Ⅰ型牛疱疹病毒TK^-/gE^-基因双缺失突变株生物学特性

目的构建Ⅰ型牛疱疹病毒(BHV-1)的TK-/gE-双缺失突变株,检测其生物学功能,为治疗牛传染性鼻气管炎提供参考。方法构建了带有EGFP表达盒的BHV-1 TK-/gE-双缺失突变株。通过southern杂交、蛋白质斑点印迹、空斑试验、MDBK细胞增殖实验等技术方法,对重组基因所构成病毒突变株的生物学特性进行鉴定。结果 Southern杂交及蛋白斑点印迹表明,课题组成功构建了带有EGFP表达盒的双缺失突变株;该突变株具有与野生株相当的繁殖力,但TK-/gE-成功缺失,毒力大幅减弱;BHV-1 TK-/gE-遗传稳定,不会返强。结论本项目组成功构建了Ⅰ型牛疱疹病毒(BHV-1)的TK-/gE-双缺失突变株,该缺失株具有良好的安全性和稳定性,为该突变株进一步作为生物安全疫苗和多价病毒载体提供了依据,为预防和治疗牛传染性鼻气管炎提供了技术支持。

伪狂犬病病毒鄂A株TK^-/LacZ^+突变株的构建

本研究以地高辛标记的含TK基因的BamHI/KpnI片段为探针 ,通过Southern杂交确定伪狂犬病病毒鄂A株基因组中一大小约 5 9kb的KpnI片段中含有TK基因 ,回收该片段并克隆于pUC18的KpnI位点。然后进一步克隆其中含TK基因的PstI/KpnI片段 ,并将LacZ表达盒插入到该片段中的BamHI位点 ,构建转移质粒 pUEKPZ。将该质粒与伪狂犬病病毒鄂A株基因组共转染PK 15细胞 ,待完全病变后在X gal存在下筛选蓝斑 ,蓝斑纯化 3次后 ,经PCR扩增、Southern杂交证实获得的病毒为伪狂犬病病毒鄂A株TK- /LacZ+ 突变株。