基于TLR-4信号通路的中药防治急性肺损伤的研究进展

急性肺损伤(acute lung injury,ALI)为临床常见的急危重症,发病机制复杂,病死率较高。Toll受体4(Toll-like receptor 4,TLR-4)信号通路与炎症反应密切相关,在ALI的发病机制中起着重要的作用。近年来,研究发现一些中药复方及活性成分通过调节TLR-4信号通路达到防治ALI的作用。就TLR-4信号通路及其在ALI中的作用,以及以该通路相关分子为靶点防治ALI中药的研究进展做一综述。

缺氧-复氧诱导HK2细胞HMGB1/TLR-4信号通路活化调控TNF-α、IL-1β表达的意义

目的:观察缺氧-复氧诱导后HK2细胞的凋亡率、高迁移率蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)水平的改变,探讨缺氧-复氧模拟肾缺血-再灌注诱导HGMB1/TLR-4信号通路活化在调控晚期炎症反应和细胞凋亡的意义。方法:用抗霉素A处理HK2细胞(0.1μmol/L)耗竭ATP的方法建立缺氧-复氧HK2细胞模型以模拟缺血-再灌注损伤。将HK2细胞随机分成3组:normal组、I/R组和重组人HGMB1组(r HGMB1组),在复氧后12 h、24 h、48 h 3个时间点,用流式细胞术检测细胞的凋亡率,ELISA法检测细胞上清液HMGB1、TNF-α、IL-1β的水平,免疫激光共聚焦和western blot检测HK2细胞TLR-4蛋白的表达。结果:缺氧-复氧可诱导HK2细胞凋亡比率、细胞上清液重组人HMGB1、TNF-α、IL-1β水平及HK2细胞TLR-4蛋白12 h即明显增多,24 h达高峰,与normal组相同时间点相比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。经重组人HGMB1处理后,细胞的凋亡率、上清液HMGB1、TNF-α、IL-1β水平及HK2细胞TLR-4蛋白均明显降低,与I/R组相同时间点相比较差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:缺氧-复氧模拟肾缺血-再灌注可诱导HK2细胞HGMB1/TLR-4信号通路活化,参与调控TNF-α、IL-1β炎症介质的表达及HK2细胞的凋亡,通过晚期炎症和凋亡机制介导AKI的发生和发展。

基于TLR-4/NF-κB信号通路探究金花茶提取物对非酒精性脂肪肝的作用

探讨金花茶提取物对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠模型的改善作用及其机制。随机选取10只SD大鼠为空白组,剩余50只则灌服高糖高脂乳剂复制非酒精性脂肪肝模型,14 d后造模大鼠按血清中总胆固醇(TC)水平随机分为模型组、辛伐他汀组(8 mg/kg)及金花茶高、中、低剂量组(260、130、65 mg/kg)。分组后连续给药6周,于末次给药前进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)并计算血糖曲线下面积(AUC),末次给药后采集血清及肝组织,检测血脂指标总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)及游离脂肪酸(FFA),肝脂指标TC及TG,肝功能指标谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST),肝脏脂质过氧化指标丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD);测定大鼠血清炎症因子指标白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)及肿瘤坏死因子(TNF-α);检测血清胰岛素(FINS)并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色法观察肝脏病理形态学变化并进行非酒精性脂肪肝病活动度积分(NAS)评分;测定肝组织中Toll样受体4(TLR-4)和核因子κB(NF-κB)的基因及蛋白的表达。结果表明:与模型组相比,金花茶药物组AUC、HOMA-IR及血清中FINS、TG、TC、LDL-C、FFA、ALT、AST、IL-6、IL-8、TNF水平显著降低(P<0.05),HDL-C水平明显升高(P<0.05);肝组织TG、TC、MDA中含量显著降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05);肝脏脂肪肝病样变减轻,肝细胞形态异常及炎症浸润明显改善,NAS评分显著下降(P<0.05);TLR-4、NF-κB蛋白及mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),其中以金花茶高剂量的改善效果最佳。综上所述,金花茶提取物可通过TLR-4/NF-κB信号通路来调节糖脂代谢紊乱,降低炎症反应和减轻炎症浸润,改善NAFLD大鼠肝脏病变。

