miR-143-3p靶向调控TLR2/NF-κB/NLRP3通路对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响

目的研究miR-143-3p对LPS+ATP诱导HCT-116细胞焦亡的影响。方法双荧光素酶检测miR-143-3p与TLR2基因靶向关系。转染miR-143-3p mimic后建立焦亡模型,流式细胞术检测细胞凋亡,生化法检测Caspase-1活性及LDH含量;ELISA法检测IL-1β、IL-18含量。q-PCR检测NF-κB、TLR2、NLRP3、GSDMD mRNA水平;免疫荧光检测NLRP3、ASC蛋白表达;Western blot检测TLR2、GSDMD、p-NF-κB p65、cleave Caspase-1蛋白表达。结果双荧光素酶检测发现miR-143-3p靶向调控TLR2表达。miR-143-3p mimic组和si TLR2组较模型组细胞中NF-κB、TLR2、NLRP3、GSDMD mRNA表达及TLR2、GSDMD、p-NF-κB p65、cleave Caspase-1、ASC、NLRP3蛋白表达降低;Caspase-1活性及LDH、IL-1β、IL-18含量降低。结论miR-143-3p靶向TLR2基因调控NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号通路调控溃疡性结肠炎细胞焦亡。

基于TLR2/NF-κB信号通路探讨平喘方及拆方改善哮喘小鼠气道重塑作用机制

目的基于TLR2/NF-κB信号通路研究平喘方及拆方改善卵清蛋白诱导的哮喘小鼠气道重塑的作用机制。方法将75只SPF级BALB/c雄性小鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组、平喘方组和平喘祛瘀方组,每组15只。除空白组外,其余组小鼠于第1日和第14日采用卵清蛋白联合氢氧化铝凝胶腹腔注射致敏,第21~27日连续予5%卵清蛋白雾化激发哮喘,每次雾化激发1 h后灌胃相应药液,连续7 d,空白组和模型组予等量蒸馏水灌胃。末次给药24 h后取材,HE染色观察小鼠肺组织病理变化,Masson染色观察肺组织支气管周围胶原纤维沉积,RT-qPCR检测肺组织平滑肌肌球蛋白重链(SM-MHC)、钙调蛋白(Calponin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Toll样受体2(TLR2)、核因子(NF)-κB抑制因子α(IκBα)、NF-κBp65 mRNA表达,Western blot检测肺组织纤维连接蛋白1(FN1)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、TLR2、IκBα、NF-κBp65蛋白表达。结果与空白组比较,模型组小鼠支气管管腔狭窄,炎性浸润明显,肺间质可见大量胶原纤维沉积,肺组织SM-MHC、Calponin、IκBαmRNA表达显著降低(P<0.01),α-SMA、TLR2、NF-κBp65 mRNA表达显著升高(P<0.01),FN1、CollagenⅠ、TLR2、NF-κBp65蛋白表达显著升高(P<0.01),E-cadherin、IκBα蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,地塞米松组、平喘方组及平喘祛瘀方组小鼠肺组织病理损伤减轻,炎性浸润及胶原纤维沉积减少,肺组织SM-MHC、Calponin、IκBαmRNA表达显著升高(P<0.01,P<0.05),α-SMA、TLR2、NF-κBp65 mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05),FN1、CollagenⅠ、TLR2、NF-κBp65蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.01),地塞米松组IκBα蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论平喘方及拆方能明显改善哮喘小鼠气道重塑,其机制可能与抑制TLR2/NF-κB信号通路相关。

