替莫唑胺对神经胶质瘤TJ905细胞增殖特性和迁移能力的影响

目的探讨替莫唑胺(TMZ)对人胶质瘤TJ905细胞增殖和迁移能力的影响。方法培养TJ905细胞,分别应用不同浓度的TMZ(0、50、100、200、400μmol·L-1)干预TJ905细胞,干预不同时间(24、48、72 h)后收集细胞,应用Cell Counting Kit-8检测药物干预前后细胞增殖活性变化;细胞划痕实验检测400μmol·L-1TMZ对TJ905细胞迁移能力的影响。结果随着TMZ浓度的升高和培养时间的延长,TJ905细胞的密度降低,细胞出现皱缩,增殖受到明显抑制,并可见散在的细胞碎片;TJ905细胞存活率随着培养液中TMZ浓度的升高和培养时间的延长而降低(P<0.05);400μmol·L-1TMZ的培养液培养24、48和72 h后TJ905细胞迁移度均低于对照组(P<0.05)。结论 TMZ能有效抑制TJ905细胞增殖和迁移。

TJ905胶质瘤细胞系中脑肿瘤干细胞的培养、分离与鉴定

目的培养恶性胶质瘤TJ905细胞,并从中分离、培养和鉴定肿瘤干细胞,观察干细胞生长特征,为脑肿瘤干细胞的进一步研究奠定基础。方法将TJ905细胞置于含血清培养基中培养;将TJ905细胞置于含生长因子的无血清培养基中培养,待其形成悬浮生长的细胞球后用免疫磁珠分离获取CD133+细胞。用细胞免疫荧光染色对肿瘤干细胞及其分化细胞进行鉴定。结果在恶性胶质瘤细胞系TJ905中成功分离出肿瘤干细胞,培养于无血清培养液中,细胞呈球形、悬浮生长,具有很强的繁殖与自我更新能力;将该细胞置于含血清的培基中可分化;免疫荧光染色显示脑肿瘤干细胞中神经上皮干细胞蛋白(Nestin)表达阳性。结论培养的恶性胶质瘤细胞系TJ905中有脑肿瘤干细胞的存在,并且能在体外将其培养、分离及诱导分化,可为肿瘤干细胞的研究提供便利条件。

Research on the effects of PIAS3 expression on the invasion of glioma TJ905 cells

Objective To investigate the function and possible mechanisms of PIAS3 expression on the invasion of TJ905 cells. Methods PIAS3 overexpression vectors were constructed and PIAS3 siRNA were chemically synthesized, which were separately transfected into TJ905 cells for upregulation or

替莫唑胺对Livin基因过表达的胶质瘤TJ905细胞及其干细胞增殖活性的影响

目的分析替莫唑胺(TMZ)干预Livin基因过表达的胶质瘤TJ905细胞及其干细胞模型后对细胞增殖活性的影响,以及对胶质瘤TJ905细胞和TJ905干细胞中Livin、Caspase-3/7的作用机制。方法使用免疫磁珠方法从胶质瘤TJ905细胞系中分选出CD133阳性胶质瘤干细胞,采用慢病毒过表达技术建立Livin过表达的细胞模型,使用不同浓度(0、25、50、100、200、400μmol/L)的TMZ干预细胞模型48 h,采用CCK-8、流式细胞术、反转录PCR检测药物干预后细胞增殖活性、细胞周期及Livin、Caspase-3/7基因的表达量。结果(1)胶质瘤TJ905细胞中Livin基因表达量明显高于同源TJ905干细胞,差异有统计学意义(P<0.05);(2)TMZ能抑制胶质瘤TJ905细胞及其干细胞的增殖活性,降低增殖速度,并且随药物浓度的增加抑制作用逐渐增强;(3)TMZ能抑制Livin基因的表达,诱导Caspase-3/7的表达,并且随药物浓度的增加抑制作用逐渐增强,差异有统计学意义(P<0.05);(4)Livin基因转染后胶质瘤干细胞细胞周期G0/G1增加明显,而TJ905细胞周期则是G2/M期少量增加;TMZ干预细胞模型后,TJ905干细胞过表达组在S、G2/M停滞,对照组则是在S期停滞;TJ905细胞过表达组在S期停滞,对照组G2/M则是低浓度诱导停滞,随药物浓度增加其诱导作用减弱,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论TMZ可以通过抑制Livin基因的表达、诱导Caspase-3/7的表达、调控细胞周期变化来降低细胞增殖活性,促进细胞凋亡。

沉默FOXC1基因调控Notch通路对脑胶质瘤细胞增殖和凋亡影响

目的脑胶质瘤具有高发病率和高度恶性,目前的治疗方法效果不理想,且易复发。近年来,基因治疗逐渐被认识及广泛研究,但具体耙点及作用机制尚无定论。本研究探讨了siRNA靶向沉默FOXC1基因调控Notch通路对脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法根据前期实验,选择靶向沉默FOXC1基因效率最高的siRNA序列(FOXC1-siRNA-1707,实验组)和阴性对照序列(FOXCl-siRNA-NC,阴性对照组),用Lipofectamine^TM 2000DNA转染试剂转染U251和TJ9052种人胶质瘤细胞。MTT法分析6.12.24和48h不同时间点细胞增殖变化。流式细胞术检测脑胶质瘤细胞凋亡率(亚凋亡峰值)。蛋白质印迹法检测沉默FOXC1基因后Notch-1和DH4蛋白水平的变化。结果MTT分析表明,在脑胶质瘤U251细胞中,实验组细胞增殖率与对照组、阴性对照组相比降低,且具有时间依赖性,差异均有统计学意义,F处理组=80169.8,F时间=115031.3,F处理组×时间=5604.1,均P<0.05;与对照组相比,阴性对照组细胞增殖率降低,但差异无统计学意义,P>0.05。在脑胶质瘤TJ905细胞中,实验组细胞增殖率与对照组、阴性对照组相比降低,且具有时间依赖性,差异均有统计学意义,F处理组=111037.1,F时间=153277.7,F处理组×时间=5208.2,均P<0.05;与对照组相比,阴性对照组细胞增殖率降低,但差异无统计学意义,P>0.05。流式细胞仪检测结果表明,U251细胞中FOXC1基因沉默后,脑胶质瘤细胞凋亡率增加,差异有统计学意义,F=155.9,P<0.01;TJ905细胞中FOXC1基因沉默后,脑胶质瘤细胞凋亡率增加,差异有统计学意义,F=243.1,P<0.01.蛋白质印迹法结果显示,U251细胞中靶向沉默FOXC1基因后,Notch1和D114蛋白的表达水平下降,差异有统计学意义,F值分别为7.4.12.3,均P<0.05;TJ905细胞中靶向沉默FOXC1基因后,Notch1和D114蛋白的表达水平亦下降,差异有统计学意义,F值分别为8.7、19.2,均P<0.05。结论沉默FOXC1基因可以抑制脑胶质瘤细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控Notch通路相关。

重组腺病毒介导HSV-TK基因对胶质瘤细胞的生长抑制

本文构建了带有HSV-TK基因的腺病毒包装质粒pACCMVTK,并获得重组腺病毒AdCMVTK,用其感染胶质母细胞瘤细胞系TJ905,研究了HSV-TK/GCV系统对该细胞系的生长影响。结果发现该系统对胶质母细胞瘤细胞系TJ905生长有明显的抑制作用,以100MOI(重复感染率)的病毒剂量感染细胞,GCV半数抑制浓度IC_(50)仅为5μmol,同时发现HSV-TK/GCV系统对TJ905细胞系有明显的旁观效应。表明该系统有治疗胶质瘤的应用前景。