TLR-7对阿尔茨海默病细胞模型β淀粉样蛋白表达及炎症反应的调控作用及机制

目的探究Toll样受体7(TLR-7)在阿尔茨海默病人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)模型中对β淀粉样蛋白表达及神经炎症反应的调控作用及机制。方法构建稳定表达β淀粉样前体蛋白瑞典型突变(APPswe)的阿尔茨海默病模型细胞SH-SY5Y/APPswe,将细胞分为SH-SY5Y组、SH-SY5Y/APPswe组、TLR-7敲低SH-SY5Y/APPswe(SH-SY5Y/APPswe+sh-TLR-7)组、敲低对照SH-SY5Y/APPswe(SH-SY5Y/APPswe+sh-NC)组、TLR-7敲低+miR-15b抑制SH-SY5Y/APPswe(SH-SY5Y/APPswe+sh-TLR-7+miR-15b inhibitor)组和TLR-7敲低+微小RNA-15b(miR-15b)抑制对照SH-SY5Y/APPswe(SH-SY5Y/APPswe+sh-TLR-7+inhibitor NC)组。蛋白质印迹法检测β淀粉样前体蛋白(APP)的表达;实时荧光定量PCR实验检测TLR-7、miR-15b、β淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达;酶联免疫吸附实验检测β淀粉样蛋白42(Aβ42)以及IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌;荧光素酶报告基因实验检测核因子κB(NF-κB)活性。结果与SH-SY5Y组比较,SH-SY5Y/APPswe组细胞APP表达水平上调,Aβ42分泌水平增加[(11.24±0.76)ng/mL比(2.09±0.17)ng/mL,P<0.01)];与SH-SY5Y/APPswe+sh-NC组比较,SH-SY5Y/APPswe+sh-TLR-7组miR-15b表达水平上调[(2.98±0.21)比(1.10±0.05),P<0.01],BACE1 mRNA表达水平下降[(0.72±0.06)比(1.02±0.03),P<0.01],Aβ42分泌水平下降[(6.09±0.42)ng/mL比(10.52±0.67)ng/mL,P<0.01],IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达水平下降[IL-1β:(3.34±0.25)比(4.62±0.41),P<0.01;IL-6:(3.75±0.34)比(5.43±0.31),P<0.01;TNF-α:(1.25±0.11)比(2.07±0.18),P<0.01],IL-1β、IL-6和TNF-α分泌水平下降[IL-1β:(61.40±7.76)pg/mL比(101.76±7.95)pg/mL,P<0.01;IL-6:(547.29±39.11)pg/mL比(893.35±101.43)pg/mL,P<0.01;TNF-α:(256.17±24.32)pg/mL比(375.28±33.99)pg/mL,P<0.01],NF-κB活性下降[(3.25±0.31)比(5.01±0.52),P<0.01]。与SH-SY5Y/APPswe+sh-TLR-7+inhibitor NC组比较,SH-SY5Y/APPswe+sh-TLR-7+miR-15b inhibitor组miR-15b表达水平下降[(0.67±0.13)比(2.96±0.35),P<0.01],BACE1 mRNA表达水平升高[(1.39±0.42)比(0.71±0.05),P<0.05],Aβ42分泌水平升高[(19.54±3.01)ng/mL比(7.47±1.58)ng/mL,P<0.01],IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达水平升高[IL-1β:(6.07±0.43)比(3.55±0.33),P<0.01;IL-6:(5.98±0.28)比(4.02±0.22),P<0.01;TNF-α:(1.88±0.21)比(1.36±0.20),P<0.01],IL-1β、IL-6、TNF-α分泌水平升高[IL-1β:(155.32±13.67)pg/mL比(68.62±5.41)pg/mL,P<0.05;IL-6:(1255.49±119.79)pg/mL比(439.73±60.01)pg/mL,P<0.05;TNF-α:(423.66±34.32)pg/mL比(227.82±26.53)pg/mL,P<0.05],NF-κB活性升高[(5.91±0.66)比(3.58±0.27),P<0.01]。结论TLR-7可能通过miR-15b调控NF-κB信号通路,并影响阿尔茨海默病模型细胞β淀粉样蛋白的分泌及神经炎症反应。

