理论依据。 展开更多
关键词 thermus oshimai葡萄糖异构酶 工程菌E.coli BL21(DE3)/pET28b/ToGI D-葡萄糖 D-果糖 细胞催化 转化
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耐高温葡萄糖异构酶的全细胞固定化条件研究 被引量:1
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作者 贾东旭 王腾 +4 位作者 孙嘉诚 金利群 廖承军 陈德水 王红艳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期8-15,共8页
对三羟甲基磷交联Thermus oshimai葡萄糖异构酶重组菌的固定化工艺进行研究。确定所用硅藻土载体粒径36.8μm、聚凝剂聚乙烯亚胺分子质量为70 000 Da、交联剂合成前体为四羟甲基硫酸磷;运用最优的固定化条件:0.3 g硅藻土、5 mmol/L Mn^(... 对三羟甲基磷交联Thermus oshimai葡萄糖异构酶重组菌的固定化工艺进行研究。确定所用硅藻土载体粒径36.8μm、聚凝剂聚乙烯亚胺分子质量为70 000 Da、交联剂合成前体为四羟甲基硫酸磷;运用最优的固定化条件:0.3 g硅藻土、5 mmol/L Mn^(2+)、0.12%(体积分数)聚乙烯亚胺絮凝1 h、1.5%(体积分数)三羟甲基硫酸磷交联1.5 h,所制备的固定化细胞酶活可达138.4 U/g。应用该催化剂于85℃和1 100 mmol/L D-葡萄糖底物条件下连续催化10批次,催化剂仍保留91%以上酶活,D-果糖转化率始终维持在51.7%以上。该工艺可以连续生产高果糖浓度高果糖浆,有效简化后续分离提取工艺,为进一步使用符合食品工业要求的表达系统连续制备高果糖浆奠定基础。 展开更多
关键词 thermus oshimai葡萄糖异构酶 工程菌Escherichia COLI BL21(DE3)/pET28b/ToGI 交联固定化 三羟甲基磷 高温异构化反应
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深海嗜热菌超氧化物歧化酶基因耐盐性研究
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作者 陈全战 张边江 +1 位作者 王立科 胡德龙 《湖北农业科学》 2015年第19期4766-4770,共5页
为探究深海嗜热菌(Thermophile thermus)中铁离子超氧化物歧化酶Fe-SOD基因(Tt SOD)与植物耐盐性的关系,对该基因的全长序列进行了分析,构建了Tt SOD基因过量表达载体,并将该过量表达载体成功转化烟草中,获得转基因植株。结果表明,该基... 为探究深海嗜热菌(Thermophile thermus)中铁离子超氧化物歧化酶Fe-SOD基因(Tt SOD)与植物耐盐性的关系,对该基因的全长序列进行了分析,构建了Tt SOD基因过量表达载体,并将该过量表达载体成功转化烟草中,获得转基因植株。结果表明,该基因全长615 bp,是典型的Fe-SOD。转Tt SOD基因烟草中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性显著提高,而丙二醛(MDA)含量显著降低;转基因烟草的种子萌发率、叶绿素和类胡萝卜素含量显著提高。本研究的结果表明植物过表达Tt SOD基因,提高了转基因烟草耐盐能力,为选育作物耐盐性新品种提供技术参考。 展开更多
关键词 深海嗜热菌(Thermophile thermus) 超氧化物歧化酶(SOD) 耐盐性 转基因烟草
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微生物对绿脱石中有机质利用的研究 被引量:5
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作者 汪丹 董海良 《矿物岩石地球化学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期301-309,共9页
