基于TLR-4/NF-κB信号通路探究金花茶提取物对非酒精性脂肪肝的作用

探讨金花茶提取物对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠模型的改善作用及其机制。随机选取10只SD大鼠为空白组,剩余50只则灌服高糖高脂乳剂复制非酒精性脂肪肝模型,14 d后造模大鼠按血清中总胆固醇(TC)水平随机分为模型组、辛伐他汀组(8 mg/kg)及金花茶高、中、低剂量组(260、130、65 mg/kg)。分组后连续给药6周,于末次给药前进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)并计算血糖曲线下面积(AUC),末次给药后采集血清及肝组织,检测血脂指标总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)及游离脂肪酸(FFA),肝脂指标TC及TG,肝功能指标谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST),肝脏脂质过氧化指标丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD);测定大鼠血清炎症因子指标白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)及肿瘤坏死因子(TNF-α);检测血清胰岛素(FINS)并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色法观察肝脏病理形态学变化并进行非酒精性脂肪肝病活动度积分(NAS)评分;测定肝组织中Toll样受体4(TLR-4)和核因子κB(NF-κB)的基因及蛋白的表达。结果表明:与模型组相比,金花茶药物组AUC、HOMA-IR及血清中FINS、TG、TC、LDL-C、FFA、ALT、AST、IL-6、IL-8、TNF水平显著降低(P<0.05),HDL-C水平明显升高(P<0.05);肝组织TG、TC、MDA中含量显著降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05);肝脏脂肪肝病样变减轻,肝细胞形态异常及炎症浸润明显改善,NAS评分显著下降(P<0.05);TLR-4、NF-κB蛋白及mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),其中以金花茶高剂量的改善效果最佳。综上所述,金花茶提取物可通过TLR-4/NF-κB信号通路来调节糖脂代谢紊乱,降低炎症反应和减轻炎症浸润,改善NAFLD大鼠肝脏病变。

基于TLR-4/MyD88/NF-κB对健脾化滞丸治疗溃疡性结肠炎的机制进行拆方研究

目的:通过建立脾虚湿蕴型溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型,探讨健脾化滞丸及其不同拆方对TLR-4/MyD88/NF-κB通路的影响。方法:64只Wistar大鼠随机分为正常对照组8只、模型组56只,采用中医证候联合乙醇-2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠法复制UC大鼠模型,造模成功后,将模型大鼠随机分为模型组(M)、美沙拉嗪组(A)、健脾化滞丸全方组(B)、健脾清化方组(C)、健脾清化活血方组(D)、健脾清化导滞方组(E)、清化导滞活血方组(F),每组8只,给予相应药物灌胃4周,疗程结束后处死所有大鼠并取材,观察大鼠体质量变化、疾病活动度及结肠病理改变,ELISA及免疫组化检测大鼠结肠组织TNF-α表达;RT-PCR及Western blot检测大鼠结肠组织TLR-4、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达。结果:健脾化滞丸全方、健脾清化方、健脾清化活血方组及健脾清化导滞方组大鼠体质量明显高于模型组(P<0.01),各治疗组均能明显改善UC模型大鼠结肠组织病理损伤及疾病活动指数,其中健脾化滞丸全方组及健脾清化活血方组作用最好。各治疗组均可抑制结肠组织TLR-4、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达(P<0.001),其中美沙拉嗪组、健脾化滞丸全方组、健脾清化导滞方组及清化导滞活血方组在降低NF-κB mRNA及蛋白表达上明显优于健脾清化方组及健脾清化活血方组(P<0.05)。各组均能降低结肠组织TNF-α表达(P<0.001),组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:健脾化滞丸及各拆方均可能通过TLR-4/MyD88/NF-κB通路发挥作用,其中黄连、煨木香、凤尾草、炮姜可能为本方核心药物,对临床具有一定指导意义。

