TIP30基因对大肠癌细胞HCT116生物学特性的影响

目的通过构建基因真核表达载体分析TIP30对大肠癌细胞HCT116生物学特性的影响,为TIP30在大肠癌基因治疗中的应用提供依据。方法构建pCMV4-flag-TIP30真核表达载体并转染HCT116细胞,RT-PCR和Western blot检测TIP30基因表达,体外侵袭实验检测细胞侵袭能力,软琼脂实验检测细胞成瘤性。结果成功构建稳定表达TIP30的HCT116细胞模型,转染TIP30的HCT116细胞增殖受抑,侵袭能力及克隆形成能力均减弱。结论大肠癌HCT116细胞TIP30过表达不仅能抑制其生长、诱导其凋亡,并能降低其侵袭、迁移能力,为TIP30基因治疗提供依据。

DAC及TSA对结肠癌细胞系中TIP30基因表达的影响及伊立替康敏感性探讨

目的探讨DAC及TSA对结肠癌细胞系中抑癌基因TIP30表达的影响,以及与伊立替康敏感性的关系。方法 DAC及TSA处理体外培养的结肠癌细胞系HCT116及HT29,RT-PCR法检测结肠癌细胞系HCT116及HT29药物干预前后抑癌基因TIP30表达情况的变化。MTT法检测结肠癌细胞株HCT116和HT29在不同浓度CPT-11下的凋亡情况,绘制生长抑制曲线并计算半数抑制浓度。结果 HCT116及HT29细胞系经DAC及DAC和TSA联合作用后使原来不表达或低表达的抑癌基因TIP30重新表达或表达增强;结肠癌细胞系HT29与HCT116相比伊立替康敏感性较强,DAC处理后2个细胞系伊立替康敏感性均增强。结论TIP30基因的异常甲基化是结肠癌发生发展中的常见现象,结肠癌细胞系中TIP30启动子甲基化可能是基因失活的主要调控机制,DAC单独干预和DAC及TSA联合干预效果相似,均能显著增加高甲基化抑癌基因的重新表达。基因甲基化水平可能与化疗敏感性相关。

骨桥蛋白与TIP30基因在口腔鳞癌中的表达

目的:研究口腔鳞状细胞癌(OSCC)中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和TIP30基因的表达及意义。方法:用实时荧光定量PCR法检测OSCC(n=18)组织和癌旁正常口腔黏膜(n=18)OPN及TIP30 mRNA的表达;用免疫组织化学En VisionTM法检测OSCC组织石蜡切片(n=70)和正常口腔黏膜(n=20)中OPN和TIP30蛋白的表达。用SPSS 17.0软件进行统计分析。结果:OPN在OSCC组织中的mRNA和蛋白表达水平高于正常组织(P<0.01);TIP30基因在正常组织中mRNA和蛋白表达水平高于OSCC组织(P<0.01)。OPN、TIP30基因的表达呈负相关性(P<0.05)。结论:OPN可能参与了OSCC的发生发展;TIP30基因对OSCC的作用可能与OPN相反。

Tip30基因过表达对人胃癌细胞生长的影响及分子机制

目的探讨Tip30基因过表达对人胃癌AGS细胞增殖、凋亡的影响及相关分子机制。方法人胃癌AGS细胞中Tip30基因过表达采用腺病毒转染法,使用实时定量PCR和Western blotting验证Tip30过表达的效果,分别采用MTT法、划痕试验检测细胞增殖、迁移情况,流式细胞术分析细胞凋亡,Western blotting分析p53、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果过表达组AGS细胞Tip30基因m RNA和蛋白表达水平均显著高于对照组(P<0.05)。与对照组比较,Tip30过表达后,细胞增殖、体外迁移能力均显著减弱(P<0.05);Tip30过表达后AGS细胞凋亡率相比对照组显著增大,Tip30过表达促进AGS细胞凋亡与上调p53、Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达水平相关。结论 Tip30基因过表达可抑制人胃癌AGS细胞增殖活性、体外迁移能力,且促进胃癌细胞凋亡。

