蝎素组分Ⅲ对THP1细胞NF-κB转录因子的影响

目的:研究蝎素组分Ⅲ(Scorpion venom crudeⅢ,SVC-Ⅲ)对THP1细胞中NFκ-B转录因子的影响。方法:用RT-PCR方法检测THP1细胞中p65和IKK1基因的表达;Western blot检测细胞p65蛋白的表达;荧光素酶报告基因的方法观察NF-κB的转录活性。结果:1μg/L浓度的SVC-Ⅲ在mRNA和蛋白水平均对NFκ-B有促进表达作用,并增强NFκ-B的转录活性;10μg/L浓度的SVC-Ⅲ则未显示出促进作用;100μg/L浓度的SVC-Ⅲ反而表现出一定的抑制作用。结论:SVC-Ⅲ能以剂量依赖的方式调节THP1细胞NFκ-B转录因子的表达和活性。

基于THP1-Blue^(TM) NF-κB报告基因法的体外热原检测方法开发与验证

目的:利用导入核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)报告基因和分泌型胚胎碱性磷酸酶(secreted alkaline phosphatase,SEAP)活性的人单核细胞白血病细胞系THP-1细胞,建立一种可用于体外热原检测的方法,并考察方法的可行性和品种适用性。方法:参照《中华人民共和国药典》四部通则9101分析方法验证和9301注射剂安全检查法应用指导原则(附单核细胞活化反应测定法),以细菌内毒素国家标准品作为基准,对THP1-BlueTM NF-κB报告基因法进行专属性、精密度、耐用性等方法学研究;以精密度和阈值作为方法可行性分析的判断指标;并进行品种适用性研究。结果:所建立的方法符合《中华人民共和国药典》9301中单核细胞活化反应测定法的要求,R2均为0.999以上;计算最低检测限0.03 EU·mL^(-1);以内毒素含量为0.5,1.0 EU·mL^(-1)的溶液做回收实验,方法的准确度分别为101%和106%;通过本方法完成人凝血酶原复合物、冻干人纤维蛋白原、b型流感、23价肺炎、牛痘疫苗的品种适用性研究。结论:THP1-Blue^(TM) NF-κB报告基因法满足单核细胞激活实验要求,可用于体外热原物质检测。