甘草甜素对HBsAg低表达HepG2.2.15细胞株HBV感染及TLR2、4的影响

目的:探讨甘草甜素(GL)对HepG2.2.15细胞上清HBV DNA、e抗原分泌,Toll样受体2、4(TLR2、4)信号分子的表达及对细胞增殖的影响。方法:实时荧光定量PCR检测HBV DNA表达,ELISA检测HBV所分泌抗原,MTT检测细胞增殖活性,直接免疫荧光流式细胞术(FCM)检测TLR2、4在细胞株上表达的阳性细胞率,并与空白对照组对比。结果:HBsAg在该细胞株低表达,但HBeAg则明显阳性,因此研究了GL对e抗原的影响,给药后第3d e抗原总体均数间差异显著(P<0.01),但只有400μg/ml组与对照组间比较显著降低(P<0.05),800μg/ml组则较其余GL组明显升高(P<0.01)。HBV DNA给药后第3 d总体均数间比较差异有显著性,只有50μg/ml组较对照组降低,但无统计学意义(P>0.05),其余各组均较对照组升高;各组TLR2、4数值总体均数间有显著差异(P<0.01)。除200μg/ml组外,各剂量组与对照组比较显示两者均显著上调(P<0.05),但均无剂量依赖关系;MTT实验显示200μg/ml以下三个剂量组均可促进细胞增殖,但只有200μg/ml组与对照组间差异显著(P<0.05);400、800μg/ml两组均显著抑制细胞增殖(P<0.01);而MTT分别与HBeAg、HBV DNA呈显著负相关(P<0.05)。结论:研究表明,GL对HepG2.2.15变异株的病毒复制及e抗原分泌可能具有双向作用;细胞的存活数与病毒复制及e抗原呈负相关;TLR2在变异株低表达,GL呈非剂量依赖关系上调TLR2、4表达,至少在该细胞株GL影响HBV的机理与TLR2、4信号的改变无关,但有可能在体内通过免疫途径影响HBV。

调神健脾针法对腹泻型肠易激综合征患者TLR 2/4、MYD 88、NF-κb的影响

目的研究针刺对腹泻型肠易激综合征患者(IBS-D)TLR 2/4、MYD 88、NF-κb的影响,探讨针灸治疗IBS-D的机制。方法选取30例IBS-D患者为针刺组,30例健康志愿者为健康对照组。针刺组予调神健脾针法治疗,每周治疗3次,共治疗18次,每次30 min。穴位取百会、印堂,太冲、足三里、三阴交、天枢、上巨虚。健康对照组为空白对照,不予任何处理。观察IBS-D患者针刺治疗前后IBS症状严重度(IBS-SSS)、ZUNG氏抑郁评分量表(SDS)、ZUNG氏焦虑评分量表(SAS)评分变化,并进行IBS-SSS等级疗效评定;比较IBS-D患者与健康志愿者Toll样受体家族2/4(TLR 2/4)、髓样分化因子88(MYD 88)、NF-κb mRNA和蛋白表达差异;以及IBS-D患者针刺治疗前后TLR 2/4、MYD 88、NF-κb mRNA和蛋白表达变化。结果IBS-D患者针刺治疗后IBS-SSS、SDS、SAS均明显低于治疗前(P<0.05);IBS-D患者针刺治疗前TLR 2/4、MYD 88、NF-κb mRNA和蛋白表达均高于健康志愿者(P<0.05);IBS-D患者针刺治疗后TLR 2/4、MYD 88、NF-κb mRNA及蛋白表达较治疗前明显降低(P<0.05)。结论针刺可以显著缓解IBS-D相关临床症状,其作用机制可能与调节TLR 2/4、MYD 88、NF-κb表达有关。