基于TLR-4/NF-κB信号通路探讨苍附导痰汤对痰湿型多囊卵巢综合征大鼠的治疗作用

目的基于TLR-4/NF-κB信号通路探讨苍附导痰汤对痰湿型多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠的影响。方法将50只SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组及中药(苍附导痰汤)低、中、高剂量组(3.12、6.24、12.48 g·kg^(-1))。采用Poresky造模法联合高脂饮食建立痰湿型PCOS病证结合大鼠模型。造模成功后采用相应剂量的苍附导痰汤灌胃给药,每日1次,连续28 d。采用苏木精-伊红(HE)染色法进行大鼠卵巢组织病理形态学观察;采用ELISA法测定血清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)等炎性因子水平;采用qRT-PCR法检测卵巢组织中核因子κB(NF-κB)、Toll样受体4(TLR-4)、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)mRNA表达;采用免疫组织化学法检测卵巢组织中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达。结果与空白组比较,模型组大鼠卵巢的成熟卵泡数和黄体数明显减少(P<0.05);血清IL-6、TNF-α和CRP水平明显升高(P<0.05);卵巢组织中NF-κB、TLR-4及ox-LDL mRNA表达及HMGB1蛋白表达均明显上调(P<0.05)。与模型组比较,中药中、高剂量组大鼠卵巢的成熟卵泡数、黄体数均明显增加(P<0.05);大鼠血清IL-6、TNF-α、CRP水平明显下降(P<0.05);卵巢组织中NF-κB、ox-LDL、TLR-4 mRNA表达及HMGB1蛋白表达均明显下调(P<0.05)。结论苍附导痰汤可能通过下调HMGB1的表达,抑制TLR-4/NF-κB信号通路,进而减少IL-6、TNF-α、CRP等炎性因子的释放,从而发挥对PCOS的治疗作用。

山柰酚通过下调NF-κB信号通路减轻猪源甲型H9N2流感病毒所致小鼠急性肺损伤

目的:探讨山柰酚是否通过下调转录因子NF-κB信号通路的表达而保护感染猪源甲型H9N2流感病毒引起急性肺损伤的小鼠。方法:猪源甲型H9N2流感病毒感染BALB/c小鼠建立急性肺损伤模型,山柰酚干预后检测肺湿重与干重比,观察肺组织的病理学变化,检测支气管肺泡灌洗液内炎性细胞数量以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)含量同时检测肺组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)活性以及丙二醛(MDA)含量,Western blot检测小鼠肺内NF-κB P65的表达,ELISA检测小鼠肺组织匀浆细胞核提取物中NF-κB P65和NF-κB P50的核转位。结果:山柰酚能降低小鼠死亡率,改善肺组织的病理学变化和肺水肿程度,并能降低肺内巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞等炎性细胞的数量同时降低TNF-α、IL-6、IL-1β和MDA的含量,抑制MPO的活性并升高SOD的活性。另外,山柰酚可以下调NF-κB P65的表达增加细胞核提取物中NF-κB P65和NF-κB P50的核转位。结论:山柰酚通过下调NF-κB信号通路的表达从而降低猪源甲型H9N2流感病毒所致急性肺损伤小鼠的炎症程度和氧化应激损伤,最终减轻流感病毒所致的急性肺损伤。

基于TLR-4/NF-κB信号通路研究老鹳草素对四氯化碳致肝损伤小鼠的保肝作用

目的:研究老鹳草素对四氯化碳(CCl_4)致急性肝损伤小鼠的保护作用,并探索其作用机制。方法:将60只小鼠随机分为正常对照组、模型组、水飞蓟宾(180 mg/kg)阳性对照组及老鹳草素低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组,连续灌胃给药10 d。末次给药2 h后,除正常对照组外,其余各组腹腔注射0.1%CCl_4花生油溶液(10 mL/kg)建立CCl_4致小鼠急性肝损伤模型。16 h后,收集血清和肝组织。生化法测定血清ALT、AST、ALP、TBIL、γ-GT、MDA、T-SOD、GSH-Px水平;ELISA法检测肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6含量;Western-blot检测肝组织中TLR-4、NF-κB蛋白表达;HE染色观察肝组织病理学变化。结果:与模型组比较,老鹳草素能显著降低肝损伤小鼠血清ALT、AST、ALP、TBIL、γ-GT、MDA水平,显著升高血清T-SOD、GSH-Px活性,显著降低肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6含量和TLR-4、NF-κB蛋白表达(P<0.05或P<0.01);HE染色结果显示其对肝组织损伤有明显的改善作用。结论:老鹳草素对CCl_4制备的急性肝损伤小鼠具有显著的保护作用,其作用机制可能与抗炎、抗氧化及调控TLR-4/NF-κB信号通路有关。

