不同毒力结核分枝杆菌对THP-1细胞凋亡及细胞因子表达的影响

为探讨不同毒力结核分枝杆菌(MTB)感染巨噬细胞后不同时间点细胞凋亡情况与其分泌的几种主要细胞因子转录与表达之间的关系,建立THP-1体外巨噬细胞模型,用不同毒力MTB(强毒株H37Rv、弱毒株BCG)感染细胞,应用流式细胞术检测巨噬细胞在六个时间点的凋亡情况,应用荧光定量PCR检测细胞因子TNF-α、IL-10、IL-6的转录水平,应用ELISA方法检测细胞上清液中三种细胞因子的分泌量。结果显示:BCG组和H37Rv组的早期凋亡率均显著高于对照组(P<0.05)。巨噬细胞细胞因子TNF-α、IL-6的转录水平与分泌水平相符,弱毒菌株巨噬细胞凋亡情况随时间延长成上升趋势,其分泌的细胞因子TNF-α表现为相同趋势,IL-6表现为相反趋势。强毒株巨噬细胞凋亡情况低于弱毒株,细胞因子分泌情况复杂,一般表现为一种先增强后抑制的情况。本试验通过对不同时间点细胞因子与凋亡情况关系的研究为结核分枝杆菌对巨噬细胞凋亡机制提供新思路。

沉默STAT1对肠道病毒71型感染THP-1细胞的初步探讨

目的探讨EV71感染对THP-1细胞内转录因子STAT1、ISGs及STAT1基因敲减对ISGs和EV71复制变化的影响。方法采用实时荧光定量(qRT-PCR)法检测EV71感染人单核巨噬细胞(THP-1)后4种干扰素刺激基因ISG15、ISG56、OAS1、MXA的mRNA水平和IFN-β的产生,并采用Westernblot分析转录因子STAT1磷酸化水平,利用慢病毒介导的特异性STAT1短发卡RNA干扰THP-1细胞STAT1的表达,观察STAT1基因沉默对4种干扰素刺激基因及EV71/VP1表达水平的影响。结果EV71感染THP-1细胞后,IFN-βmRNA的相对表达量上调,并刺激了MXA、OAS1、ISG56mRNA的表达和STAT1的磷酸化水平。慢病毒介导的shRNA-STAT1基因沉默后,与con-shRNA-STAT1组比,STAT1总蛋白及其磷酸化水平表达下降,MXA、OAS1、ISG56mRNA的表达量及EV71/VP1蛋白的表达水平降低。结论STAT1基因沉默抑制EV71感染THP-1细胞内STAT1的磷酸化和ISGs的转录,并抑制EV71的感染。

尖吻蝮蛇蛇毒对刚地弓形虫侵入宿主细胞的作用研究

目的 观察细胞培养系统中宿主细胞在不同剂量源自皖南地区的尖吻蝮蛇 (Agkistrodonacutus)蛇毒的作用下感染刚地弓形虫速殖子百分率的差异 ;探讨运用蝮蛇蛇毒作为辅助因子提高细胞培养用于弓形虫病病原学诊断的敏感性。方法 以尖吻蝮蛇蛇毒加入分孔培养的Hela细胞和THP - 1细胞中 ,分别用IFA和流式细胞仪进行检测 ,观察尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入细胞的影响。结果 在相同的时间内 ,在尖吻蝮蛇蛇毒的作用下 ,Hela细胞和THP - 1细胞感染弓形虫速殖子的百分率在不同的时段均明显的提高。结论 尖吻蝮蛇蛇毒可以促进弓形虫速殖子侵入宿主细胞 ,在实际应中 ,可以作为一种辅助因子在检测标本时提高速殖子检出率 。

溶血磷脂酸对基质金属蛋白酶-9表达及活性的影响

目的观察溶血磷脂酸（Lysophosphatidie Acid,LPA）对人单核细胞株THP-1细胞基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinases-9）表达及活性和NF-κB p65表达活性的影响,探讨MMP-9在LPA致动脉粥样硬化中的作用及机制。方法以不同浓度水平LPA（0-10μmol/L）刺激人THP-1细胞4h,RT-PCR法测定MMP-9mRNA表达,酶谱法检测MMP-9活性,westernblot检测核蛋白NF-κB p65表达变化。结果随着LPA剂量的增加,MMP-9表达及活性,核蛋白NF-κB p65表达逐渐增强,在LPA1μmol/L时达到最高点,然后逐渐减弱,LPA以剂量依赖的方式激活NF-κB,上调THP-1细胞MMP-9表达,增加MMP-9活性。结论LPA可能通过激活NF-κB,在转录水平促进THP-1细胞MMP-9mRNA表达,并增强其活性,促进粥样硬化发生和发展。

