基于TLR-4/MyD88/NF-κB对健脾化滞丸治疗溃疡性结肠炎的机制进行拆方研究

目的:通过建立脾虚湿蕴型溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型,探讨健脾化滞丸及其不同拆方对TLR-4/MyD88/NF-κB通路的影响。方法:64只Wistar大鼠随机分为正常对照组8只、模型组56只,采用中医证候联合乙醇-2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠法复制UC大鼠模型,造模成功后,将模型大鼠随机分为模型组(M)、美沙拉嗪组(A)、健脾化滞丸全方组(B)、健脾清化方组(C)、健脾清化活血方组(D)、健脾清化导滞方组(E)、清化导滞活血方组(F),每组8只,给予相应药物灌胃4周,疗程结束后处死所有大鼠并取材,观察大鼠体质量变化、疾病活动度及结肠病理改变,ELISA及免疫组化检测大鼠结肠组织TNF-α表达;RT-PCR及Western blot检测大鼠结肠组织TLR-4、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达。结果:健脾化滞丸全方、健脾清化方、健脾清化活血方组及健脾清化导滞方组大鼠体质量明显高于模型组(P<0.01),各治疗组均能明显改善UC模型大鼠结肠组织病理损伤及疾病活动指数,其中健脾化滞丸全方组及健脾清化活血方组作用最好。各治疗组均可抑制结肠组织TLR-4、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达(P<0.001),其中美沙拉嗪组、健脾化滞丸全方组、健脾清化导滞方组及清化导滞活血方组在降低NF-κB mRNA及蛋白表达上明显优于健脾清化方组及健脾清化活血方组(P<0.05)。各组均能降低结肠组织TNF-α表达(P<0.001),组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:健脾化滞丸及各拆方均可能通过TLR-4/MyD88/NF-κB通路发挥作用,其中黄连、煨木香、凤尾草、炮姜可能为本方核心药物,对临床具有一定指导意义。

基于TLR-4/NF-κB信号通路探究金花茶提取物对非酒精性脂肪肝的作用

探讨金花茶提取物对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠模型的改善作用及其机制。随机选取10只SD大鼠为空白组,剩余50只则灌服高糖高脂乳剂复制非酒精性脂肪肝模型,14 d后造模大鼠按血清中总胆固醇(TC)水平随机分为模型组、辛伐他汀组(8 mg/kg)及金花茶高、中、低剂量组(260、130、65 mg/kg)。分组后连续给药6周,于末次给药前进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)并计算血糖曲线下面积(AUC),末次给药后采集血清及肝组织,检测血脂指标总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)及游离脂肪酸(FFA),肝脂指标TC及TG,肝功能指标谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST),肝脏脂质过氧化指标丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD);测定大鼠血清炎症因子指标白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)及肿瘤坏死因子(TNF-α);检测血清胰岛素(FINS)并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色法观察肝脏病理形态学变化并进行非酒精性脂肪肝病活动度积分(NAS)评分;测定肝组织中Toll样受体4(TLR-4)和核因子κB(NF-κB)的基因及蛋白的表达。结果表明:与模型组相比,金花茶药物组AUC、HOMA-IR及血清中FINS、TG、TC、LDL-C、FFA、ALT、AST、IL-6、IL-8、TNF水平显著降低(P<0.05),HDL-C水平明显升高(P<0.05);肝组织TG、TC、MDA中含量显著降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05);肝脏脂肪肝病样变减轻,肝细胞形态异常及炎症浸润明显改善,NAS评分显著下降(P<0.05);TLR-4、NF-κB蛋白及mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),其中以金花茶高剂量的改善效果最佳。综上所述,金花茶提取物可通过TLR-4/NF-κB信号通路来调节糖脂代谢紊乱,降低炎症反应和减轻炎症浸润,改善NAFLD大鼠肝脏病变。