杜仲提取物对类风湿关节炎大鼠免疫功能及TLR2/NF-κB/TNF信号通路的影响

目的观察杜仲提取物对类风湿关节炎大鼠免疫功能及TLR2/NF-κB/TNF信号通路的影响。方法将35只SD大鼠分为正常对照组、模型组、杜仲低剂量组(杜仲提取物200 mg/kg)、氨甲蝶呤组(氨甲蝶呤0.75 mg/kg)、杜仲高剂量组(杜仲提取物800 mg/kg),每组7只,连续给药3周。采用冷水游泳+足跖部皮内注射CFAO制备类风湿关节炎模型。记录各组大鼠关节肿胀程度及关节指数评分,ELISA检测血清免疫球蛋白水平;流式细胞仪检测T淋巴细胞水平;HE染色观察关节病变;Western blotting检测大鼠踝关节滑膜组织中Toll样受体2(TLR2)、核转录因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠左后足肿胀度、关节指数评分及免疫球蛋白水平、TLR2、NF-κB、TNF-α升高,CD4+、CD4+CD25+Treg水平降低(P<0.05),与模型组相比,杜仲低剂量组、氨甲蝶呤组、杜仲高剂量组大鼠左后足肿胀度、关节指数评分及免疫球蛋白水平、TLR2、NF-κB、TNF-α降低,CD4+、CD4+CD25+Treg水平升高(P<0.05),杜仲低剂量组与氨甲蝶呤组差异无统计学意义(P>0.05),与氨甲蝶呤组相比,左后足肿胀度、关节指数评分及免疫球蛋白水平、TLR2、NF-κB、TNF-α降低,CD4+、CD4+CD25+Treg水平升高(P<0.05)。结论杜仲提取物可通过调节大鼠血清免疫球蛋白及T淋巴细胞水平,抑制类风湿TLR2、NF-κB信号通路,降低炎性水平。

三黄膏对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染大鼠皮下软组织炎症及TLR2/NF-κB信号通路的影响

目的观察三黄膏对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染大鼠皮下软组织的影响,从TLR2/NF-κB信号通路探讨其作用机制。方法将96只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、百多邦组和三黄膏高、中、低剂量组,每组16只。除空白组外,其余各组以MRSA菌悬液皮下注射制备软组织感染模型,百多邦组和三黄膏高、中、低剂量组分别于患处涂抹相应药物,空白组和模型组涂抹等量凡士林,每日2次,共7 d。HE染色观察感染组织病理变化,ELISA检测血清及感染组织肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-7含量,RT-qPCR检测感染组织TNF-α、IL-1β、IL-7、Toll样受体2(TLR2)、转化生长因子-β活化激酶结合蛋白1(TAB1)、核因子(NF)-κB p65 mRNA表达,Western blot检测TLR2、TAB1、NF-κB p65蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠感染组织表皮层鳞状上皮普遍增厚,胶原纤维聚集成片状、团块状,各层有大量炎性细胞浸润;血清及感染组织TNF-α、IL-1β、IL-7含量显著增加(P<0.01),感染组织TNF-α、IL-1β、IL-7、TLR2、TAB1、NF-κB p65 mRNA和TLR2、TAB1、NF-κB p65蛋白表达均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,三黄膏高剂量组大鼠感染组织胶原纤维聚集明显减少,周围肉芽组织填充,有新生的薄壁毛细血管;血清及感染组织TNF-α、IL-1β、IL-7含量显著减少,感染组织TNF-α、IL-1β、IL-7、TLR2、TAB1、NF-κB p65 mRNA和TLR2、TAB1、NF-κB p65蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论三黄膏可能通过降低感染组织TLR2、TAB1、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达,抑制TLR2/NF-κB信号通路下游炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-7分泌,进而发挥促进感染创面愈合及抑制炎症反应的作用。

