肝癌TIL细胞转导IL-2基因的生物学变化研究

目的：为探讨ＩＬ２基因导入肝癌浸润淋巴细胞及对其生物学活性的影响。方法：应用逆转录病毒载体介导ＩＬ２基因导入人肝癌浸润淋巴细胞（ＴＩＬ），同时对经转导ＩＬ２基因的肝癌浸润淋巴细胞的杀伤活性，增殖能力及表型等进行了观察。结果：转导ＩＬ２基因后的肝癌浸润淋巴细胞能表达一定量的ＩＬ２，明显高于未转导细胞，但其杀伤肿瘤细胞活性，增殖能力及表型等没有显著变化。结论：应用逆转录病毒载体介导ＩＬ２基因导入人肝癌浸润淋巴细胞获得成功，亦有ＩＬ２基因产物表达。

应用TNF基因导入TIL细胞的初步研究

近几年来,用淋巴因子进行肿瘤的过继免疫疗法取得了很大的进展,然而由于淋巴因子进入体内后极易被机体分泌的酶类降解。半衰期较短,因此需要不断地从外界进行补充,而基因重组的淋巴因子价格昂贵,给过继免疫疗法的临床应用带来了一定的问题。1990年9月。

血清IL-2水平对胸水TIL细胞体外扩增及活性的影响

目的 通过对血清白介素 2 (interleukine 2 ,IL 2 )水平的检测 ,了解内源性IL 2水平对胸水TIL细胞体外扩增及抗肿瘤活性的影响。方法 对 5 4例有恶性胸水患者 ,第一次抽胸水时无菌收集胸水 ,进行TIL细胞培养 ,并同时进行血清IL 2水平检测。TIL细胞体外杀瘤活性用MTT法检测 ,血清IL 2的水平用ELISA法检测。将IL 2水平较高的 2 7例患者分为 1组 ,IL 2水平较低的 2 7例患者分为另 1组 ,比较两组患者胸水TIL细胞体外增殖速度及杀瘤活性。结果 血清IL 2水平较低组 ,TIL细胞体外培养 8天后扩增 5 9.3± 2 0 .9倍 ,培养 12天后扩增 112 .5± 32 .9倍 ,明显高于IL 2水平较高组的 2 4 .0± 11.0倍和 6 2 .5± 2 1.9倍。IL 2水平较低组TIL细胞体外杀瘤率为 4 5 .3± 9.5 % ,明显高于IL 2水平较高组的 2 6 .7± 7.3% ,P<0 .0 5。结论 血清IL 2水平高低与TIL细胞体外增殖的速度及其杀瘤活性明显相关 ,IL 2水平较低的患者胸水中TIL细胞体外增殖的速度较快 ,杀瘤活性较强。血清IL 2水平可望作为恶性胸水IL 2 /TIL治疗选择的指标。

头颈部鳞癌TIL细胞制备的方法学研究

从实体肿瘤中分离到的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)在体外经IL2激活后可大量扩增，并对肿瘤细胞有高度杀伤活性。本文对6例头颈鳞癌本院实体标本用直接法和酶消化法分离培养，并对两种培养方法进行细胞表型及活性测定，靶细胞为自体瘤细胞及K562细胞。结果显示：分离细胞数，

肝癌疫苗激活的TIL细胞对原发性肝癌患者的NK细胞活性的影响及意义

目的 :探讨经肝癌疫苗激活的肿瘤浸润性淋巴细胞 (tum or infiltrating lym phocytes,TIL)对原发性肝癌患者 NK细胞活性的影响。方法 :使用冷冻方法制成肝癌疫苗 ,用于激活 TIL 细胞。对 2 6例原发性肝癌患者使用经肝癌疫苗激活的 TIL 细胞治疗 ,检测其治疗前后 NK细胞活性的变化 ,并与对照组相比较。结果 :应用肝癌疫苗激活的 TIL 细胞的患者 ,其 NK细胞活性明显提高。结论 :应用肝癌疫苗激活的 TIL 细胞 ,能明显地提高原发性肝癌患者的

双歧杆菌协同TIL细胞体内杀瘤活性的研究

本研究应用从小鼠Ｓ１８０癌性腹水分离诱导的ＴＬ瘤内注射与活的双歧杆菌腹腔内注射共同治疗荷Ｓ１８０实体瘤小鼠，结果表明单用ＴＩＬ和ＴＩＬ合用ＩＬ－２早期抑瘤效果，能延缓肿瘤的发生和发展，而晚期抑瘤效果尚不及单用双歧杆菌组。ＴＩＬ与双歧杆菌、ＴＩＬ、双歧杆菌及低剂量ＩＬ－２，荷瘤早、晚期抑瘤效果均较好，且毒副作用低，表明双歧杆菌有可能通过刺激机体产生内源性ＩＬ－２维持ＴＩＬ的生物学活性从而协同ＴＩＬ细胞在体内的杀瘤作用。本研究亦表明ＴＩＬ中以ＣＤ＋细胞为主，杀瘤活性有一定的ＭＨＣ限制。