猪胸膜肺炎放线杆菌感染小鼠所致炎症中TLR-4信号通路涉及细胞焦亡

【目的】探讨革兰氏阴性菌胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus Pleuropneumoniae,APP)感染小鼠致肺病变的分子细胞机制,以改善猪传染性胸膜肺炎的防治。【方法】滴鼻法感染小鼠,观察肺部眼观病变,石蜡切片HE染色观察肺组织病变。RT-PCR和q PCR方法检测小鼠肺部的Caspase-1、Caspase-3、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18、TLR-4表达量的变化。【结果】小鼠在感染后48h内死亡,解剖后观察小鼠肺部有严重出血和炎症。实验组小鼠肺组织IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α的表达水平显著增加;TLR-4的表达量显著上调;肺部组织Caspase-1的表达水平明显升高,而Caspase-3的表达水平未见明显变化。【结论】TLR-4信号通路可能参与APP感染引起的肺部炎症的发生,APP感染后激活TLR-4信号通路使有关细胞释放炎症因子,引起的肺部炎症。炎症可能涉及Caspase-1参与的细胞焦亡。

基于TLR-4/NF-κB信号通路研究老鹳草素对四氯化碳致肝损伤小鼠的保肝作用

目的:研究老鹳草素对四氯化碳(CCl_4)致急性肝损伤小鼠的保护作用,并探索其作用机制。方法:将60只小鼠随机分为正常对照组、模型组、水飞蓟宾(180 mg/kg)阳性对照组及老鹳草素低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组,连续灌胃给药10 d。末次给药2 h后,除正常对照组外,其余各组腹腔注射0.1%CCl_4花生油溶液(10 mL/kg)建立CCl_4致小鼠急性肝损伤模型。16 h后,收集血清和肝组织。生化法测定血清ALT、AST、ALP、TBIL、γ-GT、MDA、T-SOD、GSH-Px水平;ELISA法检测肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6含量;Western-blot检测肝组织中TLR-4、NF-κB蛋白表达;HE染色观察肝组织病理学变化。结果:与模型组比较,老鹳草素能显著降低肝损伤小鼠血清ALT、AST、ALP、TBIL、γ-GT、MDA水平,显著升高血清T-SOD、GSH-Px活性,显著降低肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6含量和TLR-4、NF-κB蛋白表达(P<0.05或P<0.01);HE染色结果显示其对肝组织损伤有明显的改善作用。结论:老鹳草素对CCl_4制备的急性肝损伤小鼠具有显著的保护作用,其作用机制可能与抗炎、抗氧化及调控TLR-4/NF-κB信号通路有关。

基于TLR-4/NF-κB信号通路探讨苍附导痰汤对痰湿型多囊卵巢综合征大鼠的治疗作用

目的基于TLR-4/NF-κB信号通路探讨苍附导痰汤对痰湿型多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠的影响。方法将50只SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组及中药(苍附导痰汤)低、中、高剂量组(3.12、6.24、12.48 g·kg^(-1))。采用Poresky造模法联合高脂饮食建立痰湿型PCOS病证结合大鼠模型。造模成功后采用相应剂量的苍附导痰汤灌胃给药,每日1次,连续28 d。采用苏木精-伊红(HE)染色法进行大鼠卵巢组织病理形态学观察;采用ELISA法测定血清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)等炎性因子水平;采用qRT-PCR法检测卵巢组织中核因子κB(NF-κB)、Toll样受体4(TLR-4)、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)mRNA表达;采用免疫组织化学法检测卵巢组织中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达。结果与空白组比较,模型组大鼠卵巢的成熟卵泡数和黄体数明显减少(P<0.05);血清IL-6、TNF-α和CRP水平明显升高(P<0.05);卵巢组织中NF-κB、TLR-4及ox-LDL mRNA表达及HMGB1蛋白表达均明显上调(P<0.05)。与模型组比较,中药中、高剂量组大鼠卵巢的成熟卵泡数、黄体数均明显增加(P<0.05);大鼠血清IL-6、TNF-α、CRP水平明显下降(P<0.05);卵巢组织中NF-κB、ox-LDL、TLR-4 mRNA表达及HMGB1蛋白表达均明显下调(P<0.05)。结论苍附导痰汤可能通过下调HMGB1的表达,抑制TLR-4/NF-κB信号通路,进而减少IL-6、TNF-α、CRP等炎性因子的释放,从而发挥对PCOS的治疗作用。

