基于TLR2/MyD88/NF-κB信号通路探讨加味少腹逐瘀汤对寒湿瘀结证子宫内膜异位症痛经小鼠腹腔炎症微环境干预作用

目的探讨加味少腹逐瘀汤对寒湿瘀结证子宫内膜异位症痛经小鼠腹腔炎症微环境的干预机制。方法构建动物模型后随机分组。以自主活动次数、粪便含水率、热痛潜伏期评价证候;以子宫及异位病灶大小评价疗效;HE染色比较病理变化;免疫组化检测异位组织中NF-κB的表达及其入核情况;qPCR法和Western blot测定病灶中TLR2、MyD88、NF-κB的mRNA和蛋白表达;ELISA检测TNF-α、IL-6、PGE2、E2、P。结果与假手术组对比,模型小鼠自主活动减少,热痛潜伏期缩短,粪便含水率增加;子宫体积增大,腹腔可见明显异位灶且HE染色显示炎症浸润;免疫组化显示NF-κB表达增加;异位组织TLR2、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达增加,外周血TNF-α、IL-6、PGE2、E2增高,P下降。与模型组相比,各治疗组子宫体积减小、异位灶重量减轻、疼痛潜伏期延长;中药高剂量组小鼠自主活动次数增加、粪便含水率减少;药物干预后炎症反应改善、NF-κB表达下降;TLR2、MyD88、NF-κB的mRNA及蛋白表达降低;且外周血TNF-α、IL-6、PGE2、E2降低、P升高。结论加味少腹逐瘀汤可以降低寒湿瘀结证子宫内膜异位症小鼠血清炎症因子,这可能与抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路改善腹腔炎症微环境有关。

EGCG调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对特应性皮炎大鼠Th1/Th2平衡的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对特应性皮炎(AD)大鼠的保护作用及潜在机制。方法 将SPF级SD大鼠分为对照(Control)组、AD模型(AD)组、AD+EGCG治疗(EGCG)组、AD+地塞米松阳性对照(DXM)组、AD+EGCG+TLR4激动剂(TLR4)组,每组18只。根据临床损伤严重程度计算皮肤损伤评分;ELISA检测炎症因子的表达;HE染色观察组织学变化;流式细胞仪分析Th1和Th2阳性细胞比例;Western blot检测TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白水平。结果 与Control组比较,AD组大鼠背部皮肤损伤程度较重,病理学损伤评分增加(P<0.05),白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)水平及Th1细胞百分比降低,白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-13(IL-13)水平及Th2细胞百分比升高(P<0.05),TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平升高(均P<0.05)。与AD组比较,EGCG组和DXM组大鼠皮肤损伤评分及皮肤损伤病理学评分降低,Th_1细胞百分比、IL-2、IFN-γ水平升高,IL-4、IL-13水平、Th_(2)阳性百分比、TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平下降(均P<0.05)。与EGCG组比较,DXM组大鼠皮肤损伤评分及皮肤损伤病理学评分、Th_1、Th_(2)细胞百分比、TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平差异无统计学意义(均P>0.05),TLR4组大鼠皮损评分及皮肤损伤病理学评分升高,皮损组织中Th_1细胞百分比降低,Th_(2)阳性百分比及TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平上调(均P<0.05)。结论 EGCG可以通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,维持Th1/Th2平衡来抑制炎症反应,进而降低AD的严重程度。

麦粒灸对坐骨神经损伤大鼠脊髓组织TLR4/MyD88/NF-κB信号通路表达的影响

目的观察麦粒灸“环跳”对坐骨神经损伤(SNI)大鼠坐骨神经功能、坐骨神经干病理形态及脊髓组织TLR4/MyD88/NF-κB表达的影响,探究麦粒灸治疗SNI的可能机制。方法24只雄性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组和麦粒灸组,每组6只。模型组、麦粒灸组采用坐骨神经钳夹制备SNI大鼠模型,造模后第7日起麦粒灸组取患侧“环跳”麦粒灸干预,每次6壮,1次/d,连续10 d。观察造模后第7日及干预结束后大鼠坐骨神经功能指数(SFI)、纤维丝测痛仪测量大鼠机械痛阈值(MWT),ELISA检测脊髓组织一氧化氮(NO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)含量,HE染色观察坐骨神经干形态,Western blot检测脊髓组织Toll样受体4(TLR4)、核因子(NF)-κBp65、p-NF-κBp65、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、p-IκBα蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠SFI、MWT显著降低(P<0.01),坐骨神经干神经纤维排列紊乱,施万细胞数量明显增多,有大量空泡变性,脊髓组织NO、iNOS含量及TLR4、p-NF-κBp65、MyD88、p-IκBα蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,麦粒灸组大鼠SFI、MWT显著升高(P<0.01),坐骨神经干损伤减轻,细胞排列较整齐,施万细胞数量减少,轴突脱髓鞘及细胞空泡变性减少,脊髓组织NO、iNOS含量及TLR4、p-NF-κBp65、MyD88、p-IκBα蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论麦粒灸“环跳”可下调SNI大鼠脊髓组织TLR4、p-NF-κBp65、MyD88、p-IκBα蛋白表达,抑制NO、iNOS分泌,从而缓解疼痛、减轻受损神经组织炎症反应。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨复方银翘合剂缓解哮喘小鼠炎症反应的作用研究