拉考沙胺联合奥卡西平治疗局灶性癫痫的疗效及对脑电图频段功率、血清TLR-4、NF-κB水平影响

目的探讨拉考沙胺联合奥卡西平治疗局灶性癫痫的疗效及对患者脑电图频段功率、血清Toll样受体-4(TLR-4)、核转录因子-κB(NF-κB)水平影响。方法选取2022年1月至2023年2月本院收治的局灶性癫痫患者102例,根据随机数字表法分为基线组和试验组,每组51例。基线组采用奥卡西平治疗,试验组采用拉考沙胺联合奥卡西平治疗。两组均治疗6个月后评估疗效。比较两组患者治疗前、治疗6个月癫痫发作频率、脑电图频段功率,检测血清TLR-4、NF-κB水平。分析两组患者治疗6个月TLR-4、NF-κB水平与疗效的关系。统计两组患者治疗期间不良反应发生率。结果试验组治疗总有效率高于基线组(P<0.05)。治疗6个月,两组患者癫痫发作频率降低,且试验组低于基线组(P<0.05);两组α、β频段功率升高,δ、θ频段功率降低,且试验组变化幅度大于基线组(P<0.05)。治疗6个月,试验组、基线组TLR-4(r=-0.820、-0.666,P均<0.001)、NF-κB(r=-0.744、-0.643,P均<0.001)水平与疗效均呈负相关。治疗期间试验组不良反应发生率与基线组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论拉考沙胺联合奥卡西平治疗局灶性癫痫疗效显著,可有效改善患者脑电图频段功率,减少发作频率,且安全性有保障。

支气管肺泡灌洗液及血清NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α在肺炎诊断中的应用价值

目的探讨支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清核转录因子-κB(NF-κB)、Toll样受体2(TLR-2)、Toll样受体4(TLR-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)在肺炎诊断中的应用价值。方法选取2023年1月—2024年3月于吉林大学第二医院就诊的57例肺炎患者纳入研究组,另取同期体检的健康者57例纳入对照组,均采集外周静脉血与肺泡灌洗液,检测NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α水平,采用Pearson相关性分析患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α的相关性。结果研究组患者血清NF-κB(41.74±4.75)μg/L、TLR-2(5.32±1.12)ng/L、TLR-4(6.44±1.61)ng/L、TNF-α(4.36±1.03)ng/L水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组患者BALF中NF-κB(8.19±2.62)μg/L、TLR-2(2.97±0.79)ng/L、TLR-4(4.24±1.18)ng/L、TNF-α(2.04±0.59)ng/L水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α水平呈正相关性(P<0.05)。结论肺炎患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α均呈高表达,联合检测有助于早期诊断及评估病情。

芪苈强心胶囊联合沙库巴曲缬沙坦钠对老年慢性心力衰竭患者血清Gal-3、Copeptin水平及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨芪苈强心胶囊辅助治疗老年CHF对患者Gal-3、Copeptin水平及TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法:采用随机数表法将2021年3月至2023年3月平顶山市第一人民医院112例老年CHF患者分为采用沙库巴曲缬沙坦钠(诺欣妥)治疗的常规组(n=56例)和采用芪苈强心胶囊辅助治疗的联合组(n=56例)。观察两组疗效、心功能、血清半乳糖凝集素-3(Gal-3)、Copeptin水平、Toll样受体(TLR4)、核因子-κ(NF-κB)水平及不良反应。结果:治疗3个月后,联合组的临床治疗总有效率、心输出量(CO)、左心室射血分数(LVEF)高于常规组(P<0.05);联合组TLR4、NF-κB、Gal-3、Copeptin水平低于常规组(P<0.05);两组患者用药期间不良反应发生率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:芪苈强心胶囊联合沙库巴曲缬沙坦钠可调节TLR4、NF-κB水平,促进老年CHF患者心功能恢复,并抑制心肌重构,进而有效提高临床治疗疗效,且不增加患者不良反应发生风险。

芍药苷-6-氧-苯磺酸酯(CP-25)通过TLR-4/NF-κB信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨芍药苷-6-氧-苯磺酸酯(CP-25)通过Toll样受体4(TLR-4)/核因子κB(NF-κB)信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:CCK-8实验检测人卵巢癌细胞A2780、SK-OV-3、HO8910及正常卵巢细胞HOSEpiC的活性。A2780细胞分为对照组(0.01%二甲基亚砜)、CP-25低(0.5 mg/ml CP-25)、中(1 mg/ml CP-25)、高(2 mg/ml CP-25)浓度组和CP-25高浓度+LPS组(2 mg/ml CP-25和0.1μg/ml TLR-4激活剂LPS)。CCK-8和克隆形成实验评估细胞增殖能力;流式细胞术和TUNEL染色分析细胞凋亡情况;Western blot分析增殖蛋白Ki67、凋亡相关蛋白(Cleaved caspase-3、Caspase-3、Bax、Bcl-2)、TLR-4、p-NF-κB p65、NF-κB p65蛋白表达水平;免疫荧光染色观察TLR-4、NF-κB p65蛋白表达。结果:与HOSEpiC细胞相比,A2780、SK-OV-3、HO8910细胞活性随CP-25浓度增加而逐渐减弱(P<0.05),且CP-25在低、中、高浓度下对A2780细胞的生长有50%左右的抑制作用,故采用A2780细胞进行实验。与对照组相比,CP-25低、中、高浓度组A2780细胞克隆形成率显著下降,细胞凋亡率和凋亡指数明显上升,Ki67、Bcl-2、TLR-4、p-NF-κB p65表达水平和细胞核NF-κB p65水平显著降低,Cleaved caspase-3/Caspase-3、Bax表达显著升高(P<0.05),且呈现浓度依赖性。与CP-25高浓度组相比,CP-25高浓度+LPS组细胞活性、克隆形成率明显升高,细胞凋亡率和凋亡指数明显降低,Ki67、Bcl-2、TLR-4、p-NF-κB p65表达水平和细胞核NF-κB p65水平明显升高,Cleaved caspase-3/Caspase-3和Bax表达明显降低(P<0.05)。结论:CP-25通过抑制TLR-4/NF-κB信号通路抑制卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡。