升降散调控TLR-4/NF-κB信号通路对脂多糖诱导脓毒症大鼠心肌损伤的影响

目的研究升降散调控TLR-4/NF-κB信号通路对LPS诱导脓毒症大鼠心肌损伤的影响。方法采用腹腔注射LPS法构建急性脓毒血症大鼠模型,大鼠随机分为正常组(n=6),脓毒症模型组(n=6),中药组(n=6),抑制剂组(n=6),除正常组外,各组均腹腔注射注射脂多糖,miR-146a抑制剂组心肌内注射miR-146a抑制剂(0.2μl/g),中药组升降散灌胃。48 h后采集大鼠心肌组织,观察心肌组织切片病理改变,测定白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等因子的水平,及miRNA-146a、NF-κB mRNA、TNF-αmRNA、IL-6 mRNA、IL-1βmRNA活性水平。结果与正常组相比,各组IL-1、IL-6、TLR4及NF-κB蛋白水平升高(P<0.05),模型组及抑制组TNF-α高于对照组(P<0.05);模型组miR-146a、NF-κB、TNF-α、IL-6及IL-1基因表达增高(P<0.01),中药组miR-146a及NF-κB表达增高(P<0.05);抑制剂组NF-κB、TNF-α、IL-6及IL-1表达增高(P<0.01)。与模型组相比,中药组、TNF-α、TLR4及NF-κB蛋白水平降低(P<0.05),中药组miR-146a表达增高,而NF-κB、TNF-α、IL-1及IL-6基因表达降低(P<0.05);抑制剂组IL-6、TNF-α、TLR4及NF-κB活性升高(P<0.01),抑制剂组miR-146a表达降低(P<0.01),NF-κB、TNF-α、IL-6及IL-1表达增高。与抑制剂组相比,中药组IL-1、IL-6、TNF-α、TLR4及NF-κB蛋白水平降低(P<0.01),miR-146a基因表达增高,而NF-κB、TNF-α、IL-6及IL-1表达降低(P<0.01)。结论升降散能减轻脓毒症大鼠心肌损害,其机制可能与其促进miRNA-146a表达,负反馈调节TLR-4/NF-κB信号通路,减轻抑制炎症反应有关。

LR12肽通过调控TLR-4/NF-κB信号通路对坏死性小肠结肠炎新生小鼠肠道损伤的影响

目的探讨LR12肽对坏死性小肠结肠炎(NEC)新生小鼠肠道损伤的影响及其作用机制。方法SPF级C57BL/6小鼠18只(雌性6只,雄性12只),8周龄,体重16~23 g。雌鼠受孕后产幼鼠60只,根据随机数字表法分为对照组、模型组、LR12-scr组和LR12组,每组15只。对照组不采取任何操作,其余三组建立NEC模型。模型构建成功后,LR12-scr组腹腔注射5 mg/kg LR12 scramble,LR12组腹腔注射5 mg/kg LR12肽,对照组和模型组腹腔注射等剂量的溶剂,1次/d,连续3 d。比较各组幼鼠的各项指标。结果与对照组比较,模型组临床症状积分,肠组织病理评分,肠黏膜通透性,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-1β和IL-6水平及髓细胞触发受体1、TLR-4、MyD88、NF-κB p65等蛋白表达水平升高,体重及IκBα蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,LR12组临床症状积分,肠组织病理评分,肠黏膜通透性,TNF-α、IL-1β和IL-6水平及TREM1、TLR-4、MyD88、NF-κB p65等蛋白表达水平降低,体重及IκBα蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。LR12-scr组以上各指标与模型组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论LR12肽可改善NEC新生小鼠肠黏膜通透性,降低肠组织炎症反应,减轻肠道损伤,其机制可能与抑制TLR-4/NF-κB信号通路活化有关。

