松龄血脉康对THP-1源性泡沫细胞ABCA1蛋白表达及细胞内胆固醇含量的影响

目的观察松龄血脉康对THP-1源性泡沫细胞腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白表达及细胞内胆固醇含量的影响及其防治动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法培养THP-1细胞,160 nmol/L佛波脂(PAM)使之巨噬化,用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白使巨噬细胞形成泡沫细胞。0.81 mg/L松龄血脉康、10μmol/L罗格列酮分别和泡沫细胞孵育6、12、24 h;0.40、0.81、1.6 mg/L的松龄血脉康、1、10、20μmol/L的罗格列酮与泡沫细胞孵育24 h。用流式细胞技术检测ABCA1蛋白表达的水平,并测定各组细胞内胆固醇含量。结果松龄血脉康组、罗格列酮组均增加ABCA1蛋白的表达,而细胞内胆固醇含量减少,与对照组相比,均有显著性差异(P<0.05),且有浓度、时间依赖性。松龄血脉康组与罗格列酮组无显著性差异(P>0.05)。结论松龄血脉康具有与罗格列酮增加ABCA1蛋白及降低胆固醇含量相似的作用。增加ABCA1蛋白表达,降低细胞内胆固醇含量可能是中药松龄血脉康抗AS的机制之一。

血管紧张素-(1-7)通过AC-cAMP途径增加THP-1源性泡沫细胞ABCA1的表达并减少细胞胆固醇含量

目的:构建THP-1源性泡沫细胞模型,探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]和腺苷酸环化酶抑制剂MDL对THP-1源性泡沫细胞胆固醇逆转运相关蛋白——ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达和胆固醇含量的影响。方法:将THP-1源性单核细胞诱导为巨噬细胞,加入氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)建立泡沫细胞模型。实验分为4组:正常泡沫细胞组、MDL组、Ang-(1-7)组和MDL+Ang-(1-7)组。处理24 h后,分别通过ELISA法、荧光定量PCR法和Western blotting检测各组细胞cAMP表达水平、ABCA1 mRNA相对表达量和蛋白含量,闪烁计数法检测各组细胞胆固醇流出率,高效液相色谱法检测各组细胞胆固醇含量。结果:(1)Ang-(1-7)组cAMP表达水平、ABCA1 mRNA相对表达量和蛋白含量较泡沫细胞组有明显升高(P<0.05),胆固醇流出率较泡沫细胞组明显增高(P<0.05),胆固醇含量较泡沫细胞组显著降低(P<0.05)。(2)MDL组cAMP表达水平、ABCA1 mRNA相对表达量和蛋白含量较泡沫细胞组有明显降低(P<0.05),胆固醇流出率较泡沫细胞组明显降低(P<0.05),胆固醇含量较泡沫细胞组增高(P<0.05)。(3)MDL+Ang-(1-7)组数值介于Ang-(1-7)组与泡沫细胞组之间。结论:(1)Ang-(1-7)能促进泡沫细胞ABCA1的表达增加,促进胆固醇外流,减少泡沫细胞胆固醇含量,逆转泡沫细胞的形成。(2)MDL可以抑制腺苷酸环化酶的活性,减少cAMP的生成,从而部分拮抗Ang-(1-7)的上述作用,但不能完全阻断Ang-(1-7)的作用。

血管紧张素Ⅱ对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1表达的调控作用

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达的调控作用。方法以50mg/L的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)温育人巨噬细胞系THP-1源性巨噬细胞48h为对照,同时分别加入10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L的AngⅡ,采用RT-PCR和Westernblotting法分别检测THP-1源性泡沫细胞中ABCA1mRNA与蛋白的表达,采用酶法检测细胞内胆固醇含量,应用液体闪烁计数仪检测胆固醇流出的变化。结果与对照组比较,10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/LAngⅡ组ABCA1mRNA和蛋白表达均下降(P<0.05),胞内胆固醇含量增加(P<0.05),胆固醇流出率减少(P<0.05)。结论AngⅡ可下调THP-1源性泡沫细胞ABCA1的表达,促进泡沫细胞形成。