大豆β-伴球蛋白对黄河鲤头肾TLR2/NF-κB p65及其炎性因子基因表达的影响

为研究大豆β-伴球蛋白水平对黄河鲤Cyprinus carpio haematopterus头肾TLR2/NF-κB p65信号通路和下游炎性细胞因子表达的影响,将225尾体质量为(41.00±0.12)g的黄河鲤随机分为5组,每组设3个重复,每个重复15尾鱼,分别饲喂含0%(对照)、1.0%、3.0%、5.0%和7.0%的大豆β-伴球蛋白(替代鱼粉)的等氮(粗蛋白质38.0%)、等能(脂肪6.0%)饲料,进行为期21 d的养殖试验,分别于试验开始的第1、7、14、21天取头肾进行实时定量PCR,分析各组TLR2、NF-κB p65、IL-1β、IL-6、TNF-α1、IFN-γ基因表达的变化。结果表明:黄河鲤头肾中TLR2、NF-κB p65、IL-1β、IL-6和TNF-α1的表达与大豆β-伴球蛋白添加剂量、饲喂时间显著相关(P<0.05),但无交互作用,而IFN-γ的表达只与剂量相关;3.0%及以上添加组,1~21 d内TLR2、NF-κB p65、IL-1β、IL-6和TNF-α1表达量均显著高于对照组(P<0.05),第21天时各因子表达量较第14天时总体上趋于下降;1.0%、3.0%、5.0%添加组IFN-γ表达在试验期内显著高于对照组(P<0.05)。研究表明,饲料中添加大豆β-伴球蛋白能促进黄河鲤头肾TLR2、NF-κB p65、IL-1β、IL-6和TNF-α1表达且具有剂量-时间依赖效应,但无交互作用,推测大豆β-伴球蛋白可引起鲤炎症反应,导致免疫功能紊乱。因此,鲤鱼日粮中不宜使用高水平的大豆β-伴球蛋白。

HMGB1/TLR2/NF-κB在溃疡性结肠炎小鼠结肠组织中的表达及意义

目的探讨HMGB1/TLR2/NF-κB在溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠组织中的表达及作用机制。方法 BALB/C小鼠随机分为正常对照组及模型组,每组12只;正常对照组不造模,模型组用恶唑酮(OXZ)灌肠复制UC模型。观察两组实验小鼠体质量变化、大体及组织病理学改变;RT-PCR检测结肠组织HMGBlmRNA的表达变化;免疫组织化学和流式细胞术检测结肠组织中HMGB1、TLR2、NF-κB蛋白的表达变化。结果与正常对照组小鼠相比,模型组小鼠出现不同程度的腹泻和便血,结肠黏膜明显充血、水肿,可见较大溃疡病灶;模型组小鼠结肠组织中HMGB1mRNA及蛋白表达升高,主要位于细胞浆和细胞外;模型组小鼠结肠组织TLR2和NF-κB蛋白表达亦明显升高;HMGB1蛋白与TLR2蛋白表达呈显著正相关(r=0.81,P<0.01);TLR2蛋白与NF-κB蛋白表达呈显著正相关(r=0.78,P<0.01)。结论 HMGB1在小鼠溃疡性结肠炎中的致炎作用可能部分通过结合其受体TLR2,激活NF-κB信号途径而实现的。

黄芩苷经TLR2/NF-κB途径减轻类风湿关节炎大鼠滑膜炎

目的评价不同剂量黄芩苷对SD大鼠类风湿关节炎的疗效,并探讨其可能的作用机制。方法制备SD大鼠类风湿关节炎模型,测量后足的肿胀度;通过不同剂量黄芩苷溶液灌胃治疗后,观察膝关节滑膜HE染色切片病理变化;实时荧光定量PCR测定膝关节滑膜组织TLR2及MyD88mRNA表达;Westernblot测定滑膜组织TLR2、MyD88及NF-κBp65蛋白表达。结果黄芩苷30、60mg·kg^(-1)均能明显减弱滑膜组织中成纤维细胞的增殖及炎性损伤程度,明显降低滑膜组织TLR2及MyD88mRNA表达(P<0.01),明显减弱TLR2、MyD88及NF-κBp65蛋白表达(P<0.05)。结论黄芩苷具有良好的抗类风湿关节滑膜炎作用,其可能是通过抑制TLR2-NF-κB信号通路的活化来实现的。

1,25(OH)_(2)D_(3)通过抑制TLR2/NF-κB信号通路保护实验性自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺功能研究

