不同养殖模式大黄鱼非标记定量差异蛋白组学分析

通过非标记定量蛋白质组学技术研究不同养殖模式大黄鱼的蛋白质差异。选取普通网箱养殖大黄鱼和深水网箱养殖大黄鱼,提取肌肉总蛋白,通过高效液相色谱-质谱联用技术进行鉴定、分析。质谱数据使用MaxQuant软件将峰信号转化为肽段/蛋白的表达矩阵数据,然后使用Perseus软件可视化展示数据。不同养殖模式大黄鱼蛋白质进行Student’s t检验,筛选出差异表达蛋白后并对其进行基因功能分类、代谢通路富集和蛋白质相互作用网络分析,以P<0.05为差异有统计学意义。通过数据库比对获得6077条多肽,分别对应于1232个蛋白,其中130个蛋白在大黄鱼间存在显著差异表达,76个上调蛋白,54个下调蛋白,其中上调倍数最高的属于TCP伴侣蛋白,下调倍数最高的属于α-1(I)链状胶原蛋白。生物信息学分析发现,不同养殖模式大黄鱼蛋白质的差异主要在于热休克蛋白、伴侣蛋白、球蛋白及胶原蛋白等,而不同养殖模式中环境温度可能是导致大黄鱼蛋白质显著差异表达的主要因素。

应用非标记定量蛋白组学研究帕金森病差异表达蛋白

目的寻找帕金森病(PD)患者血清中差异表达的蛋白,探索PD生物学标志物。方法选择在北京医院临床确诊的PD患者24例,其中12例为仅有PD病史(P1组),另12例合并有高血压病、糖尿病基础疾病(P2组);筛选24例年龄、性别匹配的体检者(对照组C1和C2组),采集血清标本去除高丰度蛋白后,应用非标记定量蛋白组学技术检测各组血清中蛋白表达,采取双重对比将P1组与C1组、P2组与C2组比较,分别筛查出差异表达蛋白,再从中筛选出表达变化(上调或下调)一致的蛋白,确定为PD差异表达蛋白,并用生物信息学方法分析解释。结果各组对比后,共鉴定出4种差异表达的蛋白为PRG4、CFHR-3、ACTG1、HIST2H2BF,其中PD患者的血清中PRG4、CFHR-3表达上调,ACTG1、HIST2H2BF表达下调且存在一定的相互作用。结论应用非标记定量蛋白组学筛选出了帕金森差异表达的蛋白,可能对帕金森病的诊断具有一定的意义。

基于TMT标记定量蛋白组学分析SATB1过表达前后鼻咽癌细胞中差异蛋白质及信号富集

目的:分析富含AT序列的特异性核基质区结合蛋白1(SATB1)表达改变对人鼻咽癌(NPC)细胞中蛋白表达谱特征的影响,并采用生物信息学富集分析差异信号通路。方法:利用SATB1过表达慢病毒和阴性对照慢病毒感染CNE1细胞,获得稳定表达细胞系。提取2组细胞的总蛋白,利用TMT标记蛋白定量技术和串联质谱分析技术筛选出差异表达蛋白,采用RT-qPCR对差异蛋白编码基因在mRNA水平进行定量验证;应用GO数据库对差异表达蛋白进行注释和富集分析,应用KEGG数据库对差异蛋白涉及信号通路进行富集分析。结果:SATB1过表达慢病毒感染CNE1细胞后获得稳定表达细胞系。与对照组相比,过表达SATB1的CNE1细胞鉴别出278个差异表达蛋白,其中115个表达上调,163个表达下调;采用RT-qPCR对10个代表性差异蛋白的编码基因进行mRNA水平的验证,其结果与蛋白组学结果具有一致性。GO数据库分析差异表达蛋白主要参与了细胞过程、单有机体过程、生物调控和代谢过程,发挥生物分子结合和催化等分子功能;细胞组件主要存在于细胞部分、细胞以及细胞器上。KEGG数据库分析显示差异表达蛋白参与和肿瘤关系密切的信号通路,主要有MAPK、PI3K-Akt、AMPK、JAK-STAT、p53、PPAR、Hippo和HIF-1通路等。结论:SATB1过表达后明显改变了NPC细胞中蛋白表达谱并影响多条与肿瘤关系密切的信号通路。蛋白组学筛查也为NPC的发病分子机制、治疗和预后标靶筛查提供了可能的宏观手段。