升降散调控TLR-4/NF-κB信号通路对脂多糖诱导脓毒症大鼠心肌损伤的影响

目的研究升降散调控TLR-4/NF-κB信号通路对LPS诱导脓毒症大鼠心肌损伤的影响。方法采用腹腔注射LPS法构建急性脓毒血症大鼠模型,大鼠随机分为正常组(n=6),脓毒症模型组(n=6),中药组(n=6),抑制剂组(n=6),除正常组外,各组均腹腔注射注射脂多糖,miR-146a抑制剂组心肌内注射miR-146a抑制剂(0.2μl/g),中药组升降散灌胃。48 h后采集大鼠心肌组织,观察心肌组织切片病理改变,测定白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等因子的水平,及miRNA-146a、NF-κB mRNA、TNF-αmRNA、IL-6 mRNA、IL-1βmRNA活性水平。结果与正常组相比,各组IL-1、IL-6、TLR4及NF-κB蛋白水平升高(P<0.05),模型组及抑制组TNF-α高于对照组(P<0.05);模型组miR-146a、NF-κB、TNF-α、IL-6及IL-1基因表达增高(P<0.01),中药组miR-146a及NF-κB表达增高(P<0.05);抑制剂组NF-κB、TNF-α、IL-6及IL-1表达增高(P<0.01)。与模型组相比,中药组、TNF-α、TLR4及NF-κB蛋白水平降低(P<0.05),中药组miR-146a表达增高,而NF-κB、TNF-α、IL-1及IL-6基因表达降低(P<0.05);抑制剂组IL-6、TNF-α、TLR4及NF-κB活性升高(P<0.01),抑制剂组miR-146a表达降低(P<0.01),NF-κB、TNF-α、IL-6及IL-1表达增高。与抑制剂组相比,中药组IL-1、IL-6、TNF-α、TLR4及NF-κB蛋白水平降低(P<0.01),miR-146a基因表达增高,而NF-κB、TNF-α、IL-6及IL-1表达降低(P<0.01)。结论升降散能减轻脓毒症大鼠心肌损害,其机制可能与其促进miRNA-146a表达,负反馈调节TLR-4/NF-κB信号通路,减轻抑制炎症反应有关。

NIBP在结肠癌细胞中通过调控NF-κB信号通路促进MMP2、MMP9表达

目的:观察慢病毒介导的NIBP(NIK and IKKβbinding protein)基因转染结肠癌细胞株HT29后,细胞迁移能力以及细胞内p65、MMP2、MMP9 m RNA和蛋白表达的变化。方法:分为未经转染的HT29细胞(HT29组)、转染空载的HT29细胞(HT29-NC组)和转染NIBP的HT29细胞(HT29-NIBP稳转组)。采用Transwell试验检测细胞迁移能力;Q-PCR法检测NIBP、p65、MMP2、MMP9的m RNA表达;Western Blot法检测NIBP、p65、磷酸化p65(p-p65)的蛋白表达;ELISA法检测MMP2、MMP9的分泌。结果:高表达NIBP能增强结肠癌细胞株HT29的迁移能力,并主要通过增加p-p65从而促进MMP2、MMP9 m RNA及蛋白表达(P<0.05)。结论:NIBP可能通过激活NF-κB信号通路促进结肠癌细胞分泌MMP-2、MMP-9,从而促进结肠癌细胞的侵袭转移。

LR12肽通过调控TLR-4/NF-κB信号通路对坏死性小肠结肠炎新生小鼠肠道损伤的影响

目的探讨LR12肽对坏死性小肠结肠炎(NEC)新生小鼠肠道损伤的影响及其作用机制。方法SPF级C57BL/6小鼠18只(雌性6只,雄性12只),8周龄,体重16~23 g。雌鼠受孕后产幼鼠60只,根据随机数字表法分为对照组、模型组、LR12-scr组和LR12组,每组15只。对照组不采取任何操作,其余三组建立NEC模型。模型构建成功后,LR12-scr组腹腔注射5 mg/kg LR12 scramble,LR12组腹腔注射5 mg/kg LR12肽,对照组和模型组腹腔注射等剂量的溶剂,1次/d,连续3 d。比较各组幼鼠的各项指标。结果与对照组比较,模型组临床症状积分,肠组织病理评分,肠黏膜通透性,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-1β和IL-6水平及髓细胞触发受体1、TLR-4、MyD88、NF-κB p65等蛋白表达水平升高,体重及IκBα蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,LR12组临床症状积分,肠组织病理评分,肠黏膜通透性,TNF-α、IL-1β和IL-6水平及TREM1、TLR-4、MyD88、NF-κB p65等蛋白表达水平降低,体重及IκBα蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。LR12-scr组以上各指标与模型组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论LR12肽可改善NEC新生小鼠肠黏膜通透性,降低肠组织炎症反应,减轻肠道损伤,其机制可能与抑制TLR-4/NF-κB信号通路活化有关。