TIP30基因表达对人多发性骨髓瘤细胞生物学功能的影响

目的研究TIP30基因表达对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖、凋亡等生物学功能的影响,以期为多发性骨髓瘤临床防治及药物研制提供新的靶点。方法人多发性骨髓瘤U266细胞中TIP30基因过表达采用腺病毒转染法,使用实时定量PCR和Western blotting验证TIP30过表达的效果,分别采用MTT法、划痕试验检测细胞增殖、迁移情况,流式细胞术分析细胞凋亡,Western blotting分析p53、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 TIP30过表达腺病毒转染后,过表达组中U266细胞TIP30基因m RNA和蛋白表达水平均显著上升。与对照组比较,TIP30过表达后,细胞增殖、体外迁移能力均显著减弱(P<0.05);TIP30过表达后U266细胞凋亡率较对照组显著增大,TIP30过表达促进U266细胞凋亡与上调p53、Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达水平相关。结论 TIP30基因过表达可抑制人多发性骨髓瘤U266细胞增殖活性与体外迁移能力,并促进多发性骨髓瘤细胞凋亡。

TIP30基因在乳腺癌中的研究进展

在美国，乳腺癌的发病率占女性恶性肿瘤的26％，病死率在女性恶性肿瘤死亡总人数中占15％，仅次于肺癌。在我国的北京、上海等发达地区，乳腺癌已是危害女性健康的主要恶性肿瘤之一。同其他恶性肿瘤一样，乳腺癌的发生也是一个多基因参与并经多步骤发展的复杂病理过程。作为肿瘤转移抑制相关基因，TIP30的缺失表达与乳腺癌的发生、发展相关。本文对TIP30基因的结构特点、与乳腺癌的关系、作用机制和应用前景进行综述。

TIP30基因的研究进展

TIP30基因是最新发现的一种肿瘤转移抑制相关基因，在人类的多种组织如心、脑、肺、肾、骨骼肌和胰腺中均有表达，但在多种肿瘤组织中如人类肝癌、恶性黑色素瘤、结肠癌、神经母细胞瘤中表达下降或缺失。研究发现TIP30是通过调节与细胞增殖、凋亡及血管生成相关基因而达到抑制肿瘤转移的作用。本文就TIP30／CC3基因结构特点、与肿瘤的关系、作用机制进行综述。

TIP30基因腺病毒载体的构建及体内外抑癌作用

目的 利用缺陷型腺病毒载体表达TIP30基因 ,观察其体内外抑瘤作用。方法 用Ad EasyTM系统 ,在大肠杆菌同源重组 ,构建Ad TIP30腺病毒载体 ,经在 2 93细胞内成功包装并鉴定后 ,感染p5 3基因型不同的肝癌细胞株HepG2 (p5 3 wt)、PLC/PRL/ 5 (p5 3 mut)和骨肉瘤细胞株Saos 2 (p5 3 null)。用台盼蓝拒染法检测存活细胞 ,观察TIP30的体外抑瘤作用 ;用RT PCR方法检测HepG2 细胞p5 3基因的表达水平 ;通过裸鼠皮下肝癌移植瘤模型观察Ad TIP30的体内抑瘤效果。结果 Ad TIP30对 3种肿瘤细胞的增殖均有抑制作用 ,但对p5 3基因野生型的肝癌细胞株HepG2 抑制作用最明显。经Ad TIP30感染后 ,HepG2 细胞p5 3基因表达水平显著升高。Ad TIP30可显著抑制裸鼠皮下肿瘤的生长 ,其抑瘤率达 6 2 .8%。结论 腺病毒载体表达TIP30基因可通过p5 3基因依赖性或非依赖性途径抑制肿瘤细胞的增殖 ,是一种潜在的肿瘤生物治疗手段。