基于TLR-4/NF-κB信号通路及水通道蛋白1表达探讨大陷胸汤干预重症急性胰腺炎早期肺损伤的效应机制

目的:探讨大陷胸汤对重症急性胰腺炎(SAP)早期肺损伤的影响及作用机制。方法:将60只大鼠随机分为实验组、模型组和对照组,每组20只。实验组予大陷胸汤灌胃,对照组及模型组予蒸馏水灌胃,在连续灌胃7 d后,模型组与实验组以胰胆管注射牛磺胆酸钠的方式制备SAP模型,于造模后12、24、48、72 h各时间点分别处死5只大鼠取材,观察大鼠一般情况、胸腹水量、肺湿干重比、胰腺组织及肺组织病理学改变、肺组织白细胞介素(IL)-1及Toll样受体4(TLR-4)水平、肺组织核因子(NF)-κB及水通道蛋白1(AQP1)表达水平。结果:与对照组相比,模型组大鼠一般情况较差,胰腺炎症反应以及肺损伤程度较重,胸腹水量、肺湿干重比、肺组织NF-κB表达水平、IL-1及TLR-4水平升高(P<0.05),肺组织AQP1表达水平下降。与模型组相比,实验组大鼠一般情况较好,肺损伤程度较轻,胸腹水量、肺湿干重比、肺组织NF-κB表达水平、IL-1及TLR-4水平下降(P<0.05),肺组织AQP1表达水平升高,造模后72 h后,胰腺组织坏死程度与同期模型组相比明显好转。结论:大陷胸汤可在一定程度上减轻SAP大鼠早期肺损伤,其机制可能与抑制TLR-4/NF-κB炎症信号通路,增强AQP1表达有关。

有氧运动对CAP大鼠前列腺组织miR-155表达、TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨有氧运动对慢性非细菌性前列腺炎(CAP)大鼠前列腺组织miR-155表达、Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB信号通路的影响。方法雄性健康SD大鼠随机分为正常对照组(正常组)、CAP模型对照组(模型组)、游泳运动观察组(运动组),每组10只,注射消痔灵进行大鼠造模,模型形成期7 d,后运动组进行50 min/(次·d)的游泳运动,每周运动6 d,持续28 d,正常组和模型组不进行任何运动,自由活动取食;末次运动结束后2 h处死大鼠,采用ELISA检测前列腺组织白细胞介素(IL)-8、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达,Western印迹检测TLR4、NF-κB P65蛋白相对表达,实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-155表达,观察各组前列腺组织病理学改变。结果28 d游泳运动结束后,与正常组比较,模型组和运动组前列腺组织内IL-8、IL-6、TNF-α、TLR4、NF-κB P65和miR-155表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,运动组上述各项观察指标均显著降低(P<0.05);相关分析显示,TLR4、NF-κB P65与IL-8、IL-6、TNF-α表达呈正相关,miR-155与TLR4、NF-κB P65、IL-8、IL-6、TNF-α表达呈正相关(均P<0.01);病理观察显示,正常组前列腺组织学观察未见异常改变,模型组前列腺组织内可见腺体上皮细胞及纤维组织明显增生,间质中淋巴细胞等慢性炎症细胞浸润;与模型组比较,运动组前列腺腺体上皮细胞轻度增生,间质轻度纤维化,慢性炎症细胞浸润现象明显好转。结论有氧运动能够对CAP大鼠炎症起到缓解作用,其作用机制可能与miR-155调控TLR4/NF-κB信号通路有关。