基于非标记定量技术的3种毛皮海狮蛋白组学分析研究

试验旨在通过非标记定量技术对非澳毛皮海狮、南美毛皮海狮、智利毛皮海狮的胡须进行蛋白组学分析,探讨3种海狮间的亲缘关系。首先采集海狮胡须样品,提取总蛋白,再对蛋白进行浓度测定、电泳、酶解和肽段除盐等处理。得到的样品进行色谱与质谱分析、数据库检索、相关性分析与层次聚类分析、差异蛋白筛选与GO富集分析。结果表明:南美毛皮海狮N1与智利毛皮海狮Z1蛋白差异不明显、相关性强,自身表达量分布均匀;非澳毛皮海狮F1与这两种毛皮海狮间蛋白差异较为显著、相关性弱,自身表达量相对分布不均匀。说明非澳毛皮海狮和其他两种海狮亲缘关系较远,有相对明显的遗传差异,属于海狮科海狗属;而南美毛皮海狮与智利毛皮海狮的亲缘关系较近,可能为不同亚种。

SETD2基因敲除前后鼻咽癌细胞中定量蛋白组学研究及差异信号富集

目的分析甲基转移酶SETD2表达改变对人鼻咽癌(NPC)细胞中蛋白表达谱的影响并富集差异信号通路。方法提取SETD2基因敲除细胞株CNE1SETD2-KO和野生型细胞CNE1WT的总蛋白,利用Tandem Mass Tag(TMT)标记蛋白质定量技术和串联质谱分析技术筛选出差异表达蛋白质,应用GO数据库对差异表达蛋白质进行注释和富集,应用KEGG数据库进行差异蛋白质涉及信号通路富集。结果以表达倍数(FC)≥1.2倍且P<0.05为筛选标准,SETD2基因敲除的CNE1细胞鉴别出2049个差异表达蛋白质,其中904个表达上调,1145个表达下调。GO功能注释结果表明,SETD2敲除后在生物过程(细胞过程及调节,细胞运动、代谢过程及细胞组分的生物合成)、分子功能(催化活性及分子结合、转录因子活性)和细胞组分(胞膜、细胞器、大分子复合物)等具有特征性。KEGG信号富集结果表明SETD2敲除主要影响与肿瘤关系密切的信号有MAPK、PI3K-Akt、Ras、Rap1、mTOR、Hippo、HIF-1、Wnt、AMPK、FoxO、ErbB、p53、JAK-STAT等。结论SETD2敲除后显著改变了NPC细胞中蛋白质表达特征并影响多条与肿瘤关系密切的信号通路,研究结果为NPC的发病机制和治疗标靶筛选提供了参考。

基于蛋白组学技术筛选急性主动脉夹层诊断标记物

目的 应用非标记定量蛋白组学比较急性主动脉夹层（AAD）与急性心肌梗死（AMI）和健康人血清中的差异蛋白,筛选并验证潜在的夹层早期诊断标志物.方法 前期预实验收集急性主动脉夹层患者与健康人血清各3份,进行非标记蛋白组学检测,筛选出差异蛋白.之后收集急性主动脉夹层、急性冠脉综合征患者和健康人血清各9份,对目标蛋白进行Elisa验证,同时收集夹层与正常动脉组织进行免疫组化验证.结果 谱图计数（spectral counts）共鉴定出648种蛋白,其中夹层组较健康人组升高4倍的蛋白有12种.对其中升高明显的纽蛋白（vinculin）进行Elisa验证,夹层组[n=9,（1366.95±394.85）pg/ml]与心梗组[n=9,（2656.91 ±531.98） pg/ml]、健康人组[n=9,（3949.37±314.61）pg/ml] （P＜0.05）相比并没有升高;免疫组化发现主动脉发生撕裂部位的纽蛋白（vinculin）分布较未发生撕裂部位密集.结论 非标记定量蛋白质组学技术是寻找AAD循环标志物的一种有效手段.纽蛋白可能参与AAD的发病过程,是一种具有研究价值的AAD潜在循环标志物.

