重组人生长激素对THP1单核细胞中活化蛋白1转录因子的影响

目的研究重组人生长激素(rhGH)对THP1单核细胞中活化蛋白1(AP-1)转录因子的影响。方法应用荧光素酶报告基因和凝胶电泳迁移率实验检测AP-1在rhGH诱导的单核细胞中的活化程度,用蛋白免疫印迹实验检测细胞外信号调控激酶(ERK)和磷酸化的ERK(p-ERK)的表达。结果与空白对照组比较,LPS组和rhGH组AP-1的转录活性升高(P<0.01);rhGH+脂多糖(LPS)组AP-1的转录活性较LPS组有明显下降(P<0.01)。同时,rhGH和LPS的预处理对ERK无显著影响,但均能促进p-ERK蛋白的表达,rhGH的预处理则能减弱LPS刺激p-ERK蛋白表达。结论 rhGH可通过双向调节ERK的磷酸化而影响THP-1单核细胞中AP-1的转录活性。

8-溴-环磷酸腺苷对单核细胞株THP1中ABCA1及细胞间黏附分子的影响

目的观察8-Br-cAMP刺激下,单核细胞株THP1中ABCA1、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及白介素-1β(IL-1β)mRNA和蛋白质表达的变化,阐明ABCA1基因在动脉粥样硬化(AS)形成中的可能机制。方法复苏培养THP1单核细胞,加入8-Br-cAMP(0.5mmol/L)刺激3、6、12、24h,设未加刺激同时孵育24h的细胞为阴性对照组;以荧光定量RT-PCR和Western印迹法及ELISA法检测ABCA1、ICAM-1及IL-1βmRNA和蛋白质表达量;用ABCA1的反义寡核苷酸(100nmol/L)转染THP1细胞,给予8-Br-cAMP刺激,同样的方法观察上述指标的改变。结果予8-Br-cAMP刺激后,THP1细胞中ABCA1、ICAM-1mRNA和蛋白质及IL-1β蛋白质表达均增高,给予反义寡核苷酸转染后氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)刺激3、6h上述指标的mRNA表达降低(P<0.01),12、24h蛋白质表达降低(P<0.01)。结论 THP1单核细胞中,8-Br-cAMP激活ABCA1不仅可增加细胞内胆固醇外运,还具有增加炎症因子表达的作用,在AS的发生中发挥双重作用。

鸢尾素通过调控内质网应激抑制脂多糖诱导的THP-1巨噬细胞炎症反应

目的探讨鸢尾素(Irisin)在脂多糖(LPS)诱导的人髓系白血病单核细胞(THP)-1巨噬细胞炎症中的作用及机制。方法采用佛波酯诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,LPS刺激构建THP-1巨噬细胞炎症模型,分为正常对照组、不同浓度Irisin组、LPS组、LPS+不同浓度Irisin组、LPS+Irisin+衣霉素(TM)组。采用酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6水平。采用线粒体膜电位(MMP)试剂盒测定MMP。采用活性氧(ROS)试剂盒测定ROS水平。采用Western印迹检测肌醇需要酶(IRE)1α、双链RNA激活的蛋白激酶类内质网激酶(PERK)、免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)、phospho-核转录因子(NF)-κB p65和NF-κB p65的表达。结果与正常对照组相比,LPS诱导的THP-1巨噬细胞上清液中TNF-α、IL-6和IL-1β水平明显升高(均P<0.05);200 ng/ml Irisin处理后,LPS诱导的THP-1巨噬细胞TNF-α、IL-6和IL-1β分泌显著下降(均P<0.05);200 ng/ml Irisin和TM共同处理LPS诱导的THP-1巨噬细胞后,TNF-α、IL-6和IL-1β水平又显著升高(均P<0.05)。与正常对照组相比,LPS组ROS水平明显升高,MMP明显下降(均P<0.05),而Irisin则可显著抑制LPS诱导的THP1巨噬细胞ROS水平升高和MMP下降(均P<0.05)。与LPS组相比,LPS+Irisin组BIP、PERK和IRE1表达水平及phospho-NF-κB p65/NF-κB p65比值均明显降低(P<0.05),而与LPS+Irisin组相比,LPS+Irisin+TM组以上指标均明显升高(P<0.05)。结论Irisin可通过抑制内质网应激和NF-κB信号通路,改善氧化应激和线粒体功能,进而抑制LPS诱导的THP-1巨噬细胞炎症反应。