目的:研究复方银翘合剂对哮喘小鼠的作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将72只小鼠随机分为6组,正常组、模型组、复方银翘合剂低、中、高剂量组和阳性药物组,每组12只。采用卵清蛋白诱导小鼠哮喘模型,观察小鼠一般症状并检测IgE浓度。收集小鼠肺泡灌洗液并染色计数,HE染色观察小鼠肺组织病理变化。ELISA检测小鼠肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13的水平。Western blot法检测肺组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和核转录因子κB(NF-κB)蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠肺泡灌洗液中总细胞数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞均显著增多(P<0.05),巨噬细胞显著减少(P<0.05),肺组织中支气管管壁增厚,炎性细胞浸润,TNF-α、IL-4、IL-5、IL-13的水平均显著提高(P<0.05),TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,复方银翘合剂中、高剂量组小鼠肺泡灌洗液中总细胞数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞均显著减少(P<0.05),巨噬细胞显著增多(P<0.05),TNF-α、IL-4、IL-5、IL-13的水平均显著降低(P<0.05),TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。复方银翘合剂各剂量组比较结果显示,高剂量组的上述变化最明显。结论:复方银翘合剂可缓解哮喘小鼠症状,减轻肺组织病理变化和炎症水平,其作用机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

复方佛耳草合剂对慢性阻塞性肺疾病大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨复方佛耳草合剂对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响。方法 大鼠随机分为空白组(10只)和造模组(50只),造模组连续12周采用香烟烟雾联合气管注射LPS建立COPD大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、地塞米松组(0.5 mg/kg)和复方佛耳草合剂低、中、高剂量组(6.8、13.6、27.2 g/kg),每组10只。给药干预24周后,采用动物肺功能仪检测大鼠肺功能,HE染色法观察肺组织病理变化,ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平及SOD活性,RT-qPCR法检测肺组织TLR4、MyD88、NF-κB及caspase-3 mRNA表达,Western blot法检测肺组织TLR4、MyD88、NF-κB及TNF-α蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠存在肺通气功能障碍,肺组织和支气管受损明显,SOD活性降低(P<0.01),血清TNF-α、IL-1β、IL-6及MDA水平升高(P<0.01),肺组织TLR4、MyD88、NF-κB、caspase-3 mRNA表达和TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α蛋白表达均升高(P<0.01);与模型组比较,复方佛耳草合剂各剂量组均能够改善肺功能指标,修复受损肺组织,降低血清TNF-α、IL-1β、IL-6及MDA水平(P<0.05,P<0.01),降低肺组织TLR4、MyD88、NF-κB、caspase-3 mRNA表达和TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α蛋白表达(P<0.05,P<0.01),且复方佛耳草合剂的作用呈剂量依赖性。结论 复方佛耳草合剂可改善慢性阻塞性肺疾病大鼠的肺功能障碍与病理损伤,其机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关。

