Response surface optimization of microwave-assisted extraction for HPLC-fluorescence determination of puerarin and daidzein in Radix Puerariae thomsonii

Microwave-assisted extraction was optimized with response surface methodology for HPLC-fluorescence determination of puerarin and daidzein in Radix Puerariae thomsonii.The optimized extraction procedure was achieved by soaking the sample with 70% methanol（1∶15,v/v）for 30 min,and then microwave irradiation for 11 min at a power of 600 W.Coupling the extraction process with HPLC-fluorescence presented good recovery,satisfactory precision,and good linear relation.Compared with a method from the Chinese Pharmacopoeia,the proposed method enables higher extraction efficiency and more accurate analytical results.It can be of potential value in quality assessment of Radix Puerariae thomsonii medicinal materials.

Production and Cultivation Technology of Selenium-enriched Pueraria thomsonii Benth

The cultivation technology of selenium-containing plant Pueraria thomsonii Benth was summarized from the producing area conditions,variety selection,field management and other aspects,which is of great significance for increasing the selenium concentration in humans or animals.

葛粉对小鼠糖脂代谢紊乱的改善作用研究

目的探究长期摄入葛粉对糖脂代谢紊乱的改善作用。方法将36只C57BL/6J小鼠随机分为空白组、对照组和葛粉组,每组12只。基于高脂饮食联合葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠糖脂代谢紊乱模型。葛粉组灌胃5g/kg体重的葛粉,其余两组灌胃等量生理盐水。每周测量各组小鼠体重并进行疾病活动度评分,15周后检测小鼠空腹血糖和葡萄糖耐性,对小鼠结肠长度、肝脏及脂肪重量进行测量并通过试剂盒检测小鼠血清中甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平。综合以上实验结果评估葛粉对小鼠糖脂代谢紊乱的改善作用。结果高脂饮食联合葡聚糖硫酸钠诱导后小鼠体重出现非正常快速增长,葛粉饮食干预后增长速度降低。与空白组相比,对照组小鼠疾病活动度评分显著升高,结肠缩短且伴随肝脏及脂肪组织重量的显著增加;葛粉饮食干预后,各相关指标均有显著改善,表明长期摄入葛粉能够缓解小鼠肠道炎症,抑制小鼠体重非正常增长,改善肝脏及脂肪组织脂质代谢;与空白组比较,对照组小鼠空腹血糖、葡萄糖耐量、血清TG、TC、LDL-C水平均有显著增高,糖耐性、HDL-C则出现显著下降;葛粉饮食干预后所有指标均有所改善,表明葛粉饮食干预能够降低小鼠血糖,提高糖耐性,改善小鼠血脂情况。结论摄入葛粉能一定程度预防糖脂代谢紊乱,这可能与葛粉中的抗性淀粉及异黄酮类调节糖脂代谢以及改善肠道炎症有关。

葛根、粉葛炮制前后多糖和微量元素含量研究

目的:探讨不同的切制规格及炮制方法对葛根、粉葛所含多糖、微量元素含量的影响。方法:利用UV以及ICP-MS检测方法,对葛的不同品种(葛根、粉葛)、不同规格(片、丁)、不同炮制方法(煨制、醋制)中所含多糖和微量元素含量进行测定。结果:多糖类含量粉葛远高于葛根;丁块型葛基本高于片型葛;葛根丁经过煨制、醋制后没有显著变化,葛根片煨制提高、醋制降低,粉葛丁经过煨制、醋制后提高,粉葛片经煨制、醋制后降低。微量元素含量,葛根中Fe、Cu、Zn、Mg、K、Mn含量均高于粉葛,但Ca含量明显低于粉葛;Fe的含量均是片大于丁,Zn、Ca含量则是丁大于片;葛根丁中微量元素含量经过煨制后变化较大、醋制变化较小,葛根片中Fe、Cu、Zn、Mg、Mn含量煨制降低、醋制提高,粉葛丁中Fe、Zn、Mg、K、Ca含量经过煨制、醋制后降低,粉葛片中Fe、Zn、Ca含量经过煨制、醋制后降低。结论:葛根、粉葛不同的切制规格及炮制方法对其多糖和微量元素含量均可产生不同程度的影响,而该变化可为进一步深入探讨葛的炮制作用机理提供参考依据。

