牛磺酸抑制THP-1细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1表达

目的:观察牛磺酸对人单核细胞系THP-1细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(ACAT-1)表达的影响。方法:在有或无干扰素-γ(INF-γ)的条件下,用不同浓度的牛磺酸与THP-1持续孵育不同的时间,RT-PCR检测ACAT-1mRNA水平,WesternBlot检测其蛋白表达。结果:牛磺酸显著下调THP-1的ACAT-1mRNA和蛋白表达水平(P<0.05～0.01,n=3),并呈时间和剂量依赖性效应。INF-γ促进ACAT-1mRNA和蛋白表达(P<0.05),该作用被牛磺酸部分抑制(P<0.01)。结论:牛磺酸抑制ACAT-1的基础表达和由INF-γ诱导的表达,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。

脂肪分化相关蛋白通过蛋白激酶C和酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1促进THP-1巨噬细胞蓄积脂质

目的:探讨脂肪分化相关蛋白促进THP-1巨噬细胞蓄积脂质的机制。方法:使用高胆固醇饲料喂养新西兰兔12周,复制动脉粥样硬化动物模型。然后用Western blotting和免疫组织化学染色观察兔主动脉脂肪分化相关蛋白及蛋白激酶C的表达。THP-1巨噬细胞与氧化低密度脂蛋白孵育不同的时间,使细胞负荷胆固醇酯后,用RT-PCR的方法观察脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1的表达,用PepTag assay琼脂糖凝胶电泳及分光光度法观察蛋白激酶C的活性。在负荷胆固醇酯的THP-1巨噬细胞中分别加入蛋白激酶C的激动剂佛波酯和抑制剂钙磷酸结合蛋白,观察脂肪分化相关蛋白的表达,同时使用油红O染色和高效液相色谱法测定细胞内脂质的变化。瞬时转染pcDNA3.1-HA-adi表达载体到THP-1巨噬细胞,复制高表达脂肪分化相关蛋白的细胞模型。在负荷、不负荷胆固醇酯或ACAT抑制剂存在的状态下,观察酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达及细胞内胆固醇酯的改变。结果:与对照组相比,兔主动脉病变处脂肪分化相关蛋白及蛋白激酶C表达均显著增加。负荷胆固醇酯的THP-1巨噬细胞中脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达上调,蛋白激酶C的活性升高。荷脂细胞与蛋白激酶C激动剂共孵育后,可以协同增强上调脂肪分化相关蛋白的效应,细胞内脂质增多;如果荷脂细胞同时与蛋白激酶C抑制剂共孵育,可以有效抑制荷脂所致的脂肪分化相关蛋白高表达,细胞内脂质减少。高表达脂肪分化相关蛋白的THP-1巨噬细胞能够使酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达增加,促进细胞内胆固醇酯蓄积。加入酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶抑制剂后,这些作用被减弱。结论:脂肪分化相关蛋白可能是通过蛋白激酶C活性的改变影响酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1的活性,从而影响细胞内脂质的蓄积。

Ghrelin对THP-1细胞泡沫化过程中酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达的影响

目的:研究单核/巨噬细胞分化成为泡沫细胞过程中ghrelin对人酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT-1)表达以及细胞内胆固醇酯的影响。方法:体外培养人源单核细胞系(THP-1),由佛波酯(PMA)作用使其分化为巨噬细胞,后者可在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)存在条件下进一步转变为泡沫细胞。巨噬细胞加入不同浓度的ghrelin预孵2 h后再加入ox-LDL,油红O染色法观察细胞内脂滴含量,运用RT-PCR法检测ACAT-1 mRNA水平,Western blotting法检测ACAT-1蛋白表达,采用酶法,通过荧光分光光度计检测细胞内胆固醇酯含量。结果:Ghrelin可明显减少THP-1源性泡沫细胞内脂滴的形成,显著降低细胞内胆固醇酯含量,并能显著降低单核/巨噬细胞泡沫化过程中ACAT-1 mRNA水平和蛋白表达,且此干预作用呈浓度依赖性。结论:Ghrelin可能通过ACAT-1转录翻译水平的下调延缓动脉粥样硬化的发生。