益气活血方对冠心病气虚血瘀证大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的探讨益气活血方对冠心病气虚血瘀证大鼠的影响。方法48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、益气活血方组、单硝酸异山梨酯组。除假手术组外,所有大鼠行冠状动脉结扎术。术后7 d,除假手术组外,其余大鼠强迫游泳14 d,并控制大鼠的食量,同时益气活血方组和单硝酸异山梨酯组大鼠予灌胃给药28 d。心脏超声检测大鼠心功能;全血黏度检测大鼠的瘀血程度;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色检测大鼠心脏病理形态改变;Masson染色检测大鼠心肌纤维化水平;荧光定量PCR和免疫组化检测大鼠心肌组织Toll样受体(toll-like receptor,TLR)4、髓样分化因子(myeloid differentiationfactor,MyD)88和核因子(nuclear-factor,NF)-κB p65的mRNA和蛋白表达量;ELISA检测大鼠血清中白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的含量。结果与假手术组比较,模型组大鼠心功能下降(P<0.01),全血黏度升高(P<0.01),心肌组织排列紊乱,心肌损伤范围较大,心肌纤维化严重(P<0.01),心肌中TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平上调(P<0.01),血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量升高(P<0.01);与模型组比较,药物干预后,大鼠心功能改善(P<0.05),全血黏度下降(P<0.01),心肌组织排列较整齐,心肌损伤范围缩小,心肌纤维化缓解(P<0.01),TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平下调(P<0.05),血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量减少(P<0.05)。结论益气活血方能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB p65信号通路介导的炎症反应发挥对冠心病气虚血瘀证大鼠的治疗作用。

miR-223-3p调节TLR4/MyD88/NF-κB通路影响脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应

目的:探讨miR-223-3p对脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应的影响。方法:实验分成2部分,每个部分分为2组,共4组:miRNA阴性对照(mimic NC)+LPS组,miR-223-3p模拟物(miR-223-3p mimic)+LPS组;miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组,miR-223-3p mimic+等量溶剂(vehicle)+LPS组。随后利用Western blot实验检测每组TLR4/MyD88/NF-κB表达水平,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测促炎细胞因子水平,CCK-8法检测细胞活力。结果:与mimic NC+LPS组相比,miR-223-3p mimic+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。与miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组相比,miR-223-3p mimic+vehicle+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。结论:miR-223-3p可以通过抑制TLR4/My D88/NF-κB促进A549细胞增殖、抑制促炎细胞因子的分泌,从而抑制肺癌中炎症的发生,本研究为今后临床上肺癌的治疗及药物开发提供了新策略。

脑蛋白水解物联合长春西汀通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制

目的 探究脑蛋白水解物联合长春西汀通过Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD)88/核因子(NF)-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制。方法 选择102例重症高血压性脑出血患者随机分为两组各51例,对照组给予复方丹参液治疗,实验组给予脑蛋白水解物联合长春西汀治疗。于治疗前后分别检测患者临床指标变化、神经功能评分;检测血清氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)变化;检测血清内皮功能指标人内皮素(ET)-1,血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)变化;检测TLR4/MyD88信号通路、TLR4、MyD88和核因子(NF)-κB水平。结果 治疗前两组临床指标、神经功能评分、血清SOD、GSH-Px、MDA、ET-1、VEGF、NGF、TLR4、MyD88、NF-κB水平无显著差异(P>0.05);治疗后,与对照组相比,实验组临床相关指标、美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分降低,格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分和Barthel指数评分升高,SOD和GSH-Px水平升高,MDA、ET-1水平降低,VEGF和NGF水平升高,TLR4、MyD88、NF-κB水平降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 脑蛋白水解物联合长春西汀可改善重症高血压性脑出血患者神经功能,其机制与降低氧化损伤和TLR4/MyD88/核因子(NF)-κB信号通路的调控有关。

蚓激酶对哮喘小鼠气道炎症和TLR2/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的研究蚓激酶对过敏性哮喘小鼠TLR2/MyD88/NF-κB信号通路和炎症相关因子IL-5、IL-13、IL-33的影响,探讨蚓激酶对哮喘小鼠气道炎症的作用机制。方法24只SPF级BALB/c雄性小鼠随机分为4组:空白组、模型组、地塞米松组和蚓激酶组,每组6只。HE染色法观察肺组织病理学改变;ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)中IL-5、IL-13、IL-33的表达水平;RT-PCR检测肺组织中TLR2、MyD88、TAK1、IKBα、p65 mRNA水平;Western blot检测肺组织中MyD88、TAK1、IKBα、p65蛋白水平。结果蚓激酶可以改善哮喘小鼠模型炎症细胞浸润,降低BALF中炎症因子IL-5、IL-13、IL-33的表达,以及程度上抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白和mRNA的激活表达水平。结论蚓激酶对OVA哮喘小鼠气道炎症有明显的改善作用,相关机制可能与TLR2/MyD88/NF-κB信号通路的程度激活抑制有关。