江西省粉葛产业高质量发展分析

介绍了江西省粉葛产业的生产规模、种植模式、加工产品等发展现状,分析了影响该省粉葛产业高质量发展所面临的品种较为单一、种植过程中化肥施用不合理、地膜残留较为严重以及一二三产业融合不够等问题,提出了加大粉葛种业研发力度、优化施肥方式、科学使用回收地膜、加快一二三产业融合发展等对策建议,以期为江西省粉葛产业高质量发展提供参考。

基于HPLC指纹图谱结合一测多评法的葛花质量控制研究

建立葛花药材的指纹图谱,并同时建立其中10个主要黄酮类成分含量的一测多评分析方法(QAMS),用于不同产地葛花药材整体质量评价。采用高效液相色谱法(HPLC)对不同产地葛花中主要化学成分进行分析,确定最佳色谱条件,建立指纹图谱;在此基础上,以葛花苷为参照峰,建立QAMS测定葛花10个黄酮类成分含量;并与外标法(ESM)测定结果比较,验证QAMS的准确性。建立了葛花药材指纹图谱,20批葛花和10批粉葛花药材的相似度均大于0.85,标定共有峰分别为18和27个。以葛花苷为参照峰,各个成分校正因子的重复性、耐用性均良好;应用一测多评法测定10个成分的含量,与外标法测定结果比较,含量无明显差异(P>0.05),相对偏差<3.0%。不同产地来源的葛花药材中10个成分含量均存在较大差异,说明应提高葛花药材的质量控制标准。所建立的指纹图谱结合一测多评分析方法简便、可行,可客观、有效的用于不同产地葛花药材质量评价,可以为葛花质量标准修订、优质葛花种质资源的选育和育种提供参考。

镉胁迫对粉葛幼苗生长、生理特性及镉富集的影响

【目的】镉污染严重威胁农业生态与人类健康,探究作物对镉的累积效应及生理机制对重金属污染的治理意义重大。以赣葛1号为材料,探讨镉胁迫下粉葛幼苗的生长、镉富集特性、耐受性及生理响应。【方法】本研究采用水培试验,检测分析了不同浓度镉(0,10,25,50,100 mg/L)胁迫对粉葛幼苗镉含量、叶片过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、丙二醛、可溶性糖、可溶性蛋白含量等指标的影响。【结果】介质中镉对粉葛幼苗的生长具有“低促高抑”的作用,叶片(叶长、叶宽)日增长率随介质中镉浓度增加呈先增后降趋势,在25 mg/L浓度时达最大。总体上,随着镉浓度的升高,粉葛叶片过氧化物酶和超氧化物歧化酶活性呈“先升后降再升”的变化趋势,其中过氧化物酶活性显著增加了174.90%~200.13%;过氧化氢酶、丙二醛和可溶性糖含量呈先降低后升高的趋势;而可溶性蛋白含量呈先增加后降低的趋势。粉葛根系、叶片中镉含量均随着镉浓度的增加而显著增加(P<0.05),根系和叶片富集系数分别为24.42~28.36和5.24~8.39;相关性表明粉葛幼苗根系、叶片中镉含量与介质中镉含量均表现为极显著正相关关系(P<0.001)。【结论】粉葛是一种潜在的镉忍耐植物,具备较强的镉富集能力,并通过调节抗氧化系统和根系固持来缓解镉毒害。该研究结果为寻找合适的植物修复材料提供了理论依据。