Salusin-α通过调控PPARγ抑制THP-1源性泡沫细胞形成

目的 探究Salusin-α是否通过调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome pro-liferator-activated receptor gamma,PPARγ)下调酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(acyl-coA:cholesterol acyltransferase 1,ACAT1)抑制THP-1源性泡沫细胞形成。方法 THP-1细胞以160 nmol/L佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(Phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)孵育48 h诱导分化为巨噬细胞,再用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,Ox-LDL)孵育48 h诱导分化为泡沫细胞,Ox-LDL孵育的同时加入不同浓度(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 nmol/L)Salusin-α处理。采用酶偶联比色法检测细胞游离胆固醇(free cholesterol,FC)和总胆固醇(total cholesterol,TC)含量,两者之差即为胆固醇酯(cholesterol ester,CE),比较各组CE/TC的比值;油红O染色法观察胞质脂滴的变化;RT-PCR和Western blot分别检测各组ACAT1、PPARγ mRNA和蛋白相对表达量。用特异性PPARγ抑制剂T0070907进一步验证Salusin-α抑制THP-1源性泡沫细胞形成的分子机制。结果胆固醇检测及油红O染色提示泡沫细胞模型构建成功。随着Salusin-α浓度的增加,CE/TC先降低后稍增加,0.6 nmol/L时最低,差异有统计学意义。Salusin-α可明显减少胞质内脂滴的形成,抑制泡沫细胞形成;同时浓度依赖性降低ACAT1 mRNA和蛋白相对表达量,增加PPARγ mRNA和蛋白相对表达量,差异有统计学意义。T0070907可降低PPARγ mRNA和蛋白相对表达量,增加ACAT1 mRNA和蛋白相对表达量,部分阻断Salusin-α抑制泡沫细胞形成的作用。结论 Salusin-α通过激活PPARγ通路下调ACAT1抑制THP-1源性泡沫细胞形成,发挥抗动脉粥样硬化作用。

肌源干细胞通过TGF-β1/CTGF信号通路减轻压力性尿失禁大鼠的排尿障碍和尿道损伤

目的基于转化生长因子β1/结缔组织生长因子(TGF-β1/CTGF)信号通路探究肌源干细胞(MDSCs)对压力性尿失禁(SUI)大鼠排尿功能和尿道损伤的影响。方法分离、培养MDSCs,免疫细胞化学法检测MDSCs标志物Desmin和Sca-1表达。40只SD雌性大鼠按照随机数字表法分为4组:NC组(不作任何处理)、SUI组(SUI模型)、MDSCs组(SUI模型+MDSCs治疗)、MDSCs+SB431542组(SUI模型+MDSCs治疗+通路抑制剂SB431542处理),每组10只。比较4组大鼠喷嚏阳性率、尿动力学指标[膀胱最大容积(MBC)、漏尿点压(LPP)、腹压漏尿点压(ALPP)、排尿量、残余尿量、排尿效率];HE染色观察4组尿道组织病理学变化;蛋白免疫印迹法检测4组尿道组织中TGF-β1、CTGF蛋白表达。结果成功获得Desmin和Sca-1均呈阳性表达的MDSCs。与NC组比较,SUI组喷嚏阳性率、MBC、LPP、ALPP、排尿量、残余尿量均增加,排尿效率、TGF-β1和CTGF蛋白表达均降低(P<0.05),伴有严重尿道损伤;与SUI组比较,MDSCs组喷嚏阳性率、MBC、LPP、ALPP、排尿量、残余尿量均降低,排尿效率、TGF-β1和CTGF蛋白表达均增加(P<0.05),尿道损伤减轻;与MDSCs组比较,MDSCs+SB431542组喷嚏阳性率、MBC、LPP、ALPP、排尿量、残余尿量均增加,排尿效率、TGF-β1和CTGF蛋白表达均降低(P<0.05),尿道损伤加重。结论MDSCs可改善SUI大鼠的排尿功能,减轻尿道损伤,其可能是通过调控TGF-β1/CTGF信号通路发挥作用。