益糖康调控2型糖尿病大鼠脂肪组织TLR4/MyD88/NF-κB通路实验研究

目的观察益糖康对2型糖尿病大鼠脂肪组织TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响,探讨益糖康对2型糖尿病的抗炎作用机制。方法将SPF级SD大鼠按照随机数字表法随机分为正常对照组(不做处理),模型组(蒸馏水,5 mL/kg),益糖康组(益糖康汤剂,5 g/kg)和二甲双胍组(150 mg/kg),每组10只。所有大鼠给药途径均为经口灌胃,每日1次,连续4周。干预4周后,称量各组大鼠的体质量,快速血糖仪测定各组大鼠空腹血糖(FPG),手工法测定各组大鼠血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,称量白色脂肪(WAT)和棕色脂肪(BAT)总质量,并计算脂肪指数。酶联免疫吸附法检测肠黏膜组织中脂多糖(LPS)含量,脂肪组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,Western-blot法检测脂肪组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白88(MyD88)、核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,其余3组大鼠的体质量,FPG、TG、TC、LDL-C、WAT、TNF-α含量,TLR4、MyD88、NF-κB表达水平均显著升高(P<0.01);HDL-C、BAT的水平均显著降低(P<0.01)。与模型组比较,益糖康组大鼠体质量显著升高(P<0.01),二甲双胍组没有显著差异(P>0.05),益糖康组和二甲双胍组大鼠FPG、TG、TC、LDL-C、WAT、TNF-α含量以及脂肪组织中TLR4、MyD88、NF-κB表达水平均显著降低(P<0.01),HDL-C、BAT的水平显著升高(P<0.01)。益糖康组大鼠体质量显著高于二甲双胍组(P<0.01)外,其余指标益糖康组和二甲双胍组之间比较均没有显著差异(P>0.05)。结论益糖康可能通过降低肠黏膜中LPS的含量进而抑制脂肪组织中TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的过度活化,发挥抗炎作用,最终实现调控糖脂代谢的作用。

参芪补胰方通过调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路治疗2型糖尿病大鼠的作用机制

目的观察参芪补胰方对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响,探讨参芪补胰方治疗T2DM的作用机制。方法采用随机对照法将48只SD大鼠随机分为7组,正常组予以基础饲料喂养,其余各组动物采用高糖高脂饲养加腹腔注射STZ法造模,二甲双胍组给予盐酸二甲双胍片,中药组给予不同剂量参芪补胰方,给药6周后留取标本。ELISA法检测大鼠肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白细胞介素-1β(Interleukin 1β,IL-1β)、白细胞介素-10(Interleukin 10,IL-10)、白细胞介素-17(Interleukin 17,IL-17)水平,HE染色法观察大鼠胰腺组织病理变化,TUNEL染色法观察大鼠胰岛细胞凋亡情况,RT-PCR法检测大鼠胰腺组织TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA表达水平,Western blot法检测大鼠胰腺组织TLR4、MyD88、NF-κB的蛋白表达水平。结果参芪补胰方对T2DM FBG水平方面有明显下降作用,与模型组比较有统计学差异(P<0.05);参芪补胰方组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-10、IL-17表达水平明显降低(P<0.05);可以通过改善大鼠胰腺组织损伤、促进细胞结构组织修复、减少细胞凋亡起到抗T2DM的作用;同时,与模型组比较,参芪补胰方组大鼠胰腺组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论参芪补胰方可能通过调控T2DM大鼠炎症因子及TLR4、MyD88、NF-κB表达发挥其抗T2DM的作用。

川芎嗪抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻子宫内膜异位症大鼠炎症反应

目的探讨川芎嗪抑制Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)信号通路减轻子宫内膜异位症(EMs)大鼠炎症反应的作用。方法自体子宫移植法构建EMs大鼠模型,随机分为EMs组、川芎嗪(低、中、高)剂量组、阳性药物组,每组各12只;进行假手术的12只大鼠作为假手术组。游标卡尺测定异位病灶体积,HE染色检测异位内膜组织病理学改变,ELISA检测血清性激素及炎症因子水平,qRT-PCR、Western blot、免疫荧光染色分别检测异位内膜组织中炎症因子mRNA表达、TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白表达及NF-κB p65入核情况。结果与假手术组比较,EMs组大鼠异位内膜组织出现明显病理损伤,血清雌二醇(E2)、孕激素(P)含量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-1β、IL-6水平及异位内膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA、总蛋白TLR4、MyD88、p-NF-κB p65和核蛋白NF-κB p65表达水平升高,血清促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)含量降低(P<0.05),同时NF-κB p65蛋白大量入核;与EMs组比较,川芎嗪(低、中、高)剂量组和阳性药物组可缓解EMs模型大鼠的上述改变并降低异位病灶体积,且川芎嗪高剂量组和阳性药物组对EMs大鼠的作用效果较好且相近。结论川芎嗪可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路激活减轻EMs大鼠炎症反应。