目的基于TLR2/NF-κB信号通路研究1,25(OH)_(2)D_(3)对实验性自身免疫性甲状腺炎大鼠的保护作用机制。方法将大鼠随机分为对照组、模型组、硒酵母片对照组和1,25(OH)_(2)D_(3)低、中、高剂量组。除对照组外,其余大鼠采用皮下注射甲状腺球蛋白(PTg)建立自身免疫性甲状腺炎大鼠模型,1,25(OH)_(2)D_(3)低、中、高剂量组分别给予腹腔注射0.5、1.0、1.5μg/kg 1,25(OH)_(2)D_(3)注射剂,对照组和模型组注射等量蒸馏水,硒酵母片对照组注射等量硒酵母混悬液(每天1次),连续4周。观察大鼠甲状腺组织变化,检测大鼠甲状腺功能因子、血清炎性因子、甲状腺自身抗体含量及TLR2/NF-κB信号通路相关蛋白水平及基因表达量。结果与模型组大鼠比较,1,25(OH)_(2)D_(3)各组大鼠血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)及促甲状腺激素(TSH)水平、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及甲状腺组织TLR2、MyD88、TRAF-6和NF-κB mRNA和蛋白表达均不同程度降低,而白细胞介素-10(IL-10)不同程度增加,高剂量1,25(OH)_(2)D_(3)组与模型组差异具有统计学意义(P<0.05)。结论1,25(OH)_(2)D_(3)对自身免疫性甲状腺炎大鼠的甲状腺功能有一定的改善作用,并能提高自身免疫抗体水平,其机制可能与1,25(OH)_(2)D_(3)抑制TLR2/NF-κB信号通路活性,从而调控IL-6、IL-10、IL-12和TNF-α等炎症因子释放有关。

秃疮花异紫堇碱对LPS诱导的牛肺微血管内皮细胞炎症因子和TLR2/MYD88/NF-κB通路的影响

试验旨在探究秃疮花异紫堇碱(ICD)对脂多糖(LPS)诱导的牛肺微血管内皮细胞(CPA 47)炎症因子和Toll样受体2/髓样分化因子88/核转录因子-κB(TLR2/MYD88/NF-κB)通路的影响。选取CPA 47分为5组接种于6孔板中,每组设置4孔,对照组细胞加入1640培养基,LPS组加入脂多糖处理建立炎症模型,ICD高剂量组细胞加入20 mg/L ICD+50μg/L LPS,ICD中剂量组细胞加入15 mg/L ICD+50μg/L LPS,ICD低剂量组细胞加入10 mg/L ICD+50μg/L LPS。分别利用ELISA检测各组的炎性因子含量,实时荧光定量PCR检测TLR2/MYD88/NF-κB通路中关键基因的表达量,免疫印迹法(Western blot)检测上述通路中各蛋白含量。结果显示,与对照组相比,LPS处理组和ICD低剂量组牛肺微血管内皮细胞白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量显著升高(P<0.05),TLR2、NF-κB、MYD88的mRNA表达量和蛋白含量显著升高(P<0.05)。与LPS组相比,ICD高、中剂量组中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α含量显著降低(P<0.05),TLR2、NF-κB、MYD88的mRNA表达量和蛋白含量显著降低(P<0.05)。研究表明,15~20 mg/L ICD可以有效缓解LPS诱导的牛肺微血管内皮细胞的炎症反应,抑制LPS诱导的牛肺微血管内皮细胞TLR2/MYD88/NF-κB炎症通路的激活。