阿奇霉素经TLR-4/NF-κB信号通路干预COPD大鼠炎症的机制研究

目的探讨阿奇霉素通过TLR-4/NF-κB信号通路干预慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠炎症的机制。方法 36只SD大鼠分为健康对照组、模型组、阿奇霉素组。模型组及阿奇霉素组采用烟熏联合气管内滴入脂多糖1个月建立COPD大鼠模型。阿奇霉素组烟熏前30min给予50mg/kg阿奇霉素灌胃,健康对照组及模型组给予等量生理盐水。1个月后,处死大鼠,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态;ELISA法检测肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、IL-6水平;RT-PCR检测Toll样受体4(TLR4)及核因子-κB(NF-κB)、磷酸化p65(pp65)mRNA表达;Western blot检测TLR4、pp65、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及MMP-9表达水平。并对大鼠支气管肺泡灌洗液进行细胞分类和计数。结果与模型组比较,阿奇霉素组能改善肺组织形态,降低中性粒细胞数(P<0.01),减少肺组织匀浆中TNF-α、IL-1β、IL-6、MMP-2及MMP-9的分泌(P<0.01),并抑制TLR4表达及pp65(P<0.01)。结论阿奇霉素能通过TLR-4/NF-κB信号通路干预COPD大鼠炎症。

基于TLR-4/NF-κB信号通路探讨归术益坤方联合粪菌移植对多囊卵巢综合征大鼠的治疗作用

目的 探讨归术益坤方联合粪菌移植治疗多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome, PCOS)的潜在机制。方法 将30只6周龄SD雌性大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、粪菌移植组、中药组、中药联合粪菌移植组,每组各6只。采用来曲唑诱导PCOS大鼠模型,以对照组大鼠新鲜粪便、归术益坤方进行干预,观察大鼠动情周期。检测大鼠血清性激素[黄体生成素(Luteinizing hormone, LH)、促卵泡激素(Follicle-stimulating hormone, FSH)、睾酮(Testosterone, T)]、空腹胰岛素(Fasting insulin, FINS)、空腹血糖(Fasting plasmaglucose, FPG)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA)检测大鼠白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)、瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor, TNF-α)水平;HE染色观察大鼠卵巢形态学变化;Western Blot检测卵巢组织Toll样受体4(TLR-4)、磷酸化NF-κB p65相对表达量。结果 与对照组比较,模型组大鼠出现动情周期紊乱、卵巢呈多囊样改变,T、LH、LH/FSH、体质量、FPG、FINS、HOMA-IR、IL-18、TNF-α水平均明显升高(P<0.01),卵巢组织TLR-4、磷酸化NF-κB p65表达量上升(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,归术益坤方联合粪菌移植可显著改善上述指标(P<0.05);粪菌移植可降低T、LH、LH/FSH、体质量、FPG、HOMA-IR、TNF-α(P<0.05),下调卵巢组织TLR-4、磷酸化NF-κB p65表达(P<0.01),归术益坤方可降低T、LH、LH/FSH、体质量、FPG、FINS、HOMA-IR、IL-18、TNF-α(P<0.05),下调卵巢组织TLR-4、磷酸化NF-κB p65表达量(P<0.01)。结论 归术益坤方联合粪菌移植可明显改善PCOS大鼠生殖功能和代谢异常,潜在机制可能是改善肠道微生态,下调TLR-4/NF-κB信号通路,改善慢性炎症状态。

钙结合蛋白S100A4通过TLR4/NF-κB信号通路调控胶质瘤细胞增殖、存活及迁移功能

目的:探索外源性钙结合蛋白S100A4对胶质瘤细胞增殖、存活及迁移功能的影响及机制。方法:利用UCSC数据库下载泛癌数据集,进行S100A4在泛癌中的表达及预后分析;从CGGA数据库中下载胶质瘤患者的转录组数据和临床数据,利用R软件进行分析S100A4表达在胶质瘤患者中的预后与进展;利用在线分析工具GEPIA与STRING进行胶质瘤患者的S100A4蛋白质网络互作分析。体外培养人胶质瘤细胞系(U87与U251),实验分为3组:PBS组、S100A4组、S100A4+TAK242组[瑞沙托维(TAK242)为Toll-样受体4(TLR4)特异性抑制剂]。流式细胞术检测胶质瘤细胞的增殖与凋亡;细胞划痕实验、Transwell实验及克隆形成实验检测U87与U251细胞的迁移及增殖能力;Western blot检测TLR4蛋白、NF-κB相关信号分子蛋白水平。结果:生物信息学结果显示,S100A4在多种肿瘤中显著上调(P<0.05),包括:胶质母细胞瘤(GBM)、低级胶质瘤(LGG)、胃癌(STAD)、肝细胞肝癌(LIHC)等,其中在GBM和LGG中预后较差。与低表达S1004的胶质瘤患者相比,高表达S100A4的胶质瘤患者生存期更短,WHO分级程度更高。此外,胶质瘤患者S100A4蛋白可能与膜联蛋白A2(ANXA2)、TLR4和晚期糖基化终末产物特异性受体(AGER)蛋白存在相互作用。细胞实验中,与PBS组相比,外源性S100A4处理后,胶质瘤U87和U251细胞增殖、迁移能力增强,TLR4、p-ERK1/2、p-p38、p-p65蛋白水平显著上调(P<0.05)。与S100A4组相比,S100A4+TAK242组胶质瘤细胞增殖、迁移能力减弱,TLR4、p-ERK1/2、p-p38、p-p65蛋白水平显著下调(P<0.05)。结论:S100A4可能通过TLR-4/NF-κB信号通路调控胶质瘤细胞增殖、迁移及存活功能。