清透邪热方对甲型H1N1流感病毒感染Ana-1细胞TLR-7、MyD88及NF-κB mRNA及蛋白表达的影响

目的研究清透邪热方体外抗甲型H1N1流感病毒效应机制。方法将清透邪热方制备成0.388、0.194、0.097、0.0485、0.024 25mg/mL不同浓度,用H1N1甲型流感病毒感染小鼠Ana-1巨噬细胞,给予不同浓度清透邪热方及达菲进行干预,检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)和白细胞介素-6(IL-6)表达,Toll样受体7(TLR7)及其下游髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达。结果清透邪热方能够抑制甲型H1N1流感病毒感染Ana-1细胞TNF-α、IP-10、IL-6的表达;其中清透邪热方0.024 25mg/mL组降低H1N1病毒感染组TNF-α、IL-6显著(P<0.01);清透邪热方0.097mg/mL组降低IP-10显著(P<0.01)。清透邪热方能够抑制H1N1流感病毒感染后Ana-1细胞后TLR-7、MyD88及NF-κB mRNA及蛋白表达升高;其中清透邪热方0.048 5mg/mL组抑制H1N1病毒感染组TLR-7mRNA、MyD88mRNA表达显著(P<0.01);清透邪热方0.024 25mg/mL组抑制H1N1病毒感染组NF-κB mRNA表达显著(P<0.01);清透邪热方0.048 5mg/mL组抑制H1N1病毒感染组TLR-7蛋白表达升高显著(P<0.01),清透邪热方0.388mg/mL组抑制H1N1病毒感染组MyD88蛋白、NF-κB蛋白表达显著(P<0.01)。结论清透邪热方通过抑制甲型H1N1流感病毒感染Ana-1细胞TLR-7、MyD88及NF-κB mRNA及蛋白表达升高,减少TNF-α、IP-10和IL-6表达,起到抗病毒作用。

鸡Ⅰ型IFN及TLR-3和TLR-7实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为检测鸡抗病毒相关基因在病毒感染过程中的动态变化规律,研究建立了鸡IFN-a、IFN-β、TLR-3和TLR-7的实时荧光定量RT-PCR的检测方法。根据GenBank提供的鸡IFN-α、IFN-β、FLR-3和TLR-7参考序列设计了相应的特异引物,用常规RT-PCR方法从鸡脾脏总RNA中扩增得到鸡相应基因。将其cDNA分别克隆到pMD19-T载体中进行测序鉴定,采用SYBR Green I染料法,建立标准曲线并分析其溶解曲线。结果表明,这4种基因的检测灵敏度可高达46 copies/μL,且具有良好的特异性和重复性。此检测方法的建立为动态定量检测及研究鸡IFN-α、IFN-β、TLR-3和TLR-7基因的表达变化提供了有效的手段。

不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导鸡TLR-7和Mx基因mRNA转录水平的差异

本试验拟研究不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导SPF鸡、SPF鸡胚和鸡胚成纤维细胞中TLR-7和Mx基因mRNA转录水平的动态变化,为不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导IFN-Ⅰ产生差异的机制提供依据。150只6周龄SPF鸡随机分为3组,分别静脉接种PBS、105 EID50毒株SD/196和SD/818各0.2mL,分别于接种后的第1、3、5、7和10天每组剖杀8只,收集具有明显病变差异的组织;180枚10日龄SPF鸡胚分别尿囊腔接种PBS、104 EID50的SD/196毒株和SD/818毒株各0.1mL,分别于接种后的第4、8、16、24、32和48小时每组收集胚体10个;鸡胚成纤维细胞分别接种PBS、SD/196和SD/818毒株病毒液(1moi)进行37℃培养,于感染后的第4、8、16、24、32和48小时收集细胞;动态收集的病变组织、胚体和成纤维细胞通过荧光定量PCR测定TLR-7和Mx基因mRNA水平的表达。结果显示,肺、肾、十二指肠和法氏囊为主要病变差异组织,除鸡胚TLR-7的表达外,毒株SD/818大部分时间点诱导主要病变差异组织、鸡胚和成纤维细胞中TLR-7和Mx基因mRNA的表达显著高于毒株SD/196(P<0.05)。结果表明不同致病性H9N2亚型禽流感病毒明显诱导了SPF鸡主要病变差异组织、SPF鸡胚和鸡胚成纤维细胞中TLR-7和Mx基因mRNA的表达,且较高致病性毒株SD/818诱导表达量明显高于较低致病性毒株SD/196。