TLR2/4配体增强的非特异性肝脏炎症对BALB/c小鼠自身免疫性肝炎的影响

目的:探索非特异性肝脏炎症诱导BALB/c小鼠产生自身免疫性肝炎(AIH)的原因。方法:尾静脉注射质粒pCYP2D6、pcDNA3.1和psTLR2/4,腹腔重复注射四氯化碳(CCl_4)。ELISA检测抗CYP2D6抗体和自身抗体水平;HE染色检测肝脏炎症情况;天狼星红染色检测肝脏纤维化情况。结果:CCl_4引发BALB/c小鼠产生非特异性肝脏炎症,TLR2/4配体增强了这种炎症。停止注射CCl_4后,非特异性肝脏炎症消失,但是却促进模拟抗原人CYP2D6诱导产生自身免疫应答、自身免疫性肝炎和肝纤维化,且TLR2/4配体增强了这些变化。结论:TLR2/4增强的肝脏非特异性炎症在BALB/c小鼠自身免疫性肝炎的启动和发展中可能发挥了重要作用。

TLR2、TSLP、IL-4、IFN-γ在特应性皮炎小鼠模型中的表达及意义

目的初步探讨Toll样受体(toll like receptors,TLR)及胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromallymphopoietin,TSLP)在特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)发病机制中的作用。方法将32只6～8周SPF级雌性纯系BALB/c小鼠按照随机数字表法分为对照组和实验组,每组16只。建立小鼠特应性皮炎模型,采用免疫组织化学方法检测小鼠皮损中TLR2、TSLP的表达。ELISA法测定血清中TLR2、TSLP、IL-4、IFN-γ表达水平。结果 AD小鼠皮损中TLR2的阳性表达物质主要位于细胞膜和胞浆,基底层及棘细胞层广泛表达。实验组平均光密度值(136.591±15.621)明显高于对照组(13.542±3.865)。TSLP阳性表达物质主要位于胞核,胞浆及胞膜少量着色,实验组平均光密度值(74.306±17.898)明显高于对照组(46.093±3.347)。AD小鼠血清TLR2(142.896±11.934)、TSLP(213.621±34.666)、IL-4(97.831±15.882)、IFN-γ(70.999±9.604)的表达水平明显高于对照组(14.302±3.548)、(151.997±22.328)、(60.560±9.286)、(51.224±4.534),TLR2与TSLP、IL-4表达水平呈正相关(r=0.854,0.997,P<0.01);但与IFN-γ表达水平呈负相关(r=-0.756,P<0.05)。结论 TLR2、TSLP在AD小鼠血清及皮损中大量表达,上皮细胞分泌的TLR2可通过TSLP,连接上皮细胞介导的固有免疫和适应性免疫。

TLR2/4、MYD88和NF-κB P65在支原体肺炎小鼠中的表达及其相关性

目的对支原体肺炎小鼠中TLR2/4、MYD88和NF-κB P65的表达水平以及相关性进行研究分析。方法选取温州医科大学实验动物中心供给的健康成年雄性清洁级小鼠64只,按随机数字法进行分组,其中采用支原体菌液滴鼻建立的32只支原体肺炎小鼠作为观察组,采用生理盐水建立的32只正常小鼠作为对照组,对两组实验小鼠的肺组织病理变化情况、肺指数变化情况以及TLR2、TLR4、MYD88、NF-κB P65相关指标的密度值进行比较分析。结果观察组支原体肺炎感染小鼠肺指数、TLR2、TLR4表达水平明显高于对照组正常小鼠,差异有统计学意义(P<0.05);观察组感染小鼠MYD88、NF-KBP65、MYD88、NF-KBP65的表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组小鼠中MYD88与TLR2均为阳性的18例,均为阴性的11例,与TLR4均为阳性的18例,均为阴性的10例,观察组支原体肺炎感染小鼠的MYD88的表达水平与TLR2、TLR4表达水平呈正相关关系,差异有统计学意义(P<0.05),小鼠MYD88的表达水平与NF-KBP65表达水平呈正相关关系,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TLR2、TLR4、MYD88、NF-κB P65表达水平在支原体肺炎小鼠中升高,且参与到支原体感染的免疫损伤中。