乌药叶提取物对高脂血症大鼠肝脏组织病理学及TLR-4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨乌药叶提取物对高脂血症模型大鼠肝脏组织病理学及Toll样受体4(TLR-4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:将40只SPF级雄性大鼠随机分为对照组10只和造模组30只。造模组通过高脂饮食建立高脂血症大鼠模型,模型制备成功后,将造模组大鼠随机分为模型组与乌药叶高、低剂量组。乌药叶高、低剂量组分别按1.6 g/kg、0.8 g/kg的剂量灌胃乌药叶提取物,模型组及对照组给予等容积的蒸馏水。连续给药8周后,HE染色后观察大鼠肝脏组织病理学变化,Western blot法检测其肝脏TLR-4、NF-κB、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠肝细胞排列紊乱、炎性细胞浸润、并呈现大小不一的脂滴,TLR-4、NF-κB、TNF-α、IL-2蛋白表达均增加(P<0.05);与模型组比较,高、低剂量组大鼠肝脏病理形态接近对照组,肝细胞排列较为整齐,炎性细胞浸润明显减轻,肝细胞内小脂滴数量减少,细胞空泡化明显改善,TLR-4、NF-κB、TNF-α、IL-2蛋白表达均降低(P<0.05),其中以乌药叶高剂量组效果更显著。结论:乌药叶提取物对高脂血症模型大鼠的肝组织病理改变有明显的改善作用,其作用机制可能是通过阻断TLR-4/NF-κB信号通路,减少TNF-α、IL-2蛋白表达实现的。

CD14/TLR-4-NF-κB信号通路参与骨关节炎发病机制的研究

目的观察膝骨关节CD14、toll样受体(toll-like receptor,TLR)-4、NF-κBp65、基质金属蛋白酶(matrix metallo-proteinases,MMPs)-13蛋白及其mRNA表达,探讨膝骨关节炎发病机制。方法 40只清洁级雄性SD大鼠,按体重随机分为两组。正常组同步饲养,模型组采用改良Hulth法建立膝骨关节炎模型。第4周末处死全部大鼠,摘取膝关节滑膜组织,应用HE染色观察膝骨关节组织形态学变化;分别应用Real-time PCR、Western-blot技术检测CD14、TLR-4、NF-κBp65、MMPs-13mRNA及其蛋白表达。结果模型组CD14、TLR-4、NF-κBp65、MMPs-13mRNA及其蛋白表达呈高表达特点,与正常组比较有统计学意义(P<0.05)。结论 CD14/TLR-4-NF-κB信号通路过度活化,下游NF-κBp65及MMPs-13的表达升高可能是导致关节软骨破坏,降解加速,诱发骨关节炎发展的重要因素之一。

吴茱萸碱抑制HMGB1/TLR-4/NF-κB信号通路对类风湿关节炎大鼠的改善作用

目的 探讨吴茱萸碱(Evo)对类风湿关节炎(RA)大鼠滑膜增生和炎性反应的改善作用机制。方法 建立胶原诱导的RA模型大鼠,分为模型组、吴茱萸碱低、中、高剂量组(Evo-L、M、H组)、阳性对照组(美洛昔康组),另设健康大鼠为对照组。评估6组大鼠足跖肿胀度及关节炎指数;HE染色检测滑膜组织病理学变化;TUNEL染色观察滑膜细胞凋亡;微量法检测滑膜组织氧化应激指标(MDA、SOD、GSH Px)水平;ELISA法检测血清炎性因子水平;Western blot法检测滑膜组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR-4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路蛋白表达。结果 与模型组比较,Evo-L、M、H组和美洛昔康组大鼠滑膜组织病理学变化不同程度好转,足跖肿胀度及关节炎指数、MDA、IL-6、CRP、TNF-α水平、HMGB1、TLR-4蛋白水平及p-NF-κB p65/NF-κB p65比值显著下降(P<0.05),滑膜细胞凋亡率、SOD、GSH Px水平显著上升(P<0.05)。结论 吴茱萸碱可能通过抑制HMGB1/TLR-4/NF-κB信号通路,改善RA大鼠的滑膜增生和炎性反应。

