【目的】本研究以猪种布鲁氏菌Toll/白介素-1受体(TIR)结构域蛋白(Brucella suis TIR domain containing protein,Bs-TDCP)为研究对象,进行基因克隆、生物信息学分析及蛋白互作研究,为后续开发适合动物或人类使用的有效布鲁氏菌疫苗奠...【目的】本研究以猪种布鲁氏菌Toll/白介素-1受体(TIR)结构域蛋白(Brucella suis TIR domain containing protein,Bs-TDCP)为研究对象,进行基因克隆、生物信息学分析及蛋白互作研究,为后续开发适合动物或人类使用的有效布鲁氏菌疫苗奠定基础。【方法】利用GenBank数据库查找黑腹果蝇髓样分化因子88(Dm-MyD88)和人MyD88(Hs-MyD88)基因序列,设计特异性引物进行基因序列扩增。根据猪种布鲁氏菌测序结果,获得Bs-TDCP基因序列。通过ExPASy、SWISS-MODEL、TMHMM、SMART等在线工具分析Bs-TDCP蛋白理化性质、二级和三级结构、跨膜及功能结构域,并进一步研究Bs-TDCP蛋白与Toll样受体(TLRs)信号通路的关键胞内配体MyD88分子之间的蛋白串扰。【结果】猪种布鲁氏菌TIR结构域蛋白Bs-TDCP基因的开放阅读框(ORF)大小为828 bp,编码275个氨基酸,其中丙氨酸占12.7%,分子式为C_(1345)H_(2196)N_(390)O_(424)S_(6),Bs-TDCP蛋白分子质量为35.85 ku,理论等电点为9.37,不稳定指数为50.44,属于不稳定疏水性蛋白,不包含跨膜结构域和信号肽序列(SPS),但其具有典型的TIR结构域,Bs-TDCP蛋白二级结构由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲组成,占比分别为77.45%、8.36%、2.91%和11.27%。重组蛋白Bs-TDCP(rBs-TDCP)、重组蛋白Dm-MyD88(rDm-MyD88)和重组蛋白Hs-MyD88(rHs-MyD88)亲和纯化效果良好。蛋白体外结合试验结果表明,不含His标签的Bs-TDCP(rBs-TDCP^(△))与MyD88分子之间存在蛋白互作。【结论】rBs-TDCP^(△)分别与rDm-MyD88、rHs-MyD88配体存在一定程度的蛋白互作,本研究结果为开发供人类使用的新型布鲁氏菌疫苗提供理论参考。展开更多
Toll样受体(Toll like receptor,TLR)是架接固有免疫和适应性免疫的桥梁。迄今为止,已鉴定的人TLR有10种,分别命名为TLR1-TLR10,TLR是一种I型跨膜蛋白,由胞外富含亮氨酸重复序YtJ(LRR)结构域,胞内保守的Toll/IL-1受体(TIR...Toll样受体(Toll like receptor,TLR)是架接固有免疫和适应性免疫的桥梁。迄今为止,已鉴定的人TLR有10种,分别命名为TLR1-TLR10,TLR是一种I型跨膜蛋白,由胞外富含亮氨酸重复序YtJ(LRR)结构域,胞内保守的Toll/IL-1受体(TIR)结构域和跨膜结构域构成。TLRs在识别病原体相关分子模式后,其信号的特异转导主要取决于TLRs的TIR功能域与下游接头分子的TIR功能域的特异相互作用。然而,TLR2和TLR4的TIR功能域在其与下游接头分子Mal和MyD88相互作用、以及TLRs同源或异源二聚化方面的作用模式存在明显的差异。本文就TLR2和TLR4的TIR结构与功能进行简要综述,有助于我们进一步了解TLRTIR功能域与下游接头分子的相互作用。展开更多
耐药菌是人类面临的巨大威胁。噬菌体能感染并裂解细菌,被认为是人类应对耐药菌的重要工具。然而,细菌在长期演化过程中形成了复杂的防御系统来抵抗噬菌体感染。近期,华中农业大学陶攀教授带领的研究团队在Nature Communications上发表...耐药菌是人类面临的巨大威胁。噬菌体能感染并裂解细菌,被认为是人类应对耐药菌的重要工具。然而,细菌在长期演化过程中形成了复杂的防御系统来抵抗噬菌体感染。近期,华中农业大学陶攀教授带领的研究团队在Nature Communications上发表了题为“The role of TIR domain-containing proteins in bacterial defense against phages”的研究论文,系统解析了大肠杆菌中含TIR结构域的抗噬菌体防御系统,揭示了TIR结构域在细菌免疫系统中的作用,增强了人们对原核生物和真核生物的先天免疫机制的理解,同时为开发高效噬菌体治疗制剂、应对潜在的耐药危机提供了理论和技术支持。展开更多
Toll样受体(toll like receptors,TLRs)能识别病原微生物相关分子模式,募集含有Toll/白介素-1受体(TIR)结构域的接头蛋白分子,通过髓样分化蛋白88(MyD88)依赖性信号传导通路或由β-干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)依赖性信号传导通路启...Toll样受体(toll like receptors,TLRs)能识别病原微生物相关分子模式,募集含有Toll/白介素-1受体(TIR)结构域的接头蛋白分子,通过髓样分化蛋白88(MyD88)依赖性信号传导通路或由β-干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)依赖性信号传导通路启动信号传导,继而引发特异性的免疫应答。作者就TLRs的结构特征、分布、配体识别、参与信号传导的接头蛋白分子及介导的信号传导通路的最新研究进展进行综述。展开更多