荆芥、桂枝挥发油对LPS体外刺激小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4通路的影响

目的:观察VOHS(荆芥挥发油)、VOCC(桂枝挥发油)体外干预小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4通路的抗炎机制。方法:1.常规培养小鼠腹腔巨噬细胞,加入不同浓度的VOHS、VOCC,药物作用24 h后采用MTT法检测细胞存活率。2.常规培养小鼠腹腔巨噬细胞,分组加药培养24 h后,提取细胞总RNA,采用RT-PCR测定TLR2、TLR4 mRNA表达。3.常规培养小鼠腹腔巨噬细胞,分组加药培养6h后,收集细胞上清液,采用ELISA测定其中TNF-α。结果:1.VOHS和VOCC在0.00625～0.025 mg/mL剂量范围内,细胞存活率与对照组相比无差异(P>0.05),可作为受试剂量。2.VOHS、VOCC在0.025 mg/mL剂量下能显著降低LPS所致的小鼠巨噬细胞TLR2/4 mRNA表达的过度升高(P﹤0.05)。3.VOHS在0.025 mg/mL、0.0125 mg/mL剂量下和VOCC在0.025 mg/mL剂量下能显著抑制LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞对TNF-α的分泌与释放(P<0.05)。结论:VOHS、VOCC可明显抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞TLR2、TLR4mRNA高表达,及减少前炎症细胞因子TNF-α含量的释放,这可能荆芥和桂枝的抗炎机制之一。

TLR2 mRNA和TLR4 mRNA在银屑病皮损中的表达

目的探讨Toll样受体2(TLR2)mRNA和Toll样受体4(TLR4)mRNA在银屑病皮损中表达的变化。方法采用原位杂交技术检测银屑病皮损处和正常皮肤中TLR2 mRNA和TLR4m RNA的表达情况。结果寻常型银屑病皮损中TLR2 mRNA和TLR4 mRNA主要表达于表皮基底上层;正常皮肤则表达于表皮的基底层。统计学分析表明,TLR2 mRNA和TLR4 mRNA在正常皮肤和银屑病皮损处基底层和基底上层的表达差异均有统计学意义(P<0.05),且TLR2 mRNA和TLR4 mRNA在银屑病皮损中的表达均高于正常皮肤组织(P<0.05)。结论 TLR2和TLR4可能在银屑病的发生与发展过程中发挥重要的作用。

TLR2 mAb和TLR4 mAb对急性期溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜炎症因子IFN-γ、IL-4及IL-17表达的影响

目的探讨TLR2单克隆抗体(toll-like receptor 2 monoclonal antibodies,TLR2 mAb)和TLR4单克隆抗体(toll-like receptor 4 monoclonal antibodies,TLR4 mAb)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的急性期溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠结肠黏膜的炎症因子IFN-γ、IL-4及IL-17表达的影响。方法50只雄性BALB/c小鼠分为5组(每组10只):对照组(A)、模型组(B)及TLR2 mAb干预组(C)、TLR4mAb干预组(D)、TLR2 mAb和TLR4 mAb联合干预组(E)。A组小鼠饮用蒸馏水7 d;B-E组小鼠仅饮用5%DSS水溶液7 d以产生急性期溃疡性结肠炎模型。造模开始的同时,每隔48 h分别给予C、D、E干预组小鼠以TLR2 mAb(10μg)、TLR4 mAb(10μg)、TLR2 mAb(10μg)+TLR4 mAb(10μg)腹腔内注射,A、B组给予腹腔内注射生理盐水,以观察TLR2 mAb和TLR4 mAb的干预作用。观察指标包括疾病活动指数(disease activityindex,DAI)、结肠组织病理学评分(histopathological score,HS)。造模及干预7 d后处死小鼠,Real-ti me PCR法检测各组结肠黏膜TLR2、TLR4、IFN-γ、IL-4及IL-17的mRNA表达。结果(1)与A组相比,B组小鼠肠道DAI及HS明显增高(P<0.01)。与B组相比,E组小鼠肠道DAI(P<0.05)和HS(P<0.01)均明显降低。与D组相比,E组小鼠肠道HS明显降低(P<0.05)。(2)与A组相比,B组小鼠结肠黏膜TLR2、TLR4表达明显增高(P<0.01,P<0.05)。与B组相比,C、D、E组小鼠结肠黏膜TLR2、TLR4表达均有不同程度的降低。(3)与A组相比,B组小鼠结肠黏膜IFN-γ、IL-4及IL-17的mRNA表达明显增高(P<0.01,P<0.05,P<0.01)。与B组相比,C、D、E组小鼠结肠黏膜IFN-γ、IL-4及IL-17的mRNA表达均有不同程度的降低。结论TLR2 mAb和TLR4 mAb可能通过下调小鼠结肠黏膜的炎症因子IFN-γ、IL-4、IL-17的mRNA表达而发挥其干预作用。