五指山猪和长白猪背最长肌蛋白组学研究

为比较五指山猪和长白猪生长后期肌肉生长发育的差异,以6、8月龄五指山猪和长白猪为试验对象,采用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)对其背最长肌总蛋白进行鉴定,结合生物信息学技术筛选品种间和品种内差异蛋白,并对其进行KEGG通路富集分析。结果表明:4组样品中共鉴定到1713个蛋白;五指山猪和长白猪品种间比较,6、8月龄猪中分别有460、337个差异的蛋白;品种内2个生长阶段比较,五指山猪和长白猪中分别有421、275个差异蛋白;2种比较均为上调的差异蛋白数多于下调差异蛋白数;KEGG通路分析发现,在五指山猪和长白猪品种间,6、8月龄在2个品种间的差异蛋白富集到差异显著(P<0.05)的条目分别为34、33个,在品种内,五指山猪和长白猪在2个生长阶段间的差异蛋白富集到差异显著(P<0.05)的条目分别为24、14个;在品种内发现了调控骨骼肌分化过程中发挥着重要作用的PI3K/AKT信号通路和影响脂肪沉积的PPAR信号通路,在品种间除了这2种外,还发现有肌纤维类型发育相关的糖酵解/糖异生信号通路;品种内2个比较组在PPAR和PI3K/AKT信号通路分别有10、9个共同表达的基因,品种间2个比较组在糖酵解/糖异生、PI3K/AKT和PPAR信号通路分别有10、13、9个共同表达的基因,对这些信号通路中共同表达的基因进行分析后筛选到一些与肌肉生长发育和脂肪代谢相关的关键基因。

抗心磷脂抗体阳性复发性流产小鼠胎盘的差异蛋白组学研究

目的探讨抗心磷脂抗体(ACA)阳性复发性流产小鼠胎盘组织中蛋白的表达谱特征并进行生物信息学分析。方法将20只雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组和ACA阳性流产模型组,每组10只。模型组于第1天和第8天通过腹腔注射β2-糖蛋白I(β2-GPI)建立ACA阳性流产模型,正常对照组于相同时间注射等体积生理盐水,腹腔注射后第18天,雌雄1∶1合笼,观察并记录妊娠时间。妊娠第15天处死小鼠,测量胎鼠、胎盘重量,计算胚胎丢失率,ELISA法检测血清、胎盘中ACA含量。采用Label-free蛋白质组学方法筛选两组小鼠胎盘组织中的差异蛋白,并进行GO富集、KEGG通路以及蛋白相互作网络分析,选择差异蛋白中的低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Toll样受体4(TLR-4)、凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim-3)以及维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)进行Western blot验证。结果与正常对照组相比,ACA阳性流产模型组胎鼠及胎盘重量显著下降(P<0.05),胚胎丢失率显著上升(P<0.05),血清、胎盘中ACA含量显著升高(P<0.05)。与正常对照组相比,ACA阳性流产小鼠胎盘组织中鉴别出87个差异表达蛋白,其中35个表达上调,52个表达下调;GO富集分析结果显示差异蛋白主要定位于细胞外,参与跨膜转运活性的调控;KEGG通路分析结果表明差异蛋白主要富集在代谢和磷脂酶D信号通路;蛋白相互作用分析发现差异蛋白中39个蛋白存在相互作用。Western blot验证结果显示,HIF-1α、TLR-4、TSP-1、Tim-3和RORγt表达量在模型组均显著上升(P<0.05),与蛋白组学结果一致。结论成功建立ACA阳性流产小鼠模型。ACA阳性流产小鼠胎盘组织中蛋白表达谱发生显著改变,差异蛋白主要与跨膜转运和代谢通路有关,这些蛋白的差异表达可能与ACA阳性流产有关。

利用同位素标记相对和绝对定量技术筛查神经管畸形胚胎孕鼠血清差异蛋白质谱

目的筛查神经管畸形相关血清标记物,为阐明神经管畸形的发病机制提供理论依据。方法应用维甲酸在大鼠神经管闭合的关键期(孕10 d,E10)给药,建立脊柱裂大鼠模型,选取致畸早期孕11、13 d (E11、E13)显性脊柱裂胚胎孕鼠和正常胚胎孕鼠血清各5例,应用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)和液相色谱质谱鉴定技术分析2组蛋白质,定量信息以蛋白的丰度比差异倍数1.5倍以上(P <0.05)为差异蛋白质。结果质谱共得到谱图157 422张,鉴定出390种蛋白质,发现E11维甲酸致畸组与正常对照组差异蛋白40种,E13维甲酸致畸组与正常对照组差异蛋白26种。结论筛选出致畸早期大量神经管畸形和正常孕鼠血清差异蛋白,差异蛋白通过直接或间接相互作用,促进或抑制神经管畸形的发生与发展。