粉葛水提物对2型糖尿病db/db小鼠胰岛细胞炎症损伤的改善作用及其机制

为探讨粉葛水提物对2型糖尿病db/db小鼠胰岛细胞炎症损伤的作用及机制,将30只db/db小鼠随机分为模型组、粉葛水提物高、中、低剂量组和二甲双胍组,正常组则采用6只db/m小鼠。持续给药8周后,测量小鼠体质量变化、计算胰重比、检测血清空腹胰岛素(fasting serum lisulin,FINS)、血清空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、糖化血清蛋白(glycosylated serum protein,GSP),计算胰岛素抵抗指数(homeostasis model assess-ment for insulin resistance,HOMA-IR);苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察胰腺组织病理学变化;免疫组化(immunohistochemistry,IHC)法检测胰岛细胞中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、核因子-κBp65(nuclear factor kappa-Bp65,NF-κBp65)和白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)的蛋白表达;蛋白免疫印迹(Western blot,WB)法检测胰腺组织寡聚化结构域样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(cystein-asparate protease 1,caspase-1)、白细胞介素1β(interle-ukin-1β,IL-1β)、IL-18的蛋白表达;免疫荧光(immunofluorescence,IF)法检测胰腺组织NLRP3的表达。结果表明:与正常组比较,模型组小鼠体质量、胰重比、血清GSP、FBG、FINS含量、HOMA-IR水平明显增加;胰岛细胞变形,出现炎性浸润,胰岛细胞和腺泡细胞边界不清晰,TNF-α、NF-κBp65和IL-18的蛋白表达量明显增加;胰腺组织中相关蛋白表达量明显升高。与模型组比较,二甲双胍和粉葛水提物组体质量、胰重比、血清GSP、FBG、FINS明显降低;胰岛细胞形态完整且边界清晰,炎性浸润明显降低,可见较多胰岛细胞,TNF-α、NF-κBp65和IL-18的蛋白表达量明显减少;胰腺组织中相关蛋白表达量明显降低。综上,粉葛水提物可以减轻db/db小鼠胰岛细胞的炎症损伤,降低胰岛素抵抗,改善2型糖尿病症状。其作用机制可能与抑制NLRP3炎性小体通路及其下游炎症因子IL-1β和IL-18的分泌有关。

粉葛PtERF98基因克隆及表达分析

乙烯响应因子(ethylene responsive factors,ERF)是植物特有的一类转录因子,在乙烯信号转导通路、植物生长发育和逆境胁迫响应中起重要的调控作用。为探明PtERF98转录因子在粉葛(Pueraria thomsonii Benth.)块根采后生理性变质(post-harvest physiological deterioration,PPD)过程中的表达调控机制,本研究采用RT-PCR技术从火山粉葛叶组织中克隆PtERF98基因,并对其进行生物信息学、组织表达特异性分析和在PPD过程中的表达分析。结果显示,PtERF98基因CDS序列长450 bp,编码149个氨基酸残基;PtERF98蛋白理论分子量为16.93 kDa,理论等电点为8.06,为亲水性不稳定蛋白。蛋白结构分析显示,PtERF98具有典型的AP2保守结构域,属于ERF转录因子家族成员,定位于细胞核,无跨膜螺旋结构,含有1个信号肽和16个磷酸化位点。氨基酸序列同源性和系统进化关系分析表明,PtERF98与大豆(Glycine max)GmERF98同源性最高且亲缘关系最近。组织表达分析显示,PtERF98基因在火山粉葛的根、茎、叶中均有表达,且在不同组织中的相对表达量存在差异,叶中表达量最高。此外,PtERF98的表达受到PPD的显著诱导,表达水平随着PPD时间延长呈先升高后下降趋势,并在采后48 h达到最高,推测该基因可能参与粉葛块根的PPD过程。本研究可为深入了解PtERF98基因的功能及其在粉葛PPD过程中的表达调控作用奠定研究基础。

粉葛冲调粉的研制

目的:以火山粉葛为原料,以铁皮石斛、麦芽糊精、木糖醇、海藻酸钠为辅料制成粉葛冲调粉。方法:通过单因素和L_(9)(3^(4))正交试验,采用综合评分法确定粉葛冲调粉的最优配方。以DPPH·自由基清除能力、ABTS^(+)·自由基清除能力确定粉葛冲调粉总抗氧化能力,以α-葡萄糖苷酶抑制活性试验确定粉葛冲调粉体外降糖作用。结果:粉葛冲调粉的最优配方为原料配比粉葛:铁皮石斛1:0.2、麦芽糊精10%、木糖醇0.3%、海藻酸钠0.3%,综合评分为84.65分。粉葛冲调粉与抗坏血酸(维生素C)清除ABTS^(+)·自由基的IC_(50)值分别为(3.909±0.975)、(0.2009±0.0849)mg/mL;粉葛冲调粉与抗坏血酸清除DPPH·自由基的IC_(50)值分别为(3.860±1.094)、(0.1269±0.0755)mg/mL;粉葛石斛组与抗坏血酸在浓度为1.5 mg/mL时,总抗氧化能力分别为0.1811、0.499。粉葛冲调粉与阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶抑制活性的IC_(50)值分别(5.845±3.353)、(0.371±0.0477)mg/mL。结论:研制出一款新型粉葛冲调粉产品,可提高粉葛经济价值,为粉葛冲调粉产业化生产提供科学依据。