FHL2通过NF-κB信号通路调节THP-1巨噬细胞泡沫化

目的 明确4个半LIM结构域蛋白(FHL2)是否能够通过调节核因子κB(NF-κB)信号通路影响巨噬细胞泡沫化。方法 构建FHL2过表达质粒及合成FHL2小干扰RNA(si-FHL2),分别转染至人单核/巨噬细胞系THP-1中,Western blot检测FHL2表达;使用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激细胞,ELISA检测细胞IL-6、IL-1β、TNF-α等细胞因子的表达;油红O染色检测细胞泡沫化程度;Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果 转染过表达FHL2质粒的细胞中FHL2表达量升高(P<0.01),而转染si-FHL2的细胞表达量降低(P<0.05);敲低FHL2能够下调炎性细胞因子的分泌(P<0.01);FHL2下调能够缓解THP-1巨噬细胞泡沫化;同时,FHL2下调抑制NF-κB信号通路的活化(P<0.05),而在过表达FHL2组中结果呈相反趋势。结论 下调FHL2的表达可通过抑制NF-κB信号通路活化,降低炎性细胞因子的分泌,缓解巨噬细胞的泡沫化。

NF-κB活化对THP-1源性泡沫细胞胆固醇流出与炎症因子表达的影响及右归丸的干预机制研究

目的:通过脂多糖(LPS)干预单核细胞(THP-1)源性泡沫细胞制备高胆固醇模型,探讨右归丸含药血清对THP-1源性泡沫细胞胆固醇流出与炎症因子表达的影响。方法:利用LPS培养THP-1源性泡沫细胞诱导24h制备高胆固醇细胞模型,给予右归丸含药血清小、中、大剂量干预。通过比色法检测干预后的THP-1源性泡沫细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量;酶联免疫吸附法测定细胞内的细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;逆转录-聚合酶链反应法检测细胞NF-κB p65、SREBP1c、ABCA1mRNA的含量和蛋白表达。结果:10 ng/ml LPS培养THP-1源性泡沫细胞成功复制了高胆固醇细胞模型。右归丸大、中、小剂量组THP-1源性泡沫细胞内TC、FC、CE、IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB p65、SREBP1c、ABCA1mRNA含量以及NF-κBp65、SREBP1c、ABCA1mRNA蛋白表达水平与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:右归丸可能是通过抑制NF-κB p65和SREBP1c基因表达而调节血脂,同时通过抑制炎症因子的释放来预防动脉粥样硬化,为临床预防和治疗动脉粥样硬化提供了新的靶点。

右归丸含药血清对THP-1源性泡沫细胞胆固醇代谢的影响及机制研究

目的观察右归丸含药血清对THP-1源性泡沫细胞内SREBP-1c和ABCA1因子表达的影响,以探讨右归丸对泡沫细胞内胆固醇代谢的影响及机制。方法 THP-1细胞诱导分化成巨噬细胞后,在ox-LDL刺激48 h,使巨噬细胞转化为泡沫细胞,给予右归丸大、中、小剂量含药血清干预,通过油红O染色检测细胞内脂滴的形态,大小和数量;比色法检测不同浓度和不同时间干预后泡沫细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量;RT-PCR检测不同浓度和不同时间干预下泡沫细胞内SREBP1c、ABCA1mRNA表达和蛋白的影响。结果利用巨噬细胞源性泡沫细胞成功复制高胆固醇细胞模型,与正常组比较,模型组油红O染色可见大量橘红色染色的脂滴,脂滴密集,体积较大,与模型组比较右归丸含药血清作用细胞内脂滴颜色变浅、弥散;与正常组比较,模型组明显增加细胞内TC、FC和CE的含量(P<0.05),而随着右归丸浓度的增加,细胞内胆固醇的含量明显下降(P<0.05)。与对照组比较,模型组能明显增加细胞中SREBP1c mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05),抑制ABCA1mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05),当加入右归丸含药血清后与模型组比较,SREBP1c mRNA和蛋白的表达明显降低(P<0.05),ABCA1mRNA和蛋白的表达水平明显降低升高(P<0.05),且右归丸大剂量血清组SREBP1c、ABCA1变化最为明显。结论巨噬细胞源性泡沫细胞模型可能是通过抑制SREBP1c基因促进其下游ABCA1基因表达,有利于加速胆固醇的流出进而起到调节血脂的功能,这可能是右归丸治疗高脂血症的机制,为预防和治疗高脂血症提供新的靶点。