激光捕获显微切割技术结合iTRAQ标记定量蛋白质组在结肠癌筛查中的应用研究

目的采用激光捕获显微切割技术(LCM)结合iTRAQ标记定量蛋白质组技术,筛查结肠癌间质的差异表达蛋白质。方法 (1)选择12对结肠腺癌标本为观察组,其配对正常结肠黏膜(与结肠癌标本至少相距10 cm以上)为对照组,采用LCM技术分别纯化其间质作为生物样本;(2)iTRAQ标记定量蛋白质组技术鉴定两组间的差异表达蛋白质;(3)采用Geneontology生物信息学软件(http://pantherdb.org/)对差异表达蛋白质进行细胞成分、生物学途径和分子功能分析。结果 (1)鉴定了70个差异表达蛋白,其中37个蛋白在结肠癌间质中高表达,33个蛋白在结肠癌间质中表达降低;(2)从生物学途径、细胞成分、分子功能三个方面对差异表达蛋白质进行分析。结论 (1)首次采用iTRAQ标记定量蛋白质组学和LCM结合的方法筛查结肠癌间质差异表达蛋白质;(2)GO功能分析显示了差异表达蛋白质的细胞成分、分子功能以及生物学功能。

里氏木霉磷酸化蛋白质组的非标记定量分析

目的:利用液相色谱串联质谱和非标定量技术,研究里氏木霉中磷酸化蛋白在不同培养条件下的表达差异,以期获得与纤维素酶表达调控相关的磷酸化蛋白。方法:分别在阻遏条件、诱导条件和中性条件下培养里氏木霉,提取胞内总蛋白,进行酶切和非标记定量分析。结果:对比诱导条件与阻遏条件、诱导条件与中性条件、阻遏条件与中性条件下培养的里氏木霉的胞内蛋白表达量差异,分别发现差异蛋白90、61和90个。根据其功能,可将这些差异蛋白归为四类,即锌指蛋白、ATP结合蛋白、具有N-乙酰化转移酶活性的蛋白以及具有氧化还原酶活性的蛋白。它们主要参与糖酵解、蛋白质合成、DNA修复以及转录调节过程。结论:发现的这些差异蛋白为研究调控纤维素酶的表达调控提供了新的线索。

应用蛋白组学技术研究壳寡糖对水稻幼苗抗寒性能的诱导机理

水稻幼苗对低温有极高的敏感性,将壳寡糖作为一种新型生物农药应用于水稻生长并帮助其抵御低温胁迫势在必行。本实验选取明恢63水稻,通过模拟水稻幼苗从正常生长到遭遇低温再到复性的全过程,测定水稻幼苗对应时期的生理生化指标,采用灵敏度高、选择性强且效率高的非标记定量技术对水稻幼苗的差异蛋白进行鉴定分析并研究其代谢通路,探究壳寡糖对水稻幼苗抗击低温胁迫的诱导机理,并针对光合作用途径和淀粉蔗糖代谢进行讨论。结果表明,壳寡糖可以调控水稻中的蛋白丰度,抵抗低温胁迫对光合作用的影响,使表达的蛋白丰度提高,同时促进蔗糖分解、淀粉积累转化为葡萄糖供体,用于水稻生长代谢。本研究可为抗寒水稻的选育提供实践指导,为水稻抗寒、新型生物农药的研发利用提供科学依据。

基于iTRAQ定量蛋白组技术的肾小球肾炎唾液生物标志物研究

目的:研究基于同位素标记相对和绝对定量(i TRAQ)标记技术筛选慢性肾小球肾炎(GN)的唾液差异表达蛋白。方法:纳入慢性GN患者38例以及健康对照者45例,采集唾液样本,提取唾液蛋白并酶解和i TRAQ标记,采用液相色谱–质谱/质谱联用(LC–MS/MS)鉴定蛋白,软件Proteome Discoverer 1.3处理数据,并进一步进行生物信息学分析,通过PANTHER,STRING和KEGG工具进行分析。结果:本研究总共鉴定出1482个蛋白,相对于健康对照组,GN组共鉴定出217个差异表达蛋白。其中,132个蛋白质显著上调(比值≥1.5),85个蛋白质显著下调(比值≤0.67)。筛选出13个具有显著性差异的蛋白作为GN可能的生物标志物。结论:本研究发现多个与慢性GN相关的特异性表达的唾液蛋白和通路。慢性GN异蛋白主要与细脂类代谢,血红蛋白黏附,炎症反应,补体激活等生物功能或通路有关。