miR-27a通过TLR4/NF-κB信号通路对类风湿关节炎滑膜细胞生物学行为的影响

目的:探讨miR-27a通过Toll样受体(TLR)4/NF-κB信号通路对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞生物学行为的影响。方法:选择行膝关节置换术的30例RA患者(RA组)和同期因创伤急诊截肢的18例患者(对照组)的滑膜组织,采用qRT-PCR法检测miR-27a的表达。将RA成纤维样滑膜细胞MH7A分为4组:空白对照组,不进行任何处理;TNF-α组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理24 h;TNF-α+miR-NC组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理后转染miR-NC;TNF-α+miR-27a mimic组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理后转染miR-27a mimic,采用qRT-PCR法检测组织或细胞中miR-27a的表达量,CCK-8法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况,双荧光素酶报告实验验证TLR4 mRNA与miR-27a的靶向关系,Western blot法检测细胞中TLR4、NF-κB、磷酸化TLR4(p-TLR4)和磷酸化NF-κB(p-NF-κB)蛋白的表达情况。结果:对照组和RA组滑膜组织中miR-27a的表达量分别为(1.00±0.08)和(0.36±0.05),RA组低于对照组(P<0.001)。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组细胞中miR-27a表达量下降,TNF-α+miR-27a mimic组miR-27a表达量升高;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimic组细胞中miR-27a表达量升高(P<0.05)。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力增强,细胞凋亡率降低;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimic组细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力减弱,细胞凋亡率升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实TLR4是miR-27a的靶基因。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组p-TLR4/TLR4、p-NF-κB/NF-κB升高;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimics组p-TLR4/TLR4、p-NF-κB/NF-κB降低(P<0.05)。结论:miR-27a可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低RA成纤维样滑膜细胞的增殖、侵袭和迁移能力,促进其凋亡。

黄芩汤调控TLR2/NF-κB/NLRP3通路对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响

目的基于TLR2/NF-κB/NLRP3通路探讨黄芩汤对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响。方法实验分为空白组、模型组、低中高中药血清组。LPS+ATP构建焦亡模型,cck-8法检测生长情况,流式细胞术检测凋亡,Elisa检测IL-18、IL-1β、TNF-α水平,qRT-PCR检测IL-1β、NLRP3、Caspase-1、IL-18、ASC、GSDMD mRNA表达情况,WB检测TLR2、p-NF-κB-p65、GSDMD蛋白水平。结果与模型组相比,三组中药血清细胞活力均明显上升(P<0.05)、凋亡率均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,三组中药血清IL-18、IL-1β、TNF-α水平均明显降低(P<0.05)。与模型组相比,中剂量组Caspase-1、NLRP3、ASC、IL-18的mRNA表达明显降低(P<0.05),高剂量组IL-1β、NLRP3、Caspase-1、IL-18、ASC、GSDMD的mRNA表达均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,中、高剂量组TLR2、p-NF-κB-p65及高剂量组GSDMD蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论黄芩汤抑制溃疡性结肠炎焦亡的机制可能是调控TLR2/NF-κB/NLRP3通路。

基于TLR2/MyD88/NF-κB信号通路探讨加味少腹逐瘀汤对寒湿瘀结证子宫内膜异位症痛经小鼠腹腔炎症微环境干预作用

目的探讨加味少腹逐瘀汤对寒湿瘀结证子宫内膜异位症痛经小鼠腹腔炎症微环境的干预机制。方法构建动物模型后随机分组。以自主活动次数、粪便含水率、热痛潜伏期评价证候;以子宫及异位病灶大小评价疗效;HE染色比较病理变化;免疫组化检测异位组织中NF-κB的表达及其入核情况;qPCR法和Western blot测定病灶中TLR2、MyD88、NF-κB的mRNA和蛋白表达;ELISA检测TNF-α、IL-6、PGE2、E2、P。结果与假手术组对比,模型小鼠自主活动减少,热痛潜伏期缩短,粪便含水率增加;子宫体积增大,腹腔可见明显异位灶且HE染色显示炎症浸润;免疫组化显示NF-κB表达增加;异位组织TLR2、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达增加,外周血TNF-α、IL-6、PGE2、E2增高,P下降。与模型组相比,各治疗组子宫体积减小、异位灶重量减轻、疼痛潜伏期延长;中药高剂量组小鼠自主活动次数增加、粪便含水率减少;药物干预后炎症反应改善、NF-κB表达下降;TLR2、MyD88、NF-κB的mRNA及蛋白表达降低;且外周血TNF-α、IL-6、PGE2、E2降低、P升高。结论加味少腹逐瘀汤可以降低寒湿瘀结证子宫内膜异位症小鼠血清炎症因子,这可能与抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路改善腹腔炎症微环境有关。