蔓性千斤拔素D通过TLR2/MyD88/NF-κB信号通路调控CIA大鼠炎症反应的相关机制

目的:观察蔓性千斤拔素D对大鼠胶原诱导型关节炎(CIA)的作用并探讨其作用机制。方法:将40只大鼠随机分为正常组、CIA组、甲氨蝶呤(MTX)组(1.35 mg·kg^(-1))、蔓性千斤拔素D低剂量组(1.5 mg·kg^(-1))及蔓性千斤拔素D高剂量组(3.0 mg·kg^(-1)),每组8只,除正常组外,其余均采用Ⅱ型胶原诱导CIA模型。给药组通过灌胃给予相应药液,正常组给予相应体积生理盐水,MTX组每周1次,蔓性千斤拔素D各组每天1次,共给药28 d。实验中记录各组大鼠关节炎评分和关节肿胀度,苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠踝关节病理学变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Toll样受体2(TLR2)、髓样分化因子88(MyD88)、核转录因子-κB(NF-κB) p65 mRNA的表达量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TLR2、MyD88、NF-κB p65蛋白的表达量。结果:与正常组比较,CIA组大鼠踝关节明显肿胀,关节炎临床评分及关节肿胀度显著升高(P<0.01),踝关节组织结构明显破坏,血清炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量显著升高(P<0.01),TLR2、MyD88、NF-κB p65mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与CIA组比较,各给药组大鼠关节炎临床评分及关节肿胀度均明显降低(P<0.05,P<0.01),踝关节组织结构病理变化明显改善,血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量均明显降低(P<0.05,P<0.01),踝关节TLR2、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平均明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论:蔓性千斤拔素D在一定程度上可降低类风湿关节炎大鼠炎性因子的表达,能起到良好的治疗作用,其作用机制可能是通过抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路的活化而发挥抗炎作用。

基于TLR4/MYD88/NF-κB通路研究降脂通脉饮对高脂血症模型大鼠的影响

目的:基于Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MYD88)/核转录因子-κB (nuclear transcription factor-κB,NF-κB)通路探讨降脂通脉饮对高脂血症模型大鼠的影响。方法:从15只SD大鼠中随机选取3只作为空白组,其余大鼠给予高脂饲料2周建立高脂血症模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、降脂通脉饮低剂量组(1.56 mg·kg^(-1))、降脂通脉饮中剂量组(3.125 mg·kg^(-1))、降脂通脉饮高剂量组(6.25 mg·kg^(-1)),每组各3只,给予相应剂量药物8周,每日1次,空白组和模型组给予生理盐水灌胃。全自动生化仪检测大鼠血清血脂水平,包括总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C);ELISA检测血清炎症因子含量,包括肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ);Western Blot和qPCR检测颈动脉组织TLR4、MYD88、NF-κB蛋白和基因表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C水平升高(P<0.01);与模型组比较,降脂通脉饮低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠血清TC、TG、LDL-C水平降低(P<0.05);各组大鼠血清HDL-C水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组大鼠血清MCP-1、TNF-α、IFN-γ含量升高(P<0.01);与模型组比较,降脂通脉饮中剂量、高剂量组大鼠血清MCP-1、TNF-α、IFN-γ含量降低(P<0.05),降脂通脉饮低剂量组大鼠血清TNF-α、IFN-γ含量降低(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠颈动脉组织TLR4 mRNA、MYD88 mRNA、NF-κB mRNA表达水平升高(P<0.01);与模型组比较,降脂通脉饮低剂量、中剂量、高剂量组大鼠颈动脉组织TLR4 mRNA、MYD88 mRNA、NF-κB mRNA表达水平降低(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠颈动脉组织TLR4、MYD88、NF-κB蛋白表达水平升高(P<0.01);与模型组比较,降脂通脉饮中剂量、高剂量组大鼠颈动脉组织TLR4、MYD88、NF-κB蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:降脂通脉饮可降低高脂血症大鼠血脂水平,其机制可能与抑制TLR4/MYD88/NF-κB通路,从而减轻炎症反应有关。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨左归丸、右归丸影响骨关节炎模型的作用机制研究