糖基化终产物对THP-1巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1表达的影响

目的观察糖基化终产物(advanced glycosylation end-products,AGEs)对THP-1巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(acyl coenzyme A:cholesterol acyltransferase-1,ACAT-1)表达的影响。方法将糖基化-牛血清白蛋白(AGE-modified bovine serum albumin,AGE-BSA)与佛波酯(PMA)诱导分化72h的THP-1巨噬细胞共同孵育,运用RT-PCR和Western blot分别检测巨噬细胞ACAT-1 mRNA和蛋白的表达水平。结果PMA诱导72h后,THP-1细胞停止增殖,由单核细胞分化成为巨噬细胞。用50、100、200和400mg/L AGE-BSA处理巨噬细胞后,细胞ACAT-1 mRNA相对表达量逐渐增加;ACAT-1蛋白表达的平均积分光密度值也逐渐增加,二者较对照牛血清白蛋白组明显增加(P<0.05)。用200mg/LAGE-BSA作用巨噬细胞0、12、24、36h和48h后,细胞ACAT-1 mRNA相对表达量逐渐升高;ACAT-1蛋白表达的平均积分光密度值也逐渐升高,较0h明显增加(P<0.05)。结论AGEs可上调THP-1巨噬细胞ACAT-1 mRNA和蛋白的表达,呈浓度和时间依赖性,这可能与糖尿病动脉粥样硬化有关。

脂肪分化相关蛋白通过酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1促进巨噬细胞脂质蓄积

目的观察高表达脂肪分化相关蛋白对酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达及脂质蓄积的影响。方法构建表达载体pcDNA3.1-HA-脂肪分化相关蛋白,使用THP-1巨噬细胞,通过瞬时转染使之高表达脂肪分化相关蛋白,依次用氧化型低密度脂蛋白和(或)丙泮尼地处理。逆转录聚合酶链反应和Western blot检测酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1及脂肪分化相关蛋白的表达,油红O染色和高效液相色谱检测细胞内脂质的蓄积。结果随着氧化型低密度脂蛋白浓度的增加,巨噬细胞脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达明显增强,两者呈伴行关系。丙泮尼地能抑制酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达上调,且随处理时间延长,其表达逐渐减少,并且能减少细胞内脂滴生成。与对照组相比,瞬时转染pcDNA3.1-HA-脂肪分化相关蛋白能使脂肪分化相关蛋白表达明显升高。高表达脂肪分化相关蛋白的巨噬细胞能使酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达增加,促进细胞内胆固醇酯蓄积,并协同增强氧化型低密度脂蛋白的作用。加入丙泮尼地后,高表达脂肪分化相关蛋白的作用被减弱。结论高表达脂肪分化相关蛋白能上调THP-1巨噬细胞酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达,促进细胞内脂质蓄积。脂肪分化相关蛋白可能通过酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1促进细胞内胆固醇酯的蓄积。

不对称二甲基精氨酸上调THP-1来源的巨噬细胞和泡沫细胞内胆固醇酰基转移酶-1的表达(英文)

目的观察不对称二甲基精氨酸(ADMA)对单核细胞THP-1来源的巨噬细胞和泡沫细胞中胆固醇酰基转移酶-1(ACAT-1)的表达及胆固醇含量的影响。方法分别采用RT-PCR和Western blot技术检测ACAT-1mRNA和蛋白表达水平。采用酶偶联比色法检测细胞内胆固醇含量。结果不同浓度的ADMA(0,3.75,7.5,15,or30μmol/L)对THP-1来源的巨噬细胞和泡沫细胞作用不同时间(6、12、24h)后,巨噬细胞和泡沫细胞内ACAT-1mRNA和蛋白的表达明显上调,细胞内总胆固醇的含量明显升高。结论 ADMA在巨噬细胞形成泡沫细胞过程中可能发挥了重要作用。抑制巨噬细胞和泡沫细胞内ACAT-1可能成为治疗动脉粥样硬化的潜在靶点。

酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶1基因过表达对泡沫细胞形成的影响

目的研究在三种不同细胞中过表达酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶1基因对泡沫细胞形成的影响。方法构建携带酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶1全长cDNA的pCDNA3.1质粒载体并稳定转染体外培养的人THP-1单核细胞、小鼠RAW264.7单核巨噬细胞和人胚肾293上皮细胞,以油红O染色法检测在乙酰化低密度脂蛋白作用下转染前后三种细胞形成泡沫细胞的情况。结果在相同的脂质负荷条件下,转染酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶1基因的THP-1单核细胞和RAW264.7巨噬细胞同未转染的细胞相比泡沫细胞的形成数量增加,而人胚肾293上皮细胞无论是否转染酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶1基因均不易形成泡沫细胞。结论单核巨噬细胞中过表达酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶1基因可促进泡沫细胞的形成。