不同粉葛品种的营养品质分析及产品研发进展

粉葛属药食两用同源植物,营养成分与药用成分丰富,应用价值较高,具有一定的市场潜力,不同成分含量在不同粉葛品种间存在差异。就当前粉葛种质资源的研究、营养品质分析及其产品研发进行综述,以期为粉葛资源的进一步开发利用,粉葛经济效益的提高,粉葛产业的高效发展提供参考依据。

粉葛再生体系建立的研究

为建立高效粉葛组织培养再生体系,以不同消毒方式、基本培养基、蔗糖浓度、外植体等处理,研究其对粉葛初代培养、继代培养和生根培养的影响。结果表明,以75%酒精30 s+0.1%升汞+吐温-80消毒8 min时,外植体的成活率最高,可达83.33%。外植体的最佳取材部位为带芽茎段,其平均株高可达2.13 cm,繁殖系数为2。MS为最佳的基本培养基,繁殖系数为1.26;蔗糖浓度以30 g/L为最佳,其平均株高为1.69 cm,繁殖系数为1.55;最佳初代培养基为MS+琼脂5.5 g/L+蔗糖30 g/L+6-BA 0.2 mg/L+IBA 0.6 mg/L,其平均株高为3.13 cm,繁殖系数为3.17;最佳的继代培养基为MS+琼脂5.5 g/L+蔗糖30 g/L+6-BA 0.6 mg/L+IBA 0.8 mg/L+KT 0.2 mg/L,其平均株高为1.86 cm,繁殖系数为3.44;最佳的生根培养基为MS+琼脂5.5 g/L+蔗糖30 g/L+IBA 1.0 mg/L,其生根率为100%,平均主根数达7.1根。通过组培条件优化,初步建立粉葛的再生体系。

粉葛中微量元素含量的测定

[目的]测定粉葛样品中微量元素的含量。[方法]采用火焰原子吸收光谱法测定7种粉葛中Mg、Fe、Mn和Zn 4种微量元素的含量。[结果]粉葛样品富含Mg、Fe、Mn和Zn元素;不同产地不同品种粉葛的微量元素含量差异明显,即使同一产地不同品种粉葛的微量元素含量也有差异。[结论]该研究可为粉葛资源的进一步开发利用提供参考。

葛根药材HPLC指纹图谱研究

目的 :对不同来源的葛根药材指纹图谱比较研究。方法 :应用RP HPLC法、KromasilC18分析柱、乙腈 水二元梯度洗脱 ,流速为 1.0mL·min-1,检测波长 2 5 0nm。结果与结论 :不同来源的葛根药材所含黄酮类成分均得到很好的分离 ,该法可用于鉴别葛根的品种 ,并为葛根注射液及含葛根药材的中药复方注射液指纹图谱研究奠定基础。

不同品种葛根药理作用的比较性研究

比较了几个品种葛根的ＬＤ＿（５０），云南葛的毒性最大，峨嵋葛和野葛次之，粉葛的毒性最小。抑制２，４－二硝基苯酚引起的大鼠体温升高，以野葛、峨嵋葛和葛根素的作用快速而明显，维持约８个小时。粉葛的作用较弱。对垂体后叶素引起的心肌缺血率，以峨嵋葛的作用最强，野葛和葛根素次之，粉葛的作用最弱。野葛和峨嵋葛的解热和抗心肌缺血作用均明显高于粉葛，葛根素是有效成分之一。

蒸汽爆破预处理对粉葛总黄酮及抗氧化性的影响

实验选取爆破压力1.0、2.0 MPa,维持压力时间30、40、60、80 s,对粉葛进行预处理。利用紫外分光光度法表征爆破前后总黄酮的变化,旨在探讨蒸汽爆破预处理对粉葛总黄酮及抗氧化性的影响。抗氧化活性利用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)清除率进行评价。结果表明:经过蒸汽爆破预处理后,粉葛的总黄酮提取量、甲醇提取物得率和抗氧化性得到显著提高。在最优处理条件下,总黄酮(以葛根素计)提取量达到5.43 mg/g,是未经预处理粉葛提取量的2.32倍;甲醇提取物得率为16.92%;抗氧化活性得到显著增加,DPPH清除活性的半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)由30.65 g/L降低至10.10 g/L。将蒸汽爆破预处理应用于粉葛活性物质的提取,可实现提取量和抗氧化能力的有效提高。