磷蛋白组的研究技术及其进展

真核细胞中蛋白质磷酸化是一个重要事件。真核细胞利用可逆的蛋白磷酸化来控制许多细胞过程包括信号转换、基因表达、细胞周期等。磷蛋白组的研究涉及磷蛋白的分离和鉴定 ,磷酸化残基定位和定量分析。由于蛋白质磷酸化是一个动态过程 ,在细胞中磷蛋白含量低 ,磷酸化位点可变 ,且磷酸肽的质谱信号常常会受到抑制 ,所以磷蛋白的分析存在更多的困难。本文介绍了国内外在磷酸蛋白的分离鉴定及定量分析方面的研究技术以及进展情况。目前 ,质谱仍然是核心的鉴定技术 ,寻找更好富集方法是最大的挑战。定量蛋白组学是对蛋白质的差异表达进行精确的定量分析。目前还不存在一种独立的方法可以完成磷蛋白的分离、鉴定 ,以及磷酸位点的定位和定量分析。随着样品分离技术和相关仪器的发展 ,磷酸蛋白快速、准确、全面分析鉴定将能够实现。

应用核素标记相对和绝对定量技术对大鼠急性脊髓损伤的蛋白组学研究

急性脊髓损伤（ASCI）是一种严重的神经系统创伤，是致残的主要病因之一。我们应用核素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术探索SD大鼠ASCI后0h和6h的脊髓差异蛋白的表达。

基于相对和绝对定量同位素标记技术对肥胖大鼠海马区差异蛋白组学的研究

目的筛选及鉴定肥胖大鼠海马区的差异蛋白表达。方法将24只SD大鼠随机分为单纯肥胖组(Ob,n=14)及正常对照组(NC,n=10)。予高脂高糖饮食制备单纯肥胖大鼠模型,采用相对和绝对定量同位素标记技术(iTRAQ)联合二维液相色谱-串联质谱(2D-LC-MS/MS)法鉴定肥胖大鼠海马区差异蛋白表达,对所获蛋白行生物信息学分析,Western blot法对筛选的部分差异蛋白进行验证。结果成功建立单纯肥胖大鼠模型,共鉴定出310种差异蛋白表达。于KEGG数据库检索筛选出26个差异蛋白显著富集的代谢通路。选取位于蛋白功能相互作用网络交叉点的4种差异蛋白行Western blot验证,发现蛋白表达水平与质谱结果一致。结论采用iTRAQ结合2D-LC-MS/MS技术,能有效筛选肥胖大鼠海马区差异蛋白表达,为研究肥胖对中枢神经系统损伤机制提供依据。

基于蛋白质组学技术对竹叶青蛇毒染毒家兔模型血清蛋白质变化的检测及其意义

目的:探讨竹叶青蛇蛇毒模型中血清蛋白的表达,阐明竹叶青蛇蛇毒在染毒过程中标志蛋白的表达情况。方法:将12只雌雄不限日本大耳兔随机分为假手术组和模型组,每组6只。模型组家兔给予20 mg·kg^(-1)竹叶青蛇毒肌肉注射,假手术组家兔给予等量生理盐水注射;4 h后,2组日本大耳兔用戊巴比妥钠麻醉后心脏采血,分离血清,采用绝对定量同位标记(TMT)联合高效液相色谱-串联质谱(HPLC-TMS)定量蛋白组学技术对2组家兔血清进行差异蛋白分析,采用Proteome Discover 2.4等数据库筛选差异蛋白。结果:假手术组与模型组在主成分分析(PCA分析)坐标图上分成明显2簇;差异蛋白鉴定分析共鉴定分析出199个差异蛋白,其中表达上调的蛋白有139个,上调蛋白前5位分别为骨骼肌快肌肌钙蛋白Ⅰ(TNNI2)、小清蛋白α(PV)、烯醇化酶2(ENO2)、肌红蛋白(MB)和肌酸激酶(CK);表达下调蛋白有60个,下调蛋白前5位分别为载脂蛋白C1(APOC1)、扣带蛋白(CGN)、载脂蛋白CI(APOCI)、前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)和转钴胺素蛋白Ⅰ(TCN1)。基因本体(GO)分析,参与胞外调节功能过程的差异蛋白最多,其次为钙离子调节和蛋白降解调节过程蛋白。结论:竹叶青蛇蛇毒染毒过程中抗原加工及呈递功能有关的蛋白表达水平变化明显,其中CK和溶质载体家族16成员1(SLC16A1)可以作为染毒后损伤的候选靶标。