流感病毒性肺炎湿热证小鼠TLR-7介导信号通路的变化

目的通过人工气候模拟,观察流感病毒性肺炎湿热证小鼠Toll样受体7(TLR-7)介导信号通路的变化,探讨病毒性疾病湿热证的物质基础。方法将50只BALB/c小鼠随机分为正常对照组10只、单纯湿热组10只、湿热模型组15只、单纯病毒组15只。单纯湿热组:全程高脂饲料喂养,连续10天置于气候箱;湿热模型组:全程高脂饲料喂养,连续10天置于气候箱,第11天接种病毒,接种病毒后不再置入气候箱;单纯病毒组:全程普通饲料喂养14天,不置入气候箱,第11天接种病毒1次,继续喂养3天,第15天处死采集标本,每组随机选取8个样本检测,比较各组TLR-7、核因子-κB(NF-κB)、髓样分化因子88(MyD88)mRNA表达水平。结果湿热模型组TLR-7、MyD88、NF-κB三者mRNA表达水平较其他3组增高,但TLR-7、MyD884组间差异无统计学意义(P>0.05),NF-κB水平湿热模型组高于其他3组(P<0.05或P<0.01)。结论湿热因素干预能上调TLR-7介导信号因子,尤其是下游信号因子NF-κB,从而激发Tol1-NF-κB信号通路,导致湿热模型组小鼠肺脏病变程度较单纯病毒组重。

银翘散对IV感染小鼠肺组织中TLR7/Myd88/NF-кB信号表达的影响

目的:研究银翘散对甲型流感病毒诱导的肺炎小鼠肺组织中TLR-7介导的MyD88依赖性信号传导通路的调控机制。方法:将48只昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、利巴韦林组,银翘散低、中、高剂量组(20、10、5 g·kg·d-1)。除正常组外,建立流感病毒FM1鼠肺适应株滴鼻感染的小鼠流感病毒性肺炎模型。感染后1 h,正常组和模型组予以双蒸水灌胃,药物组分别予以各药物治疗,连续3 d。以苏木素-伊红染色(HE染色)法观察病理改变;RT-PCR检测肺组织TLR-7、髓样分化因子88(MyD88)、核因子(NF-κB p65)mRNA水平。结果:银翘散20、10 g·kg·d-1均能减轻肺组织炎性损伤;降低了TLR-7、Myd88、NF-κB P65 mRNA水平(P<0.05,P<0.01)。结论:银翘散通过抑制TLR-7介导的MyD88依赖性信号通路,抑制了NF-κB p65的表达,从而达到减少肺组织损伤的治疗目的。