阿奇霉素经TLR-4/NF-κB信号通路干预COPD大鼠炎症的机制研究

目的探讨阿奇霉素通过TLR-4/NF-κB信号通路干预慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠炎症的机制。方法 36只SD大鼠分为健康对照组、模型组、阿奇霉素组。模型组及阿奇霉素组采用烟熏联合气管内滴入脂多糖1个月建立COPD大鼠模型。阿奇霉素组烟熏前30min给予50mg/kg阿奇霉素灌胃,健康对照组及模型组给予等量生理盐水。1个月后,处死大鼠,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态;ELISA法检测肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、IL-6水平;RT-PCR检测Toll样受体4(TLR4)及核因子-κB(NF-κB)、磷酸化p65(pp65)mRNA表达;Western blot检测TLR4、pp65、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及MMP-9表达水平。并对大鼠支气管肺泡灌洗液进行细胞分类和计数。结果与模型组比较,阿奇霉素组能改善肺组织形态,降低中性粒细胞数(P<0.01),减少肺组织匀浆中TNF-α、IL-1β、IL-6、MMP-2及MMP-9的分泌(P<0.01),并抑制TLR4表达及pp65(P<0.01)。结论阿奇霉素能通过TLR-4/NF-κB信号通路干预COPD大鼠炎症。

基于NF-κB通路探讨宣肺解痉方治疗支气管哮喘气道重塑机制研究

目的观察宣肺解痉方治疗支气管哮喘的临床疗效,并基于核因子(nuclear factor,NF)-κB通路探讨宣肺解痉方改善气道重塑的作用机制。方法将河北中医药大学第一附属医院呼吸二科收治的68例支气管哮喘慢性持续期患者随机分为2组,对照组患者使用布地奈德福莫特罗粉吸入剂(160μg/4.5μg)治疗,治疗组患者在此基础上加用宣肺解痉方中药汤剂,连续治疗30 d后,比较2组患者临床症状评分、哮喘控制测试(asthma control test,ACT)评分、迷你哮喘生活质量问卷(mini asthma quality of life questionnaire,MiniAQLQ)评分及肺功能、气道重塑血清指标的变化。结果治疗组患者总有效率、ACT与MiniAQLQ评分、肺功能指标、人核因子κB抑制蛋白(nuclear factor-kappa-b inhibitor,IκB)α表达水平均较对照组明显上升(P<0.05);临床症状评分、转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9与NF-κB p65表达水平均较对照组明显下降(P<0.05)。结论宣肺解痉方可以明显降低支气管哮喘慢性持续期患者血清中TGF-β1、MMP-9表达,提高临床疗效,其作用机制可能与通过下调NF-κB信号通路降低气道炎症水平有关。