基于TLR-4/NF-κB信号通路探讨归术益坤方联合粪菌移植对多囊卵巢综合征大鼠的治疗作用

目的 探讨归术益坤方联合粪菌移植治疗多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome, PCOS)的潜在机制。方法 将30只6周龄SD雌性大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、粪菌移植组、中药组、中药联合粪菌移植组,每组各6只。采用来曲唑诱导PCOS大鼠模型,以对照组大鼠新鲜粪便、归术益坤方进行干预,观察大鼠动情周期。检测大鼠血清性激素[黄体生成素(Luteinizing hormone, LH)、促卵泡激素(Follicle-stimulating hormone, FSH)、睾酮(Testosterone, T)]、空腹胰岛素(Fasting insulin, FINS)、空腹血糖(Fasting plasmaglucose, FPG)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA)检测大鼠白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)、瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor, TNF-α)水平;HE染色观察大鼠卵巢形态学变化;Western Blot检测卵巢组织Toll样受体4(TLR-4)、磷酸化NF-κB p65相对表达量。结果 与对照组比较,模型组大鼠出现动情周期紊乱、卵巢呈多囊样改变,T、LH、LH/FSH、体质量、FPG、FINS、HOMA-IR、IL-18、TNF-α水平均明显升高(P<0.01),卵巢组织TLR-4、磷酸化NF-κB p65表达量上升(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,归术益坤方联合粪菌移植可显著改善上述指标(P<0.05);粪菌移植可降低T、LH、LH/FSH、体质量、FPG、HOMA-IR、TNF-α(P<0.05),下调卵巢组织TLR-4、磷酸化NF-κB p65表达(P<0.01),归术益坤方可降低T、LH、LH/FSH、体质量、FPG、FINS、HOMA-IR、IL-18、TNF-α(P<0.05),下调卵巢组织TLR-4、磷酸化NF-κB p65表达量(P<0.01)。结论 归术益坤方联合粪菌移植可明显改善PCOS大鼠生殖功能和代谢异常,潜在机制可能是改善肠道微生态,下调TLR-4/NF-κB信号通路,改善慢性炎症状态。

归术益坤方通过调控LPS/TLR-4通路对多囊卵巢综合征大鼠的影响

目的基于LPS/TLR-4通路探讨归术益坤方治疗多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)的潜在机制。方法将18只6周龄雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、中药组,每组6只,来曲唑灌胃复制PCOS大鼠模型,以归术益坤方进行干预。监测大鼠动情周期、体质量、身长,放免法检测血清睾酮(testosterone,T)水平,干化学法检测空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)水平,ELISA法检测血清白细胞介-18(interleukin-18,IL-18)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)水平,HE染色观察大鼠卵巢形态学变化,Western-blot法检测卵巢组织Toll样受体4(toll like receptor-4,TLR-4)表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠体质量显著升高(P<0.01),动情周期出现紊乱,T值(P<0.05)、FPG值(P<0.01)明显升高,卵巢组织呈多卵泡改变,血清LPS水平上升(P<0.05),炎症因子IL-18、TNF-α水平显著上升(P<0.01),TLR-4蛋白表达显著上调(P<0.01)。与模型组相比,中药组体质量显著下降(P<0.01),部分大鼠恢复正常动情周期,T水平降低(P<0.05),FPG水平显著降低(P<0.01),卵巢可见优势卵泡及黄体,血清LPS水平下降(P<0.05),IL-18水平明显降低(P<0.01),TLR-4蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论归术益坤方可以降低PCOS大鼠体质量,促进其恢复卵巢功能,降低雄激素水平及空腹血糖水平,下调LPS、炎症因子及TLR-4的表达。归术益坤方治疗PCOS的作用可能是通过调控LPS/TLR-4通路实现的。