基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路探讨柴胡皂苷B2对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨柴胡皂苷B2对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响。方法大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、依那普利(10 mg/kg)组和柴胡皂苷B2低、中、高剂量组(5、10、20 mg/kg),每组12只。除假手术组外,其余5组建立单侧输尿管梗阻(UUO)模型,各组灌胃给予相应药物,每天1次,连续给药2周。全自动生化分析仪检测大鼠血清中血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平,ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-1β水平,Masson染色观察大鼠肾组织病理学变化,试剂盒检测大鼠肾组织中肾上腺髓质素(ADM)水平,免疫组化法检测大鼠肾组织中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、转化生长因子-β1(TGF-β1)阳性表达,Western blot法检测大鼠肾组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB、NLRP3蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠肾组织可见肾小管扩张,上皮细胞出现部分空泡化,肾间质内大量炎性细胞浸润、纤维细胞生成及胶原纤维沉积,血清BUN、Scr、TNF-α、IL-1β水平、肾组织TGF-β1阳性表达、TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达升高(P<0.05),肾组织ADM水平、E-cadherin阳性表达降低(P<0.05);与模型组比较,柴胡皂苷B2各剂量组大鼠肾脏病变逐渐减轻,血清BUN、Scr、TNF-α、IL-1β水平,肾组织TGF-β1阳性表达,TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达均降低(P<0.05),肾组织ADM水平、E-cadherin阳性表达均升高(P<0.05);与柴胡皂苷B2高剂量组比较,依那普利组上述指标无明显变化(P>0.05)。结论柴胡皂苷B2能够缓解UUO大鼠肾间质纤维化,改善肾功能和炎症反应,可能与抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的表达有关。

甘草酸二铵通过TLR4/NF-κB信号通路负调控LPS诱导的BV2小胶质细胞神经炎症反应

目的:评价甘草酸二铵(DG)对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞TLR4/NF-κB炎症信号通路的影响,探讨其改善神经炎症的潜在机制。方法:采用LPS诱导BV2小胶质细胞损伤模型,给予20、60μmol/L DG处理。MTS检测细胞活力;Griess检测细胞NO分泌水平;ELISA检测细胞上清中TNF-α、IL-6和IL-1β炎症因子水平。RT-qPCR检测细胞TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4和MyD88 mRNA水平;Western blot检测细胞TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB、IκB-α和p-IκB-α蛋白表达。结果:与对照组相比,LPS处理的BV2小胶质细胞活力明显降低(P<0.05),NO分泌显著增加(P<0.05),TNF-α、IL-6和IL-1β炎症因子水平明显升高(P<0.05),TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4和MyD88 mRNA水平显著升高(P<0.05),TLR4、MyD88、p-NF-κB和p-IκB-α蛋白表达明显升高(P<0.05);与LPS组相比,不同浓度DG干预的BV2小胶质细胞活力明显升高(P<0.05),NO分泌明显减少(P<0.05),TNF-α、IL-6和IL-1β炎症因子水平明显降低(P<0.05),TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4和MyD88 mRNA水平明显降低(P<0.05),TLR4、MyD88、p-NF-κB和p-IκB-α蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论:DG可有效减轻LPS诱导的小胶质细胞神经炎症反应,可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。

