TIF3转基因CHO和COS7细胞株的构建与鉴定

目的 构建 TIF3转基因 CHO和 COS7细胞株并对其构建的细胞株进行鉴定。方法 采用磷酸钙介导转染技术和 G4 18细胞筛选法 ,以 pc DNA3.1/ V5 - His- TOPO为表达载体 ,构建 TIF3转基因 CHO和 COS7细胞株 ;并应用 Western Blot技术对转基因表达产物进行分析与鉴定。实验设计分无转染组、载体转染组和目的基因转染组。结果 在 7株转染的 CHO细胞株中 ,有 3株具有高效稳定表达的 TIF3编码蛋白质 ;在 4株转染的 COS7细胞株中有 2株同样具有高效稳定的 TIF3编码蛋白质表达。结论 本研究成功地构建了 3株 TIF3转基因 CHO细胞株和 2株 TIF3转基因 COS7细胞株 。

TIF3转基因CHO和COS7细胞株的构建与鉴定

[目的 ]TIF3(MouseTranslationInitiationFacfor 3)是从镉转化BALB/c 3T3细胞中克隆出来的新基因 ,其在基因文库 (Gen Bank)的新添编号为AF2 710 72。为了对该基因的生物学功能进行研究 ,构建了TIF3转基因CHO和COS7细胞株并作了鉴定。[方法 ]采用磷酸钙介导转染技术和G418细胞筛选法 ,以pcD NA3 1/V5 His TOPO为表达载体 ,构建TIF3转基因CHO和COS7细胞株 ;应用WesternBlot技术对转基因表达产物进行分析与鉴定。实验设计分无转染组 (空白对照 )、载体转染组 (载体对照 )和目的基因转染组 (载体 +TIF3cDNA )。 [结果 ]结果显示 ,无论在CHO细胞还是COS7细胞 ,经转染和G418筛选后 ,无转染组的细胞 10 0 %死亡 ,而载体转染组和TIF3cDNA转染组的细胞形成较多的细胞集落。提示克隆化基因的细胞转染及G418筛选效果良好。经WesternBlot分析与鉴定 ,在 7株转染和经G418反复筛选的CHO细胞株中 ,有 3株具有高效稳定表达约 36kDa的TIF3编码蛋白质 ;在 4株转染和经G418反复筛选的COS7细胞株中有 2株也具有高效稳定的TIF3编码蛋白质表达 ,而无转染组和载体对照组的CHO和COS7细胞均缺乏此蛋白质表达。 [结论 ]本研究成功地构建了 3株TIF3转基因CHO细胞株和 2株TIF3转基因COS7细胞株。这两类TIF3转基因哺乳动物细胞稳定?