肾小球疾病患者尿液比较蛋白质组学研究方法的建立

目的:采用蛋白质组学技术建立尿液蛋白质图谱分析方法,并通过对膜性肾病(MN)和局灶节段性肾小球硬化(FSGS)患者尿液蛋白质图谱的比较分析,以期寻找到具有鉴别诊断意义的尿液蛋白质标志物。方法:以肾病综合征为主要表现的MN和FSGS患者各15例,采用白蛋白/IgG抗体清除联合同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)标记二维液相色谱与串联质谱联用技术(2D-LC MS/MS)蛋白质组学技术对患者尿液蛋白质组进行全面分析,并获取差异表达蛋白。对鉴定蛋白和差异蛋白进行Gene ontology(GO)分析。对鉴定蛋白丰度排序前10位蛋白与血蛋白质组丰度排序前10位蛋白进行比较。结果:共鉴定尿液蛋白809个,GO分析显示根据分子功能,鉴定蛋白主要属于催化活性、结合、受体活性三个类别;根据生物过程,鉴定蛋白主要属于代谢过程、细胞过程、发育过程三个类别;根据细胞定位,鉴定蛋白主要属于细胞外区域、细胞成分、细胞外基质三个类别。符合条件的差异蛋白16个,生物学功能包括参与纤溶调节、免疫反应、代谢过程、细胞增生等。对临床表现肾病综合征的MN和FSGS患者尿液鉴定蛋白丰度排序前10位蛋白与血蛋白质组丰度排序前10位蛋白进行比较显示有较大差异,提示即使在病理情况下,肾脏仍可对不同种类的蛋白保持不同的处理功能,蛋白尿可能有着不同于血蛋白质组的组成架构。结论:从患者尿液中获得的蛋白质组学图谱为进一步开展基于蛋白质组学生物标志物的研究提供了基础,从MN和FSGS患者尿液中获得的差异蛋白有待进一步验证其与疾病诊断、治疗及预后的关系。

基于iTRAQ技术筛选早期和进展期胃癌患者血清差异蛋白

目的筛查早期、进展期胃癌和健康人群血清中差异表达的蛋白,以期发现与胃癌有关的蛋白标志物。方法用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)联合串联液相色谱/质谱联用(LC-MS/MS)检测早期与进展期胃癌患者血清,筛选关键性差异表达腺苷酸核糖基化因子(ARF-1)蛋白,利用免疫组化进行胃癌组织蛋白差异验证。结果共发现119个差异蛋白质(53个上调,66个下调)。免疫组化结果显示进展期胃癌组织中ARF-1蛋白表达量高于早期胃癌组与癌旁正常组,早期胃癌组ARF-1蛋白表达量高于癌旁正常组(P<0.05)。结论初步筛选了胃癌血清中蛋白表达谱,经免疫组化验证ARF-1表达水平与血清一致。

基于串联质谱标签的蛋白质组学联合高内涵筛选技术筛选胃癌相关基因的研究

目的:应用Tandem mass tag(TMT)技术联合高内涵筛选(HCS)寻找潜在的胃癌相关基因。方法:利用TMT技术从胃癌及癌旁组织中筛选差异表达蛋白质,应用GO和KEGG数据库进行注释和信号通路富集并结合PubMed数据库结果,筛选出胃癌中未见或较少报道的上调目的基因。通过shRNA技术敲减基因,HCS技术比较敲减对细胞增殖的影响,筛选出肿瘤增殖相关基因并通过检测mRNA含量、克隆形成和CCK8进行验证。结果:通过TMT从胃癌和癌旁组织定量到差异表达蛋白1008个(上调649个,下调359个),25个目的基因敲减后HCS结果显示SF3B4敲减抑制细胞增殖,验证发现SF3B4是潜在的胃癌细胞增殖相关基因。结论:TMT技术结合HCS为肿瘤相关基因的筛选提供新的可能性。本研究提示SF3B4是潜在的胃癌增殖相关基因,为研究胃癌发生机制提供新线索。