粉葛组织培养及同源四倍体诱导

目的建立粉葛的组织培养体系;培育粉葛同源四倍体新种质.方法以MS培养基为基本培养基,培养外植体茎尖或茎段获得组培再生植株;用不同体积分数的秋水仙素对无菌苗茎尖进行不同时间的处理,诱导遗传物质加倍的同源四倍体.结果其最适愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+NAA0.2 mg/L,分化和增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L,生根培养基为1/2 MS+IBA 0.2 mg/L;从长出约1 cm的丛生芽上切取0.3～0.5 cm的茎尖用0.4%～0.5%的秋水仙素处理48 h效果较好,体积分数过低或过高和处理时间太短或太长都不易成功.结论同源四倍体粉葛为葛根中药用物质质量分数的提高提供了基础.

磨浆法从葛根中提取黄酮的研究——生产葛根淀粉废水的综合利用

从葛根中提取黄酮的方法有热提法、超声波法等,但无人采用磨浆法。本文对比以上三种方法来提取葛根黄酮,结果表明了采用磨浆法对提取葛根黄酮有较高的产率,而且黄酮中的葛根素含量也较高,含量为47%。用该方法从生产葛根淀粉废水中富集到的黄酮含葛根素39%。该方法具有工艺简单,适用于生产葛根淀粉废水的综合利用。

粉葛与野葛中异黄酮的HPLC指纹对照和比色测定

目的：建立粉葛与野葛药材异黄酮的HPLC指纹对照测定法、定性和定量相似性评价指标、以及粉葛与野葛总异黄酮含量的比色测定法。方法：采用C18色谱柱,甲醇-0.1%甲酸溶液梯度程序洗脱测定粉葛与野葛药材异黄酮的HPLC指纹图谱,统计分析确定共有模式;以最接近共有模式的粉葛与野葛药材为指纹对照,采用夹角余弦法和相对欧氏距离法,分别从化学成分定性和含量2个方面对不同产地粉葛与野葛药材的HPLC指纹图谱进行定性与定量相似性评价。以葛根素为对照,Folin-phenol试剂为显色剂,未加供试品的溶液为空白,70℃水浴显色后,在750 nm下比色法测定粉葛与野葛药材的异黄酮总量。结果：建立的粉葛与野葛异黄酮成分HPLC指纹图谱分离好、专属性强,野葛色谱图中有20个特征指纹峰,粉葛色谱图中有11个特征指纹峰。比色法测定异黄酮总量的线性范围为12-40 mg·L^-1（r=0.999 5）,平均回收率101.1%（n=6）。结论：粉葛与野葛异黄酮指纹图谱以指纹对照品为参照,同时进行夹角余弦法定性和相对欧氏距离法定量相似性评价,重复性和耐用性良好,并且更全面和实用。Folin-phenol试剂比色法测定粉葛与野葛异黄酮总量准确灵敏。

葛根和粉葛高效液相色谱指纹图谱及化学模式识别

目的:建立并比较葛根和粉葛的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,为其质量控制提供依据。方法:采用HPLC法,色谱柱为Kromasil C_(18)(4.6 mm×200 mm),流动相为乙腈-0.03 mol/L醋酸铵溶液(梯度洗脱),流速为0.9m L/min,柱温为40℃,检测波长为250 nm,进样量为20μL。收集16批次的葛根和粉葛样品进行测定,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》软件进行相似度评价,采用聚类分析和主成分分析对指纹图谱进行化学模式识别研究。结果:16批葛根和粉葛药材的指纹图谱有6个共有峰,经对照指认出葛根素、大豆苷、大豆苷元和染料木素的色谱峰。相似度分析结果显示葛根和粉葛的相似度较高,均在0.910以上;聚类分析将葛根和粉葛样品分别归为两类;主成分分析提取得到8个主成分,累计方差贡献率达到93.548%,前3个主成分得分投影结果与聚类分析基本一致。结论:葛根和粉葛所含化学成分既有一定的相似性,也存在一定差异,该方法可作为葛根和粉葛的质量控制及临床应用的依据。