丹参有效成份配伍对ApoE^(-/-)小鼠心脏的保护作用及TLR4/NF-κB通路的影响

目的研究丹参4种主要的水溶性成分丹参素(DSS)、丹酚酸(Sal)-A、Sal-B和原儿茶醛(PAL)的有效配伍组合(SABP)对ApoE基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠心脏的保护作用及其机制。方法6周龄雄性的ApoE^(-/-)小鼠被随机分为:模型(Model)组、SABP组、阳性药瑞舒伐他汀(RC)组。雄性的C57BL/6J小鼠作为正常对照(Control)组。所有的小鼠正常饮食。RC组每天腹腔注射0.4 mg/kg的RC,SABP组每天腹腔注射丹参4种水溶性成分的有效组合(DSS:5 mg/kg,Sal-A:0.233 mg/kg,Sal-B:10.000 mg/kg,PAL:17.000 mg/kg)。Control组和Model组每天腹腔注射等剂量的生理盐水。8 w后,通过全自动生化分析仪检测血清脂类水平,苏木素-伊红(HE)染色观察心脏的形态学变化。免疫组化和Western印迹检测心脏组织中Toll样受体(TLR)4、转化生长因子β激活激酶(TAK)1、核转录因子(NF)-κB、白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α蛋白表达的变化。结果SABP可以有效地降低血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,改善心脏损伤,减少心脏中TLR4、TAK1、IL-6和TNF-α蛋白表达,抑制NF-κB的磷酸化。结论SABP对ApoE^(-/-)小鼠心脏具有保护作用,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路有关。

基于TLR-4/MyD88/NF-κB通路探讨针刺改善血管性痴呆大鼠认知功能的机制

目的研究针刺通过调控Toll样受体4(TLR-4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)信号通路改善血管性痴呆大鼠认知功能的机制。方法将36只SPF级SD雄性大鼠采用随机数表法分成假手术组(A组)、模型组(B组)和针刺组(C组),每组12只。B组和C组采用改良两血管结扎法制备血管性痴呆模型,A组仅手术分离双侧颈总动脉、不结扎。C组采用针刺“百会”“肾俞”“丰隆”穴进行干预,每个疗程6天,共2个疗程;A组、B组正常喂养,不进行干预。每组大鼠进行Morris水迷宫实验,评估其学习记忆能力;ELISA测定大鼠血清IL-1β、TNF-α水平;Real-time PCR测定海马TLR-4、MyD88、NF-κB mRNA的表达;免疫组化测定大脑Iba1、NF-κB蛋白的阳性表达;Western blot测定海马IL-1β、TNF-α相对表达水平。结果与B组相比,C组大鼠逃避潜伏期缩短(P<0.01),穿越平台次数增多(P<0.05);血清中TNF-α、IL-1β浓度明显降低(P<0.01);海马中TLR-4、MyD88、NF-κB mRNA的表达量明显减少(P<0.01);大脑的Iba1、NF-κB蛋白的阳性表达明显减少(P<0.01);海马中的TNF-α、IL-1β相对表达量明显减少(P<0.01)。结论针刺“百会”“肾俞”“丰隆”穴可以改善血管性痴呆大鼠的认知功能障碍,其机制可能与通过抑制TLR-4/MyD88/NF-κB信号通路活性,从而抑制神经炎性反应有关。

前列腺小体miRNA-146a/TLR-4/NF-κB通路在EAP大鼠慢性炎症中的作用及大火草干预的研究

背景目前对慢性前列腺炎(CP)的治疗未达到预期的疗效,亟需寻找新的治疗药物,本课题组前期研究发现大火草〔Anemone tomentosa(Maxim.)Péi〕对CP有较好的疗效,但具体作用机制还有待进一步研究。目的探讨前列腺小体源性微小RNA-146a(miRNA-146a)调控Toll样受体4(TLR-4)/核转录因子κB(NF-κB)通路在自身免疫性前列腺炎(EAP)大鼠慢性炎症中的作用及大火草干预的可能机制。方法2021年12月—2022年6月,将42只Wistar大鼠采用随机数字表法分正常组、模型组、大火草低剂量组、大火草中剂量组、大火草高剂量组、miRNA-146a激动剂(mimics)组、miRNA-146a抑制剂(inhibitor)组,每组6只。药物干预后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA,采用蛋白质印迹法检测TLR-4、细胞内抑制性蛋白κB(IκB)、磷酸化细胞内抑制性蛋白κB(p-IκB)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6),酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)检测炎症因子。结果与正常组比较,各组前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA表达均下调(P<0.01)。与模型组比较,大火草中、高剂量组,miRNA-146a mimics组前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA表达均上调(P<0.01);miRNA-146a inhibitor组前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA表达下调(P<0.01)。大火草和miRNA-146a mimics可以显著降低前列腺组织TLR-4、p-IκBα、TRAF6蛋白表达(P<0.01);促进前列腺组织IκBα蛋白表达上调(P<0.01);降低大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)、干扰素γ(IFN-γ)水平(P<0.05)。大火草和miRNA-146a mimics可以减轻前列腺组织炎症细胞浸润,改善前列腺组织病理损伤。结论前列腺小体源性miRNA-146a可以调节TLR-4/NF-κB通路参与EAP大鼠前列腺局部病理变化。大火草抗EAP大鼠慢性炎症的作用机制可能与其调控前列腺小体源性miRNA-146a/TLR-4/NF-κB通路有关。