茯苓四逆汤调节TLR-4/NF-κB 通道对脓毒症大鼠心肌抑制的保护机制研究

目的:探讨茯苓四逆汤调节TLR-4/NF-κB通道对脓毒症大鼠心肌抑制的保护作用机制。方法:SPF级SD雄性大鼠120只,随机分成6组:正常组、假手术组、模型组,中药低、中、高剂量组。通过盲肠结扎穿孔法(CLP法)制作脓毒症模型。造模后6h开始给药,持续给药3d。正常组、假手术组、模型组予等量生理盐水,中药各剂量组予相应剂量茯苓四逆汤,均为灌胃给药。观察大鼠生存状态,于术前和术后24h、48h、72h各选5只大鼠处死,采用Western blotting法及QPCR检测心肌组织NF-κB、H-FABP的蛋白和TLR-4的基因表达,同时以ELISA法检测心肌细胞TNF-ɑ、IL-6含量。结果:与正常组比较,模型组及中药各剂量组TNF-ɑ、IL-6水平及NF-κB、H-FABP蛋白表达明显升高,TLR-4 基因表达亦增高;与模型组同时间点比较,中药各剂量组TNF-ɑ、IL-6水平明显下降,NF-κB 和H-FABP蛋白水平比较也有统计学差异;中药各剂量组同时间比较发现,剂量越高,其TNF-ɑ、IL-6水平下降越明显,下调NF-κB 和H-FABP蛋白表达水平越明显,TLR-4 mRNA 转录水平降低的越明显,差异均有统计学意义。结论:茯苓四逆汤能减轻脓毒症大鼠心肌抑制,通过抑制炎症反应,负反馈调节TLR-4/NF-κB信号通路,从而缓解心肌抑制。

黄芪甲苷通过调控TLR-4/NF-κB信号通路对大鼠皮瓣缺血再灌注损伤的影响

目的探讨黄芪甲苷(astragaloside,AS)对大鼠皮瓣缺血再灌注损伤的影响及其可能机制。方法按随机数字表法将SD大鼠分为假手术组(Sham)、模型组(Model)、AS低剂量组(AS-L,20 mg/kg)和AS高剂量组(AS-H,80 mg/kg),每组12只。术后立即给予药物灌胃处理,1次/d,连续7 d。观察术后2、4、6 d各组大鼠皮瓣变化情况,并于术后7 d测定各组大鼠皮瓣成活率;HE染色观察大鼠皮瓣组织病理学变化;ELISA实验检测大鼠血清炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β表达水平;比色法测定大鼠组织SOD活性和MDA含量;qRT-PCR检测大鼠皮瓣组织TLR4和NF-κB p65 mRNA表达水平;Western blot检测大鼠皮瓣组织全蛋白TLR4、MyD88以及核蛋白NF-κB p65表达水平。结果Model组大鼠腹部皮瓣出现严重水肿,有炎症渗出,皮瓣发硬,毛发生长不良;不同剂量AS处理后能有效缓解皮瓣缺血再灌注引起的水肿和炎性反应。与Sham组比较,Model组大鼠皮瓣存活率和皮瓣组织中SOD活性显著降低(P<0.05),而血清TNF-α、IL-6和IL-1β表达水平、皮瓣组织中MDA含量、TLR4和NF-κB p65 mRNA表达水平以及全蛋白TLR4、MyD88和核蛋白NF-κB p65表达水平均显著增加(P<0.05);与Model组比较,AS-L组和AS-H组大鼠皮瓣存活率和皮瓣组织中SOD活性均显著提高(P<0.05),而血清TNF-α、IL-6和IL-1β表达水平、皮瓣组织中MDA含量、TLR4和NF-κB p65 mRNA表达水平以及全蛋白TLR4、MyD88和核蛋白NF-κB p65表达水平均显著降低(P<0.05)。结论黄芪甲苷能改善大鼠皮瓣缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制TLR-4/NF-κB信号通路介导的炎症反应和氧化损伤有关。