肥大细胞改变THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇含量及抑制胆固醇流出

目的:以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象,探讨肥大细胞(MC)对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量、分配和流出的影响及机制。方法:THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞在MC颗粒释放物存在或缺乏下与高密度脂蛋白3(HDL3)共育。高效液相色谱检测泡沫细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和酯化胆固醇(EC)含量,用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出,运用逆转录聚合酶链反应检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA水平,采用琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测HDL3及apoA-Ⅰ的降解。结果:MC组泡沫细胞内TC、FC明显高于对照组(TC对照组为527.3 mg/g,MC组为917.9 mg/g);EC/TC比值低于对照组(7.6%vs47.5%);细胞内胆固醇流出少于对照组(26.92%±2.6%vs40.98%±3.4%,P<0.05);而泡沫细胞ABCA1的mRNA水平与对照组无明显差异。MC颗粒释放物处理HDL3后,聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示,约有28%的apoA-Ⅰ被降解,在分子量26 kD左右处出现了新的条带,产生了1个26 kD的小多肽。结论:肥大细胞可通过降解HDL3及apoA-Ⅰ抑制细胞内胆固醇流出而增加细胞内胆固醇蓄积,这个作用与ABCA1表达无直接关系。

THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及鉴定

目的以人类单核细胞株THP-1建立泡沫细胞模型及建立鉴定模型的方法。方法以160nmol/L的佛波酯诱导THP-124h后分化成为巨噬细胞,继与80mg/L的氧化型低密度脂蛋白孵育48h,油红O染色后显微镜下观察细胞形态,采用HPLC-MS的方法测定细胞内胆固醇和胆固醇酯的含量。结果经油红O染色后,诱导建模的细胞内有大量的红色脂质颗粒存在;HPLC-MS测定结果显示,与正常单核细胞相比,建模的细胞内胆固醇和胆固醇酯含量均明显增加。结论THP-1细胞经佛波酯和氧化型低密度脂蛋白诱导后,能成功建立人类巨噬细胞源性泡沫细胞模型。

ApoAⅠ促进THP-1源性泡沫细胞ApoE分泌的研究

目的通过建立动脉粥样硬化损伤部位细胞模型，观察ApoAI对THP—l源性泡沫细胞ApoE分泌的影响，探讨ApoAI与ApoE之间是否存在相互关系以及这种关系对动脉粥样硬化的影响。方法采用聚乙二醇-6000（PEG-6000）沉淀法制备人血浆HDL，再利用凝胶过滤柱层析法分离ApoA I；佛波酯（PMA）诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞，氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，OXLDL）使分化后THP-1细胞荷脂，建立动脉粥样硬化细胞模型；ELISA检测不同浓度ApoAI（0，5，10，15，25ug／m1）及不同孵育时间（0．3，6，12，24h），THP—1源性泡沫细胞ApoE的分泌；RT—PCR检测细胞ApoEmRNA的表达情况。结果ApoAI增加THP-1源性泡沫细胞ApoE的分泌量；且ApoE蛋白质的分泌随着ApoAI孵育时间增加而增加，在24hApoE的分泌量达最大；在剂量试验中，ApoE的分泌量随着ApoAI剂量的增加有增加趋势，ApoAI浓度为25μmol／L时，ApoE分泌量最大；而却oE基因的表达不受ApoAI的影响。结论-定浓度的ApoAI促进THP-1源性泡沫细胞ApoE的分泌，且具有时间及剂量依赖性。而在基因水平上，ApoAI对ApoEmRNA表达没有影响。

THP-1源性巨噬细胞泡沫化过程中肝X受体-α乙酰化修饰改变与SIRT1有关

目的为研究THP-1源性巨噬细胞泡沫化过程中,SIRT1与肝X受体-α是否发生相互作用、肝X受体-α的乙酰化修饰如何改变及其与细胞内胆固醇含量的关系。方法采用体外培养的THP-1细胞构建泡沫细胞模型,高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量的变化,免疫共沉淀检测肝X受体-α与SIRT1是否结合,免疫印迹法检测肝X受体-α的乙酰化修饰改变及SIRT1的表达改变。结果在氧化低密度脂蛋白诱导细胞分化12、24h和48h后,细胞内胆固醇含量增加,SIRT1与肝X受体-α共沉降,去乙酰化的肝X受体-α蛋白水平升高,SIRT1蛋白的表达增加。结论THP-1源性泡沫细胞形成过程中,肝X受体-α与SIRT1存在相互作用,肝X受体-α的乙酰化修饰逐渐降低,其机制与SIRT1的水平升高有关。