PPAR-γ对单核/巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1表达效应的研究

目的 研究配体罗格列酮活化的过氧化体增殖物激活型受体 γ(PPAR γ)对单核 /巨噬细胞转分化过程中酰基辅酶A :胆固醇酰基转移酶 1 (Acyl CoA :cholesterolacyltransferases,ACAT 1 )表达效应的影响。 方法 在RPMI1 640培养基中培养人单核细胞 (THP 1 ) ,加入佛波酯(PMA)培养 48h,细胞贴壁呈巨噬细胞样分化。运用免疫细胞化学、逆转录聚合酶链反应、蛋白质免疫印迹等方法 ,观察单核巨噬细胞转分化前后PPAR γ对ACAT 1mRNA和蛋白表达水平的影响。结果 单核巨噬细胞转分化前后ACAT 1表达增加 ,罗格列酮活化的PPAR γ可明显抑制A CAT 1的表达。结论 动脉粥样硬化事件的发生可能与ACAT 1表达增强有关。罗格列酮活化的PPAR γ可能通过抑制ACAT 1表达 ,巨噬细胞摄取脂质降低 ,从而减少泡沫细胞的形成 。

酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1反义寡核苷酸对泡沫细胞形成的影响

目的:观察酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)反义寡核苷酸对泡沫细胞(FC)形成的影响。方法:体外培养人THP-1单核细胞系,由佛波酯(PMA)作用使其分化为巨噬细胞;并建立过表达ACAT1基因的THP-1单核细胞系。在脂质体的介导下将针对ACAT1基因序列的反义和错义寡核苷酸分别作用于上述细胞6h后加入Ac-LDL进行脂质负荷,以Western blotting法检测ACAT1蛋白表达,放射性同位素标记底物法检测ACAT酶活性的变化,油红O染色法观察泡沫细胞的形成情况。结果:ACAT1反义寡核苷酸可明显抑制巨噬细胞和过表达ACAT1基因的THP-1单核细胞内的ACAT酶活性,而且可明显抑制Ac-LDL负荷后泡沫细胞的形成;错义寡核苷酸则无此作用。结论:ACAT1反义寡核苷酸可抑制ACAT的生物学活性及泡沫细胞的形成。

巨噬细胞荷脂过程中脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1及中性胆固醇酯水解酶相互结合

目的探讨脂肪分化相关蛋白是否与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1或中性胆固醇酯水解酶相互结合。方法 50 mg/L氧化型低密度脂蛋白孵育RAW264.7细胞0、0.5、1、3、6 h,使用逆转录-聚合酶链反应及蛋白免疫印迹分析技术检测脂肪分化相关蛋白、酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1和中性胆固醇酯水解酶的mRNA及蛋白的表达;应用免疫共沉淀技术检测脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1或中性胆固醇酯水解酶是否相互结合。结果随着氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7细胞孵育时间的延长,逆转录-聚合酶链反应和蛋白免疫印迹分析显示,脂肪分化相关蛋白、酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1和中性胆固醇酯水解酶的mRNA和蛋白质随着时间的延长而增多,与0 h相比,差异有显著性(P<0.05,n=3)。免疫共沉淀实验显示,RAW264.7细胞与氧化型低密度脂蛋白孵育0、0.5、1、3 h时脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1结合,6 h时脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1不结合;孵育0、0.5、1 h时脂肪分化相关蛋白与中性胆固醇酯水解酶不结合,3、6 h时与中性胆固醇酯水解酶结合。结论在荷脂的RAW264.7细胞中脂肪分化相关蛋白与中性胆固醇酯水解酶及酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1相互结合。脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1和中性胆固醇酯水解酶在细胞内脂质代谢中可能协同作用。

