B淋巴瘤中纯化TIL-T的IL-2Rα基因突变及蛋白表达检测

目的 :探讨B淋巴瘤 (B NHL)中肿瘤浸润T细胞 (TIL T)的活化标记IL 2Rα(CD2 5 )的基因突变 ,肿瘤组织中CD2 5蛋白表达及TIL T的增殖特点。方法 :19例B NHL提纯TIL T ,RT PCR和SSCP检测其IL 2Rα的基因突变与否 ;MTT法检测 17例TIL T在低浓度rIL 2刺激下的增殖情况 ;冰冻切片免疫组化检测 2 9例B NHL中IL 2Rα蛋白的表达。结果 :SSCP显示19例TIL T的IL 2Rα未发现异常泳动条带 ;rIL 2刺激下 ,13 17例 (76 5 % )TIL T增殖表现下调 ;免疫组化显示B NHL中 2 5 2 9例 (86 2 % )CD2 5表达为 (+ - )和 (+) ,4 2 9例 (13 8% )CD2 5表达为 (++～ +++)。结论 :TIL T的IL 2Rα未发现基因异常 ,但TIL T表达CD2 5蛋白数量异常 ,提示B T接触活化异常可能是B

B细胞淋巴瘤TIL-T的IL-2Rα基因突变及蛋白表达检测

目的 :检测B细胞淋巴瘤 (B NHL)中肿瘤浸润T细胞 (TIL T)的活化标记IL 2Rα(CD2 5 )的基因及蛋白表达 ,寻找TIL T在B NHL肿瘤微环境中存在意义的实验依据。方法 :将 19例B NHL提取RNA ,采用RT PCR和SSCP检测其IL 2Rα的Ⅳ Ⅷ外显子基因突变与否 ;19例B NHL采用细胞免疫化学染色进行CD3、CD4、CD8、CD2 0、CD2 5细胞免疫表型的分析 ;2 9例B NHL和 2 0例良性淋巴组织 ,采用冰冻切片免疫组化方法进行IL 2Rα(CD2 5 )蛋白表达的检测。结果 :SSCP显示 19例TIL -T的IL 2Rα未发现异常泳动条带。细胞免疫化学染色示B NHL中 5 2 .6 3% (10 /19例 )的CD2 5 +细胞少于 10 % ,TIL T(CD3+)与CD4相关 (r =0 .5 7,P <0 .0 1)并与CD2 5相关 (r =0 .5 0 ,P <0 .0 5 )。免疫组化示 86 .2 % (2 5 /2 9例 )的B NHL中CD2 5表达 (+/- )和 (+) ,且主要表达在TIL T细胞上 ,呈散在分布 ,阳性细胞少于T标记细胞。结论 :19例TIL T的IL 2Rα在RNA水平未发现基因异常 ;CD2 5蛋白在B NHL中呈弱表达趋势。提示部分TIL T不表达CD2 5 ,推测TIL T的IL 2Rα的表达在转录后机制中可能出现异常或TIL T存在活化障碍。

卵巢癌患者术后化疗联合应用S-TIL细胞后T淋巴细胞亚群的变化

目的 :观察卵巢癌患者术后化疗辅加冷冻卵巢癌瘤苗激活的肿瘤浸润淋巴细胞 (S- TIL)治疗前后 T淋巴细胞亚群的变化。方法 :将 76例卵巢癌术后行化疗的患者分为 S- TIL 治疗组及对照组。 2组分别于化疗前及治疗后第 7,14,2 1天采外周静脉血检查 T淋巴细胞亚群 ,并进行比较。结果 :治疗组 CD3 +、CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+比值在 14d左右即上升 ,与对照组比较有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :卵巢癌术后化疗联合应用 S- TIL