仙人掌多糖对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇蓄积及其相关基因表达的影响

采用PMA和ox–LDL构建THP–1巨噬细胞源性泡沫细胞模型,观察不同浓度(5、10、15 nmol/L)仙人掌多糖(ODP–Ia)对泡沫细胞内脂质、胆固醇蓄积以及介导胆固醇流出的ABCA1、ABCG1、SR–BI基因表达的影响。结果显示:THP–1巨噬细胞泡沫化后胞内蓄积了大量脂质,高剂量(15 nmol/L)ODP–Ia能够显著减少胞内脂质、胆固醇蓄积,并增强ABCA1、ABCG1、SR–BI m RNA及蛋白表达(与单独ox–LDL处理组比较,P<0.05),但效果均次于阳性对照依折麦布组(P<0.05),低、中剂量(5、10 nmol/L)ODP–Ia作用效果均不显著。本研究结果表明,ODP–Ia可通过增强ABCA1、ABCG1、SR–BI基因表达来减少胞内胆固醇蓄积。

姜黄素对THP-1源性巨噬泡沫细胞B类1型清道夫受体表达的影响

目的研究姜黄素对人单核细胞(THP-1)源性巨噬泡沫细胞B类1型清道夫受体(SR-B1)表达的影响。方法使用不同浓度姜黄素(12.5、25、50 mg/L)作用于THP-1巨噬泡沫细胞,观察三组不同浓度姜黄素作用的THP-1源性巨噬泡沫细胞SR-B1表达情况。结果仅50 mg/L姜黄素作用24 h细胞存活率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);其他浓度及时间姜黄素组细胞存活率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。50 mg/L姜黄素组SR-B1、TRAF6、NF-κB以及IRAK1 mRNA表达水平明显低于其他组,差异有统计学意义(P<0.05);25 mg/L姜黄素组上述指标表达水平低于12.5 mg/L姜黄素组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05);12.5 mg/L姜黄素组与对照组上述指标表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论一定浓度姜黄素可抑制THP-1源性巨噬泡沫细胞中SR-B1、TRAF6、NF-κB以及IRAK1 mRNA的表达,从而减少泡沫细胞,达到抗动脉粥样硬化的目的。

同型半胱氨酸对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇流出的影响

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞的形成及细胞内胆固醇流出的影响。方法首先以160 nmol·L-1的佛波酯(PMA)刺激THP-1单核细胞48 h使其分化为巨噬细胞,继之用含0、50、100、200μmol·L-1的Hcy和100 mg·L-1的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育24 h,使其转化为泡沫细胞。采用油红O染色进行泡沫细胞定性分析,泡沫细胞面积计数法进行半定量分析,总胆固醇和游离胆固醇测定法进行定量分析。结果经PMA处理48 h后,呈簇集状悬浮状态的单核细胞分化为形态不规则、有伪足并贴壁的巨噬细胞,继之经Hcy和ox-LDL处理后的细胞中出现了大量红染的脂滴,细胞呈现泡沫化改变;细胞面积计数法显示实验组较对照组而言泡沫细胞阳性率升高(P<0.05),以100μmol·L-1Hcy组最明显(P<0.05);酶终点法测定胆固醇流出结果显示,实验组的胆固醇酯相对值明显高于对照组(P<0.05)。结论成功建立THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型,Hcy减少了细胞内胆固醇的流出,在动脉粥样硬化的发生发展中扮演重要作用。