渥曼青霉素阻断罗格列酮对人巨噬细胞酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶-1表达的影响

目的:研究过氧化体增殖物激活型受体-γ(peroxisome proliferator activated receptors-γ,PPAR-γ)配体罗格列酮对巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(Acyl-CoA:cholesterol acyltransferase-1,ACAT-1)表达的影响及可能机制。方法:在RPMI 1640培养基中培养人单核细胞株(THP-1),加入佛波酯培养48h,细胞贴壁呈巨噬细胞样分化。将细胞分为空白对照组、不同浓度罗格列酮组和罗格列酮+渥曼青霉素(wortmannin)组,运用实时定量PCR和Western blot,观察巨噬细胞ACAT-1 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:罗格列酮可明显抑制ACAT-1 mRNA和蛋白的表达,且呈浓度依赖性;加入磷酯酰肌醇三磷酸激酶(phosphate dylinositol 3-kinase,PI3K)信号途径抑制剂渥曼青霉素后ACAT-1表达较罗格列酮组高,较空白对照组低。结论:PPAR-γ配体罗格列酮通过PI3K途径抑制ACAT-1表达发挥其抗动脉粥样硬化的作用。

脂肪分化相关蛋白促进RAW264.7细胞内酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1高表达

目的观察高表达脂肪分化相关蛋白细胞内酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达的变化,阐明脂肪分化相关蛋白促进细胞内脂质蓄积的机制。方法构建的pQCXIP-HA-Adi逆转录病毒载体转染PA317包装细胞,获得pQCXIP-HA-Adi逆转录病毒。用病毒感染RAW264.7细胞,Puromycin筛选后获得稳定高表达脂肪分化相关蛋白的RAW264.7细胞株。应用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法检测经感染后细胞内脂肪分化相关蛋白和酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1的表达。并应用阿托伐他汀处理高表达脂肪分化相关蛋白的RAW264.7细胞,观察酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达的改变。结果用pQCXIP-HA-Adi逆转录病毒感染RAW264.7细胞后,脂肪分化相关蛋白和酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1 mRNA和蛋白表达明显升高,而对照组表达无明显变化。加入阿托伐他汀后,即在去除底物对酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达影响的情况下,高表达脂肪分化相关蛋白细胞内酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达仍升高。结论高表达脂肪分化相关蛋白可明显上调RAW264.7细胞酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1的表达。

沉默酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶1基因对人前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的观察ACAT1在人前列腺癌PC-3细胞增殖和侵袭迁移中的作用。方法体外培养人前列腺癌PC-3细胞,通过脂质体Hiper Fect将ACAT1 siRNA转染至人前列腺癌PC-3细胞中沉默酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)基因的表达,Real-time PCR验证沉默的效果。利用CFSE染色法分别检测加入无血清1640培养基的空白对照组、加入阴性-siRNA-Hiper Fect复合物的阴性对照组和加入ACAT1 siRNA-Hiper Fect复合物的ACAT1组人前列腺癌PC-3细胞的增殖率,比较ACAT1基因沉默前后细胞增殖的变化。利用Transwell小室法检测ACAT1基因沉默前后人前列腺癌PC-3细胞侵袭和迁移能力的变化。结果与空白对照组和阴性对照组比较,ACAT1 siRNA组转染48 h ACAT1 mRNA表达水平最低(P<0.05)。与阴性对照组和空白对照组比较,ACAT1siRNA组细胞增殖率下降,侵袭和迁移实验中穿膜细胞数减少,差异有高度统计学意义(P<0.01)。阴性对照组与空白对照组比较,细胞增殖率、侵袭和迁移能力无变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ACAT1基因干扰能抑制PC-3细胞的增殖,减弱侵袭迁移能力,为探寻前列腺癌发病机制和治疗提供新的思路和手段。

肉碱棕榈酰转移酶1A基因多态性与肝细胞癌风险的相关性研究

目的探讨肉碱棕榈酰转移酶1A(CPT1A)基因多态性与肝细胞癌(HCC)风险的相关性。方法收集2022年3月至2023年3月中国人民解放军空军军医大学第一附属医院收治的HCC患者350例(病例组),选取同期来院体检的健康志愿者350例设为对照组。对两组样本在MassArray平台对rs80356779、rs3019594和rs28461943个单核苷酸多态性(SNP)位点进行基因分型并进行统计分析。结果rs80356779的最小等位基因A与HCC患病风险升高显著相关(P<0.05)。rs80356779和rs3019594位点的基因型频率分布在两组中差异有统计学意义(P<0.05)。rs80356779在显性和加性模型下分别增加了2.17和2.03倍的HCC患病风险(P<0.05),而rs3019594在隐形和加性模型下HCC的患病风险升高1.92和1.36倍(P<0.05)。结论CPT1A基因多态性与HCC患病风险相关,提示rs80356779和rs3019594突变可作为HCC易感人群筛查的潜在位点。

