TLN-58和hLYZ基因融合表达载体的构建及其细胞毒性研究

为了评价融合表达抗菌肽TLN-58和人溶菌酶hLYZ双基因重组表达质粒的安全性,试验采用基因重组法将TLN-58和hLYZ基因片段克隆至pEGFP-N1载体,利用转染试剂GeneTwin^(TW)将构建好的重组质粒转染HEK293细胞,RT-PCR验证重组真核质粒在细胞中表达情况;通过DAPI染色、AO/EB染色、CCK-8检测法和流式细胞术测定并分析hLYZ和TLN-58融合基因表达产物的细胞毒性。结果表明:成功构建重组真核质粒pEGFP-N1-hLYZ-TLN-58,当重组质粒DNA用量为1μg且GeneTwin^(TW)转染试剂用量为3μL时,转染HEK293细胞24 h,为最佳转染条件,重组质粒可成功表达目的基因;DAPI染色和AO/EB染色显示,转染pEGFP-N1-hLYZ-TLN-58质粒组细胞凋亡与对照组相比,无显著性差异;CCK-8试验测定细胞相对增殖率(RGR)为50%~74%,显示重组质粒的细胞毒性较小;流式细胞术检测发现重组质粒转染细胞与对照组细胞在G1、G2和S期所占的比例均差异不显著。结果表明,重组质粒的细胞毒性较小且对细胞周期无显著影响,为抗菌肽TLN-58和hLYZ的安全性及抗菌应用奠定了研究基础。