TLR2 mRNA和TLR4 mRNA在蕈样肉芽肿皮损中的表达

目的:探讨Toll样受体2(TLR2)mRNA和Toll样受体4(TLR4)mRNA在蕈样肉芽肿皮损中的表达水平。方法:采用原位杂交技术检测蕈样肉芽肿皮损和正常皮肤中TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达。结果:蕈样肉芽肿皮损中TLR2 mRNA和TLR4 mRNA主要表达于表皮基底上层,正常皮肤则表达于表皮的基底层。统计学分析表明TLR2 mRNA和TLR4 mRNA在正常皮肤和蕈样肉芽肿皮损处基底层和基底上层的表达均有显著性差异(P<0.05),且TLR2 mRNA和TLR4 mRNA在蕈样肉芽肿皮损中的表达均高于在正常皮肤中的表达(P<0.05)。结论:TLR2 mRNA和TLR4 mRNA可能在蕈样肉芽肿的发生与发展过程中发挥重要作用。

热应激对大鼠脾脏组织形态学及TLR2/4表达的影响

为了探究热应激下大鼠脾脏组织形态学及TLR2和TLR4表达的变化情况,本研究通过建立不同处理的大鼠热应激模型,即38℃-单次热应激(6 h)、38℃-多次热应激(2 h/次,3次)、43℃-单次热应激(6 h)、43℃-多次热应激(2 h/次,3次),以室温条件下饲养的大鼠作对照,收集各组脾脏组织进行组织学和TLR2、TLR4 mRNA表达检测.HE染色结果发现,与对照组大鼠脾脏相比,各处理组脾脏白髓减少,红髓增加,并且随着温度的增加,脾窦严重萎缩,红细胞数明显减少;与单次热应激组相比,多次热应激组边缘区变宽.qRT-PCR检测显示,与对照组相比,TLR2和TLR4 mRNA在38℃处理组中表达上调,而在43℃处理组下调.免疫荧光染色发现,TLR2和TLR4蛋白均分布于各处理组红髓区、边缘区的巨噬细胞膜上;TLR2蛋白分布于对照组和38℃处理组的脾索;TLR4蛋白分布于对照组和38℃处理组白髓区的巨噬细胞膜上.由此可见,TLR2和TLR4基因可能参与调控热应激大鼠脾脏巨噬细胞的免疫应答过程:低热环境可通过增强免疫机能应对热应激对脾脏的损伤,而在高热环境下脾脏组织严重受损,其免疫功能被抑制或破坏.

四神丸对溃疡性结肠炎模型大鼠Toll样受体2、白细胞介素-1β和白细胞介素-4的影响

目的观察四神丸对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠组织Toll样受体2(TLR2)基因表达及血清白细胞介素(IL)-1β、IL-4含量的影响,探讨其治疗UC的作用机制。方法采用复合方法制作脾肾阳虚型UC大鼠模型。实验大鼠分为空白组、模型组、阳性药组、四神丸组,阳性药组予柳氮磺吡啶肠溶片水溶液0.5 g/kg灌胃,四神丸组予四神丸26 g/kg灌胃,每日1次,共21 d。肉眼观察结肠组织损伤情况,并检测大鼠结肠组织TLR2基因表达及血清IL-1β、IL-4的含量。结果与空白组比较,模型组大鼠结肠黏膜肉眼观察有显著炎症、充血、溃疡形成(P<0.01),模型组大鼠结肠组织TLR2基因表达与血清IL-1β含量升高(P<0.05),IL-4含量降低(P<0.01);与模型组比较,四神丸组大鼠结肠组织TLR2基因表达和血清IL-1β含量均降低(P<0.05,P<0.01),IL-4含量升高(P<0.05)。结论四神丸治疗UC机制可能与调节肠道免疫细胞因子、抑制TLR2信号避免其过度激活有关。