具有潜在改善炎症反应益生菌的筛选

目的:探讨供试菌株对脂多糖(LPS)诱导THP-1细胞分泌炎性细胞因子的调节作用,筛选出具有潜在改善炎症反应的益生菌。方法:通过佛波酯(PMA)诱导THP-1成为成熟巨噬细胞,脂多糖(LPS)刺激成熟巨噬细胞产生炎症反应,评价益生菌对这种炎症反应的改善作用,并对具有改善炎症反应潜力的益生菌株进行胃肠道耐受能力、粘附能力、抑菌能力及抗生素敏感性评价。结果:植物乳杆菌SS-9、SD-H9、鼠李糖乳杆菌SD-L8及罗伊氏乳杆菌WX-94具有改善机体炎症反应的潜力,其中SS-9和SD-H9能显著降低炎症模型细胞IL-1β的分泌(P<0.05),WX-94和SS-9能显著降低炎症模型细胞的IL-6的分泌(P<0.05);同时四株菌均具有较高的胃肠道耐受能力、粘附能力,具有安全通过肠道的潜力;并可以不同程度地抑制致病菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌及阴沟肠杆菌的生长,具有抑制肠道感染的潜力;抗生素敏感性研究表明,四株菌均未发现抗生素耐受的风险。结论:植物乳杆菌SS-9、SD-H9、鼠李糖乳杆菌SD-L8及罗伊氏乳杆菌WX-94均可作为具有潜在炎症调节能力的益生菌进行开发和应用。

基于转录组测序探究PM_(2.5)引起THP-1细胞发生炎性反应的关键因子

大气细颗粒物(PM_(2.5))作为空气污染的主要污染物,由于其具有颗粒小、比表面积大的特点,很容易沉积于肺泡细胞或进入血流.现有的研究报道指出,许多呼吸道疾病都与暴露于环境PM_(2.5)有关.肺泡巨噬细胞作为一种固有免疫细胞,是抵御外来污染物和致病微生物的第一道防线.本研究以THP-1细胞为人巨噬细胞模型,探究了PM_(2.5)暴露引起巨噬细胞发生炎症反应的机制.通过对暴露于PM_(2.5)后的THP-1细胞进行RNA-Seq测序,筛选出3967个差异表达基因,对这些差异表达基因进行GO分析、KEGG富集分析,结果显示,多条通路与免疫反应及炎症信号有关.通过对230个富集于炎症相关通路的差异表达基因进行蛋白质-蛋白质相互作用分析,结果显示,CXCL8(C-X-C motif chemokine ligand 8)在蛋白质相互作用中处于核心地位.因此,进一步利用实时荧光定量PCR和ELISA对PM_(2.5)暴露的THP-1细胞中的CXCL8表达水平进行验证,发现在低浓度PM_(2.5)暴露的前24 h以内,CXCL8的相对转录水平及分泌水平随着PM_(2.5)暴露时间的延长和暴露浓度的增加而升高.研究表明,CXCL8在PM_(2.5)暴露的THP-1细胞中表达显著,且处于通路蛋白互作的核心位置,提示CXCL8在PM_(2.5)暴露引起的肺部炎症反应中发挥着重要作用.

IFN-γ诱导感染牛分枝杆菌的THP-1细胞凋亡及AIF信号通路

将质量浓度为15μg/L的IFN-γ作用于不同剂量M.bovis(MOI10∶1,20∶1)北京株感染的THP-1细胞,在感染后12,24,36,48、72h,使用流式细胞仪测定其细胞凋亡百分比。结果表明:IFN-γ诱导了牛分枝杆菌北京株感染的细胞凋亡,并且凋亡呈时间相关性。在相同时间,感染剂量为MOI10∶1和MOI20∶1的THP-1细胞经IFN-γ诱导后,细胞凋亡数无显著差异(P>0.05)。将IFN-γ(15μg/L)和牛分枝杆菌北京株(MOI10∶1)处理的THP-1细胞孵育36h后,使用免疫细胞化学的方法检测细胞核内凋亡诱导相关因子(AIF)的变化,结果发现,细胞核内牛分枝杆菌单独感染和IFN-γ刺激的牛分枝杆菌感染的巨噬细胞的AIF的百分比分别为(11.38±1.00)%和(23.26±1.85)%,两者相比差异显著(P<0.05)。表明在IFN-γ诱导的牛分枝杆菌感染的THP-1细胞凋亡过程中,AIF介导的凋亡信号通路被激活。本研究首次报道了在IFN-γ诱导的牛分枝杆菌北京株感染的THP-1细胞凋亡过程中AIF相关信号通路,对阐明IFN-γ在牛分枝杆菌感染中的作用机制具有重要意义。