TLR-5在溃疡性结肠炎中的表达及相关性研究

目的探讨TLR-5在溃疡性结肠炎发病中的作用。方法收集50例溃疡性结肠炎患者肠黏膜标本,通过RT-PCR检测肠黏膜中TLR-5 mRNA的表达量,ELISA检测NF-κB转录活性。另外收集30名健康志愿者作为对照组。结果中度及重度溃疡性结肠炎患者TLR-5 mRNA的表达量明显高于对照组(1.22±0.32、2.15±0.15、0.6±0.12,P<0.05);溃疡性结肠炎患者肠黏膜中NF-κB转录活性明显增强,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);TLR-5 mRNA的表达量与溃疡性结肠炎的严重程度及炎症指标(ESR和CRP)呈正相关。结论 TLR-5可能通过活化NF-κB参与了溃疡性结肠炎的发病,且TLR-5可反映溃疡性结肠炎的疾病严重程度。

TLR-2和TLR-5在弥漫大B细胞淋巴瘤组织中的表达及临床意义

目的探讨Toll样受体-2(TLR-2)和Toll样受体-5(TLR-5)在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测60例DLBCL组织标本中TLR-2和TLR-5的表达,以21例反应性淋巴结增生组织为对照组,并分析TLR-2和TLR-5表达与DLBCL临床病理特征的关系。结果 TLR-2在DLBCL组织中的阳性表达率为78.3%,在对照组中为28.5%,差异有统计学意义(P<0.05);TLR-2表达与年龄、性别和ECOG评分无关,与临床分期、乳酸脱氢酶水平、B症状、IPI、免疫亚型以及结外受累有关。TLR-5在DLBCL中的阳性表达率为26.6%,在对照组中为23.8%(P>0.05);TLR-5表达与各临床病理特征无关。结论 TLR-5与DLBCL临床特征无关;TLR-2可能参与了DLBCL的发生和发展,有望作为判断其预后的生物学指标。

系统性红斑狼疮IRF-5和TLR-9mRNA的表达

目的 分析山东地区汉族人群IRF-5基因及TLR-9基因在系统性红斑狼疮患者体内的表达情况,以探讨其与系统系红斑狼疮的关系.方法 以实时荧光定量聚合酶链反应方法检测92例系统性红斑狼疮患者和88例健康对照者IRF5及TLR-9基因表达水平（以2-⊿⊿Ct表示）.结果 系统性红斑狼疮患者体内IRF5及TLR-9 mRNA明显高于健康对照者,且具有统计学意义（p〈0.05）.结论 IRF-5、TLR-9基因可能在SLE发病中起一定作用.

15个物种Toll样受体5基因密码子使用偏好性分析

【目的】探究Toll样受体5(TLR5)基因的密码子使用模式,并分析TLR5基因密码子使用偏好性的影响因素。【方法】综合运用CodonW、BioEdit和R等软件对筛选的15个不同物种TLR5基因完整编码区(CDS)序列核苷酸组成和密码子使用模式进行计算和统计,再基于同义密码子相对使用度(RSCU)和CDS分别进行聚类分析,推测TLR5基因发挥相似生物学功能的物种,并通过ENC-plot、Neutrality-plot和PR2-plot 3种绘图分析造成密码子偏好性现象的可能因素。【结果】9个物种TLR5基因CDS密码子第3位碱基GC含量(GC3)>0.5,14个物种有效密码子数(ENC)值>35,15个物种密码子AU偏斜度(AU skew)和GC偏斜度(GC skew)值<0;不同物种TLR5基因CDS有31个高频密码子,其中21个以G或C结尾,此外GCC、AGA、AGG和CUG表现为较高的RSCU值,为优势密码子;RSCU层次聚类和系统发育聚类结果不完全相同,但两种聚类方法均提示猪、牛和羊TLR5基因的密码子使用特点相似,鸡和绿头鸭相似,虹鳟和鲫鱼相似;ENC-plot分析发现各物种TLR5基因均分布在标准曲线下方较远位置,Neutrality-plot显示密码子第1、2位GC含量的平均值(GC12)和GC3含量呈极显著正相关(P<0.01),PR2-plot则显示密码子第3位碱基使用频率不一致。【结论】不同物种TLR5基因密码子使用模式存在偏好性现象,该现象是物种进化过程中受碱基突变和翻译选择双重影响的结果,其中碱基突变是主要影响因素。研究结果可为后续TLR5基因的生物学功能挖掘提供新的角度和理论认识。