circ_0005379通过调控miR-17-5p/酰基辅酶A氧化酶1轴抑制口腔鳞状细胞癌的发展进程

目的探讨circ_0005379对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法分别以癌旁正常组织及正常口腔黏膜细胞HOK-16A为对照,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测OSCC组织和SCC15细胞中circ_0005379和miR-17-5p表达水平,蛋白印迹(Westernblot)检测酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)蛋白表达水平。转染circ_0005379过表达载体至SCC15细胞,四甲基噻唑蓝(MTT)染色法、流式细胞术、Transwell和Westernblot分别检测过表达circ_0005379对SCC15细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)、β连环素(β-catenin)和Snail蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验检验SCC15细胞中circ_0005379与miR-17-5p及miR-17-5p与ACOX1调控关系。建立稳定过表达circ_0005379的SCC15细胞裸鼠移植瘤模型,观察过表达circ_0005379对裸鼠移植瘤生长的影响。结果与癌旁组织比较,OSCC组织中circ_0005379和ACOX1蛋白表达降低(P<0.05),miR-17-5p表达升高(P<0.05)。与HOK-16A细胞比较,SCC15细胞中circ_0005379和ACOX1蛋白表达降低(P<0.05),miR-17-5p表达升高(P<0.05)。过表达circ_0005379后,SCC15细胞活性、迁移和侵袭细胞数及β-catenin和Snail蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率和E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。circ_0005379靶向负调控miR-17-5p表达,ACOX1是miR-17-5p的靶基因。过表达miR-17-5p可逆转过表达circ_0005379对OSCC细胞系增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。过表达circ_0005379的裸鼠肿瘤体积和重量降低(P<0.05),肿瘤组织中circ_0005379和ACOX1蛋白表达水平升高(P<0.05),miR-17-5p表达水平降低(P<0.05)。结论circ_0005379可能通过靶向miR-17-5p/ACOX1来抑制体外OSCC细胞增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡,同时抑制体内肿瘤生长,其可能是OSCC治疗的潜在靶点。

短链酰基辅酶A脱氢酶在心脏成纤维细胞胶原表达和细胞增殖中的作用

目的:研究短链酰基辅酶A脱氢酶(short-chain acyl-CoA dehydrogenase,SCAD)在心脏成纤维细胞胶原表达和细胞增殖中的作用,探讨其与心肌纤维化之间的关系。方法:以血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)刺激心脏成纤维细胞建立胶原表达和细胞增殖模型,并采用SCAD的最优干扰序列siRNA-1186进行干扰,检测SCAD的mRNA、蛋白表达、酶活性、脂肪酸β氧化速率、ATP以及游离脂肪酸含量的变化;观察其对心脏成纤维细胞胶原表达和细胞增殖的影响。结果:与对照组相比,在Ang Ⅱ诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原表达模型中,SCAD的mRNA和蛋白表达均显著下调。与阴性对照序列组相比,siRNA-1186干扰后心脏成纤维细胞的SCAD表达和酶活性明显下降,心脏成纤维细胞脂肪酸β氧化速率以及ATP生成明显降低,并且游离脂肪酸含量明显增多。同时,心脏成纤维细胞出现明显增殖,Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达明显增加。结论:SCAD表达失调可能导致了心脏成纤维细胞异常增殖、胶原分泌紊乱,上调SCAD可能成为干预心肌纤维化的重要环节之一。