内毒素对人牙周膜细胞Toll样受体2和Toll样受体4表达的影响

目的:观察内毒素(LPS)刺激后人牙周膜细胞Toll样受体2和Toll样受体4的表达,探讨牙周膜细胞作为免疫活性细胞在牙周炎局部免疫反应中的作用。方法:组织块法原代培养人牙周膜细胞,经来源鉴定后,取生长良好的第4代细胞用LPS进行刺激,分别于刺激0、4、8、12、24 h,运用免疫细胞化学染色法检测TLR2和TLR4在牙周膜细胞中的表达;利用多功能真彩色细胞分析管理系统进行图像分析,对TLR2和TLR4进行免疫组化评分(IHS)。结果:无LPS刺激的对照组(刺激O h)TLR2和TLR4的表达均为弱阳性,加入LPS后,染色增强,且随着刺激时间的延长而增加(P<0.05),LPS刺激后各时间点TLP2和TLR4的IHS分值与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:内毒素的刺激可以使牙周膜细胞TLR2和TLR4表达增多,提示牙周膜细胞参与牙周局部免疫反应。

不同剂量1,25二羟基维生素预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨不同剂量1,25二羟基维生素预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法将60只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和VD30.5、1.0、1.5μg/kg预处理组,比较各组神经行为评分、炎性因子及TRL2、4水平。结果与模型组相比,随着VD3剂量的增加,神经行为评分和脑梗死面积均明显减少,VD3-3组改善最为明显(P<0.05);随着剂量的增高,各实验组IL-6和TNF-α水平降低越明显,具有明显的剂量变化趋势(P<0.05);IL-10、MDA各组变化差异无统计学意义(P>0.05);VD3各组TRL2和TRL4均明显低于模型组,且随着VD3剂量增加,TRL2和TRL4降低程度明显增加(P<0.05);再灌注5d后观察各组大鼠存活情况,以VD3-3组为最高83.33%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 VD3对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用具有剂量依赖性,其机制可能与抑制TLR2、4信号转导通路,减少炎性因子产生有关。

枸杞多糖通过MGL/TLR信号通路调控巨噬细胞RAW264.7的活化

目的:探讨枸杞多糖(LBP)促进巨噬细胞RAW264.7活化的机制。方法:采用不同浓度(50、100、200 mg·L^(-1))的LBP刺激巨噬细胞RAW264.7,以100μg·L^(-1)的脂多糖(LPS)和100 mg·L^(-1)半乳糖(Gal)作为阳性药。LBP刺激24 h后,采用细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)检测不同给药浓度的LBP(0、50、100、200、400、800 mg·L^(-1))对巨噬细胞RAW264.7的毒性影响;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞培养上清中白细胞介素(IL)-6、IL-12的水平;分别通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测巨噬细胞RAW264.7 Toll样受体4(TLR4)/Toll样受体2(TLR2)/巨噬细胞半乳糖型凝集素(MGL)通路中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和核转录因子-κB(NF-κB) mRNA及蛋白表达水平;结果:CCK-8结果显示,与空白组比较,400、800 mg·L^(-1)LBP组干预巨噬细胞RAW264.7时,细胞存活率下降(P<0.05)。ELISA结果显示,与空白组比较,50 mg·L^(-1)LBP能够促进巨噬细胞RAW264.7分泌IL-12水平(P<0.01);与空白组比较,100、200 mg·L^(-1)LBP能够促进巨噬细胞RAW264.7分泌IL-6水平(P<0.05,P<0.01)。Western blot结果显示,与空白组比较,不同质量浓度的LBP组(50、100、200 mg·L^(-1))作用于巨噬细胞RAW264.7能够增强TLR4、TLR2和MGL通路中MAPK关键分子(p-p38 MAPK、p-ERK、p-NF-κB、p-JNK)的蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,200 mg·L^(-1)LBP组能够促进巨噬细胞RAW264.7p-NF-κB蛋白表达水平(P<0.01)。Real-time PCR结果显示,与空白组比较,不同质量浓度的LBP组(50、100、200 mg·L^(-1))作用于巨噬细胞RAW264.7能够增强TLR4、TLR2信号通路中MAPK关键分子p38 MAPK、ERK、NF-κB、JNK的mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,50、200 mg·L^(-1)LBP组能够促进巨噬细胞RAW264.7 JNK、ERK2 mRNA的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:LBP能够通过TLR2/TLR4//MGL通路调控巨噬细胞RAW264.7的活化,参与免疫应答。