为了探索黏土矿物中含有的有机质能否被微生物利用以及微生物利用的效率,本文选取富三价铁的黏土矿物绿脱石NAu-2为还原对象,嗜热菌Thermus scotoductus SA-01,以及常温菌Shewanella putrefaciens CN-32为异化铁还原菌,分别在没有外加... 为了探索黏土矿物中含有的有机质能否被微生物利用以及微生物利用的效率,本文选取富三价铁的黏土矿物绿脱石NAu-2为还原对象,嗜热菌Thermus scotoductus SA-01,以及常温菌Shewanella putrefaciens CN-32为异化铁还原菌,分别在没有外加碳源的情况下对NAu-2结构铁进行还原。实验选取化学方法来测试Fe3+还原程度与还原速率,利用X射线粉晶衍射(XRD)、傅里叶转换红外光谱分析仪(FTIR)、扫描电镜(SEM)对黏土矿物还原产物进行矿物学表征,利用总碳/氮分析仪测试黏土矿物释放出来的溶解碳总量以及高效液相色谱仪来分析不同有机组分的含量。实验结果表明相对于常温菌CN-32,嗜热菌SA-01可以有效利用绿脱石中含有的微量有机质作为碳源。由此可知,黏土矿物经微生物作用后发生还原溶解,其吸附的有机质会随着溶解程度的升高不断释放到周围环境中;黏土矿物含有的有机质组分成分复杂,在不同温度环境下释放出来的有机质速率与种类有所不同。 展开更多
关键词 绿脱石 铁还原 有机质 thermus scotoductus SA-01 SHEWANELLA PUTREFACIENS CN-32
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高温酸性磷酸酶acp基因的克隆、表达和功能的初步鉴定 被引量:1
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作者 余霖霖 杨灵 +3 位作者 李轶女 周庆祥 朱越雄 沈桂芳 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第2期135-138,142,共5页
从高温塘泥(温度在40~85℃之间)中分离到一组嗜热微生物,提取环境基因组DNA,通过随机测序,发现许多基因与Thermus属的DNA相似性很高,根据Genbank上Thermus thermophilusHB8基因组序列中推定的酸性磷酸酶基因(TTHA1616),设计引物,PCR扩... 从高温塘泥(温度在40~85℃之间)中分离到一组嗜热微生物,提取环境基因组DNA,通过随机测序,发现许多基因与Thermus属的DNA相似性很高,根据Genbank上Thermus thermophilusHB8基因组序列中推定的酸性磷酸酶基因(TTHA1616),设计引物,PCR扩增得到一段798bp的DNA序列,测序结果与Thermus thermophilusHB8基因组中酸性磷酸酶基因相似性达98%,含有完整的酸性磷酸酶保守区,于是将该基因在大肠杆菌中表达,得到一条约33KD的特异蛋白条带,酶活检测证实该推定蛋白具有酸性磷酸酶活力。 展开更多
关键词 酸性磷酸酶 thermus 基因表达
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一种高耐热普鲁兰酶的克隆表达、酶学性质及其在粉丝制作中的应用 被引量:2
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作者 孙利鹏 德青美朵 +4 位作者 朱新文 姚雁 王婕 祝冬君 沈微 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第5期113-118,123,共7页
为了获得一种适合在粉丝制作中使用的高耐热普鲁兰酶,对Thermus thermophilus的普鲁兰酶基因进行了异源表达及应用性质研究。以T.thermophilus XQ5331基因组DNA为模板,通过PCR方法扩增获得普鲁兰酶编码基因TtP5331,在大肠杆菌中实现高... 为了获得一种适合在粉丝制作中使用的高耐热普鲁兰酶,对Thermus thermophilus的普鲁兰酶基因进行了异源表达及应用性质研究。以T.thermophilus XQ5331基因组DNA为模板,通过PCR方法扩增获得普鲁兰酶编码基因TtP5331,在大肠杆菌中实现高效表达。重组酶TtP通过离子交换层析获得初步纯化。酶学性质研究结果显示,重组酶最适作用温度为75℃,最适pH6.5,在最适条件下比酶活为17 U/mg。重组酶TtP在90℃下保温10 min仍能保留约60%的酶活,沸水浴5 min可以完全灭活。在传统粉丝制作工艺基础上,采用先加酶后制芡糊的方式制作粉丝,按照每克芡糊淀粉1 U的量添加TtP处理芡糊,制作的粉丝的断条率为4.5%,与添加明矾获得的粉丝基本一致。以上结果说明,在酶法粉丝制作工艺中,TtP适合在芡糊制作前在淀粉悬液中添加,是一种用量小、使用简便的明矾替代物。 展开更多
关键词 粉丝 明矾替代物 普鲁兰酶 thermus thermophilus 异源表达