miR-497对THP-1巨噬细胞NLRP1表达及胆固醇流出的影响

目的探讨miR-497对人单核细胞白血病(THP)-1巨噬细胞含有Pyrin结构域NLR家族蛋白(NLRP)1表达及胆固醇流出的影响。方法THP-1巨噬细胞,经佛波酯及氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)处理,转化为泡沫细胞。将miR-497 mimic转染入细胞内,采用油红O和Dil Ox-LDL染色检测细胞中的脂质积累和胆固醇流出情况,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测NLRP1 mRNA表达水平,Western印迹检测NLRP1、CD36、白细胞介素(IL)-1β及IL-18蛋白水平及荧光素酶报告基因分析miR-497与NLRP1的直接作用。结果油红O染色表明,miR-497 mimic转染后24 h,细胞中脂质储存显著下降(P<0.05)。利用Dil Ox-LDL来追踪Ox-LDL摄取,发现miR-497 mimic转染后24 h和48 h的胆固醇流出量显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,miR-497 mimic转染显著降低了THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞的NLRP1蛋白表达(P<0.05),并且CD36和IL-1β、IL-18等促炎因子蛋白表达显著降低(P<0.05)。NLRP1用荧光素酶报告基因检测miR-497的靶基因,并且与对照组相比,miR-497 mimic可显著抑制NLRP1 mRNA表达(P<0.05)。结论miR-497通过靶向抑制THP-1巨噬细胞NLRP1,促进胆固醇流出。

黄连素对间歇性缺氧诱导的单核细胞分化和环氧合酶2表达的影响

目的探讨黄连素对间歇性缺氧诱导的单核细胞THPI分化和环氧合酶2表达的影响。方法利用三气细胞培养箱在间歇性缺氧条件下培养单核细胞系THP1细胞0、12、24、48 h,以正常氧环境培养作为对照。采用流式细胞技术检测单核细胞分化的标志蛋白CD_(14)的表达变化,采用蛋白质印迹法检测环氧合酶2蛋白的表达变化。利用黄连素同时处理间歇性缺氧或正常氧状态培养的THP1细胞,采用流式细胞技术和蛋白质印迹法检测黄连素对间歇性缺氧诱导的单核细胞THP1分化和环氧合酶2表达的影响。结果间歇性缺氧24、48 h的CD_(14)阳性细胞比例明显高于间歇性缺氧0 h[(16.06±0.34)%、(15.75±2.47)%比(3.26±0.30)%],差异均有统计学意义(均P<0.05),间歇性缺氧12 h的CD_(14)阳性细胞比例[(3.80±0.47)%]与间歇性缺氧0h比较,差异无统计学意义(P>0.05)。间歇性缺氧24、48 h后THP1细胞环氧合酶2蛋白相对表达量明显高于间歇性缺氧0 h[(190±22)%、(295±23)%比(100±8)%],差异均有统计学意义(均P<0.05),间歇性缺氧12 h的THP1细胞环氧合酶2蛋白相对表达量[(129±11)%]与间歇性缺氧0 h比较,差异无统计学意义(P>0.05)。正常氧状态培养48 h与正常氧状态+黄连素(3μmol/L)培养48 h的CD_(14)阳性细胞比例比较[(3.57±0.29)%比(3.31±0.22)%],差异无统计学意义(P>0.05)。间歇性缺氧48 h后CD_(14)阳性细胞比例[(15.30±1.47)%]明显高于正常氧状态培养48 h,间歇性缺氧+黄连素(3μmol/L)培养48 h的CD14阳性细胞比例[(3.68±0.35)%]明显低于间歇性缺氧48 h,差异均有统计学意义(均P<0.05)。正常氧状态培养48 h与正常氧状态+黄连素(3μmol/L)培养48 h的环氧合酶2蛋白相对表达量比较[(100±8)%比(104±17)%],差异无统计学意义(P>0.05)。间歇性缺氧48 h后环氧合酶2蛋白相对表达量[(162±4)%]明显高于正常氧状态培养48 h,间歇性缺氧+黄连素(3μmol/L)培养48 h的环氧合酶2蛋白相对表达量[(114±14)%]明显低于间歇性缺氧48 h,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论间歇性缺氧能促进THP1分化及环氧合酶2表达,黄连素能有效抑制间歇性缺氧对THP1分化及环氧合酶2表达的促进作用。

PBX1基因对系统性红斑狼疮易感基因IFI16表达的影响

探讨PBX1基因转染人单核细胞系THP1后,对IFI16基因表达的影响。以携带人PBX1基因表达序列的复制缺陷型5型腺病毒载体(pDC315-PBX1-EGFP)转染THP1细胞后,采用实时定量PCR(RT-PCR)和Western blot技术分别在mRNA水平和蛋白水平检测PBX1和IFI16表达的变化。结果,pDC315-PBX1-EGFP转染THP1细胞后,PBX1基因的表达水平都增高,同时发现IFI16基因的表达水平降低。PBX1作为一种转录因子,能调节干扰素诱导蛋白IFI16的表达。