麻杏石甘汤对流感病毒肺部感染小鼠肺组织TLR2/4-MyD88信号通路蛋白表达的效应机制

目的:探讨麻杏石甘汤对流感病毒肺部感染模型肺组织TLR2/4-MyD88信号通路蛋白表达的效应机制。方法:选取80只SPF级Balb/c小鼠为研究对象,根据随机数字表法分为对照组、模型组、奥司他韦组、麻杏石甘汤组,每组20只。比较各组肺组织TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB水平。结果:给药后3 d,与对照组相比,模型组TLR2、TLR4、NF-κB水平升高;与模型组相比,给药组TLR2水平降低,奥司他韦组和麻杏石甘汤组TLR4水平降低,麻杏石甘汤组NF-κB水平降低(P<0.05)。给药后7 d,与对照组相比,模型组TLR4、MyD88水平升高;与模型组相比,麻杏石甘汤组TLR4、MyD88水平降低,奥司他韦组MyD88水平降低(P<0.05)。结论:麻杏石甘汤通过调节TLR2/4-MyD88信号通路蛋白表达水平起到流感病毒肺部感染抗病毒的作用。

黄芩苷对模式识别受体TLR2/4-NOD2的作用及其成药性意义

激活模式识别受体可以引起下游信号通路启动,炎性因子表达,最终引起免疫炎性反应。无论是外源性病原微生物,还是内源性组织成分均可以配体方式不同程度上激活这种模式识别受体,引起机体免疫炎性反应。因此,抑制相关受体进而在一定程度上抑制这种免疫炎性反应,对于避免疾病过程中组织损伤具有重要的意义。黄芩苷能够特异性的抑制疾病过程中TLR2/4-NOD2的表达,抑制下游炎性因子IL-1β,IL-6和TNF-α的表达,可以减轻疾病过程中组织细胞的损伤。并且这种作用具有组织的非特异性。在成药性方面具有重要的理论和实际意义。此外,本文还从药物代谢和毒性等方面进一步探讨了其成药性。

基于TLR2/4-NF-κB/iNOS-NO信号通路研究秦艽水提物对胶原诱导型关节炎大鼠的影响及作用机制

目的:研究秦艽水提物对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠的疗效,并从Toll样受体2/4-核转录因子/诱导型一氧化氮合酶一氧化氮(TLR2/4-NF-κB/iNOS-NO)信号通路探讨其可能的作用机制。方法:SD大鼠随机分为6组,即正常对照组、模型对照组、雷公藤多苷0.005 g/kg组、秦艽水提物8 g/kg、4 g/kg、2 g/kg组。除正常对照组外,其余大鼠均建立CIA大鼠模型。模型成功后,药物组按对应剂量灌胃给药,正常对照组及模型对照组以等体积(10 ml/kg)灌胃双蒸水,每天1次,共28 d。观察并记录实验期间大鼠体重变化及右踝关节肿胀程度;Elisa法检测大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及一氧化氮(NO)含量;Western blot测定大鼠足跖软组织中核转录因子-κB(NF-κB)、Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)相关蛋白表达变化。结果:与正常对照组相比,模型对照组血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS及NO含量显著升高;足跖软组织中NF-κB、TLR2及TLR4相关蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。药物干预28 d后,与模型对照组相比,除秦艽水提物2 g/kg组外,其余各给药组大鼠体重显著升高,踝关节肿胀程度显著降低;血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS及NO含量显著下降;足跖软组织中NF-κB、TLR2及TLR4相关蛋白的表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:秦艽水提物对大鼠胶原诱导型关节炎有显著的治疗作用,其作用机制可能与抑制TLR2/4-NF-κB/iNOS-NO信号通路,进而抑制炎症反应有关。