清燥救肺汤及其分解剂对肺炎支原体感染小鼠TLR-2/NF-κB信号通路的影响

目的观察清燥救肺汤及其分解剂对肺炎支原体(MP)感染小鼠Toll样受体2(TLR-2)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨其抗MP的作用机制。方法选择SPF级BALB/c小鼠144只,随机分成正常组、模型组、全方组、分解剂Ⅰ组、分解剂Ⅱ组及阿奇霉素组,每组24只。除正常组其他各组制备MP感染模型,造模成功后予药物灌胃治疗,并于感染后第3、7、10、14天进行取材。采用苏木精-伊红染色观察肺脏病理组织学改变、qPCR方法检测肺组织中TLR-2 mRNA变化、ELISA法检测血清中MyD88、TNF-α的含量及Western blot法检测肺组织NF-κB的表达。结果 MP感染后小鼠肺组织出现间质性炎症改变,7d时炎症最明显,14d时炎症逐渐减轻;治疗后各组肺部炎症均有改善,尤以第10、14天全方组、阿奇霉素组明显。MP感染后小鼠肺组织中TLR-2、NF-κB表达水平升高,血清中MyD88、TNF-α含量亦升高(P<0.05),各项指标出现峰值的时间不一致,其中NF-κB出现最早(第3天),TLR-2、TNF-α于第7天达峰值,而MyD88则相对较晚,于第10天达峰值。第7天,全方组即起效(P<0.05),肺组织中TLR-2、NF-κB表达水平下降,血清中MyD88、TNF-α含量亦降低;分解剂Ⅰ组在第10、14天亦能发挥类似全方组的作用,但较全方组偏弱(P>0.05);分解剂Ⅱ组在第14天TLR-2mRNA表达略升高。结论清燥救肺汤抗MP感染的机制与减少促炎因子的释放,调控TLR-2/NF-κB信号通路传导有关,其中分解剂Ⅰ起主要作用。

丹参酮联合大黄素通过NF-κB信号通路抑制肝细胞癌细胞中MMP-9的表达

目的:探究丹参酮联合大黄素对人肝细胞癌细胞迁移和侵袭的影响的潜在分子机制。方法:将购买的HCC细胞系Hep G2进行复苏,分为Emodin(18μmol/L,EMO组)、Tan(10μmol/L,Tan组)、Emodin+Tan(Emodin:18μmol/L;Tan:10μmol/L,EMO+Tan组)和保持未处理(Ctrl组)分别培养,孵育后,对各组Hep G2细胞株行MTT检测,评估各组细胞增殖能力;使用流式细胞术检测,观察各组细胞凋亡率;使用细胞侵袭实验,观察各组细胞侵袭能力;使用细胞划痕修复试验,观察各组细胞迁移能力;使用qRT-PCR、荧光素酶测定检测各组细胞内MMP-9mRNA表达和启动子活性情况;使用蛋白免疫印迹实验分析细胞内MMP-9蛋白表达情况;使用Ch IP分析NF-κB与人MMP-9启动子的结合活性。结果:MTT检测结果发现,低浓度丹参酮联合大黄素组(EMO+Tan组)细胞增殖显著低于Ctrl组;流式细胞术检测结果观察到EMO+Tan组细胞凋亡率显著高于Ctrl组;细胞侵袭实验结果显示,EMO+Tan组细胞侵袭数量显著低于Ctrl组;细胞划痕修复试验结果显示,EMO+Tan组细胞迁移数量显著低于Ctrl组;qRT-PCR和荧光素酶测定结果显示,EMO+Tan组MMP-9mRNA和启动子活性显著低于对照组;蛋白免疫分析结果显示EMO+Tan组MMP-9蛋白表达显著低于Ctrl组;ChI P结果显示,EMO+Tan组NF-κB与MMP-9启动子的结合活性显著降低。上述各组实验中,低浓度EMO组和Tan组与Ctrl组相比均无显著差异性。结论:在低浓度时,丹参酮联合大黄素可以通过抑制NF-κB信号通路来抑制细胞内MMP-9表达,从而抑制HCC肿瘤细胞在体外的生长、侵袭和迁移。

PCSK9介导NF-κB信号通路致小鼠肝脏脂肪变性的机制研究

目的探讨PCSK9对小鼠肝脏脂肪变性的机制。方法以腺相关病毒8.2(adeno-associated virus 8.2,AAV8.2)为载体构建绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和人源PCSK9经尾静脉转染至小鼠肝脏表达。将36只C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为空白组、GFP组和PCSK9组,每组各12只,共饲养24周。通过苏木精-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色观察肝脏组织形态,天狼星红染色(sirius red staining,SRS)观察肝脏纤维化程度,油红O(oil red O,ORO)染色观察肝脏脂质浸润程度。通过酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清PCSK9、白细胞介素(interleukin,IL)-1β,流式细胞术检测肝脏单核细胞胞内炎性细胞因子,包括IL-2、IL-4、γ-干扰素(interferon-γ,INF-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、颗粒酶B(granulase B,GrB)。免疫组化检测肝组织巨噬细胞标志物CD68阳性细胞百分比。Western blot法检测PCSK9干预小鼠单核-吞噬细胞白血病细胞(RAW264.7)细胞胆固醇流出蛋白、清道夫受体相关蛋白、NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果PCSK9组小鼠肝脏组织脂滴总量、脂肪变性、空泡化、纤维化程度明显增加或增强(P<0.001)。免疫组化检测结果显示,PCSK9组巨噬细胞标志物CD68阳性细胞百分比显著高于GFP组及空白组(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,PCSK9组IL-2、TNF-α在CD4+、CD8+细胞亚群百分比明显高于高脂GFP组(P<0.05),而IL-4、INF-γ、GrB在组间各细胞群中比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot法检测结果显示,与空白组比较,PCSK9显著降低LDLR水平,升高ATP结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)、清道夫受体B(scavenger receptor B,SRB或CD36)、Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、磷酸化IκBα激酶(phosphorylated inhibit kappa Bαkinase,p-IκBα)、磷酸化p65蛋白(phosphorylated p65,p-p65)蛋白水平(P<0.05)。结论PCSK9介导NF-κB信号通路致小鼠肝脏脂肪代谢失衡及炎性细胞因子浸润加速了肝脏脂肪变性。

