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猪2型圆环病毒ORF1与ORF2基因和伪狂犬病毒基因的重组与表达的研究
被引量:
14
1
作者
琚春梅
陈焕春
+2 位作者
樊惠英
刘正飞
曹胜波
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期370-374,共5页
根据GenBank发布的猪2型圆环病毒(PCV2 )序列(AY0 35 82 0 ) ,设计两对特异性引物,采用PCR方法,分别扩增了猪2型圆环病毒ORF1和ORF2基因。将ORF1和ORF2基因的PCR产物回收并酶切后,依次插入到伪狂犬病毒gE gI双缺失通用转移载体pIECMV中...
根据GenBank发布的猪2型圆环病毒(PCV2 )序列(AY0 35 82 0 ) ,设计两对特异性引物,采用PCR方法,分别扩增了猪2型圆环病毒ORF1和ORF2基因。将ORF1和ORF2基因的PCR产物回收并酶切后,依次插入到伪狂犬病毒gE gI双缺失通用转移载体pIECMV中,构建了猪2型圆环病毒_伪狂犬病毒重组中间转移质粒pIEORF1_ORF2。采用脂质体介导法,将重组中间转移质粒pIEORF1_ORF2与伪狂犬病毒TK- gE- LacZ+ 基因组共转染IBRS_2细胞,待发生细胞病变后收集病毒液进行空斑纯化,利用检测PCV2ORF1基因和ORF2基因的PCR方法筛选重组病毒TK- gE- gI- ORF1-ORF2 + ,用Southernblotting鉴定重组病毒,并用Westernblotting检测ORF1_ORF2融合蛋白的表达情况,在此基础上也测定了重组病毒在不同细胞上的增殖滴度。结果表明,外源基因ORF1和ORF2已成功插入到TK- gE- LacZ+ 亲本株的基因组中,并获得了表达,表达的蛋白可与PCV2阳性血清发生反应。同时发现ORF1和ORF2基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,其毒力与亲本株相当。
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关键词
猪
2
型圆环病毒
orf
1
基因
orf
2
基因
伪狂犬病毒
^
TK^-/gE^-/gI^-
/orf
1
-orf
2
^+
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职称材料
题名
猪2型圆环病毒ORF1与ORF2基因和伪狂犬病毒基因的重组与表达的研究
被引量:
14
1
作者
琚春梅
陈焕春
樊惠英
刘正飞
曹胜波
机构
华中农业大学动物医学院病毒室
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期370-374,共5页
基金
国家高技术研究发展计划基金资助项目 (No .2 0 0 1AA2 13 0 5 1)~~
文摘
根据GenBank发布的猪2型圆环病毒(PCV2 )序列(AY0 35 82 0 ) ,设计两对特异性引物,采用PCR方法,分别扩增了猪2型圆环病毒ORF1和ORF2基因。将ORF1和ORF2基因的PCR产物回收并酶切后,依次插入到伪狂犬病毒gE gI双缺失通用转移载体pIECMV中,构建了猪2型圆环病毒_伪狂犬病毒重组中间转移质粒pIEORF1_ORF2。采用脂质体介导法,将重组中间转移质粒pIEORF1_ORF2与伪狂犬病毒TK- gE- LacZ+ 基因组共转染IBRS_2细胞,待发生细胞病变后收集病毒液进行空斑纯化,利用检测PCV2ORF1基因和ORF2基因的PCR方法筛选重组病毒TK- gE- gI- ORF1-ORF2 + ,用Southernblotting鉴定重组病毒,并用Westernblotting检测ORF1_ORF2融合蛋白的表达情况,在此基础上也测定了重组病毒在不同细胞上的增殖滴度。结果表明,外源基因ORF1和ORF2已成功插入到TK- gE- LacZ+ 亲本株的基因组中,并获得了表达,表达的蛋白可与PCV2阳性血清发生反应。同时发现ORF1和ORF2基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,其毒力与亲本株相当。
关键词
猪
2
型圆环病毒
orf
1
基因
orf
2
基因
伪狂犬病毒
^
TK^-/gE^-/gI^-
/orf
1
-orf
2
^+
Keywords
porcine circovirus type
2
,
orf
1
gene,
orf
2
gene, pseudorabies virus, TK -/gE -/gI -
/orf
1
-orf
2
+
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪2型圆环病毒ORF1与ORF2基因和伪狂犬病毒基因的重组与表达的研究
琚春梅
陈焕春
樊惠英
刘正飞
曹胜波
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005
14
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参考文献
引证文献
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