猪TLR5基因表达水平与F18大肠杆菌侵染关系分析

为了探究猪Toll样受体(Toll-like receptor 5,TLR5)基因表达水平与F18大肠杆菌抗性的关系,试验通过不同血清型产肠毒素大肠杆菌(F18ab和F18ac)侵染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),同时通过脂多糖(LPS)分别诱导IPEC-J2细胞4和8h,利用实时荧光定量PCR检测TLR5基因表达水平变化,并利用Western blotting进行蛋白表达分析。结果显示,不同血清型大肠杆菌(F18ab和F18ac)菌体侵染IPEC-J2细胞后,TLR5基因表达水平均极显著上调(P<0.01);LPS诱导IPEC-J2细胞4和8h后,TLR5基因表达水平均极显著上调(P<0.01),且在LPS诱导IPEC-J2细胞8h后,TLR5基因表达水平明显高于诱导4h。与对照组相比,细胞中TLR5蛋白的表达水平极显著上调(P<0.01),与LPS诱导及F18大肠杆菌菌体刺激IPEC-J2细胞后mRNA表达水平结果相一致。本研究在细胞水平上分析了TLR5表达水平和F18大肠杆菌侵染的相关性,进一步证实猪TLR5基因的表达水平在细胞抵抗F18大肠杆菌的侵染过程中发挥了重要的调控作用,为今后关于TLR5基因功能及其在大肠杆菌腹泻遗传育种应用的研究奠定基础。

IRF5通过MyD88/TGF-β1/Smads信号通路介导AngⅡ诱导巨噬细胞的极化和炎症反应

目的探讨转录因子干扰素调节因子5(IRF5)对RAW264.7巨噬细胞极化的调控机制。方法小鼠巨噬细胞(RAW264.7)被分为正常对照组、血管紧张素II(Ang II)处理组,IRF5 siRNA转染组,Ang II+IRF5 siRNA转染组,共4组。2’,7’-二氯荧光素二乙酸盐(DCHFDA)法测定巨噬细胞活性氧簇(ROS)的水平;免疫荧光染色方法检测细胞一氧化氮合酶(i NOS)和IRF5的表达;试剂盒检测巨噬细胞丙二醛(MDA)含量;qRT-PCR和Wetern blotting分别检测巨噬细胞iNOS、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IRF5 mRNA表达水平,以及IRF5、髓样分化因子88(MyD88)、转化生长因子(TGF-β1)、Smad家族蛋白2/3(Smad-2/3)、磷酸化Smad家族蛋白2/3(p-Smad-2/3)蛋白的表达水平;ELISA法检测巨噬细胞培养上清炎症因子水平TNF-α、白介素12(IL-12)、IL-10含量变化。结果IRF5干扰载体(IRF5 siRNA)显著抑制Ang II诱导的巨噬细胞中ROS的水平(P<0.05)和MDA含量(P<0.01);IRF5 siRNA明显抑制Ang II促进巨噬细胞M1亚型的极化,IRF5 siRNA转染后可显著抑制Ang II诱导的巨噬细胞iNOS和TNF-α的表达,与此同时,IRF5表达的减少降低了MyD88/TGF-β1/Smads信号通路的活性;此外,IRF5 siRNA显著减弱Ang II组巨噬细胞培养上清中TNF-α和IL-12的分泌(均P<0.01),而增加了IL-10含量(P<0.001)。结论IRF5通过TLR-MyD88/TGF-β1/Smads信号通路调控巨噬细胞极化和炎症反应的诱发。

大黄酸对DSS诱导溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用及机制探讨

目的:探讨大黄酸对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎的治疗作用及其相关的作用机制。方法:C57BL/6雄性小鼠,随机分为6组,分别为正常组,模型组,美沙拉秦组(0.8 g·kg^(-1))与大黄酸低、中、高剂量组(6.25,12.5,25 mg·kg^(-1)),每组10只。除正常组给予蒸馏水外,其余各组均采用3%DSS溶液自由饮用7 d诱导溃疡性结肠炎模型。造模第1天开始灌胃给药,正常组与模型组给予等量的蒸馏水,连续给药14 d。每天观察小鼠体重、粪便性状、隐血便血情况,评分并计算疾病活动指数(DAI);取结肠,测量长度,制作结肠石蜡切片,苏木素-伊红(HE)染色后显微镜下观察其病理变化;取外周血,收集血清,酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测小鼠血清中鞭毛蛋白抗体含量;蛋白质免疫印迹(Western blot)检测小鼠结肠组织Toll样受体5(TLR5),核因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠DAI分显著升高(P<0.01);结肠明显缩短(P<0.01);黏膜上皮、肠腺等结构消失,黏膜下层大量淋巴细胞浸润,血管扩张。给予美沙拉秦与各剂量的大黄酸后,上述症状均得到缓解(P<0.05,P<0.01)。与正常组比较,模型组血清中鞭毛蛋白抗体含量升高(P<0.01);结肠组织TLR5,NF-κBp65蛋白表达明显增加(P<0.01),美沙拉秦组与各剂量大黄酸组均减少(P<0.05,P<0.01)。结论:大黄酸具有治疗DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎的作用,其机制可能与影响TLR5/NF-κB信号通路有关。