龙胆苦苷对非酒精性脂肪肝TLR-4/NF-κB和AMPK/Nrf2通路的影响

探讨龙胆苦苷(GPS)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠的保护作用及TLR-4/NF-κB和AMPK/Nrf2通路的影响。将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、二甲双胍组(200 mg/kg)和GPS高、中、低剂量组(120、60、30 mg/kg)。正常组给予标准饲料,其余各组给予高脂饲料饲养14周,建立大鼠NAFLD模型。生化法检测肝功能、氧化应激和脂质积累情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胰岛素抵抗和炎症因子水平,蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测大鼠肝组织中TLR-4/NF-κB和AMPK/Nrf2通路蛋白表达情况;油红O染色观察肝脏组织病理学变化。结果表明,GPS可降低NAFLD大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、空腹血糖(FBG)和空腹胰岛素(FINS)的活性或含量,增强血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和高密度脂蛋白(HDL-C)含量,改善胰岛素抵抗情况,降低肝脏中白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、NF-κBp-p65和TLR-4的表达水平,提高p-AMPK与Nrf2蛋白表达水平。由此可见,GPS改善NAFLD的作用机制可能与抑制氧化应激、炎症反应和调控TLR-4/NF-κB、AMPK/Nrf2信号通路有关。

千金子二萜醇通过NF-κB通路影响肾癌小鼠MMP-2、MMP-9的表达

目的分析千金子二萜醇对肾癌小鼠基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达的影响及其机制。方法30只6~8周龄雄性BALB/c小鼠,随机分为模型组、千金子二萜醇(Lathyrol)实验组(千金子给药组)和核转录因子(NF)-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)组,每组10只。每只小鼠左侧腋下注射1.5×10^(6)个Renca肾癌细胞,千金子给药组中药(Lathyrol,20 mg/kg)灌胃3 w,模型组以相同体积生理盐水灌胃,结束前3 d PDTC组腹腔注射PDTC 50 mg/kg。每3 d检测1次小鼠移植瘤体积,绘制体积变化曲线;剥离皮下移植瘤组织,苏木素-伊红(HE)染色观察移植瘤组织的病理情况;Western印迹检测NF-κB P65的磷酸化水平,免疫组化检测MMP-2和MMP-9蛋白表达情况。结果与模型组相比,千金子给药组移植瘤体积增长缓慢,千金子给药组与PDTC组中NF-κb P-65蛋白磷酸化水平明显降低(P<0.01),MMP-2,MMP-9表达水平降低。结论Lathyrol通过抑制NF-κB通路活性降低肾癌小鼠中MMP-2、MMP-9的表达。