银杏叶提取物对泪腺腺样囊性癌ACC-2细胞增殖及Survivin,TIP30基因表达的影响

探讨银杏叶提取物(EGB)对泪腺腺样囊性癌ACC-2细胞增殖、凋亡的影响,并从基因和蛋白水平上分析EGB对Survivin和TIP30基因表达的影响。不同浓度EGB处理体外培养的人泪腺腺样囊性癌ACC-2细胞,应用MTT法检测细胞增殖;Annexin V/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;RT-PCR和Western blotting分析Survivin,TIP30基因和蛋白的表达。结果发现EGB对ACC-2细胞的体外增殖具有抑制作用,量效关系显著,与对照组比较有统计学差异(P<0.01),半数抑制浓度(IC50)为88 mg·L-1。经流式细胞仪检测表明,EGB能使ACC-2细胞G0/G1期逐渐增加,G2/M期和S期逐渐减少,并且随着剂量的增加,ACC-2细胞凋亡率明显增加(P<0.05或P<0.01)。RT-PCR与Western杂交结果一致表明随着EGB浓度的升高,Survivin基因表达明显减少(P<0.01),而TIP30基因表达则显著提高(P<0.01)。因此,EGB能有效抑制人泪腺腺样囊性癌ACC-2细胞Survivin基因表达,并促进TIP30的表达,诱导ACC-2细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖。该研究为中药成分在肿瘤治疗中的应用提供了一定的理论和实验依据。

抑癌基因TIP30对肾癌细胞系786-0的生长抑制作用

目的:筛选含有外源性TIP30的人肾透明细胞腺癌细胞系786-0,探讨TIP30基因对786-0的生长抑制作用,寻找肾癌基因治疗的潜在靶点。方法:采用RT-PCR技术扩增TIP30基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-TIP30,转染786-0细胞,利用RT-PCR及Western blotting检测稳定转染pcDNA3.1-TIP30载体、转染pcDNA3.1(+)空载体及未处理的786-0细胞中TIP30的表达,另通过MTT法检测转染后细胞增殖能力的变化,流式细胞仪测定细胞周期分布的变化。结果:与未处理的和转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞比较,转染pcDNA3.1-TIP30的786-0细胞中TIP30基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增加(P<0.05);未处理与转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞中TIP30的表达水平比较差异无显著性(P>0.05)。转染pcDNA3.1-TIP30的786-0细胞生长抑制率明显高于未处理的和转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞(P<0.01)。流式仪检测细胞周期,与未处理的和转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞比较,转染pcDNA3.1-TIP30的786-0细胞G0-G1期细胞比例显著增加,S和G2-M期细胞比例降低(P<0.01)。结论:786-0细胞能够稳定表达外源基因TIP30;提高肾癌细胞中TIP30蛋白的表达,可抑制肿瘤细胞的生长;TIP30是肾癌基因治疗的潜在靶点。

抑癌基因TIP30启动子甲基化对大肠癌诊断及预后的影响

目的研究TIP30启动子甲基化在大肠癌与配对正常大肠黏膜中的表达差异,分析TIP30启动子甲基化状态与患者临床病理特征间的关系。方法对我院2009-2010年收治的50例大肠癌患者的手术切除标本和配对正常大肠黏膜组织,采用甲基化特异性PCR方法检测TIP30基因启动子甲基化状态。结果大肠癌TIP30启动子高甲基化与患者淋巴结转移情况(P=0.003)、CEA水平(P=0.005)及临床分期(P=0.048)之间存在显著相关性,与病变部位(结肠与直肠)之间未见显著相关性(P=0.309)。此外,TIP30启动子高甲基化在血清CEA水平较高(>15 ng/ml)的患者中比血清CEA水平较低(<15 ng/ml)的患者中更常见(P=0.005)。结论 TIP30启动子高甲基化与大肠癌淋巴结转移、CEA水平及临床分期呈正相关,与病变部位无明显相关性。TIP30启动子甲基化有望成为一种新的大肠癌分子诊断肿瘤标志物,用于大肠癌患者的早期诊断与预后判断。

抑癌基因TIP30表达对大肠癌发生、发展的影响

目的研究TIP30在大肠癌与配对正常大肠黏膜中的表达差异,分析TIP30蛋白表达与患者临床病理特征间的关系。方法对我院2009-2010年收治的50例大肠癌患者手术切除标本和配对正常大肠黏膜组织采用免疫组化法进行TIP30蛋白表达检测。结果 50例大肠癌标本中有20例（40%）TIP30蛋白表达缺失,而50例配对正常大肠组织中仅有5例（10%）TIP30蛋白表达缺失,两者相比差异有统计学意义（P〈0.05）。分析TIP30表达缺失与患者临床病理特征的关系发现,TIP30表达缺失与患者不良预后因素间存在明显相关性,这些因素包括临床分期、血清CEA水平及有无淋巴结转移等。结论 TIP30是大肠癌中的一个重要肿瘤抑制基因,TIP30表达可抑制大肠癌的发生发展,TIP30表达缺失促进大肠癌的发生发展。