免疫细胞疗法在实体瘤治疗中的挑战与对策

近年来,以T淋巴细胞为主的免疫细胞疗法在血液系统肿瘤和部分实体瘤中取得了一定的进展。然而,其对大部分实体瘤治疗的有效性和安全性仍面临着诸多挑战,如肿瘤抗原异质性和免疫逃逸、免疫细胞浸润能力差、免疫抑制微环境、代谢微环境阻碍和T细胞耗竭等,这些问题限制了免疫细胞对实体瘤治疗的疗效进一步的提升。通过寻找新抗原、设计多靶点CAR、过表达趋化因子受体及细胞因子、敲除抑制性信号分子、增强T细胞代谢能力、联合免疫检查点抑制剂,以及表观遗传修饰等手段能够有效改善免疫细胞在实体瘤治疗中的效果。本文系统性地对TIL、TCR-T细胞和CAR-T细胞为代表的免疫细胞对实体瘤治疗的研究现状、面临的挑战和解决策略进行评述。

低剂量X射线全身照射后小鼠IL-10和IL-12的反向变化

通过检测低剂量辐射 (LDR)对小鼠脾淋巴细胞中IL - 10以及腹腔巨噬细胞中IL - 12的影响 ,研究LDR辐射免疫效应的机制。采用Northernblot检测了 75mGyX射线全身照射后 ,IL - 10、IL - 12mRNA水平的变化 ,同时分别通过流式细胞术和ELISA检测了IL - 10、IL - 12蛋白水平的变化。(1)Northernblot检测表明 ,75mGyX射线全身照射后脾细胞中IL - 10的mRNA转录水平从照射后 1h即降低 ,并维持较低水平 ,一直到 4 8h开始恢复 ,达到假照射水平的 86 .2 % ;巨噬细胞中IL- 12两亚基的mRNA水平的变化则表现为 ,照射后 1hp35及p4 0亚基均迅速升高分别达到假照射组的 131%和 192 %。而后 ,p35开始回降 ,直至照射后 16 - 4 8h恢复正常 ,p4 0亚基从照射后 1-4 8h总体表现为升高。(2 )对蛋白产物检测结果表明 ,脾细胞IL - 10合成在照射后 2h开始即呈时间依赖性降低 ,至 4 8h仍无恢复迹象 (p <0 .0 1) ,双抗体夹心酶联免疫吸附法 (ELISA)检测表明 ,巨噬细胞分泌IL - 12明显增高。LDR引起IL - 10和IL -

抗原负载树突状细胞介导肝癌患者肿瘤杀伤细胞功能状态研究

目的:探讨肝癌细胞抗原负载树突状细胞激活肝癌患者外周血细胞毒性T细胞(CTL)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的抗肿瘤作用。方法:以细胞计数、间接荧光表型测定分析肝癌患者DC功能状态;MTT法测定肝癌细胞抗原负载DC介导肝癌患者外周血CTL、TIL对肝癌细胞的杀伤活性。结果:肝癌患者DC表达CD1a、CD80、CD83和HLA-DR等分子水平,DC介导的CTL、TIL对肝癌细胞的杀伤活性明显低于健康对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:肝癌患者存在DC功能缺陷,致使其介导的CTL、TIL对肝癌细胞的杀伤作用明显降低。

s-TIL对肝癌化疗栓塞后T淋巴细胞亚群的影响

目的 观察原发性肝癌化疗栓塞辅加冷冻肝癌瘤苗刺激的肿瘤浸润淋巴细胞 (s TIL)治疗前后外周血T淋巴细胞亚群的变化。方法 82例行化疗栓塞 (TACE)后的肝癌患者分为s TIL治疗组及对照组。 2组分别于TACE治疗前及治疗后 7天、14天、2 1天采外周静脉血检查T淋巴细胞亚群 ,2组进行比较。结果 治疗组CD+ 3 、CD+ 4、CD+ 8、CD+ 4/CD+ 8比值在 14天左右即上升 ,与对照组比较有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 原发性肝癌TACE治疗后辅加s