基于TLR-4/NF-κB信号通路探讨归术益坤方联合粪菌移植对多囊卵巢综合征大鼠的治疗作用

目的 探讨归术益坤方联合粪菌移植治疗多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome, PCOS)的潜在机制。方法 将30只6周龄SD雌性大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、粪菌移植组、中药组、中药联合粪菌移植组,每组各6只。采用来曲唑诱导PCOS大鼠模型,以对照组大鼠新鲜粪便、归术益坤方进行干预,观察大鼠动情周期。检测大鼠血清性激素[黄体生成素(Luteinizing hormone, LH)、促卵泡激素(Follicle-stimulating hormone, FSH)、睾酮(Testosterone, T)]、空腹胰岛素(Fasting insulin, FINS)、空腹血糖(Fasting plasmaglucose, FPG)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA)检测大鼠白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)、瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor, TNF-α)水平;HE染色观察大鼠卵巢形态学变化;Western Blot检测卵巢组织Toll样受体4(TLR-4)、磷酸化NF-κB p65相对表达量。结果 与对照组比较,模型组大鼠出现动情周期紊乱、卵巢呈多囊样改变,T、LH、LH/FSH、体质量、FPG、FINS、HOMA-IR、IL-18、TNF-α水平均明显升高(P<0.01),卵巢组织TLR-4、磷酸化NF-κB p65表达量上升(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,归术益坤方联合粪菌移植可显著改善上述指标(P<0.05);粪菌移植可降低T、LH、LH/FSH、体质量、FPG、HOMA-IR、TNF-α(P<0.05),下调卵巢组织TLR-4、磷酸化NF-κB p65表达(P<0.01),归术益坤方可降低T、LH、LH/FSH、体质量、FPG、FINS、HOMA-IR、IL-18、TNF-α(P<0.05),下调卵巢组织TLR-4、磷酸化NF-κB p65表达量(P<0.01)。结论 归术益坤方联合粪菌移植可明显改善PCOS大鼠生殖功能和代谢异常,潜在机制可能是改善肠道微生态,下调TLR-4/NF-κB信号通路,改善慢性炎症状态。

钙结合蛋白S100A4通过TLR4/NF-κB信号通路调控胶质瘤细胞增殖、存活及迁移功能

目的:探索外源性钙结合蛋白S100A4对胶质瘤细胞增殖、存活及迁移功能的影响及机制。方法:利用UCSC数据库下载泛癌数据集,进行S100A4在泛癌中的表达及预后分析;从CGGA数据库中下载胶质瘤患者的转录组数据和临床数据,利用R软件进行分析S100A4表达在胶质瘤患者中的预后与进展;利用在线分析工具GEPIA与STRING进行胶质瘤患者的S100A4蛋白质网络互作分析。体外培养人胶质瘤细胞系(U87与U251),实验分为3组:PBS组、S100A4组、S100A4+TAK242组[瑞沙托维(TAK242)为Toll-样受体4(TLR4)特异性抑制剂]。流式细胞术检测胶质瘤细胞的增殖与凋亡;细胞划痕实验、Transwell实验及克隆形成实验检测U87与U251细胞的迁移及增殖能力;Western blot检测TLR4蛋白、NF-κB相关信号分子蛋白水平。结果:生物信息学结果显示,S100A4在多种肿瘤中显著上调(P<0.05),包括:胶质母细胞瘤(GBM)、低级胶质瘤(LGG)、胃癌(STAD)、肝细胞肝癌(LIHC)等,其中在GBM和LGG中预后较差。与低表达S1004的胶质瘤患者相比,高表达S100A4的胶质瘤患者生存期更短,WHO分级程度更高。此外,胶质瘤患者S100A4蛋白可能与膜联蛋白A2(ANXA2)、TLR4和晚期糖基化终末产物特异性受体(AGER)蛋白存在相互作用。细胞实验中,与PBS组相比,外源性S100A4处理后,胶质瘤U87和U251细胞增殖、迁移能力增强,TLR4、p-ERK1/2、p-p38、p-p65蛋白水平显著上调(P<0.05)。与S100A4组相比,S100A4+TAK242组胶质瘤细胞增殖、迁移能力减弱,TLR4、p-ERK1/2、p-p38、p-p65蛋白水平显著下调(P<0.05)。结论:S100A4可能通过TLR-4/NF-κB信号通路调控胶质瘤细胞增殖、迁移及存活功能。