疣鼻天鹅TLR4基因克隆及生物信息学分析

【目的】克隆疣鼻天鹅Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)基因,并对其编码蛋白进行生物信息学分析,为进一步探索疣鼻天鹅TLR4蛋白抗病原微生物免疫机制提供重要参考依据。【方法】利用PCR扩增并克隆疣鼻天鹅TLR4基因CDS序列,应用NCBI-BLAST、Mega-X软件进行序列比对并构建系统进化树;利用ProtParam、SWISS-MODEL等软件预测TLR4基因编码蛋白的结构、功能及与宿主蛋白的相互作用关系,并进行GO功能和KEGG通路富集分析。【结果】试验成功克隆疣鼻天鹅TLR4基因CDS区序列,全长2550 bp,已提交至NCBI,登录号为:OP908241。疣鼻天鹅TLR4基因CDS区序列中存在79个稀有密码子,其中含6段连续稀有密码子,编码849个氨基酸,与灰雁和鸿雁相似度较高,亲缘关系最近。TLR4蛋白的跨膜结构域位于第647―667位氨基酸处,N-端包含由36个氨基酸组成的信号肽,信号肽切割位点在第36―37位氨基酸之间,置信度为67.85%,含有10个N-糖基化位点和85个磷酸化位点,是亲水性蛋白,主要存在于细胞质中,与人TLR4蛋白有相似的三级结构,相似率为45.48%。TLR4蛋白共存在10个主要互作蛋白,富集得到96个GO功能条目和7条KEGG通路,其中GO功能条目包括物种间相互作用、免疫反应、应激反应、信号转导等;KEGG通路包括甲型流感、单纯疱疹病毒Ⅰ型感染及沙门氏菌感染等。【结论】疣鼻天鹅TLR4基因与灰雁和鸿雁亲缘关系最近,有明显的密码子种属选择性,含有6段连续稀有密码子,其蛋白存在跨膜结构域和信号肽,并与天然免疫应答、信号转导和应激反应密切相关。

室旁核TLR4阻断改善2型糖尿病大鼠糖代谢及机制

目的 聚焦于下丘脑室旁核(PVN)区域,研究中枢Toll样受体(TLR)4阻断对2型糖尿病(T2DM)大鼠糖代谢的影响及探讨相应影响机制。方法 将SD大鼠随机分为:正常对照(NC+PVN vehicle)组、正常干预(NC+PVN TAK-242)组、糖尿病(DM+PVN vehicle)组、糖尿病干预(DM+PVN TAK-242)组。高糖高脂联合小剂量链脲佐菌素(STZ)方法建立T2DM大鼠模型,皮下植入室旁核微型渗透泵(28 d,输注速率0.11 L/h)给予TAK-242(一种TLR4特异性抑制剂)和人工脑脊液;各组大鼠监测体重、空腹血糖(FBG)、葡萄糖耐量试验(GTT)、胰岛素耐量试验(ITT)和丙酮酸耐量试验(PTT)评估体内糖代谢情况;肾交感神经放电检测交感神经活性;Western印迹检测还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶(NOX)4、Cu-Zn超氧化物歧化酶(SOD)、NF-κB通路激活标志物(TH)、谷氨酸脱羧酶(GAD)67蛋白表达;二氢乙淀(DHE)检测PVN中活性氧簇(ROS)水平;免疫荧光检测PVN中TLR4、TH阳性神经元表达数量;免疫组化检测PVN中神经元激活标志物(c-FOS)、NF-κB通路激活标志物(p-IKKβ)阳性神经元表达数量。结果 与正常组相比,T2DM组大鼠体重显著降低,FBG显著升高,体内存在胰岛素抵抗和糖异生紊乱,肾交感神经放电显著增加,PVN内TLR4、TH、ROS、c-FOS、p-IKKβ阳性神经元表达数量显著增多,PVN内NOX4、TH蛋白表达显著升高,Cu-Zn SOD、GAD67蛋白表达显著降低(P<0.05)。经TAK-242治疗的T2DM大鼠体重下降速度显著降低,FBG不断升高趋势被控制,体内胰岛素抵抗和糖异生紊乱显著改善,肾交感神经放电显著降低,PVN内TLR4、TH、ROS、c-FOS、p-IKKβ阳性神经元表达数量显著减少,PVN内NOX4、TH蛋白表达降低,Cu-Zn SOD、GAD67蛋白表达升高(P<0.05)。结论 PVN慢性输注TAK-242可有效阻断下丘脑PVN TLR4的表达,改善PVN内氧化应激和神经元凋亡,改善PVN内兴奋性神经递质和抑制性神经递质失平衡,进而降低交感神经活性,改善T2DM大鼠体内糖代谢。