辽东楤木叶总皂苷对荷结肠癌细胞裸鼠移植瘤TLR-4/NF-κB信号通路及炎性因子的影响

目的:观察辽东楤木叶总皂苷(ETS)对荷瘤裸鼠人结肠癌HT-29移植瘤Toll样受体-4/核转录因子-κB(TLR-4/NF-κB)信号通路及血清中炎性因子的影响,从而探讨其抑瘤机制。方法:将人结肠癌HT-29细胞株接种于50只裸鼠的右腋部皮下,建立人结肠癌异位皮下移植瘤的动物模型。将接种后的裸鼠随机分为5组,每组10只,即模型组,ETS低、中、高剂量组(37. 5,75,150 mg·kg-1),5-氟尿嘧啶组(20 mg·kg-1)。分组后2 d进行给药,5-氟尿嘧啶组腹腔注射给药,隔日1次; ETS低、中、高组给药;模型组给灌胃等体积的生理盐水;连续给药8周。眼眶取血,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1(IL-1);实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织中TLR-4,NF-κB mRNA表达水平;光学显微镜和透射电子显微镜下观察ETS对荷瘤裸鼠人结肠癌HT-29移植瘤形态学方面的影响。结果:病理组织学和超微病理学实验显示各给药组肿瘤组织均有不同程度的损伤,与模型组比较,ETS低、中、高剂量组及5-氟脲嘧啶组对荷瘤裸鼠人结肠癌移植瘤均有不同程度的抑制作用(P <0. 05,P <0. 01),4组抑瘤率分别是20. 14%,32. 43%,59. 56%,63. 58%;与模型组比较,ETS各剂量组TLR-4,NF-κB mRNA及TNF-α,IL-1水平表达明显降低(P <0. 05)。结论:ETS可有效抑制结肠癌肿瘤的生长,其机制可能与调控TLR-4/NF-κB信号通路,减少炎性因子表达有关。

解毒降浊颗粒对代谢综合征SD大鼠肠道菌群结构及TLR-4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨解毒降浊颗粒对代谢综合征(MS)SD大鼠肠道菌群结构及TLR-4/NF-κB信号通路的影响。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、二甲双胍组(0.103 g·kg^-1·d^-1)、受试高剂量组(解毒降浊颗粒2.4 g·kg^-1·d^-1)和受试低剂量组(解毒降浊颗粒1.2 g·kg^-1·d^-1),每组各12只。除空白对照组大鼠外,其余大鼠饲以高脂、高糖饲料,8周后,二甲双胍组和两组受试大鼠分别给予二甲双胍或解毒降浊颗粒灌胃。生化法检测血浆内毒素(LPS)水平及血脂含量,称取肝脏和附睾周围脂肪组织重量。提取粪便总DNA并扩增,文库制备,采用Illumina Miseq高通量测序法分析大鼠肠道菌群结构和多样性。采用Western blot法检测结肠组织中Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB(NF-κB)蛋白的表达水平。结果实验结束时,受试高剂量组大鼠体重、血浆LPS、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)水平明显低于模型组大鼠,而高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)水平高于模型组大鼠,但是与空白对照组相比仍然存在统计学差异(P<0.05);上述各指标与二甲双胍组基本一致(P>0.05)。另外,受试高剂量组大鼠肝脏系数(%)和附睾脂肪系数(%)均明显低于模型组(P<0.05);但是与空白对照组和二甲双胍组基本一致(P>0.05)。受试高剂量组大鼠NF-κB、IL-6及TNF-α水平与空白对照组基本一致(P>0.05),但是明显低于模型组、二甲双胍组和受试低剂量组(P<0.05)。经α-多样性分析,受试高剂量组大鼠肠道菌群丰度(Chaol指数)明显高于其他4组(P<0.05),但是5组大鼠肠道菌群复杂度(Shannon指数)比较无统计学差异(P>0.05)。受试高剂量组大鼠肠道菌群中厚壁菌门、变形菌门、放线菌门和软壁菌门比例以及普雷沃菌属、考拉杆菌属比例明显降低,拟杆菌门比例以及帕拉普氏菌属和拟杆菌属比例升高,与模型组相比有统计学差异(P<0.05)。最后,受试高剂量组和受试低剂量组大鼠结肠组织中TLR4和NF-κB蛋白表达量较模型组明显降低,尤其以受试高剂量组降低最为明显(P<0.05)。结论解毒降浊颗粒对代谢综合征大鼠有一定的减肥及降脂作用,并能改善肠道菌群,抑制TLR-4/NF-κB信号通路活化。