消肿止痛合剂通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路诱导小鼠小胶质细胞的M2极化

目的:观察消肿止痛合剂(Xiaozhong-Zhitong mixture,XZZT)对小鼠小胶质细胞(BV2细胞)M2极化和Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路的影响。方法:将BV2细胞分为空白组、模型组[脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)+缺氧]、TAK-242(TLR4抑制剂)组(LPS+缺氧+TAK-242)、XZZT组(LPS+缺氧+XZZT)和TAK-242+XZZT组(LPS+缺氧+TAK-242+XZZT)共5组。流式细胞术检测BV2细胞的早期凋亡及细胞周期;免疫荧光染色检测M1型标志物诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和M2型标志物CD206的阳性表达;Western blot检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白TLR4、MyD88、NF-κB p65、磷酸化p65(phosphorylated p65,p-p65)、磷酸化转化生长因子β活化激酶1(phosphorylated transforming growth factor-β-activated kinase 1,p-TAK1)和磷酸化NF-κB抑制蛋白激酶α/β(phosphorylated IκB kinaseα/β,p-IKKα/β)水平;RT-qPCR检测白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-10、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA表达水平。结果:与模型组相比,XZZT组中BV2细胞早期凋亡率显著降低(P<0.01),生长周期阻滞于S期的细胞比例显著升高(P<0.01),TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-IKKα/β、p-p65和p-TAK1蛋白水平显著降低(P<0.05或P<0.01),IL-1β、TNF-α、TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01),IL-10的mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。与TAK-242组相比,TAK-242+XZZT组iNOS平均阳性面积百分率显著降低,CD206平均阳性面积百分率显著升高(P<0.01)。结论:XZZT具有诱导小鼠小胶质细胞M2极化的作用,其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

miR-223-3p调节TLR4/MyD88/NF-κB通路影响脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应

目的:探讨miR-223-3p对脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应的影响。方法:实验分成2部分,每个部分分为2组,共4组:miRNA阴性对照(mimic NC)+LPS组,miR-223-3p模拟物(miR-223-3p mimic)+LPS组;miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组,miR-223-3p mimic+等量溶剂(vehicle)+LPS组。随后利用Western blot实验检测每组TLR4/MyD88/NF-κB表达水平,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测促炎细胞因子水平,CCK-8法检测细胞活力。结果:与mimic NC+LPS组相比,miR-223-3p mimic+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。与miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组相比,miR-223-3p mimic+vehicle+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。结论:miR-223-3p可以通过抑制TLR4/My D88/NF-κB促进A549细胞增殖、抑制促炎细胞因子的分泌,从而抑制肺癌中炎症的发生,本研究为今后临床上肺癌的治疗及药物开发提供了新策略。

支气管肺泡灌洗液及血清NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α在肺炎诊断中的应用价值

目的探讨支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清核转录因子-κB(NF-κB)、Toll样受体2(TLR-2)、Toll样受体4(TLR-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)在肺炎诊断中的应用价值。方法选取2023年1月—2024年3月于吉林大学第二医院就诊的57例肺炎患者纳入研究组,另取同期体检的健康者57例纳入对照组,均采集外周静脉血与肺泡灌洗液,检测NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α水平,采用Pearson相关性分析患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α的相关性。结果研究组患者血清NF-κB(41.74±4.75)μg/L、TLR-2(5.32±1.12)ng/L、TLR-4(6.44±1.61)ng/L、TNF-α(4.36±1.03)ng/L水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组患者BALF中NF-κB(8.19±2.62)μg/L、TLR-2(2.97±0.79)ng/L、TLR-4(4.24±1.18)ng/L、TNF-α(2.04±0.59)ng/L水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α水平呈正相关性(P<0.05)。结论肺炎患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α均呈高表达,联合检测有助于早期诊断及评估病情。

oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ复合物通过TLR4/MyD88/NF-κB途径促进血管内皮细胞血管生成

