5Aza-dc对癌细胞TIMP-3启动子去甲基化的作用

目的:观察5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5Aza-dc)对癌细胞TIMP-3启动子甲基化的影响。方法:用5Aza-dc处理TIMP-3启动子甲基化的H2M肝癌细胞和A431表皮癌细胞,用Transwell检测癌细胞的侵袭及运动能力,用Westernblot检测TIMP-3的蛋白表达,用RT-PCR检测TIMP-3mRNA的表达,用甲基化特异性PCR检测TIMP-3基因启动子的甲基化。结果:(1)5Aza-dc作用后的H2M和A431细胞的侵袭及运动能力降低;(2)5Aza-dc作用后的H2M和A431细胞的TIMP-3蛋白及mRNA表达量增加;(3)5Aza-dc作用后的H2M和A431细胞的TIMP-3启动子区未检测到甲基化。结论:5Aza-dc可以使肝癌和表皮癌细胞TIMP-3启动子区去甲基化,使TIMP-3得以重新表达,恢复其抑制肿瘤侵袭和移动的能力。

骨关节炎患者关节软骨TIMP-3启动子区甲基化水平的初步研究

目的探讨关节软骨中组织金属蛋白酶抑制因子-3(TIMP-3)基因启动子区甲基化与其蛋白表达的相关性,并分析TIMP-3基因CpG岛异常甲基化与骨关节炎(OA)的关联性。方法应用甲基化特异性的聚合酶链反应(MSP)技术和免疫组织化学SP法分别检测14例健康人的正常关节软骨细胞和35例骨关节炎(OA)患者软骨细胞TIMP-3基因启动子区甲基化和蛋白表达情况。结果 OA患者和健康人关节软骨中TIMP-3基因启动子区均有甲基化修饰,其阳性率分别为74.3%(26/35)和35.7%(5/14),OA组TIMP-3基因启动子区甲基化率明显高于健康组(P<0.05)。14例健康人中,软骨细胞TIMP-3蛋白表达阳性10例(71.4%),而35例OA患者中,软骨细胞TIMP-3蛋白表达阳性11例(31.4%)。24例OA患者软骨细胞蛋白表达阴性的标本中,TIMP-3启动子区甲基化阳性21例(87.5%);26例TIMP-3启动子区甲基化阳性的标本中,蛋白表达阴性21例(80.8%),TIMP-3启动子区甲基化与蛋白表达呈显著负相关(P<0.05)。结论启动子区CpG岛高甲基化是OA患者关节软骨细胞TIMP-3表达失活的主要机制之一,其可能参与了OA的发生和发展。