目的利用细胞、分子生物学技术,采用蛋白免疫印迹(Western blot,WB)、实时荧光定量反转录聚合酶链反应(Real-time PCR,RT-PCR)、酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)检测方法,观察左归丸与右归丸对大鼠膝骨关节炎(Knee osteoarthritis,KOA)软骨细胞、韧带组织的作用机制及细胞凋亡的影响,并讨论左归丸组与右归丸治疗膝骨关节炎的作用机制。方法选取8月龄的无特定病原体(Specific pathogen free,SPF)级别Wistar大鼠40只(250±20 g),雌鼠与雄鼠各20只,使用数字随机法分组,分为正常组、模型对照组、左归丸组、右归丸组、硫酸氨基葡萄糖组,每组各8只大鼠(雌雄各4只),造模方法为膝关节腔注射0.1 mL浓度为10%的木瓜蛋白酶溶液,每隔2 d造模1次,共进行3次造模,每次造模后驱赶大鼠30 min,用此方法对模型对照组、左归丸组、右归丸组、硫酸氨基葡萄糖组大鼠进行模型复制。模型复制成功后分别对5组大鼠进行相应干预。连续治疗4周后,所有大鼠取腹主动脉血后处死,Elisa法检测各组大鼠血清白细胞介素(IL)-1β表达水平,取出膝关节软骨及韧带组织,RT-PCR法与WB法检测软骨及韧带组织中toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、IκB激酶(IKK)蛋白及mRNA的表达。剩余膝关节组织HE染色检测软骨组织情况。采用SPSS 22.0软件包对检测结果进行方差分析,P<0.05差异有统计学意义。结果(1)膝关节病理切片结果:经左、右归丸治疗后KOA炎症减轻。(2)RT-PCR检测结果:软骨和韧带组织中,较模型组对比左归丸组与右归丸组TLR4、IKK表达含量明显减少(P<0.05)。(3)WB检测结果:软骨和韧带组织中,较模型组对比左归丸组与右归丸组TLR4、IKK蛋白含量明显降低(P<0.05)。(4)Elisa法检测结果:各组大鼠血清中,左归丸组与右归丸组IL-1β表达水平明显降低(P<0.05)。结论左归丸与右归丸可通过抑制TLR4/髓样分化因子88(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)/核因子κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路活化,降低TLR4、IKK、IL-1β的表达,达到保护软骨细胞及韧带组织、控制炎症、促进受损组织恢复的目的。

半夏泻心汤调控TLRs/NF-κB/MyD88信号通路干预溃疡性结肠炎的实验研究

目的观察半夏泻心汤对溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)大鼠肠道粘膜中的Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)/核转录因子κB(Nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB)/髓样分化蛋白88(Myeloid differentiation factor SS,MyD88)信号通路及抑制因子基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)MMP-1、MMP-2表达影响,并探讨其作用机制。方法建立葡聚糖硫酸钠盐(Dextran sulphate sodium salt,DSS)诱导产生UC模型,根据随机数字表法,将35只无特定病原体(Specific pathogen free,SPF)级大鼠进行分组,分为正常组、模型组、低浓度给药组(0.473 g·mL^(-1))、中浓度给药组(0.945 g·mL^(-1))和高浓度给药组(1.890 g·mL^(-1))。除正常组外,其余4组大鼠连续10天使用2.5%浓度的葡聚糖硫酸钠盐溶液每天2 mL进行灌胃,造模成功后,连续给药1周,观察大鼠疾病活动指数(Disease activity index,DAI)变化;采用苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色法,确认结肠组织病变损伤程度;同时应用蛋白质免疫印迹试验(Western blot)法,检测TLR4、NF-κB、MyD88蛋白在各组大鼠结肠中的表达;实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)技术则测定了大鼠结肠黏膜TLR4、NF-κB、IκB-α(人核因子κB抑制蛋白α,NF-κB inhibitorα)、MMP-1、MMP-2的mRNA的表达。结果造模后大鼠体质量、食欲、被毛、活动度、尿量较造模前均出现不同程度的下降,同时部分大鼠出现腹泻、便血的症状。模型组与正常组相比,大鼠结肠组织中TLR4、NF-κB、MyD88蛋白的表达,及TLR4、NF-κB、IκB-α、MMP-1、MMP-2的mRNA表达均显著升高(P<0.01);给予半夏泻心汤治疗后,UC大鼠体质量下降、腹泻、便血等症状明显减轻。低、中、高剂量的半夏泻心汤实验组中,大鼠结肠黏膜组织TLR4、NF-κB、MyD88蛋白的表达相较于模型组有不同程度地降低;MMP-1、MMP-2水平也有所下降。结论半夏泻心汤可能通过影响TLRs/NF-κB/MyD88信号通路及其相关因子的表达,改善溃疡性结肠炎大鼠结肠损伤程度,进而防治UC。