抗菌肽CC34对小鼠肠炎的缓解作用

为了揭示抗菌肽CC34对脂多糖(LPS)诱导小鼠肠道炎症的缓解作用及机制,试验选择40只无特定病原体(SPF)级小鼠,随机分为4组,每组10只。CC34组和LPS+CC34组小鼠腹腔注射9 mg/kg CC34,LPS组和Control组小鼠注射等体积生理盐水,持续7 d;第7 d给药1 h后,LPS组、LPS+CC34组小鼠注射7.5 mg/kg LPS,CC34组和Control组注射等体积生理盐水。结果显示,与Control组相比,CC34组小鼠的肝脏、脾脏、心脏指数无显著变化(P>0.05),但结肠长度极显著增长(P<0.01)。与LPS组相比,LPS+CC34组小鼠肝脏中的荷菌数及十二指肠和回肠中炎性因子的含量极显著降低(P<0.01);肠道组织中闭锁小带-1(ZO-1)、封闭蛋白-1(Claudin-1)和闭合蛋白(Occludin)的基因表达水平极显著升高(P<0.01),十二指肠的绒毛高度/隐窝深度值(V/C)显著升高(P<0.05);肠道组织中髓过氧化物酶(MPO)的基因表达水平极显著降低(P<0.01);肠组织中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)基因的表达及活性极显著升高(P<0.01),丙二醛(MDA)含量极显著降低(P<0.01),总抗氧化能力(T-AOC)极显著增强(P<0.01);肠组织中Toll样受体-4(TLR-4)和髓样分化因子88(MyD88)的基因表达水平极显著下调(P<0.01),十二指肠中p65磷酸化水平极显著降低(P<0.01)。研究表明,CC34通过下调TLR-4/核因子κ(NF-κB)信号通路,缓解了小鼠肠道炎症。

补肾健脾开心散通过TLR4/NF-κB通路改善AD大鼠炎症的机制

目的观察补肾健脾开心散对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力及脑皮质区Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB通路相关炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β表达的影响,探讨其作用机制。方法60只SD大鼠随机分为空白(Ctrl)组、模型(AD)组、补肾(BS)组(3.6 g/kg补肾方)、健脾(JP)组(4.05 g/kg健脾方)、开心(KX)组(2.34 g/kg开心方)、补肾健脾开心(BSJPKX)组(9.99 g/kg补肾健脾开心散),每组10只。采用D-半乳糖(D-gal)注射制备AD大鼠模型,BS组、JP组、KX组、BSJPKX组分别以相应药物灌胃,Ctrl组、AD组给予等量生理盐水,1次/d。给药4 w后,Morris水迷宫实验检测学习记忆能力,分别用免疫组化法、实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测脑皮质组织TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1β表达。结果与Ctrl组比较,AD组空间学习记忆能力明显下降(P<0.05,P<0.01),TLR4/NF-κB通路被激活,IL-1β、TNF-α表达显著增高(P<0.05,P<0.01);经补肾健脾开心散治疗后,与AD组比较,BSJPKX组空间学习记忆能力显著改善(P<0.05,P<0.01),TLR4/NF-κB通路被抑制,IL-1β、TNF-α表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论补肾健脾开心散可以保护AD大鼠神经元,其作用机制可能与调控TLR4/NF-κB信号通路减轻神经炎症有关。