TIL细胞治疗对恶性肿瘤患者免疫功能的影响

应用ＴＩＬ治疗１８例消化道恶性肿瘤患者，ＴＩＬ细胞的输注途径为肿瘤供血动脉和腹腔内注射，输注细胞数为１．５～３×１０９。输注ＴＩＬ细胞后，绝大多数患者外周血Ｔ细胞亚群比例显著上升（Ｐ＜０．０５），ＮＫ和ＬＡＫ细胞活性显著增强（Ｐ＜０．０５）。结果显示，ＴＩＬ细胞的输注明显提高了肿瘤患者的免疫功能。

恶性黑色素瘤TIL细胞免疫过继疗法途径的探讨

This paper had reported that 8 patients who suffered who malignent melanoma had received TIL cell injechon at primary and matastasis focuses, and the satisfied result was obtained due to TIL cell had higher anti - tumor specificity thanLAK cell whethr under nicroscope or in clinical aspets.

TIL细胞联合IL-2瘤内注射对荷瘤小鼠作用的观察

目的用TILIL－2对荷瘤小鼠进行瘤体内注射，使肿瘤生长受到抑制。方法将荷瘤小鼠分为两组，腹腔注射组和瘤内注射组，每鼠给药量TIL0.5×107＋IL－2500U／次，每隔3～4天注射一次，共6次。测量肿瘤大小，病理切片进行分析。结果瘤内注射者肿瘤生长明显受到抑制，在病理切片中可见肿瘤周围组织中有大量淋巴细胞浸润而全身给药者治疗结果不及前者。结论瘤体内给药提高了肿瘤局部的免疫力，同时可以合理的安排杀伤细胞到达肿瘤部位的有效浓度，从而抑制了肿瘤细胞的增殖，也避免了全身用药所产生的毒副作用，是一种很有潜力的治疗手段。

TIL细胞治疗对肺癌患者红细胞免疫功能的影响

应用TIL细胞治疗28例肺癌患者,TIL细胞的输注途径为静脉点滴和胸腔内注射,输注细胞数为2.0×10~3～5.0×11~9。输注TIL细胞后,绝大多数患者外用血红细胞C3b受体花环率(E-C3bRR)明显增高。而红细胞免疫复合物花环率(E-ICR)明显降低(P【0.01)。结果显示,TIL细胞的输注提高了肺癌患者红细胞免疫功能。

用TIL细胞和rIL—2、IFN联合治疗恶性胸膜间皮瘤

胸膜间皮瘤较少见.目前尚缺乏有效疗法.手术、放、化疗结果常不满意.近年来,白细胞介素2(IL—2)、过继转移免疫疗法为许多放、化疗无效的中晚期癌症病人提供了新的治疗途径.目前已确认有几种淋巴细胞亚群可用于过继免疫治疗,其中杀伤活性最高的是肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL).本文探讨了这方面的工作并附1例报告.ILAK/IL—2疗法:LAK细胞是一种细胞毒性细胞,由IL—2激活,它能杀伤NK抵抗性肿瘤细胞,抗瘤谱广,其杀伤作用无主要组织相容性抗原(MHC)约束性,可杀伤同基因、同种异体乃至异种的肿瘤细胞.目前＊＊H细胞多用外周血淋巴细胞(PBL)制备,肿瘤引流淋巴结、骨髓、胸腺、肝、脾等的淋巴细胞,也可成为LAK细胞来源.

国家卫生研究院推迟许可第一个人体基因转化:用于TIL细胞的标记

7月29日,基因治疗迈出了一小步。国家卫生研究所(NIH)的重组DNA咨询委员会(RAC)的人体基因治疗小组要求在人体内进行第一次基因转化之前附加动物试验。在进行标记基因插入人体TIL纳胞的工作以前,必须由NIH院长James Wyngaarden、RAC、基因治疗小组及尽可能地由卫生部卫生助理Robert Windom许可。 TIL细胞—肿瘤渗透性淋巴细胞是癌症病人抑制肿瘤并受白细胞介素-2刺激的自身白细胞。在体外增殖以后,他们重新转入病人体内以攻击恶性生长。