电针风池穴对颈肌慢性损伤大鼠肌卫星细胞及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的:观察电针风池穴对颈肌慢性损伤大鼠肌卫星细胞、生肌决定因子(MyoD)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Toll样受体-4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)及核转录因子(NF-κBp65)蛋白表达的影响,探讨电针促进肌肉慢性损伤修复的可能机制。方法:从45只Wistar大鼠中选取10只作为空白组,将剩余大鼠造模后按照随机数字表法分为模型组、电针组和美洛昔康组,每组10只(5只造模不成功)。采用长时间低头固定并注射高渗盐水的方法复制大鼠颈肌慢性损伤模型。造模3个月后,使用超声诊断仪观察大鼠颈后肌的形态学变化;用肌电生理检测验证模型是否成功。电针组电针双侧风池穴,每次25 min,每日1次,连续治疗10 d为1个疗程,疗程之间间隔2 d,共治疗2个疗程。干预结束后,取各组大鼠颈后肌组织,在电镜下观察颈后肌组织的形态学变化;采用免疫组织化学法检测PCNA、MyoD、TLR4、MyD88及NF-κBp65蛋白的含量。结果:①形态学检测:与空白组相比,模型组的超声诊断结果显示大鼠颈后肌组织不连续,厚度明显变薄;肌电生理检测结果表明模型组肌电波幅及频率较空白组明显衰减;与空白组相比,模型组的肌肉电镜结果显示肌原纤维结构的排列不连续,部分线粒体肿胀,肌纤维和肌节之间有断裂,并有空泡现象存在;与模型组相比,电针组肌原纤维清晰可见,肌丝横断面呈点状分布,肌节和肌浆膜完整,个别线粒体肿胀,其中少量与肌原纤维的断裂处有空泡;美洛昔康组肌原纤维结构偶见不规则,在肌原纤维的断裂处有空泡,出现少量的线粒体肿胀。②免疫组织化学:与空白组相比,模型组中的PCNA、MyoD的表达呈现弱阳性,TLR4、MyD88、NF-κBp65的蛋白表达量明显增加(P<0.05);与模型组比较,电针组与美洛昔康组中PCNA和MyoD的蛋白表达量明显增加(P<0.05),TLR4、MyD88、NF-κBp65的蛋白表达量明显减少(P<0.05)。电针组与美洛昔康组中PCNA、MyoD、TLR4、MyD88、NF-κBp65的蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论:电针风池穴治疗颈肌慢性损伤,其途径可能与促进肌卫星细胞的增殖分化有关,其机制可能通过调节TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路来实现。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨紫菀散对慢性支气管炎气道炎症的干预作用

目的 观察紫菀散对慢性支气管炎气道炎症的干预作用,并基于Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)/髓分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)/核转录因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路探讨其作用机制。方法 60只健康成年雄性SD大鼠随机分为6组,每组10只,除正常组外均采用气管内滴注脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)的方法建立慢性支气管炎模型。醋酸地塞米松组给予0.075 mg·kg-1醋酸地塞米松灌胃,每天1次;紫菀散低、中、高剂量组分别给予1.5、3.0、6.0 g·kg-1紫菀散灌胃,每天1次;模型组、正常组给予等量生理盐水灌胃。采用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平,采用细胞计数板法计数BALF中白细胞数量,采用HE染色、AB-PAS染色观察肺组织病理改变,采用免疫组化法检测肺组织TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组TGF-β1、IL-1β、IL-6水平均升高(P<0.01),白细胞总数和各种白细胞数量均增加(P<0.01),肺组织呈病理改变且气道杯状细胞增生评分升高(P<0.01),TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达均升高(P<0.01);与模型组比较,醋酸地塞米松组及紫菀散各剂量组TGF-β1、IL-1β、IL-6水平均降低(P<0.05或P<0.01),白细胞总数和各种白细胞数量均降低(P<0.01),肺组织病理改变均减轻,气道杯状细胞增生评分均降低(P<0.05或P<0.01),TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达均减少(P<0.05或P<0.01);与醋酸地塞米松组比较,紫菀散中、高剂量组TGF-β1水平均降低(P<0.05或P<0.01),紫菀散低剂量组白细胞总数和各种白细胞数量均增加(P<0.01),紫菀散中剂量组中性粒细胞数量、嗜酸性粒细胞数量均增加(P<0.01),紫菀散高剂量组淋巴细胞数量减少(P<0.01),紫菀散低、中剂量组肺组织病理改变均加重,紫菀散低剂量组气道杯状细胞增生评分升高(P<0.05),紫菀散低剂量组TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达均升高(P<0.05)。结论 紫菀散可能通过抑制TLR4/My D88/NF-κB信号通路发挥抗慢性支气管炎气道炎症的作用。