文摘【目的】本研究以猪种布鲁氏菌Toll/白介素-1受体(TIR)结构域蛋白(Brucella suis TIR domain containing protein,Bs-TDCP)为研究对象,进行基因克隆、生物信息学分析及蛋白互作研究,为后续开发适合动物或人类使用的有效布鲁氏菌疫苗奠定基础。【方法】利用GenBank数据库查找黑腹果蝇髓样分化因子88(Dm-MyD88)和人MyD88(Hs-MyD88)基因序列,设计特异性引物进行基因序列扩增。根据猪种布鲁氏菌测序结果,获得Bs-TDCP基因序列。通过ExPASy、SWISS-MODEL、TMHMM、SMART等在线工具分析Bs-TDCP蛋白理化性质、二级和三级结构、跨膜及功能结构域,并进一步研究Bs-TDCP蛋白与Toll样受体(TLRs)信号通路的关键胞内配体MyD88分子之间的蛋白串扰。【结果】猪种布鲁氏菌TIR结构域蛋白Bs-TDCP基因的开放阅读框(ORF)大小为828 bp,编码275个氨基酸,其中丙氨酸占12.7%,分子式为C_(1345)H_(2196)N_(390)O_(424)S_(6),Bs-TDCP蛋白分子质量为35.85 ku,理论等电点为9.37,不稳定指数为50.44,属于不稳定疏水性蛋白,不包含跨膜结构域和信号肽序列(SPS),但其具有典型的TIR结构域,Bs-TDCP蛋白二级结构由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲组成,占比分别为77.45%、8.36%、2.91%和11.27%。重组蛋白Bs-TDCP(rBs-TDCP)、重组蛋白Dm-MyD88(rDm-MyD88)和重组蛋白Hs-MyD88(rHs-MyD88)亲和纯化效果良好。蛋白体外结合试验结果表明,不含His标签的Bs-TDCP(rBs-TDCP^(△))与MyD88分子之间存在蛋白互作。【结论】rBs-TDCP^(△)分别与rDm-MyD88、rHs-MyD88配体存在一定程度的蛋白互作,本研究结果为开发供人类使用的新型布鲁氏菌疫苗提供理论参考。
基金Supported by the National Natural Science Foundation of China(Nos.31272620 & 31000548)the Key Program of Sichuan Department of Education(No.13ZA0263)the Changjiang Scholars and Innovative Team Development Plan(No.IRT0848)
文摘Toll样受体(Toll like receptor,TLR)是架接固有免疫和适应性免疫的桥梁。迄今为止,已鉴定的人TLR有10种,分别命名为TLR1-TLR10,TLR是一种I型跨膜蛋白,由胞外富含亮氨酸重复序YtJ(LRR)结构域,胞内保守的Toll/IL-1受体(TIR)结构域和跨膜结构域构成。TLRs在识别病原体相关分子模式后,其信号的特异转导主要取决于TLRs的TIR功能域与下游接头分子的TIR功能域的特异相互作用。然而,TLR2和TLR4的TIR功能域在其与下游接头分子Mal和MyD88相互作用、以及TLRs同源或异源二聚化方面的作用模式存在明显的差异。本文就TLR2和TLR4的TIR结构与功能进行简要综述,有助于我们进一步了解TLRTIR功能域与下游接头分子的相互作用。
文摘耐药菌是人类面临的巨大威胁。噬菌体能感染并裂解细菌,被认为是人类应对耐药菌的重要工具。然而,细菌在长期演化过程中形成了复杂的防御系统来抵抗噬菌体感染。近期,华中农业大学陶攀教授带领的研究团队在Nature Communications上发表了题为“The role of TIR domain-containing proteins in bacterial defense against phages”的研究论文,系统解析了大肠杆菌中含TIR结构域的抗噬菌体防御系统,揭示了TIR结构域在细菌免疫系统中的作用,增强了人们对原核生物和真核生物的先天免疫机制的理解,同时为开发高效噬菌体治疗制剂、应对潜在的耐药危机提供了理论和技术支持。
文摘Toll样受体(toll like receptors,TLRs)能识别病原微生物相关分子模式,募集含有Toll/白介素-1受体(TIR)结构域的接头蛋白分子,通过髓样分化蛋白88(MyD88)依赖性信号传导通路或由β-干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)依赖性信号传导通路启动信号传导,继而引发特异性的免疫应答。作者就TLRs的结构特征、分布、配体识别、参与信号传导的接头蛋白分子及介导的信号传导通路的最新研究进展进行综述。