重组IL_2联合LAK和TIL细胞治疗癌性胸腔积液

采用自体淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)和重组白细胞介素2_rIL_2静脉滴注,同时将胸液中的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)体外培养、扩增后联同_rIL_2注入胸腔治疗肺癌癌性胸腔积液30例。结果显示完全缓解(CR)16例(53％),部分缓解(PR)12例(40％),无效(NC)2例(7％)。治疗后多数患者闷喘减轻,精神好转,食欲增加,体力增强,外周血白细胞增加,PR、NC病例胸液中淋巴细胞增多,癌胚抗原(CEA)下降。除12例(40％)出现一过性发热,4例(13％)出现荨麻疹,未作处理好转。表明本疗法治疗肺癌癌性胸腔积液是有效的,能提高患者的生存时间及生活质量。

TIL细胞研究进展

TIL细胞是一种比LAK细胞较少依赖IL-2,杀伤自体肿瘤活力更强,更特异性的免疚活性细胞;与LAK细胞不同,它可与环磷酰胺合用而达极强抗瘤效果。通过正常人(或自体)LAK细胞培养上清液和少量活的肿瘤细胞、IL-2的加入,在各种容器以至全封闭自动化气囊培养系统中可得到大量长期培养的TIL免疫活性细胞。TIL主要由OKT_4^+、CD_3^+·Leu19^+、CD_3^-·Leu19^+等杭肿瘤T细胞亚群和OKT_8^+、CD_8^+、CD_4^+、CD_3^+·Leu19^-等增殖类亚群组成。临床治疗26例有转移的癌病人已显示7例有效,尤其TIL-IL-2-环磷酰胺三联剂治疗12例中4例有显效。

恶性胸/腹水肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)体外选择性CD8+T细胞扩增的培养体系建立及功能表型分析

目的探讨体外恶性胸/腹水中肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)大量培养扩增方法并初步研究其分子表型及功能特征.方法无菌操作条件下抽取恶性肿瘤患者胸/腹水,密度梯度离心法分离淋巴细胞,采用γ干扰素(IFN-γ)、抗CD3多克隆抗体OKT3和白细胞介素2(IL-2)为基础的联合方案扩增TIL,并记录其细胞形态及扩增速度.采用流式细胞术动态检测扩增淋巴细胞的分子表型T淋巴细胞亚群中淋巴细胞激活信号分子F7(SLAMF7)、CD45RO、颗粒酶B(GZMB)、程序性死亡蛋白1(PD-1)、CD57阳性细胞比例,CCK-8法检测其对肿瘤的杀伤能力.结果在本培养方案中,TIL细胞培养至第26天状态良好,第30天开始增殖速率下降.CD4^(-)CD8^(+)T细胞及CD8^(+)CD56^(+)T细胞比例随培养时间的延长逐渐提高,CD4^(+)CD8^(-)T细胞的比例逐渐下降,CD4^(+)CD25^(+)T细胞始终保持低水平状态.与扩增前相比,SLAMF7、CD45RO、GZMB、PD-1阳性细胞比例均有显著提高,耗竭性T细胞标志CD57表达比例也逐渐升高.TIL源性扩增性T细胞杀伤肿瘤细胞能力明显强于外周血单个核细胞(PBMC)源性,当效靶比为10∶1时杀伤能力最强,且杀伤能力在肿瘤细胞类型间存在明显差异.结论建立了从癌性胸/腹水中大量扩增TIL的培养方案,方法简便易行、效率高、杀伤肿瘤能力强,其效应细胞主要为CD8^(+)T细胞,表型处于活化状态.

淋巴因子激活的LAK/TIL细胞的表型

为研究肿瘤生物疗法中淋巴因子激活的杀伤细胞及其功能和特征与表型之间的关系，用流式细胞术（ＦＣＭ）结合抗体双荧光标记法对培养的淋巴因子激活杀伤细胞作连续的多项表型监测，发现存在着ＣＤ３－ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋型，ＣＤ４＋型，ＣＤ８＋ＣＤ２８＋型，ＣＤ８＋ＣＤ２８－型的淋巴因子激活杀伤细胞的亚型。研究了ＣＤ３－ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋亚型、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋亚型的杀伤活性，显示了对不同的肿瘤靶细胞有不同的敏感性。

原代培养的肺癌细胞对TIL的反杀伤作用

目的探讨肺癌细胞对TIL细胞是否具有反杀伤作用及意义。方法用MTT法检测8例人原发性肺癌的原代培养肿瘤细胞被Fas配体(Fasligand.FasL)抗体封闭前后对肿瘤浸润淋巴细胞(TumorInfiltratingLymphocytes,TIL)的杀伤活性。结果发现原代培养的肺癌细胞被FasL抗体封闭前后对T1L均有不同程度的杀伤作用,但经FasL抗体封闭后的肿瘤细胞对TIL的杀伤活性均有所下降,两组之间存在显著差异(p<0.05)。结论提示肺癌细胞对TIL细胞的反杀伤作用可能是其逃避免疫攻击的机制之一。