TIP30/CC3基因与肿瘤转移的研究进展

肿瘤转移是恶性细胞与宿主防御系统间相互作用的最终结果,也是导致恶性肿瘤患者死亡的一个重要因素。TIP30基因是美国学者Shtivelman等利用RNA差异显示技术首先发现的一种与小细胞肺癌转移抑制相关的基因,最初命名为CC3。它能显著抑制变异性高转移小细胞肺癌（v-SCLC）细胞在人胚肺-联合免疫缺陷鼠移植物动物模型中的转移力,是一种潜在的转移抑制基因。

TIP30基因抑制人肝癌细胞转移的实验研究

肿瘤转移是恶性细胞与宿主防御系统间相互作用的最终结果。这种复杂的过程包括血管形成、肿瘤细胞从原发组织脱落、迁移、侵袭细胞外基质并进入血管，随血液循环至远处器官，粘附、游出血管，并在靶组织停留、生长。关于肝癌的侵袭和转移有许多报道揭示了可能存在的分子机制，包括p53／CDKN2的突变，CD44v6的过表达；金属蛋白酶-9和CD24的高表达；染色体8p的缺失等都与肝癌的转移有关。但转移并不是一种基因发生变化而导致的，可能是由多基因构成的分子网络调控的结果。TIP30／CC3基因首先是在比较高转移性和低转移性小细胞肺癌细胞系时发现的。它能显著抑制变异性高转移小细胞肺癌（v—SCLC）细胞在SCID—hu—FL（人胚肺-联合免疫缺陷鼠移植物）动物模型中的转移力。是一种潜在的转移抑制基因。但TIP30基因在肿瘤转移中的确切作用、参与了哪些过程以及分子机制如何目前不很明确。本课题我们初步探索了TIP30基因对高转移性肝癌细胞侵袭和转移能力的影响。并初步探讨了其可能存在的分子机制，现做如下报道。

TIP30基因在肝癌组织中的表达及意义

CC3基因是1997年shtivelman用RNA差异显示技术比较高转移性小细胞肺癌及低转移性小细胞肺癌细胞系时首先发现的一种与肿瘤转移有关的基因。1998年肖华等亦发现一种分子量为30kd的转录共分子，可特异性地提高HIV-1增殖调节蛋白Tat的转录，并命名为TIP30（Tatinteractingprotein30）。序列分析发现与CC3为同一蛋白。此基因的1．6kb的RNA转录产物在人的心、胎盘、肺、肝、肾、胰腺等正常组织和某些肿瘤细胞系中广泛存在。近年来的研究表明。TIP30基因具有抑制肿瘤转移、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤血管形成等作用。目前TIP30蛋白在肝癌组织中的表达、在肝癌发生发展过程中可能存在的作用未见文献报道。

肿瘤转移抑制基因Tip30/CC3的研究进展

Tip30/CC3基因是位于人类第11号染色体短臂端(11p15.1),在人类的心、肺、骨骼肌等脏器均有表达,是一种抑制肿瘤转移和生长的新型基因,在多种肿瘤细胞中表达均有下降,人们认为其与肿瘤的生长转移之间关系密切。本文综述了各个肿瘤与Tip30/CC3基因及其编码产物和肿瘤发生、发展之间的研究进展。

口腔血管瘤组织中TIP30/CC3基因的表达及意义

目的探讨TIP30/CC3基因在口腔血管瘤组织中的表达及其临床意义。方法收集新疆兵团第五师医院病理科2008年-2013年口腔血管瘤存档蜡块20例,其中男性15例,女性5例。采用免疫组织化学S-P法检测20例口腔血管瘤及正常周围组织5例中TIP30/CC3基因表达水平,采用HPIAS-1000图文报告管理系统对TIP30/CC3基因的表达进行定量分析,并用SPSS11.5软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验。结果TIP30/CC3基因在口腔血管瘤增生期组织中呈低表达,而在退化期和正常口腔粘膜组织中TIP30/CC3基因呈高表达。口腔血管瘤增生期组织中TIP30/CC3基因的表达明显低于退化期和正常口腔粘膜组织(P<0.05)。结论 TIP30/CC3基因在口腔血管瘤增生期中的表达有明显下调趋势,表明TIP30/CC3基因在口腔血管瘤的发生和发展中起了重要作用。