乌药叶提取物对高脂血症大鼠肝脏组织病理学及TLR-4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨乌药叶提取物对高脂血症模型大鼠肝脏组织病理学及Toll样受体4(TLR-4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:将40只SPF级雄性大鼠随机分为对照组10只和造模组30只。造模组通过高脂饮食建立高脂血症大鼠模型,模型制备成功后,将造模组大鼠随机分为模型组与乌药叶高、低剂量组。乌药叶高、低剂量组分别按1.6 g/kg、0.8 g/kg的剂量灌胃乌药叶提取物,模型组及对照组给予等容积的蒸馏水。连续给药8周后,HE染色后观察大鼠肝脏组织病理学变化,Western blot法检测其肝脏TLR-4、NF-κB、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠肝细胞排列紊乱、炎性细胞浸润、并呈现大小不一的脂滴,TLR-4、NF-κB、TNF-α、IL-2蛋白表达均增加(P<0.05);与模型组比较,高、低剂量组大鼠肝脏病理形态接近对照组,肝细胞排列较为整齐,炎性细胞浸润明显减轻,肝细胞内小脂滴数量减少,细胞空泡化明显改善,TLR-4、NF-κB、TNF-α、IL-2蛋白表达均降低(P<0.05),其中以乌药叶高剂量组效果更显著。结论:乌药叶提取物对高脂血症模型大鼠的肝组织病理改变有明显的改善作用,其作用机制可能是通过阻断TLR-4/NF-κB信号通路,减少TNF-α、IL-2蛋白表达实现的。

益生菌对DSS诱导溃疡性结肠炎小鼠模型TLR-9、NF-κB表达的影响

目的:研究益生菌对溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用并探讨其可能存在的作用机制。方法:50只清洁级健康KM小鼠随机分为5组,分别为正常组、模型组、益生菌组、美沙拉嗪组、联合治疗组,每组各10只,正常组给予正常饲养,其余四组使用4%的DSS水溶液供其自由饮用10d,制备UC小鼠模型,于造模同时给予每天灌胃治疗10d后处死小鼠,剖腹分离结肠组织,观察各组小鼠的疾病活动指数(DAI)、结肠组织病理学变化,采用免疫组化检测结肠组织黏膜TLR-9、NF-κB的表达。结果:模型组的DAI、结肠黏膜损伤评分明显高于正常组、益生菌组、美沙拉嗪组及联合治疗组,具有显著性差异(P<0.05),联合治疗组稍低于益生菌组、美沙拉嗪组,差异具有统计学意义(P<0.05),但益生菌组与美沙拉嗪组差异不明显(P>0.05),结肠组织中TLR-9、NF-κB的表达中,模型组明显高于正常组、益生菌组、美沙拉嗪组、联合治疗组,存在显著差异(P<0.05),联合治疗组稍低于益生菌组、美沙拉嗪组,差异具有统计学意义(P<0.05),但益生菌组与美沙拉嗪组差异不明显(P>0.05)。结论:TLR-9/NF-κB信号通路在UC的发病中起着重要作用,益生菌对UC模型小鼠具有治疗作用,其作用机制可能与抑制TLR-9、NF-κB的表达有关,益生菌与美沙拉嗪联合治疗优于单药治疗。

Yap抑制剂抑制NF-κB/MMP-9信号通路诱导结直肠癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨Yap抑制剂抑制NF-κB/MMP-9信号通路诱导结直肠癌细胞凋亡的研究。方法:对Control(结直肠癌细胞株SW480)、Yap mimics(结直肠癌细胞株+Yap促进)和Yap Inhibitor(结直肠癌细胞株+VGLL4)进行转染、通过qPCR、免疫印记、Western-blot、流式细胞检测Yap、NF-κB和MMP-9水平、E-cadherin和vimentin mRNA、细胞的凋亡情况。结果:Yap在结肠癌细胞株属于高表达,Control中的NF-κB和MMP-9表达水平显著低于Yap mimics(P<0.05),Yap mimics中的NF-κB和MMP-9表达水平明显高于Yap Inhibitor(P<0.05),与Control相比,Yap Inhibitor中的NF-κB和MMP-9表达明显降低(P<0.05);Control中的E-cadherin mRNA显著低于Yap mimics(P<0.05),Yap mimics中的E-cadherin mRNA明显高于Yap Inhibitor(P<0.05);Control中的vimentin mRNA显著高于Yap mimics(P<0.05);Yap Inhibitor结直肠癌细胞凋亡数量与Control和Yap mimics相比凋亡最多(P<0.05),与Control相比,Yap mimics结直肠癌细胞凋亡数量最少(P<0.05)。结论:Yap抑制剂通过阻碍NF-κB/MMP-9信号通路的发展,促进结肠癌细胞的凋亡,抑制细胞增殖,阻止结直肠癌继续发展。