基于TLR2/MyD88/NF-κB信号通路探讨黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠的治疗机制

目的研究黄芩汤对溃疡性结肠炎(UC)的治疗作用,并通过TLR2/MyD88/NF-κB信号通路探讨其治疗机制。方法将小鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组(柳氮磺胺吡啶,0.45 g·kg^(-1))、黄芩汤组(9.1 g·kg^(-1)),自由饮用2.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)10 d造模,同时灌胃给药。观察小鼠体质量、结肠长度等体征变化,并进行疾病活动指数评分(DAI)。采用酶联免疫法检测血清细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)水平;HE和PAS染色法分析结肠组织病理变化;Western Blot法检测结肠组织Toll样受体2(TLR2)、髓样分化因子88(MyD88)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)和IL-6蛋白表达;免疫组化法检测结肠组织中TLR2、MyD88、NF-κB p65和IL-6阳性细胞表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量明显下降(P<0.01),DAI评分明显升高(P<0.01),结肠明显缩短(P<0.01),血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平明显升高(P<0.01),结肠隐窝结构严重丧失,黏膜下层水肿明显,并伴大量炎症浸润,杯状细胞结构破坏严重,数量大量减少,结肠组织中TLR2、MyD88、NF-κB p65和IL-6蛋白表达明显升高(P<0.01),结肠组织中TLR2、MyD88、NF-κB p65和IL-6阳性细胞数及表达强度明显升高(P<0.01)。与模型组比较,黄芩汤组小鼠体质量、DAI评分、结肠长度及血清细胞因子水平明显改善(P<0.01),结肠组织病变、杯状细胞结构和数量均得到恢复,结肠组织中TLR2、MyD88、NF-κB p65和IL-6蛋白表达强度和阳性细胞数及表达强度明显降低(P<0.01)。结论黄芩汤可能通过抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路抑制溃疡性结肠炎小鼠的炎症,实现治疗作用。

BMSCs通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制LPS诱导急性肺损伤小鼠炎症反应

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠炎症反应的影响。方法32只SPF级KM小鼠,4周龄,随机分为4组:对照组,LPS组,地塞米松(DEX)治疗组(LPS+DEX),BMSCs移植组(LPS+BMSCs);后3组经气管穿刺法注入LPS建立小鼠ALI模型,建模24 h后经尾静脉一次性注射移植同源BMSCs,同时,LPS+DEX组经尾静脉注射DEX,连续3 d;细胞移植后第4天或DEX注射完毕后24 h,记录小鼠存活数量,检测小鼠肺功能,测肺W/D重量比;收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中的炎症细胞,检测血清炎性细胞因子,观察肺组织病理学变化;经绿色荧光蛋白标记染色观察BMSCs在肺组织中的归巢;用RT-PCR及Western blot分别检测肺组织TLR4-MyD88-NF-κB信号通路相关基因和蛋白质表达(TLR4、MyD88和NF-κB)。结果与对照组相比,LPS组小鼠肺功能降低,肺W/D重量比、血清中炎症因子、BALF中炎性细胞数量明显增加,肺组织损伤严重;与LPS组比较,LPS+DEX组、LPS+BMSCs组小鼠存活数量增高,肺功能改善,肺组织损伤减轻,肺W/D重量比、血清炎性细胞因子、BALF中炎性细胞数量明显下降,TLR4-MyD88-NF-κB信号通路相关基因和蛋白表达降低。结论同源BMSCs移植可以有效缓解LPS诱导的急性肺损伤,其机制可能与调控TLR4-MyD88-NF-κB信号通路,减轻炎症反应有关,该研究为BMSCs同源移植治疗ALI提供了实验依据。