单核细胞趋化蛋白1、颗粒蛋白前体、胶质细胞源性神经营养因子水平与阿尔茨海默病认知功能、日常生活能力相关性分析

目的 分析血清单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、颗粒蛋白前体(PGRN)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)水平与阿尔茨海默病(AD)病人认知功能及日常生活能力的相关性,探讨其在AD中的诊断价值。方法 选取2019年7月至2021年6月入住苏州大学附属广济医院治疗的41例AD病人作为观察组,采用随机数字表法选取苏州大学附属广济医院同期经评估符合入组的41例健康志愿者作为对照组,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测两组研究对象血清MCP-1、PGRN、GDNF水平;采用简易智力状态检查表(MMSE)及日常生活量表(ADL)评估其认知功能及日常生活能力。分析观察组病人血清MCP-1、PGRN、GDNF水平与MMSE、ADL评分的相关性;并通过受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析MCP-1、PGRN、GDNF在AD中的诊断价值。结果 观察组MCP-1(321.7±51.1)ng/L、PGRN(42.6±8.5)μg/L水平较对照组MCP-1(242.6±35.2)ng/L、PGRN(26.5±6.1)μg/L显著增高,观察组GDNF(357.8±112.3)ng/L水平较对照组GDNF(468.0±106.6)ng/L显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示:观察组MMSE、ADL评分与血清MCP-1、PGRN水平均呈负相关(r=-0.46~-0.31,P<0.05),与PGRN水平呈正相关(r=0.47、0.46,P<0.05)。ROC曲线显示:MCP-1、PGRN、GDNF对AD的诊断价值较高,其ROC曲线下面积(AUC)分别为0.73、0.75、0.71,灵敏度分别为75.6%、75.6%、70.7%,特异度分别为61.0%、70.7%、63.4%,MCP-1、PGRN、GDNF三项标志物联合检测的AUC为0.83,灵敏度和特异度分别达到82.9%、75.6%。结论 AD病人血清MCP-1、PGRN水平表达明显增高,GDNF水平表达明显降低。这与AD病人认知功能和日常生活能力减退严重程度显著相关。三项指标联合检测在AD诊断中有着重要的参考价值.

二甲双胍抑制脂多糖诱导的THP-1细胞源性泡沫细胞形成

目的探讨二甲双胍(Met)对脂多糖(LPS)诱导的THP-1来源泡沫细胞的形成、脂滴形态以及脂滴表面蛋白分子表达的影响。方法采用100 ng/m L佛波酯(PMA)处理THP-1细胞48 h后,诱导其分化成为巨噬细胞;再利用50μg/m L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)和1μg/m L LPS促进THP-1细胞来源的巨噬细胞形成泡沫细胞,在此过程中用(0、100、200)μmol/L Met进行处理,采用油红O染色分析Met对泡沫细胞形成的影响;采用BODIPY493/503染色,荧光显微镜观察泡沫细胞内脂滴的形态和数量;抽提细胞内脂类,通过定量试剂盒测定细胞甘油三酯(TG)的含量;采用Western blot分析脂滴表面蛋白中脂肪分化相关蛋白(ADRP)、47 k Da的尾连蛋白(TIP47)的表达水平。结果与ox-LDL和LPS组相比,采用100μmol/L、200μmol/L Met处理后能够降低泡沫细胞内的脂滴大小和数量,定量分析显示细胞内TG含量明显降低,并存在剂量依赖关系,其中200μmol/L Met能够降低泡沫细胞中约25%的TG储积。Western blot结果显示,Met能够降低泡沫细胞中ADRP的表达水平,但对TIP47的表达水平无影响。结论 Met能够抑制LPS诱导的THP-1细胞源性泡沫细胞形成,并抑制脂质蓄积,同时下调细胞内ADRP的表达水平。

干扰素-γ对单核—巨噬细胞源性泡沫细胞ACAT-1表达的影响

目的观察干扰素-γ对THP-1、THP-1源性巨噬细胞泡沫细胞酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶-1(ACAT-1)表达的影响。方法将THP-1细胞与PMA孵育48小时使之分化为巨噬细胞,继以100mg/mlOx-LDL处理24小时使之形成泡沫细胞。将THP-1细胞、巨噬细胞、泡沫细胞分别用300U/mlIFN-γ干预24小时。RT-PCR检测ACAT-1mRNA水平,WesternBlot检测其蛋白表达。结果THP-1细胞分化成巨噬细胞以及形成泡沫细胞时ACAT-1mRNA及蛋白含量增加(P<0.05),而后两种细胞之间无显著性差异。与各自的对照组相比,经IFN-γ作用后三种细胞ACAT-1mRNA及蛋白表达均增强(P<0.05)。结论IFN-γ诱导单核、巨噬细胞、泡沫细胞ACAT-1的mRNA及蛋白表达,这可能是其促进动脉粥样硬化的机制之一。