麻杏石甘汤对流感病毒肺部感染模型肺组织TLR2/4-MyD88信号通路蛋白表达的影响

目的:从肺组织TLR2/4-MyD88信号通路蛋白表达水平探索麻杏石甘汤抗流感病毒效应机制。方法:经鼻腔接种建立流感病毒肺部感染模型,设正常对照组、模型对照组、奥司他韦组、抗病毒口服液组、麻杏石甘汤组。各治疗组经灌胃给药3、7 d,常规法检测肺指数、肺指数抑制率;HE染色法观察肺组织的病理变化;免疫组织化学法和免疫印迹法检测肺组织TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组肺指数显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,给药治疗3 d的麻杏石甘汤组肺指数显著降低(P<0.05)。与正常对照组比较,模型对照组小鼠肺组织充血水肿,大量炎症细胞浸润;与模型对照组比较,给药治疗3、7 d的麻杏石甘汤组小鼠肺组织病理损伤得到明显改善。免疫组化结果显示:给药3 d,与正常对照组比较,模型对照组肺组织TLR2、TLR4、NF-κB蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,麻杏石甘汤组肺组织内TLR2、TLR4、NF-κB蛋白表达水平显著下降(P<0.05);给药7 d,与正常对照组比较,模型对照组肺组织内MyD88蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,麻杏石甘汤组肺组织内MyD88蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。免疫印迹法显示:给药3 d,与正常对照组比较,模型对照组肺组织内TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,麻杏石甘汤组肺组织各蛋白表达水平显著降低(P<0.05);给药7 d,各组间差异无统计学意义。结论:麻杏石甘汤可能是通过调节TLR2/4-MyD88信号通路相关蛋白的表达水平而发挥抗流感病毒作用。

TLRs与NF-kB在大鼠骨关节炎滑膜中的表达及意义

目的:探讨不同造模时间下大鼠滑膜组织中的Toll样受体(Toll-like Receptors,TLRs)和核因子-kB(NF-kB)在骨关节炎(Osteoarthritis,OA)病程中的内在联系,研究其表达特点及变化规律。方法:将80只Wistar大鼠随机分为5组,每组16只。模型组大鼠利用经典Hulth法建立2,4,6周膝OA动物模型,同样方式切开假手术组皮肤及关节囊进入关节腔,空白对照组不予手术。按期提取滑膜样本,对其进行形态学观察并用实时PCR法检测各组滑膜组织中TLR2,TLR4及NF-kB的表达。结果:重度OA模型中的TLR2表达显著增加(P<0.05);随着造模时间的延长,TLR4的表达逐渐受到抑制(P<0.05);NF-kB在2,4,6周模型组中均大量表达(P<0.05),且表达量与造模时间成正比。结论:大鼠膝关节OA模型造模成功,OA病程时间与TLR2,TLR4和NF-kB的表达之间存在显著的相关性,三者是导致OA发生的重要影响因子。

靶向Toll样受体2激动剂的研究进展

Toll样受体(TLRs)作为一类经典的模式识别受体主要表达于抗原提呈细胞,通过识别病原体中相对保守的分子模式启动固有免疫应答,进而调控获得性免疫,在机体免疫防御中扮演着重要角色。Toll样受体2(TLR2)作为TLRs家族的重要一员,对肿瘤、免疫疾病、细菌感染等病理过程的影响不断被揭示。本文主要从构效关系研究和结构优化的角度总结TLR2激动剂的研究进展。