肿瘤浸润性淋巴细胞亚群的功能研究及其受体克隆

目的比较肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)各亚群体外特异性杀伤肿瘤功能,摸索TIL细胞表面受体(TCR)互补决定区3(CDR3)基因体外扩增的方法,为寻找TIL细胞中肿瘤特异性抗原受体奠定前期实验基础。方法从肺癌肿瘤组织中分离出TIL细胞,利用CD8、PD-1抗体将TIL细胞分群,实时无标记细胞功能分析技术(real time cellular analysis,RTCA)分析比较各亚群细胞特异性杀伤活性。利用巢式RT-PCR的方法建立TCR VαCDR3区基因体外扩增的方法。结果TIL细胞中CD3^+CD8^+(CTL)细胞亚群占75.7%,PD-1的表达约为29.7%;CD8^+PD-1^+TIL细胞亚群比CD8^+PD-1-TIL细胞具有更强的体外杀伤原代肿瘤细胞功能;巢式RT-PCR成功扩增出TCR Vα1CDR3区基因片段。结论CD8^+PD-1^+TIL细胞亚群具有较强的特异性杀伤肿瘤活性;建立了通过巢式RT-PCR体外成功获取TCR所有CDR3区基因片段的实验条件。

非小细胞肺癌组织中T淋巴细胞亚群的观察

目的:了解非小细胞肺癌组织局部免疫功能状况。方法:应用免疫组织化学技术对34例肺鳞癌和腺癌组织中的T淋巴细胞亚群(T—Ls)进行了原位定量观察。结果:肺癌组织比肺良性疾病组织中CD_4^+/CD_8^+细胞比值降低,差异非常显著(P<0.01);肺癌淋巴结转移组、低分化肺癌组比对照组组织中CD_3^+细胞减少,差异显著(P<0.05)。结论:肺癌组织局部的免疫功能低下,细胞免疫的调节机能紊乱。肺癌伴有淋巴结转移患者比未转移患者局部的免疫功能更低下。肺癌分化程度越低,局部的免疫机能越差。

肿瘤患者T细胞克隆性增殖与预后的分析

目的 通过分析肿瘤患者肿瘤浸润性淋巴细胞 (tumor infiltratinglymphocyte ,TIL)和外周血淋巴细胞 ( peripheralbloodlymphocytes,PBL)中克隆性增殖T细胞的TCRβ基因谱型的分子特征 ,研究T细胞免疫在肿瘤预后中的作用。方法 采用RT PCR及变性聚丙烯酰胺测序凝胶电泳方法扩增并分离TCRβ基因V J重排片断。通过PCR产物直接测序的方法 ,判断T细胞克隆的特征 ,得到CDR3区氨基酸序列。结果 在结直肠癌、肺癌TIL和术前PBL中均发现TCRβ基因的寡克隆性扩增 ,它们在术后的PBL中均消失。具有术前PBL的克隆性增殖T细胞的患者还可能影响肿瘤的预后。结论 肿瘤患者的肿瘤组织和术前外周血中都存在肿瘤肽特异性激活的T细胞克隆 。

基于新抗原的肿瘤个体化治疗研究与应用进展

新抗原是癌细胞通过非同义突变产生的可被加工提呈并引起特异性T细胞免疫应答的异常蛋白。新抗原的强大免疫原性及其仅表达于肿瘤细胞的特点,使其成为近些年肿瘤治疗的热门靶点。基于新抗原的个体化疫苗和靶向新抗原的过继细胞疗法在临床试验中取得了良好疗效,增强了免疫治疗的临床效果。本文将对近些年基于新抗原的肿瘤个体化治疗的最新研究和应用进展做一介绍。