结核分枝杆菌对miR-21和TLR-4/NF-κB信号通路的影响研究

目的研究结核分枝杆菌(Mtb)H37Rv及BCG感染RAW264.7和THP-1细胞后,对miR-21表达及Toll样受体(TLR)-4/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法体外培养RAW264.7和THP-1细胞及Mtb H37Rv、BCG;建立Mtb感染RAW264.7和THP-1细胞模型;RAW264.7及THP-1细胞分别分为对照组,H37Rv感染组,BCG感染组;利用流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-21、TLR4、NF-κB mRNA表达;利用ELISA检测感染12 h后细胞上清液、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-10水平。结果与对照组比较,H37Rv感染组及BCG感染组RAW264.7、THP-1细胞凋亡率均明显升高(P<0.05)。与H37Rv感染组比较,BCG感染组THP-1细胞凋亡率明显升高,RAW264.7凋亡率明显降低(P<0.05)。在RAW264.7细胞中,BCG感染组及H37Rv感染组miR-21低表达,而TLR4、NF-κB mRNA高表达,且BCG感染组TLR4、NF-κB mRNA较H37Rv感染组高表达(P<0.05)。在THP-1细胞中,BCG感染组及H37Rv感染组miR-21低表达,TLR4、NF-κB mRNA高表达,且BCG感染组TLR4、NF-κB mRNA较H37Rv感染组高表达(P<0.05)。在RAW264.7细胞中,BCG感染组及H37Rv感染组TNF-α、IL-6、IL-10表达水平均明显升高,BCG感染组TNF-α、IL-6表达水平较H37Rv感染组明显降低,IL-10明显升高(P<0.05)。在THP-1细胞中,BCG感染组及H37Rv感染组TNF-α、IL-6、IL-10表达水平均明显升高,BCG感染组TNF-α、IL-6表达水平较H37Rv感染组明显升高,IL-10明显降低(P<0.05)。结论Mtb感染巨噬细胞后,可能通过抑制机体miR-21表达,从而激活TLR-4/NF-κB信号通路,促进巨噬细胞凋亡。

基于PPAR-γ和TLR-4/NF-κB信号通路研究狗肝菜多糖对非酒精性脂肪性肝大鼠的保护作用机制

目的:研究狗肝菜多糖对非酒精性脂肪性肝(NAFLD)大鼠的保护作用,并探索其作用机制。方法:46只SD大鼠分为正常组(13只)和高脂饲料组(33只),8 w后每组各随机抽取3只,病理检查确定NAFLD模型成功后,再将高脂饲料组分为模型组和狗肝菜多糖100、200 mg/kg组,每组10只。从第9周起,各组灌胃给予相应药物或生理盐水6 w,采用生化法检测血清中ALT和AST的活性以及肝组织中MDA、SOD和GSH-Px含量;酶联免疫吸附法检测肝组织中TNF-α、IL-6和IL-1β含量;采用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠肝组织病理学变化;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测大鼠肝组织中过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)、Toll样受体4(TLR-4)和磷酸化NF-κB p65蛋白表达情况。结果:与正常组相比,模型组大鼠血清中ALT和AST活性以及肝组织中MDA、TNF-α、IL-6和IL-1β含量均显著升高;肝组织中SOD和GSH-Px活性均显著降低;肝组织中PPAR-γ表达下调,TLR-4和磷酸化NF-κB p65蛋白表达均显著上调。与模型组比较,狗肝菜多糖各剂量组大鼠血清中ALT和AST活性以及肝组织MDA、TNF-α、IL-6和IL-1β含量均明显降低,肝组织SOD和GSH-Px活性均明显增强;肝组织PPAR-γ表达上调,TLR-4和磷酸化NF-κB p65蛋白表达量均下调。结论:狗肝菜多糖对NAFLD大鼠有一定的保护作用,其机制可能与调节PPAR-γ和TLR-4/NF-κB信号通路有关。