抑郁症患者血清胶质细胞源性神经营养因子、胰岛素样生长因子1水平变化及其与睡眠障碍关系研究

目的:探究抑郁症患者血清胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平变化及其与睡眠障碍的关系。方法:选取抑郁症患者120例为抑郁症组,选取体检健康者120例为对照组。采用酶联免疫吸附法测定所有受试者血清GDNF、IGF-1水平。对所有受试者进行匹茨堡睡眠质量指数量表(PSQI)评分,根据PSQI评分结果将抑郁症患者分为无睡眠障碍组(22例)和有睡眠障碍组(98例),其中轻度、中度、重度睡眠障碍组分别为28例、43例、27例。比较抑郁症组与对照组血清GDNF、IGF-1水平及PSQI评分,以及不同临床特征抑郁症患者血清GDNF、IGF-1水平。比较无睡眠障碍组与有睡眠障碍组抑郁症患者以及不同严重程度睡眠障碍抑郁症患者血清GDNF、IGF-1水平及PSQI评分。分析抑郁症伴睡眠障碍患者血清GDNF、IGF-1水平与PSQI评分的相关性,抑郁症患者血清GDNF、IGF-1水平对睡眠障碍发生的预测价值,以及抑郁症患者睡眠障碍发生的影响因素。结果:抑郁症组血清GDNF、IGF-1水平低于对照组,PSQI评分高于对照组(均P<0.05)。抑郁症患者血清GDNF、IGF-1水平与自杀行为、发病次数、家族史无关(均P>0.05)。有睡眠障碍组血清GDNF、IGF-1水平低于无睡眠障碍组,PSQI评分高于无睡眠障碍组(均P<0.05)。轻度睡眠障碍组、中度睡眠障碍组和重度睡眠障碍组血清GDNF、IGF-1水平依次降低,PSQI评分依次升高(均P<0.05)。有睡眠障碍抑郁症患者血清GDNF与IGF-1水平呈正相关,血清GDNF、IGF-1水平均与PSQI评分呈负相关(均P<0.05)。抑郁症患者血清GDNF、IGF-1单项及两者联合预测睡眠障碍发生的曲线下面积(AUC)分别为0.767、0.754、0.854,其中血清GDNF、IGF-1各自单独预测的AUC低于两者联合预测的AUC(均P<0.05)。GDNF低水平、IGF-1低水平均是抑郁症患者发生睡眠障碍的独立危险因素(均P<0.05)。结论:有睡眠障碍抑郁症患者血清GDNF、IGF-1呈低水平,且两者与睡眠障碍严重程度有关。血清GDNF、IGF-1对抑郁症患者睡眠障碍的发生有较高预测价值。

化瘀祛痰方药对巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1、CD36表达的影响

目的:观察化瘀祛痰方药及其拆方对THP-1源性泡沫细胞腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)、CD36表达的影响,探讨该方药的作用机制,并比较方药全方及各拆方的疗效及调控作用。方法:体外培养THP-1细胞,佛波酯(PMA)使之巨噬化,氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)使巨噬细胞泡沫化。细胞随机分为空白对照组、模型组、补气组、化瘀组、祛痰组和全方组。油红O染色观察细胞浆脂滴变化,酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)的含量,并计算CE/TC值。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)定量分析ABCA1、CD36 mRNA水平。结果:模型组细胞TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著高于对照组(P<0.01);与模型组相比,全方组和祛痰组细胞TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著降低。RT-PCR结果提示模型组细胞ABCA1、CD36 mRNA水平显著升高;而化瘀祛痰方药及祛痰拆方含药血清可显著升高ABCA1 mRNA,显著降低CD36 mRNA水平。结论:化瘀祛痰方药及祛痰方可抑制ox-LDL诱导的THP-1细胞泡沫化,该作用可能与其上调ABCA1基因、下调CD36基因表达,从而减弱THP-1细胞对ox-LDL摄取有关。