TCRb REPERTOIRE IN TIL AND PBL OF PATIENTS WITH COLORECTAL CANCER

Objective: To study T cell immunology in patients with colorectal cancer, the molecular features of clonal expanded T cell in TIL and PBL were analyzed by assessment of TCRb gene reopertoire. Methods: The rearranged V-J genes of TCRb chain were amplified by RT-PCR and separated with denaturation polyacrylamide sequencing gel eletrophoresis. The PCR products were sequenced directly to determine the characteristics of the clonal expanded transcripts. Results: There were oligoclonal expanded transcripts of TCRb V genes both in TIL and PBL from pre- operation patients, which all disappeared in PBL after operation. The amino acid sequences of the CDR3 regions in these oligoclonal expanded T cells suggested that they related with the tumor peptide-specific activation. Existence of clonal expanded T cells in PBL may have relevance with the recurrence. Conclusion: Tumor peptide-specific Activated T cell clones were found not only in TIL of colorectal cancer tissue, but also in PBL of tumor-bearing patients. The activation of systemic T cell immunology may play an important role in the prognosis of patients.

肿瘤微环境代谢重编程调控耗竭性CD8^(+)T细胞研究进展

CD8^(+)T细胞耗竭是免疫疗法低应答率的重要原因之一。在肿瘤微环境中,肿瘤细胞优先利用有氧糖酵解等代谢重编程方式来使其获得优势生存,其所造成的缺氧、营养物质的消耗以及代谢有毒废物产生等特定的微环境应激会抑制CD8^(+)T细胞代谢并影响其分化。研究表明,耗竭CD8^(+)T细胞可发生代谢功能不全,伴随着信号级联和表观遗传背景的改变,从而抑制效应性免疫,并导致对免疫检查点阻断治疗反应不良。了解功能受损的耗竭性CD8^(+)T细胞其代谢改变,以及在肿瘤微环境中CD8^(+)T细胞与肿瘤细胞之间的代谢交互作用,并以此将代谢干预与免疫治疗相结合,或许是恢复T细胞的抗肿瘤活性的重要策略之一。因此,本文对CD8^(+)耗竭性T细胞其代谢特征以及在肿瘤微环境中异常代谢紊乱对CD8^(+)T细胞耗竭功能影响和靶向治疗等作一综述。

过继性T细胞治疗在非小细胞肺癌中的研究进展

T细胞是获得性抗肿瘤免疫的重要细胞亚群,但肿瘤组织中的T细胞数量少,且处于免疫抑制甚至耗竭状态,这是导致肿瘤免疫逃逸和免疫检查点抑制剂等抗肿瘤免疫治疗效果不佳的重要原因。过继性T细胞治疗主要包括肿瘤浸润淋巴细胞(tumorinfiltrating lymphocytes,TILs)、嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T)、T细胞受体工程化T细胞(T-cell receptor engineering T cell,TCR-T)治疗,其通过体外筛选扩增富集肿瘤特异性T细胞或通过基因改造赋予T细胞新的抗原特异性(CAR-T、TCR-T),有效克服了肿瘤浸润T细胞不足的缺陷。虽然过继性T细胞治疗在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的研究起步较晚,但已显示治疗的安全可行性和初步抗肿瘤效果,值得进一步深入研究。本文将对TILs、CART、TCR-T的原理、培养方法、生物学特征以及在NSCLC治疗中的研究进展进行综述,以期为优化临床研究设计和开展新型NSCLC免疫治疗提供新思路。

肝癌病人化疗栓塞后联合应用s-TIL细胞后T淋巴细胞亚群的变化

目的 :观察 39例 PHC病人经化疗栓塞后联合应用经冷冻肝癌瘤苗刺激的肿瘤浸润淋巴细胞 (s-TIL )前后外周血 T淋巴细胞亚群的变化。方法 :于化疗栓塞及应用 s- TIL前、治疗后 7d、14d、2 1d分别查 T淋巴细胞亚群 ,并与对照组比较。结果 :肝癌病人经化疗栓塞后 CD+ 3、CD+ 4 、CD+ 8、CD+ 4 / CD+ 8比值约在 14d左右即上升 ,与对照组比较有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论 :TACE后联合应用 s- TIL细胞具有提高机体细胞免疫功能的作用。