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嗜热菌及其嗜热机制 被引量:2
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作者 周小鹭 《林业科技情报》 1996年第3期42-43,共2页
嗜热菌多生长在土壤、肥堆、热泉和火山地带,在晒热或自热的生境中,也常有存在。根据嗜热菌适应温度范围的不同,对嗜热菌分成生理上不同的三类:生长最高温度在70℃以上的极端嗜热菌、生长最高温度在50℃~65℃的兼性嗜热菌和生长最高温... 嗜热菌多生长在土壤、肥堆、热泉和火山地带,在晒热或自热的生境中,也常有存在。根据嗜热菌适应温度范围的不同,对嗜热菌分成生理上不同的三类:生长最高温度在70℃以上的极端嗜热菌、生长最高温度在50℃~65℃的兼性嗜热菌和生长最高温度在15℃~50℃的耐热细菌。 展开更多
关键词 嗜热菌 热稳定性 黄色素 核糖体 极端嗜热菌 thermus 微生物学 最高温度 不饱和脂肪酸 中温菌
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腾冲热海一株栖热菌裂解性噬菌体的分离及其特征 被引量:10
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作者 洪伟 韩剑 +3 位作者 戴欣 季秀玲 魏云林 林连兵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期322-327,共6页
【目的】Thermus(栖热菌)属是嗜热细菌中比较古老的类群,本研究探索从腾冲热海热泉分离栖热菌噬菌体,并初步分析其特征。【方法】采用"双层平板法"从云南腾冲热海碱性热泉中分离纯化栖热菌噬菌体;对噬菌体及其宿主进行电镜形... 【目的】Thermus(栖热菌)属是嗜热细菌中比较古老的类群,本研究探索从腾冲热海热泉分离栖热菌噬菌体,并初步分析其特征。【方法】采用"双层平板法"从云南腾冲热海碱性热泉中分离纯化栖热菌噬菌体;对噬菌体及其宿主进行电镜形态观察,并进行噬菌体基因组限制性酶切片段多态性分析、噬菌体生理特征及蛋白组成分析。【结果】从腾冲热海热泉分离获得1株裂解性噬菌体,其宿主菌TC10通过16S rRNA基因序列分析鉴定为Thermus属菌株。此噬菌体为长尾型,头部直径67nm,尾管长837nm、宽10nm,最适感染温度为65℃-70℃,最适感染pH值为7.6,对氯仿不敏感,其形态与分离自俄罗斯勘察加半岛热泉的栖热菌噬菌体P23-45和P74-26有一定的差异,蛋白组成差异显著,为一株新的栖热菌噬菌体,命名为TTSP10(Tengchong Thermus Siphoviridae Bacteriophage)。 展开更多
关键词 栖热菌 嗜热噬菌体 TTSP10(Tengchong thermus SIPHOVIRIDAE phage) 形态与生理特征
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不同钾浓度培养条件对栖热茵TibetanG6菌株吸附铯的影响 被引量:1
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作者 王海雷 孔凡晶 郑绵平 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2005年第6期513-518,共6页
研究了不同钾离子浓度培养体系下栖热菌TibetanG6菌株(Thermus sp.TibetanG6)对铯的吸附规律以及pH和钠离子对吸附的影响.结果表明,不同钾离子浓度培养条件在TibetanG6菌株对铯的吸附过程中扮演了重要的角色,由培养基中不加钾而诱导... 研究了不同钾离子浓度培养体系下栖热菌TibetanG6菌株(Thermus sp.TibetanG6)对铯的吸附规律以及pH和钠离子对吸附的影响.结果表明,不同钾离子浓度培养条件在TibetanG6菌株对铯的吸附过程中扮演了重要的角色,由培养基中不加钾而诱导的钾缺失细胞对铯的吸附量(24 h)明显高于正常培养基中加过量钾产生的钾过量体系中的吸附量.在不同的钾离子细胞中,pH和钠离子对菌体吸附铯产生了不同的影响.菌体的红外光谱分析也表明:菌株TibetanG6细胞对铯的吸附是一个动态平衡过程.最后对pH和钠离子对铯吸附的作用机制进行了讨论. 展开更多
关键词 栖热菌(thermus sp.TibetanG6) 生物吸附 pH 钾离子体系 红外光谱
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