乳腺癌组织中FGF-1、TIP30、TLR4、HIF-1α的表达及其与微血管密度的关系

目的探讨乳腺癌组织中酸性成纤维细胞生长因子-1(FGF-1)、TIP30基因(TIP30)、Toll样受体4(TLR4)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其与微血管密度(MVD)的关系。方法选择2014年3月~2017年3月在曲靖市第一人民医院接诊的100例女性乳腺癌患者为研究对象。收集所有患者手术切除病理组织制作石蜡切片,使用SP免疫组织化学法观察乳腺癌组织中FGF-1、TIP30、TLR4、HIF-1α染色结果,并分析其与临床病理因素、MVD之间的关系。结果免疫组化结果显示,100例乳腺癌组织中,FGF-1阳性率为61.00%(61/100),TIP30阳性率为29.00%(29/100),TLR4阳性率为72.00%(72/100),HIF-1α阳性表达率为65.00%(65/100),且FGF-1、TIP30、TLR4、HIF-1α和肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移之间均具有密切关系(P<0.05)。在FGF-1、TLR4及HIF-1α阳性组织中,MVD表达高于阴性组织;在TIP30阳性组织中MVD表达低于阴性组织(P<0.05)。相关性分析结果显示,FGF-1、TLR4及HIF-1α与MVD、肿瘤大小、临床分期、淋巴转移之间均呈正相关(P<0.05),而TIP30和MVD、肿瘤大小、临床分期、淋巴转移呈负相关(P<0.05)。结论在乳腺癌组织中,FGF-1、TLR4、HIF-1α的高表达和TIP30的低表达与MVD关系密切,可促使疾病进展,这为靶向药物治疗乳腺癌提供了新思路。

K-ras和tip30在上颌窦鳞状细胞癌中的表达及意义

目的分析K-ras原癌基因及tip30抑癌基因在上颌窦鳞状细胞癌中的表达及其相关性。方法采用免疫组化的方法对54例上颌窦鳞状细胞癌和20例肥大的下鼻甲组织中K-ras及tip30进行检测。结果K-ras在上颌窦鳞状细胞癌中的阳性表达率为72.22%,在肥大的下鼻甲组织中的阳性表达率为0,两组差异有统计学意义(P<0.01)。tip30在上颌窦鳞状细胞癌中的阳性表达率为27.78%,在肥大的下鼻甲组织中的阳性表达率为85.00%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。K-ras与tip30的表达与患者的年龄、性别、吸烟史均无相关性(P>0.05),但两者都与肿瘤的TNM分期、病理分级及淋巴结转移有相关性(P<0.05)。两者在MSSCC中的表达呈负相关性(r=-0.446,P<0.01)。结论 K-ras及tip30在上颌窦鳞癌的发生、发展中可能起着密切的拮抗作用。

TIP30蛋白在食管鳞癌中的表达

目的探讨TIP30蛋白在食管鳞癌中的表达。方法用免疫组化S-P法检测64例食管鳞癌组织中TIP30蛋白的表达。结果72例正常食管组织中,有63例(87.5%)TIP30蛋白表达。64例食管鳞癌中有38例(59.38%)TIP30蛋白表达,差异具有显著性意义(P<0.05);TIP30蛋白在高分化、中分化、低分化食管鳞癌中的表达率分别为78.13%(25/32),42.11%(8/19),38.46%(5/13),比较差异有统计学意义(P<0.05);TIP30的表达在淋巴结转移组中为39.13%(9/23)明显低于未发生淋巴结转移组70.73%(29/41)(P<0.05),差异有统计学意义。结论食管鳞癌TIP30蛋白的表达与肿瘤的侵袭性有关,可作为预后不良的指标。