miR-494靶向TLR-4通路在骨质疏松发病中的作用及机制

目的 探究miR-494在骨质疏松大鼠中的表达及其调控机制。方法 选取30只8周龄雌性Sprague-Dawley大鼠,构建骨质疏松大鼠模型。双能X线吸收仪测定骨密度。ELISA检测大鼠血清中骨钙素(BGP)和总碱性磷酸酶(TALP)含量。分类培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)。qRT-PCR检测miR-494和TLR4 mRNA的表达。Western blot检测TLR4蛋白的表达。双荧光素酶报告基因验证miR-494与TLR-4的靶向关系。CCK8实验检测各组BMSCs的增殖能力。茜素红S染色检测各组BMSCs成骨分化情况。油红O染色检测各组BMSCs成脂分化情况。结果 和NC组相比,OP组大鼠骨密度、BGP含量、细胞增殖能力、矿化结节数均显著降低,TALP含量、miR-494和TLR4的表达、脂肪细胞数均显著升高(P<0.05)。和OP组相比,OP+miR-494 inhibitor组大鼠骨密度、BGP含量、细胞增殖能力、矿化结节数均显著升高,TALP含量、miR-494和TLR4的表达、脂肪细胞数均显著降低(P<0.05)。和OP+miR-494 inhibitor组相比,OP+miR-494 inhibitor+TLR-4 vector组大鼠骨密度、BGP含量、细胞增殖能力、矿化结节数均显著降低,TALP含量、miR-494和TLR4的表达、脂肪细胞数均显著升高;OP+miR-494 inhibitor+sh TLR-4组大鼠骨密度、BGP含量、细胞增殖能力、矿化结节数均显著升高,TALP含量、miR-494和TLR4的表达、脂肪细胞数均显著降低(P<0.05)。结论 miR-494通过促进TLR-4通路的表达,加快大鼠骨质疏松的进展,为骨质疏松的发病机制提供新的理论依据。

纤维支气管镜肺泡灌洗吸痰术联合血必净治疗危重症监护室肺部感染患者的效果及对BNP、TLR-4水平的影响

目的探讨纤维支气管镜肺泡灌洗吸痰术联合血必净治疗危重症监护室肺部感染患者的效果及对BNP、TLR-4水平的影响。方法将浙江大学医学院附属第一医院ICU重症监护室2015年7月—2017年1月收治的重症肺部感染的70例患者随机分为对照组和观察组,每组35例。对照组患者采用纤维支气管镜肺泡灌洗吸痰术进行治疗,观察组患者采用纤维支气管镜肺泡灌洗吸痰术联合血必净进行治疗。比较两组患者治疗后的临床疗效、临床相关指标、症状缓解时间及治疗前后BNP、TLR-4水平的变化情况。结果观察组治疗后的有效率为94.3%显著高于对照组的88.6%(P<0.05);观察组的机械通气、抗菌药物使用及ICU入住时间均显著短于对照组(P<0.05);观察组患者的咳嗽、发热及肺部啰音的缓解时间均显著短于对照组(P<0.05);两组患者治疗后BNP和TLR-4水平相比于治疗前均有显著降低(P<0.05),且观察组治疗后BNP和TLR-4水平均显著低于对照组(P<0.05)。结论纤维支气管镜肺泡灌洗吸痰术联合血必净能显著提高危重症监护室肺部感染患者的治疗效果。

基于TLR-4/NF-κB信号通路探讨苍附导痰汤对痰湿型多囊卵巢综合征大鼠的治疗作用

目的基于TLR-4/NF-κB信号通路探讨苍附导痰汤对痰湿型多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠的影响。方法将50只SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组及中药(苍附导痰汤)低、中、高剂量组(3.12、6.24、12.48 g·kg^(-1))。采用Poresky造模法联合高脂饮食建立痰湿型PCOS病证结合大鼠模型。造模成功后采用相应剂量的苍附导痰汤灌胃给药,每日1次,连续28 d。采用苏木精-伊红(HE)染色法进行大鼠卵巢组织病理形态学观察;采用ELISA法测定血清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)等炎性因子水平;采用qRT-PCR法检测卵巢组织中核因子κB(NF-κB)、Toll样受体4(TLR-4)、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)mRNA表达;采用免疫组织化学法检测卵巢组织中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达。结果与空白组比较,模型组大鼠卵巢的成熟卵泡数和黄体数明显减少(P<0.05);血清IL-6、TNF-α和CRP水平明显升高(P<0.05);卵巢组织中NF-κB、TLR-4及ox-LDL mRNA表达及HMGB1蛋白表达均明显上调(P<0.05)。与模型组比较,中药中、高剂量组大鼠卵巢的成熟卵泡数、黄体数均明显增加(P<0.05);大鼠血清IL-6、TNF-α、CRP水平明显下降(P<0.05);卵巢组织中NF-κB、ox-LDL、TLR-4 mRNA表达及HMGB1蛋白表达均明显下调(P<0.05)。结论苍附导痰汤可能通过下调HMGB1的表达,抑制TLR-4/NF-κB信号通路,进而减少IL-6、TNF-α、CRP等炎性因子的释放,从而发挥对PCOS的治疗作用。