乳香酸与三氧化二砷配伍对成纤维细胞和THP-1细胞基质金属蛋白酶产生及活性的调节作用

目的:探讨乳香、砒石主要单体成分11-羰基-β-乙酰乳香酸(acetyl-11-keto-beta-boswellic acid,AKBA)与三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)配伍对人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblast,HSFb)、人单核细胞系THP-1细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-1、MMP-2和MMP-9的调节作用,揭示其在促进创面愈合中的作用。方法:模拟创面炎症微环境建立3个细胞模型:由肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)刺激的HSFb模型,佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)活化的THP-1细胞模型和HSFb、THP-1共培养细胞模型。AKBA、ATO与这3个细胞模型共同孵育24 h后,分别用酶联免疫吸附测定(enzyme-linkedi mmunosorbent assay,ELISA)法和明胶酶谱法检测细胞培养上清中MMP-1、MMP-2和MMP-9的含量及MMP-2和MMP-9的活性;逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞中MMP-1、MMP-2和MMP-9 mRNA的表达情况;ELISA法检测各细胞模型炎性因子TNF-α和白细胞介素-1β(interleukin-1beta,IL-1β)的分泌量;蛋白印迹法检测细胞中细胞外信号调节蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated kinases 1 and 2,ERK1/2)及p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38mitogen-activated proteinkinase,p38 MAPK)磷酸化水平。结果:AKBA与ATO配伍对TNF-α刺激后的HSFb、PMA活化的THP-1细胞以及细胞共培养体系产生的MMP-1、MMP-2和MMP-9分别在活性、含量和mRNA水平有一定抑制作用(P<0.05,P<0.01);同时,AKBA与ATO配伍可降低THP-1细胞和共培养体系中TNF-α和IL-1β的分泌(P<0.01),并降低HSFb和THP-1细胞中ERK1/2及p38 MAPK磷酸化水平(P<0.05,P<0.01)。结论:AKBA与ATO配伍应用可能是通过抑制炎症状态下细胞炎症因子释放及抑制p38 MAPK信号转导通路,使成纤维细胞和炎性细胞产生MMP减少,从而发挥活血化腐、促进创面愈合的作用。

短链酰基辅酶A脱氢酶在心肌细胞凋亡中的作用

目的:研究短链酰基辅酶A脱氢酶(short-chain acyl-Co A dehydrogenase,SCAD)在心肌细胞凋亡中的变化,探讨其与心肌细胞凋亡之间的关系。方法:以叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,t BHP)刺激心肌细胞建立凋亡模型。检测细胞存活率、SCAD mRNA和蛋白表达、SCAD活性以及游离脂肪酸含量变化;并采用SCAD的最优干扰序列siRNA-1186进行干扰,观察其对心肌细胞凋亡的影响。结果:与对照组相比,在t BHP诱导的心肌细胞凋亡模型中,SCAD的mRNA和蛋白表达均显著下调。与阴性对照序列组相比,siRNA-1186干扰后心肌细胞的SCAD表达和活性明显下降,心肌细胞游离脂肪酸含量明显增加,同时,心肌细胞出现了明显凋亡,与t BHP诱导的心肌细胞凋亡趋势一致。结论:SCAD表达失调可能参与心肌细胞凋亡的过程,上调SCAD可能成为干预心肌细胞凋亡的重要环节之一。

西立伐他汀对THP-1细胞CD40和基质金属蛋白酶9表达的影响

通过观察他汀类药物对单核细胞CD4 0和基质金属蛋白酶 9的表达是否存在抑制作用 ,初步探讨他汀类药物可能的非调脂的抗动脉粥样硬化机制。将培养的THP 1细胞中加入不同浓度的西立伐他汀 ,运用RT PCR法检测CD4 0及基质金属蛋白酶 9mRNA ,酶联免疫吸附测定法测定培养基的基质金属蛋白酶 9的浓度。结果发现 ,西立伐他汀抑制THP 1细胞CD4 0和基质金属蛋白酶 9mRNA的表达 ,并呈浓度依赖性。西立伐他汀在 0 .0 1μmol L时 ,CD4 0及基质金属蛋白酶 9的表达无明显降低 ,但在 1和 10 μmol L时 ,CD4 0mRNA的表达下调 5 5 %、89% ,基质金属蛋白酶 9mRNA的表达亦明显下降 (0 .4 5 3± 0 .13比 0 .0 73± 0 .0 1和 0 .0 0 9± 0 .0 0 1)。培养基的基质金属蛋白酶 9浓度在西立伐他汀 1和 10 μmol L时分别从 0 .4 6 9± 0 .0 6降低至 0 .2 4 3± 0 .0 4和 0 .0 39± 0 .0 1(P <0 .0 5 )。结果提示 ,西立伐他汀能抑制THP 1细胞CD4 0表达以及基质金属蛋白酶的表达和分泌 ,提示他汀类药物可减轻动脉粥样斑块炎症 ,防止斑块破裂 ,从而减少急性冠状动脉事件的发生。