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)/β2糖蛋白Ⅰ(β2GPⅠ)/抗β2糖蛋白Ⅰ抗体(aβ2GPⅠ)复合物对血管内皮细胞增殖、迁移及血管生成的影响及其机制。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养至对数生长期,分为对照组(正常培养)、oxLDL组(50 mg/L oxLDL)、oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ组(50 mg/L oxLDL/100 mg/Lβ2GPⅠ/100 mg/L aβ2GPⅠ)和血管内皮生长因子(VEGF)组(100μg/L VEGF)。实时荧光定量PCR(qPCR)法检测血管生成相关因子VEGF、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2及MMP-9的基因表达;CCK-8检测细胞增殖;划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;基质胶管腔形成实验检测HUVEC的血管生成能力;Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和核因子κB(NF-κB)的蛋白表达。结果与对照组相比,oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ组细胞增殖活力在处理48 h时增加;此外,与对照组相比,oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ组细胞迁移及血管生成能力增强,VEGF、VE-cadherin、MMP-2及MMP-9的mRNA水平升高(P<0.05),TLR4和MyD88蛋白水平及p-NF-κB p65/NF-κB p65比值升高(P<0.05)。结论oxLDL/β2GPⅠ/aβ2GPⅠ复合物可能通过TLR4/MyD88/NF-κB通路诱导血管内皮细胞增殖、迁移及血管生成。

Capsosiphon fulvescens suppresses LPS-stimulated inflammatory responses by suppressing TLR4/NF-κB activation in RAW264.7 murine macrophages

Objective:To evaluate the effects of Capsosiphon fulvescens(C.fulvescens)ethanolic extract on inflammation in lipopolysaccharide(LPS)-induced RAW296.7 macrophages.Methods:The protective effects of C.fulvescens ethanolic extract on LPS-induced inflammation in RAW264.7 macrophages were assessed using biochemical analysis,including enzyme-linked immunosorbent assay,quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,and Western blot analysis.To examine reactive oxygen species(ROS)production,flow cytometry analysis,and immunofluorescence staining were used.Furthermore,the modulatory effect of C.fulvescens ethanolic extract on NF-κB activation was investigated.Results:C.fulvescens ethanolic extract significantly attenuated LPS-induced levels of pro-inflammatory cytokines and notably reduced the secretion and mRNA levels of LPS-mediated matrix metalloproteinases.In addition,C.fulvescens ethanolic extract decreased ROS production and suppressed the TLR4/NF-κB signaling pathway.Conclusions:C.fulvescens ethanolic extract alleviates inflammation as well as oxidative stress by modulating the TLR4/NF-κB signaling in LPS-induced RAW264.7 macrophages.C.fulvescens can be used as a potential therapeutic agent to suppress inflammation and oxidative stress-associated diseases.

白芍总苷胶囊联合来氟米特对类风湿关节炎Th1/Th2细胞平衡和外周血单核细胞TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨白芍总苷胶囊联合来氟米特对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者辅助性T细胞(helper T cell,Th)1/Th2细胞平衡和外周血单核细胞Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)信号通路的影响。方法按照信封抽签法将锦州医科大学附属第一医院2021年4月至2023年12月期间接收的129例RA患者分为对照组(n=64,来氟米特片治疗)和观察组(n=65,白芍总苷胶囊联合来氟米特片治疗)。对比两组疗效、临床症状、病情评分、疾病相关指标、Th1/Th2细胞平衡和TLR4/NF-κB信号通路相关指标,同时观察两组不良反应发生情况。结果观察组的临床总有效率高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,观察组治疗2个月后晨僵时间缩短,关节肿胀数和关节压痛数减少,疼痛视觉模拟量表(visual analog scale of pain,VAS)评分和RA患者病情评价(disease activity score 28,DAS28)评分下降,C反应蛋白、红细胞沉降率、类风湿因子下降,Th2细胞升高,Th1细胞、Th1/Th2下降,TLR4信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)、NF-κB mRNA下降(P<0.05)。两组不良反应发生率对比无差异(P>0.05)。结论白芍总苷胶囊联合来氟米特治疗RA患者,可促进患者症状改善,提高临床治疗效果,可能与调节Th1/Th2细胞平衡和抑制外周血单核细胞TLR4/NF-κB信号通路激活有关。