Toll样受体7敲除对日本血吸虫感染早期免疫应答的影响

目的探讨Toll样受体7(TLR7)敲除对日本血吸虫感染小鼠免疫应答的影响。方法野生型C57BL/6小鼠(WT,n=9)和TLR7-/-敲除小鼠(TLR7-/-,n=9)以腹部贴片法感染日本血吸虫尾蚴(20条)。感染后42 d处死小鼠,以胸主动脉灌注法收集虫体(n=6),并取肝脏进行虫卵计数;分别取WT、TLR7-/-未感染小鼠,WT、TLR7-/-感染小鼠的脾脏(n=3),制备脾细胞悬液;加入日本血吸虫虫卵(250个/ml)刺激72 h,ELISA法检测γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)和IL-10水平。结果感染后42 d,WT组平均虫荷数为(10.5±3.3)条,每克肝卵数为(38 251.9±4 891.5)个;TLR7-/-组平均虫荷数为(9.8±5.2)条,每克肝卵数为(38 160.9±3 341.0)个,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。在未感染的情况下,TLR7-/-小鼠脾细胞上清液中的IL-10[(1702.6±572.3)pg/ml]和IL-4[(59.5±10.1)pg/ml]水平远高于WT组小鼠[(595.2±386.3)和(8.3±0.9)pg/ml](P<0.05,P<0.01)。感染后42 d,TLR7-/-组小鼠脾细胞上清液中的TNF-α[(43.7±9.8)pg/ml]和IFN-γ[(215.2±35.4)pg/ml]水平低于WT组[(63.4±22.9)和(383.5±253.3)pg/ml],而IL-4[(63.9±33.9)pg/ml]水平高于WT组小鼠[(23.3±11.5)pg/ml],但TLR7-/-组与WT组间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TLR7-/-小鼠在未感染的状态下偏向Th2反应,不影响感染日本血吸虫6周后的免疫应答。

TLR 7在乳腺癌中的研究进展

近年来随着乳腺癌的分子生物学的发展,分子靶向新型治疗方式备受关注.Toll样受体(TLRs)是先天性免疫识别的主要受体,可以起到先天性免疫,直接杀死肿瘤细胞或者激活适应性免疫系统的作用.而TLR 7与乳腺癌的发病密切相关.本文将综述TLRs在乳腺癌发生与发展中的作用机制,重点阐述TLR 7在乳腺癌研究领域的现状,为进一步探明乳腺癌发病的分子机制及临床治疗提供新思路.

TLR7/8激动剂及其在畜禽疾病防治中的潜在应用

TLR7/8是动物体内重要的模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs),启动固有免疫并激活适应性免疫,在病原感染中发挥重要作用。TLR7/8激动剂具有增强机体免疫应答的作用,能够激活免疫细胞,调节炎性细胞因子的产生,对加速病原清除具有重要意义,被认为是许多疾病的潜在防治药物,有希望用于治疗病毒感染、肿瘤等疾病,或作为免疫佐剂为动物机体提供持久的抗体保护。常见的TLR7/8激动剂包括咪唑喹啉类衍生物和核苷类似物等,有些药物已进入临床研究阶段,但仅有少数获批临床。现主要围绕TLR7/8激动剂及其在抗病毒、免疫佐剂等方面的潜在应用进行综述。

IRF_7在干扰素诱导中作用的研究进展

IFN调节因子(interferonregulationfactor,IRF)家族在IFN的诱导表达中起着重要的调节作用。近来研究表明IRF-7是诱导IFN表达的最主要的调节因子,此文对IRF-7在TLR9亚家族和RIG-Ⅰ介导的诱导IFN-α/β表达中的调节作用作了综述。

桑菊饮含药血清对小鼠巨噬细胞Toll样受体表达的影响

目的：研究桑菊饮对小鼠肺巨噬细胞株RAW264.7表达Toll样受体（TLR）的影响。方法：用桑菊饮含药血清作用于正常RAW264.7细胞,24 h后以荧光定量PCR方法测定TLR-1-TLR-9 mRNA的表达,探讨桑菊饮对Toll样受体表达的影响。结果：桑菊饮含药血清在一定剂量（7.7 g.kg-1.U-1）时,可以促进TLR-4和TLR-7的表达,而对TLR-1,TLR-2,TLR-3,TLR-5,TLR-6,TLR-8和TLR-9的表达没有明显影响。结论：桑菊饮的药效学作用可能与促进Toll样受体某些亚型表达有关。